CN101812457A - 一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列 - Google Patents
一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列 Download PDFInfo
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Abstract
一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，它涉及生物技术领域。可以从人类的cDNA文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在真核表达系统(如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获得表达，经过分离纯化得到重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。
Description
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列。
背景技术：
胶原是一种广泛存在于动物的结构蛋白质，是皮肤、软骨及结缔组织的主要成分。胶原分子是由3条螺旋型的肽链相互盘绕而成。目前，胶原蛋白已广泛地应用于医药工业、食品工业、日用化学品工业等领域。
目前，胶原产品主要来源于动物组织，制备过程复杂，环境污染严重。此外，异种来源的胶原蛋白用于人体时还存在以下几方面问题：动物来源的胶原蛋白制备时可能受动物病毒的污染，人体应用存在感染传染病的潜在危险；异种蛋白应用可能导致免疫排斥反应，导致使用部位的无菌性炎症或严重的过敏反应；人体移植后吸收率高，不能持续维持效果，需要重复注射。上述原因限制了异种胶原在人体中的应用。
来源于人体的重组胶原蛋白，氨基酸组成和结构明确，可以改进动物体胶原蛋白的水溶性、免疫排异性、稳定性、成胶性、吸收性等特性，生产不受原料的限制，因此应用领域更加广阔。E·武奥里奥等在其申请的发明专利(96199541.6)公开了一种新型人胶原蛋白、编码这些新型胶原蛋白的多聚核苷酸序列以及这些新型蛋白和多聚核苷酸在诊断和治疗疾病方面的用途。本发明还涉及IX型胶原蛋白与II型和/或X I型胶原蛋白的融合蛋白，以及将它们做为治疗剂的用途；范英娣在其发明专利(ZL01106757.8)中公开了一种类人胶原蛋白的氨基酸序列及根据该序列编码基因构建的工程菌，再通过诱导基因工程菌来生产这种类胶原蛋白的方法；姚菊明和杜春玲在其发明专利(200710070660.7)公开了一种重组类人胶原蛋白及生物合成方法，重组类人胶原蛋白包括由胶原区和非胶原区组成，胶原区和非胶原区都由特定的氨基酸序列组成，其中非胶原区位于胶原区的羧基端，非胶原区的氨基酸序列源于T4噬菌体次要纤维蛋白；杨树林等在其发明专利(200610098297.5)中公开了一种类人胶原蛋白基因、其不同重复数的同向串联基因、含有串联基因的重组质粒及制备方法。所公开的类人胶原蛋白基因由特定的碱基序列组成，并通过对该基因的体外酶切和拼接可获得不同重复数的串联基因，以及含有该不同重复数串联基因的重组质粒。
发明内容：
本发明的目的是提供一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，它可以从人类的cDNA文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在真核表达系统(如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获得表达，经过分离纯化得到重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。
为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用以下技术方案：从人类cDNA文库中获得了一种编码人胶原蛋白的cDNA序列，再根据该序列化学合成了人类胶原蛋白的核心基因片段，并将其中大肠杆菌的稀有密码子改变为其偏爱密码子，与特定表达载体连接后构建重组表达载体，将重组表达载体导入大肠杆菌构建了工程菌，建立人类胶原蛋白片段在工程菌中高效表达的发酵工艺，建立重组人类胶原蛋白片段的纯化工艺。
一种人类胶原蛋白片段的基因序列，该序列如下：
ATGGGCCTTCAGGGTATGCCTGGTGAACGTGGTGCAGCTGGTCTTCCAGGGCCTA
AGGGTGACAGAGGTGATGCTGGTCCCAAAGGTGCTGATGGCTCTCCTGGCAAAGATGGC
GTCCGTGGTCTGACTGGCCCAATTGGTCCTCCTGGCCCTGCTGGTGCCCCTGGTGACAA
GGGTGAAAGTGGTCCTAGCGGCCCTGCTGGTCCAACTGGAGCTCGTGGTGCCCCTGGAG
ACCGTGGTGAGCCTGGTCCGCCAGGCCCTGCTGGCTTTGCTGGCCCACCTGGTGCTGAC
GGCCAACCTGGTGCTAAAGGCGAACCTGGTGATGCTGGTGCTAAAGGCGATGCTGGTCC
GCCTGGCCCTGCCGGACCCGCTGGTCCCCCTGGCCCTATTGGTAATGTTGGTGCTCCTG
GAGCCAAAGGTGCTCGCGGCAGCGCTGGTCCGCCTGGTGCTACTGGTTTCCCTGGTGCT
GCTGGCCGTGTCGGTCCTCCTGGCCCATCTGGTAATGCTGGACCGCCTGGCCCTCCTGG
TCCTGCTGGCAAAGAAGGCGGCAAAGGTCCACGTGGTGAGACTGGCCCTGCTGGACGTC
CTGGTGAAGTTGGTCCGCCTGGTCCACCTGGCCCTGCTGGCGAGAAAGGATCCCCTGGT
GCTGATGGTCCTGCTGGTGCTCCTGGTACTCCCGGGCCTCAAGGTATTGCTGGACAGCG
TGGTGTGGTCGGCCTGCCTGGTCAGAGAGGAGAGAGAGGCTTCCCTGGTCTTCCTGGCC
CGTCTGGTGAACCTGGCAAACAAGGTCCTTCTGGAGCAAGTGGTGAACGTGGTCCACCT
GGTCCTATGGGCCCGCCTGGATTGGCTGGTCCACCTGGTGAATCTGGACGTGAGGGGGC
TCCTGGTGCCGAAGGTTCCCCTGGACGTGACGGTTCTCCTGGCGCCAAGGGTGACCGTG
GTGAGACCGGCCCAGCTGGACCTCCTGGTGCTCCTGGTGCTCCTGGTGCCCCTGGCCCA
GTTGGCCCTGCTGGCAAGAGTGGTGATCGTGGTGAGACTGGTCCTGCTGGTCCAGCCGG
TCCTGTCGGCCCTGTTGGCGCCCGTGGCCCTGCCGGACCTCAAGGCCCGCGTGGTGACA
AGGGTGAGACAGGCGAACAGGGCGACAGAGGCATAAAGGGTCACCGTGGCTTCTCTGGC
CTCCAGGGTCCACCTGGCCCTCCTGGCTCTCCTGGTGAACAAGGTCCATCTGGAGCCTC
TGGTCCTGCTGGTCCACGTGGTCCTCCTGGCTCTGCTGGTGCTCCTGGCAAAGATGGAC
TCAACGGTCTCCCTGGCCCTATTGGGCCCCCTGGTCCTCGCGGTCGCACTGGTGATGCT
GGTCCTGTTGGTCCACCTGGCCCTCCTGGACCTCCTGGTCCACCTGGTCCTCCGTAA
序列中划线标示的ATG为起始密码子，划线标示的TAA为终止密码子。
根据人类胶原蛋白片段的编码序列，经过翻译得到一种人类胶原蛋白片段的氨基酸序列，该序列如下：
MGLQGMPGERGAAGLPGPKGDRGDAGPKGADGSPGKDGVRGLTGPIGPPGPAGAP
GDKGESGPSGPAGPTGARGAPGDRGEPGPPGPAGFAGPPGADGQPGAKGEPGDAGAKGD
AGPPGPAGPAGPPGPIGNVGAPGAKGARGSAGPPGATGFPGAAGRVGPPGPSGNAGPPG
PPGPAGKEGGKGPRGETGPAGRPGEVGPPGPPGPAGEKGSPGADGPAGAPGTPGPQGIA
GQRGVVGLPGQRGERGFPGLPGPSGEPGKQGPSGASGERGPPGPMGPPGLAGPPGESGR
EGAPGAEGSPGRDGSPGAKGDRGETGPAGPPGAPGAPGAPGPVGPAGKSGDRGETGPAG
PAGPVGPVGARGPAGPQGPRGDKGETGEQGDRGIKGHRGFSGLQGPPGPPGSPGEQGPS
GASGPAGPRGPPGSAGAPGKDGLNGLPGPIGPPGPRGRTGDAGPVGPPGPPGPPGPPGP
P
本发明具有以下有益效果是：根据本发明的人类胶原蛋白片段的基因序列，可以从人类的cDNA文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在真核表达系统(如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获得表达，经过分离纯化得到重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。
具体实施方式：
本具体实施方式采用以下技术方案：从人类cDNA文库中获得了一种编码人胶原蛋白的cDNA序列，再根据该序列化学合成了人类胶原蛋白的核心基因片段，并将其中大肠杆菌的稀有密码子改变为其偏爱密码子，与特定表达载体连接后构建重组表达载体，将重组表达载体导入大肠杆菌构建了工程菌，建立人类胶原蛋白片段在工程菌中高效表达的发酵工艺，建立重组人类胶原蛋白片段的纯化工艺。
一种人类胶原蛋白片段的基因序列，该序列如下：
ATGGGCCTTCAGGGTATGCCTGGTGAACGTGGTGCAGCTGGTCTTCCAGGGCCTA
AGGGTGACAGAGGTGATGCTGGTCCCAAAGGTGCTGATGGCTCTCCTGGCAAAGATGGC
GTCCGTGGTCTGACTGGCCCAATTGGTCCTCCTGGCCCTGCTGGTGCCCCTGGTGACAA
GGGTGAAAGTGGTCCTAGCGGCCCTGCTGGTCCAACTGGAGCTCGTGGTGCCCCTGGAG
ACCGTGGTGAGCCTGGTCCGCCAGGCCCTGCTGGCTTTGCTGGCCCACCTGGTGCTGAC
GGCCAACCTGGTGCTAAAGGCGAACCTGGTGATGCTGGTGCTAAAGGCGATGCTGGTCC
GCCTGGCCCTGCCGGACCCGCTGGTCCCCCTGGCCCTATTGGTAATGTTGGTGCTCCTG
GAGCCAAAGGTGCTCGCGGCAGCGCTGGTCCGCCTGGTGCTACTGGTTTCCCTGGTGCT
GCTGGCCGTGTCGGTCCTCCTGGCCCATCTGGTAATGCTGGACCGCCTGGCCCTCCTGG
TCCTGCTGGCAAAGAAGGCGGCAAAGGTCCACGTGGTGAGACTGGCCCTGCTGGACGTC
CTGGTGAAGTTGGTCCGCCTGGTCCACCTGGCCCTGCTGGCGAGAAAGGATCCCCTGGT
GCTGATGGTCCTGCTGGTGCTCCTGGTACTCCCGGGCCTCAAGGTATTGCTGGACAGCG
TGGTGTGGTCGGCCTGCCTGGTCAGAGAGGAGAGAGAGGCTTCCCTGGTCTTCCTGGCC
CGTCTGGTGAACCTGGCAAACAAGGTCCTTCTGGAGCAAGTGGTGAACGTGGTCCACCT
GGTCCTATGGGCCCGCCTGGATTGGCTGGTCCACCTGGTGAATCTGGACGTGAGGGGGC
TCCTGGTGCCGAAGGTTCCCCTGGACGTGACGGTTCTCCTGGCGCCAAGGGTGACCGTG
GTGAGACCGGCCCAGCTGGACCTCCTGGTGCTCCTGGTGCTCCTGGTGCCCCTGGCCCA
GTTGGCCCTGCTGGCAAGAGTGGTGATCGTGGTGAGACTGGTCCTGCTGGTCCAGCCGG
TCCTGTCGGCCCTGTTGGCGCCCGTGGCCCTGCCGGACCTCAAGGCCCGCGTGGTGACA
AGGGTGAGACAGGCGAACAGGGCGACAGAGGCATAAAGGGTCACCGTGGCTTCTCTGGC
CTCCAGGGTCCACCTGGCCCTCCTGGCTCTCCTGGTGAACAAGGTCCATCTGGAGCCTC
TGGTCCTGCTGGTCCACGTGGTCCTCCTGGCTCTGCTGGTGCTCCTGGCAAAGATGGAC
TCAACGGTCTCCCTGGCCCTATTGGGCCCCCTGGTCCTCGCGGTCGCACTGGTGATGCT
GGTCCTGTTGGTCCACCTGGCCCTCCTGGACCTCCTGGTCCACCTGGTCCTCCGTAA
序列中划线标示的ATG为起始密码子，划线标示的TAA为终止密码子。
根据人类胶原蛋白片段的编码序列，经过翻译得到一种人类胶原蛋白片段的氨基酸序列，该序列如下：
MGLQGMPGERGAAGLPGPKGDRGDAGPKGADGSPGKDGVRGLTGPIGPPGPAGAP
GDKGESGPSGPAGPTGARGAPGDRGEPGPPGPAGFAGPPGADGQPGAKGEPGDAGAKGD
AGPPGPAGPAGPPGPIGNVGAPGAKGARGSAGPPGATGFPGAAGRVGPPGPSGNAGPPG
PPGPAGKEGGKGPRGETGPAGRPGEVGPPGPPGPAGEKGSPGADGPAGAPGTPGPQGIA
GQRGVVGLPGQRGERGFPGLPGPSGEPGKQGPSGASGERGPPGPMGPPGLAGPPGESGR
EGAPGAEGSPGRDGSPGAKGDRGETGPAGPPGAPGAPGAPGPVGPAGKSGDRGETGPAG
PAGPVGPVGARGPAGPQGPRGDKGETGEQGDRGIKGHRGFSGLQGPPGPPGSPGEQGPS
GASGPAGPRGPPGSAGAPGKDGLNGLPGPIGPPGPRGRTGDAGPVGPPGPPGPPGPPGP
P
本具体实施方式根据本发明的人类胶原蛋白片段的基因序列，可以从人类的cDNA文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在真核表达系统(如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获得表达，经过分离纯化得到重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。
实施例1：人类胶原蛋白片段的基因序列的合成与表达载体的构建
1、化学合成人类胶原蛋白片段的基因序列
根据人类胶原蛋白的cDNA序列，合成人类胶原蛋白片段的DNA序列，并在其上游加入NdeI的识别序列，下游加入XhoI的识别序列，具体序列如下：
AAACATATGGGCCTTCAGGGTATGCCTGGTGAACGTGGTGCAGCTGGTCTTCCAG
GGCCTAAGGGTGACAGAGGTGATGCTGGTCCCAAAGGTGCTGATGGCTCTCCTGGCAAA
GATGGCGTCCGTGGTCTGACTGGCCCAATTGGTCCTCCTGGCCCTGCTGGTGCCCCTGG
TGACAAGGGTGAAAGTGGTCCTAGCGGCCCTGCTGGTCCAACTGGAGCTCGTGGTGCCC
CTGGAGACCGTGGTGAGCCTGGTCCGCCAGGCCCTGCTGGCTTTGCTGGCCCACCTGGT
GCTGACGGCCAACCTGGTGCTAAAGGCGAACCTGGTGATGCTGGTGCTAAAGGCGATGC
TGGTCCGCCTGGCCCTGCCGGACCCGCTGGTCCCCCTGGCCCTATTGGTAATGTTGGTG
CTCCTGGAGCCAAAGGTGCTCGCGGCAGCGCTGGTCCGCCTGGTGCTACTGGTTTCCCT
GGTGCTGCTGGCCGTGTCGGTCCTCCTGGCCCATCTGGTAATGCTGGACCGCCTGGCCC
TCCTGGTCCTGCTGGCAAAGAAGGCGGCAAAGGTCCACGTGGTGAGACTGGCCCTGCTG
GACGTCCTGGTGAAGTTGGTCCGCCTGGTCCACCTGGCCCTGCTGGCGAGAAAGGATCC
CCTGGTGCTGATGGTCCTGCTGGTGCTCCTGGTACTCCCGGGCCTCAAGGTATTGCTGG
ACAGCGTGGTGTGGTCGGCCTGCCTGGTCAGAGAGGAGAGAGAGGCTTCCCTGGTCTTC
CTGGCCCGTCTGGTGAACCTGGCAAACAAGGTCCTTCTGGAGCAAGTGGTGAACGTGGT
CCACCTGGTCCTATGGGCCCGCCTGGATTGGCTGGTCCACCTGGTGAATCTGGACGTGA
GGGGGCTCCTGGTGCCGAAGGTTCCCCTGGACGTGACGGTTCTCCTGGCGCCAAGGGTG
ACCGTGGTGAGACCGGCCCAGCTGGACCTCCTGGTGCTCCTGGTGCTCCTGGTGCCCCT
GGCCCAGTTGGCCCTGCTGGCAAGAGTGGTGATCGTGGTGAGACTGGTCCTGCTGGTCC
AGCCGGTCCTGTCGGCCCTGTTGGCGCCCGTGGCCCTGCCGGACCTCAAGGCCCGCGTG
GTGACAAGGGTGAGACAGGCGAACAGGGCGACAGAGGCATAAAGGGTCACCGTGGCTTC
TCTGGCCTCCAGGGTCCACCTGGCCCTCCTGGCTCTCCTGGTGAACAAGGTCCATCTGG
AGCCTCTGGTCCTGCTGGTCCACGTGGTCCTCCTGGCTCTGCTGGTGCTCCTGGCAAAG
ATGGACTCAACGGTCTCCCTGGCCCTATTGGGCCCCCTGGTCCTCGCGGTCGCACTGGT
GATGCTGGTCCTGTTGGTCCACCTGGCCCTCCTGGACCTCCTGGTCCACCTGGTCCTCC
GTAACTCGAGAAA
2、合成的DNA经过NdeI和XhoI双酶切后回收，与经过这两个酶切的pET-15b混合，在T4DNA连接酶的作用下进行连接，构建重组表达载体pET-15C。
实施例2：生产人类胶原蛋白片段的工程菌的构建与发酵工艺
1、CaCl2法制备大肠杆菌[E.coli BL21(DE3)]的感受态细胞与工程菌构建
(1)接种大肠杆菌单菌落于2mL LB液体培养基中，37℃振荡(约250r/min)培养过夜。(2)将2mL过夜培养物转接到盛有100mL的LB液体培养基的500mL三角瓶中，37℃继续振荡培养至OD600约为0.2~0.4(约2h)。(3)取1mL培养物于一灭菌的Eppendorf管中，冰浴放置10～30min，4℃，1500×g离心5min，弃上清。(4)沉淀用0.2mL冰冷氯化钙溶液轻轻悬浮，冰浴放置15min，4℃，1500×g离心5min，弃上清。(5)沉淀再用0.2mL氯化钙溶液轻轻悬浮，放置在冰浴中，制成大肠杆菌感受态细胞。(6)取5μL pET-15bC，加入制好的感受态细胞中，轻轻混匀，冰浴30min。(7)42℃热激90s后，迅速置于冰浴5min。(8)取200μL涂布于含氨苄青霉素钠(100μg/mL)的LB固体培养基上，正向放入37℃培养箱中培养1h，再倒置培养过夜至菌落清晰，获得生产人类胶原蛋白的基因工程菌。
2、建立工程菌的发酵工艺
(1)挑取转化了pET-15bC的工程菌单菌落，接种于20mL含100μg/mL氨苄青霉素钠的LB液体培养基中，37℃，振荡培养(250r/min)过夜。(2)取过夜培养物接种到2000mL含100μg/mL氨苄青霉素钠和5mmol/L甘氨酸的LB液体培养基中，相同条件下继续培养4h。(3)加入IPTG溶液，28℃，继续振荡培养(250r/min)培养8h。(4)培养液在4℃，10000rpm下离心10min，收集菌体。
实施例3：重组人类胶原蛋白片段的分离纯化
1、工程菌菌体重新悬浮于冰冷的20mL结合缓冲溶液(0.5mol/L NaCl，5mmol/L咪唑，20mmol/L Tris-Cl，pH8.0)中，冰浴条件下用超声波破碎细胞15次(800W，工作时间10s，间隔时间60s)。
2、细胞裂解液于4℃，12000×g离心30min，取上清液。3、将上清液加到装有镍离子树脂层析柱(1.5×5cm)内，让其自然流过层析介质。4、先用10mL结合缓冲液冲洗层析柱，再用8mL洗涤缓冲液(0.5mol/L NaCl，50mmol/L咪唑，20mmol/L Tris-Cl，pH8.0)洗涤层析柱。5、用4mL洗脱缓冲液(0.5mol/L NaCl，0.5mol/L咪唑，20mmol/L Tris-Cl，pH8.0)洗脱目的蛋白，收集洗脱液。6、洗脱液用TE缓冲液(20mmol/L Tris-Cl，pH8.0)稀释15倍，上DEAE-Sepharose FF离子交换柱(1.5×10cm)，用含0～1000mmol/LNaCl的TE缓冲溶液连续梯度洗托，SDS-PAGE检测各洗脱峰，合并含53KD蛋白的洗脱液，加入2个单位的凝血酶4℃酶切过夜，用Millipore浓缩管(10K)浓缩至2mL。7、浓缩液上Superdex-75凝胶过滤柱(1.2×60cm)，洗脱液为TE缓冲溶液，流速为1mL/min，分步收集，SDS-PAGE检测各洗脱峰，合并含51KD蛋白的洗脱液，得到重组人类胶原蛋白片段。
Claims (4)
1.一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，其特征在于从人类cDNA文库中获得了一种编码人胶原蛋白的cDNA序列，再根据该序列化学合成了人类胶原蛋白的核心基因片段，并将其中大肠杆菌的稀有密码子改变为其偏爱密码子，与特定表达载体连接后构建重组表达载体，将重组表达载体导入大肠杆菌构建了工程菌，建立人类胶原蛋白片段在工程菌中高效表达的发酵工艺，建立重组人类胶原蛋白片段的纯化工艺。
2.根据权利要求1所述的一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，其特征在于所述的人类胶原蛋白片段的基因序列，该序列如下：
ATGGGCCTTCAGGGTATGCCTGGTGAACGTGGTGCAGCTGGTCTTCCAGGGCCTAAGGGTGACAGAGGTGATGCTGGTCCCAAAGGTGCTGATGGCTCTCCTGGCAAAGATGGCGTCCGTGGTCTGACTGGCCCAATTGGTCCTCCTGGCCCTGCTGGTGCCCCTGGTGACAAGGGTGAAAGTGGTCCTAGCGGCCCTGCTGGTCCAACTGGAGCTCGTGGTGCCCCTGGAGACCGTGGTGAGCCTGGTCCGCCAGGCCCTGCTGGCTTTGCTGGCCCACCTGGTGCTGACGGCCAACCTGGTGCTAAAGGCGAACCTGGTGATGCTGGTGCTAAAGGCGATGCTGGTCCGCCTGGCCCTGCCGGACCCGCTGGTCCCCCTGGCCCTATTGGTAATGTTGGTGCTCCTGGAGCCAAAGGTGCTCGCGGCAGCGCTGGTCCGCCTGGTGCTACTGGTTTCCCTGGTGCTGCTGGCCGTGTCGGTCCTCCTGGCCCATCTGGTAATGCTGGACCGCCTGGCCCTCCTGGTCCTGCTGGCAAAGAAGGCGGCAAAGGTCCACGTGGTGAGACTGGCCCTGCTGGACGTCCTGGTGAAGTTGGTCCGCCTGGTCCACCTGGCCCTGCTGGCGAGAAAGGATCCCCTGGTGCTGATGGTCCTGCTGGTGCTCCTGGTACTCCCGGGCCTCAAGGTATTGCTGGACAGCGTGGTGTGGTCGGCCTGCCTGGTCAGAGAGGAGAGAGAGGCTTCCCTGGTCTTCCTGGCCCGTCTGGTGAACCTGGCAAACAAGGTCCTTCTGGAGCAAGTGGTGAACGTGGTCCACCTGGTCCTATGGGCCCGCCTGGATTGGCTGGTCCACCTGGTGAATCTGGACGTGAGGGGGCTCCTGGTGCCGAAGGTTCCCCTGGACGTGACGGTTCTCCTGGCGCCAAGGGTGACCGTGGTGAGACCGGCCCAGCTGGACCTCCTGGTGCTCCTGGTGCTCCTGGTGCCCCTGGCCCAGTTGGCCCTGCTGGCAAGAGTGGTGATCGTGGTGAGACTGGTCCTGCTGGTCCAGCCGGTCCTGTCGGCCCTGTTGGCGCCCGTGGCCCTGCCGGACCTCAAGGCCCGCGTGGTGACAAGGGTGAGACAGGCGAACAGGGCGACAGAGGCATAAAGGGTCACCGTGGCTTCTCTGGCCTCCAGGGTCCACCTGGCCCTCCTGGCTCTCCTGGTGAACAAGGTCCATCTGGAGCCTCTGGTCCTGCTGGTCCACGTGGTCCTCCTGGCTCTGCTGGTGCTCCTGGCAAAGATGGACTCAACGGTCTCCCTGGCCCTATTGGGCCCCCTGGTCCTCGCGGTCGCACTGGTGATGCTGGTCCTGTTGGTCCACCTGGCCCTCCTGGACCTCCTGGTCCACCTGGTCCTCCGTAA
3.根据权利要求1所述的一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，其特征在于根据人类胶原蛋白片段的编码序列，经过翻译得到一种人类胶原蛋白片段的氨基酸序列，该序列如下：
MGLQGMPGERGAAGLPGPKGDRGDAGPKGADGSPGKDGVRGLTGPIGPPGPAGAPGDKGESGPSGPAGPTGARGAPGDRGEPGPPGPAGFAGPPGADGQPGAKGEPGDAGAKGDAGPPGPAGPAGPPGPIGNVGAPGAKGARGSAGPPGATGFPGAAGRVGPPGPSGNAGPPGPPGPAGKEGGKGPRGETGPAGRPGEVGPPGPPGPAGEKGSPGADGPAGAPGTPGPQGIAGQRGVVGLPGQRGERGFPGLPGPSGEPGKQGPSGASGERGPPGPMGPPGLAGPPGESGREGAPGAEGSPGRDGSPGAKGDRGETGPAGPPGAPGAPGAPGPVGPAGKSGDRGETGPAGPAGPVGPVGARGPAGPQGPRGDKGETGEQGDRGIKGHRGFSGLQGPPGPPGSPGEQGPSGASGPAGPRGPPGSAGAPGKDGLNGLPGPIGPPGPRGRTGDAGPVGPPGPPGPPGPPGPP
4.根据权利要求1所述的一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，其特征在于可以从人类的cDNA文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在真核表达系统(如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获得表达，经过分离纯化得到重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。
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|---|---|---|---|---|
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| CN102351954A (zh) * | 2011-10-26 | 2012-02-15 | 陕西巨子生物技术有限公司 | 重组胶原蛋白 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20100825 |