CN101801369B - 磷铂及其在治疗顺铂和卡铂耐药性癌中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了磷铂，稳定的、分离的单体铂(II)和(IV)的磷酸络合物，以及其用于治疗癌的方法，所述癌包括对顺铂和卡铂耐药性癌。与顺铂不同，这些络合物不易进行水解并且颇溶于和稳定于水溶液中。而且，与顺铂、卡铂以及基于铂的相关抗癌剂不同，这些络合物不结合DNA。确切地，数据表明磷铂引发fas及fas相关转录因子以及某些促细胞凋亡基因如Bak和Bax的过度表达。不过，这些络合物表现出对癌细胞极大的细胞毒性。因此，本发明提供了具有与本领域那些不同分子靶的新的铂抗癌剂。

Description

磷铂及其在治疗顺铂和卡铂耐药性癌中的用途
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.第119(e)款要求2007年8月6日提交的美国临时专利申请号60/954,126以及2007年9月20日提交的美国临时专利申请号60/973,926的优先权权益，这两个美国临时专利申请均以其全部内容通过引用并入本文。
发明背景
由于顺二氨合二氯铂(II)(顺铂)用于治疗卵巢癌、睾丸癌、头颈癌及其他形式癌的极大成功，铂二胺络合物是本领域中熟知的。此外，顺铂与其他治疗方案包括放射治疗联合应用。这种铂化疗药在细胞循环G2期介导凋亡，主要通过转录抑制和通过复制抑制进程，尤其在大剂量时。以链内和链间两种模式通过鸟嘌呤和腺嘌呤碱基N7位点共价结合至DNA，通常被认为在转导大量的导致凋亡的细胞响应中的关键分子事件。
尽管顺铂非常有效，但是它表现出肾脏的、与肾有关的和神经的毒性。而且，许多患者随着时间对顺铂治疗产生耐药性，因而不能通过顺铂治疗来治愈。FDA批准的两种其他铂药物，卡铂(二氨合-1，1-环丁烷二羧酸-铂(II)(diammine-1，1-dicarcarboxylatocyclobutane-platinum(II))和奥沙利铂(二氨合-草酸铂(II))，也被认为是以与顺铂类似的方式起作用。卡铂对顺铂耐药的肿瘤细胞特别有效，但是为了有效地治疗对顺铂耐药的患者，需要相对大的剂量。这种大剂量同样具有相关的毒性。
已合成了许多新的铂胺络合物，并测试了它们的抗癌活性。然而，这些络合物中只有几个(其中一些列于图14中)表现出有前景的结果。这些新络合物包含了各种可替换的非胺配体，以及被认为对DNA结合和细胞摄取重要的非可替换的胺配体。通常，本领域中已知的这些及其他相关的铂氨合络合物是通过制备顺铂的方法来合成的，即四氯铂酸盐(PtCl4 2-)接受胺配体而变成PtCl2(胺/二胺)。以该四氯络合物起始，通常提供其他的产品，因此为了确保顺式异构体的高收率和纯度，同样可以使用PtI4 2-，随后将PtI4 2-转化为PtI2(胺/二胺)，且然后转化成PtCl2(胺/二胺)。在将PtI2(胺/二胺)转化为PtCl2(胺/二胺)时，通过用二当量的硝酸银或其他可溶性银盐在低pH下处理该二碘络合物来将该二碘络合物转化为二水合络合物(diaqua complex)。得到的二水合络合物易于与氯化钾或盐酸反应而生成目标的该二氯络合物。通常，目标铂络合物是从相应的二水合络合物在低pH下引入可取代配体而合成的，因为在较高pH下很快地发生该二水合络合物的二聚或多聚，产生不期望的产物。
在本领域中，铂胺络合物还用氮、硫、羧酸盐和磷酸盐作为可替换配体来代替可替换的氯配体。然而，那些显示最有前途治疗癌的络合物的一个特点是被配位至铂(一种软酸)的可替换的硬碱配体。这种已显示优异抗癌性质的硬-软结合的例子是羧酸铂络合物、碳酸铂络合物、膦酸铂络合物。
尽管付出了巨大的努力想用更有效的化疗药代替顺铂，但是带有磷酸盐作为可替换配体的铂(II)和铂(IV)络合物仍大量未开发。这主要归因于早期的关于铂(II)磷酸络合物的工作通常产生磷酸桥接的双核络合物。尽管已报道了某些双核磷酸铂(II)络合物的优异抗癌性质，但是对它们的应用的进一步开发由于这些络合物在水溶液中溶解性较差而受限。尽管某些单体焦磷酸络合物和三磷酸络合物是本领域中已知的，但是这种络合物不适用于药物组合物，因为它们在中等酸性溶液中进行磷酸盐水解，产生不溶性双核产物(参见Odani等的US7,342.122，描述了在本文中和在Bose等Inorg.Chem.1985，24，3989-3996中所描述的单体络合物am-2的二聚体；还可参见Odani等的WO2005/000858，将单体的am-2描述为一种潜在的抗癌药物)。
因此，本领域仍然存在这样的需要：用于治疗癌的、稳定且有效的顺铂及卡铂替代物。
发明概述
本发明提供了磷铂(phosphaplatins)，稳定的、单体的铂(II)和(IV)磷酸络合物(phosphato complexes)，其具有图1中所示的通式，其中R1、R2和R3各自独立地选自取代的或未取代的脂肪族胺或芳香族胺，而且其中当R1和R2中的一个为NH3时，R1和R2中的另一个不是NH3；而且其中S不存在或者独立地选自氢氧化物、乙酸、丁酸和α-羟基酸。本发明还提供了制备和分离磷铂的方法。
本发明还提供了治疗癌的方法，通过对需要这种治疗的患者，单独地或者联合地，与药学上可接受的载体一起施用有效量的磷铂，所述癌包括对顺铂和/或卡铂耐药的癌。
附图简述
图1显示本发明的铂(II)和铂(IV)络合物的结构。R1、R2和R3各自独立地选自取代的或未取代的脂肪族胺或芳香族胺，其中当R1和R2中的一个为NH3时，则R1和R2中的另一个不是NH3。在某些实施方案中，R1和R2选自胺、甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、丁胺、环己胺、苯胺、吡啶和取代的吡啶。在某些实施方案中，R3选自乙二胺和环己二胺。S独立地选自氢氧化物、乙酸、丁酸和α-羟基酸。在某些实施方案中，本发明要求了这些化合物的药学上可接受的盐。
图2显示一些分离的本发明络合物的结构，即(A)二氨合(二氢焦磷酸)铂(II)，也称作am-2；(B)顺式-二氨合-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)，也称作am-4；(C)1，2-乙二胺(二氢焦磷酸)铂(II)，也称作en-2；(D)1，2-乙二胺-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)，也称作en-4；(E)(反式-1，2-环己二胺)(二氢焦磷酸)铂(II)，也称作dach-2；和(F)(反式-1，2-环己二胺)-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)，也称作dach-4。
图3显示带有钠反离子的am-4的X-射线晶体结构。
图4显示从焦磷酸一侧所看到的、处于不同构象的en-4的X-射线晶体结构。
图5显示图2所示络合物的质子化程度，通过31P化学位移作为pH函数进行测定。估算的酸度常数列于表1。这些数据提供了对于这些络合物在酸性溶液与中性溶液之间溶解性差异的了解。在所公开的pH值低于2的条件下，这些络合物被完全质子化，于是预期表现出降低的溶解性。
图6表现出dach-2在(A)pH 4.2和(B)pH 8时差异的稳定性。在pH 8时，通过已配位焦磷酸根离子至铂(II)长达六天的保持所证明的，没有dach-2分解被观察到。相反地，在pH 4.2时，因游离焦磷酸盐信号的出现，显著分解是明显的。在每个图板的底部图谱起，以24小时的时间间隔来记录图谱。
图7是在顺铂和卡铂耐药性人卵巢细胞系(A2780/C30)中作为微摩尔浓度函数的dach-2、顺铂和卡铂细胞毒性作用的对照图。该细胞系对30微摩尔顺铂和100微摩尔卡铂是耐药的。
图8是dach-2与FDA已批准的顺铂和卡铂抗癌药对人卵巢细胞系(A2780)的细胞毒性作用的对比图。
图9表示dach-2对(A)顺铂敏感性和(B)顺铂耐药性的头颈癌细胞系的细胞毒性。dach-2用于顺铂敏感性细胞的IC50值低于1微摩尔，而用于顺铂耐药性细胞的IC50值，低于5微摩尔。
图10显示在一定浓度下，相比于顺铂，dach-2被细胞所摄取的量(用原子吸收光谱法检测)减少。例如，在10μM浓度下，顺铂在A2780细胞中的积聚为3.0ng Pt/106细胞，而dach-2显示为1.0ng Pt/106细胞。对于其他浓度，铂积聚保持相似的趋势。
图11显示作为人卵巢细胞系(A2780)中浓度的函数的顺铂结合DNA的程度，在培育顺铂持续2小时后用原子吸收光谱法检测。当用高达50微摩尔浓度的dach-2处理A2780细胞时，甚至当处理细胞持续24小时后，通过相同的技术，没有结合DNA的铂被检测到。
图12是通过质子NMR光谱法在顺铂(底部)、am-2(中部)和dach-2(上部)中鸟嘌呤碱基结合(顺铂主要的DNA结合位点)的比较。上部的图谱显示了游离的鸟嘌呤碱基的一个信号，即在8.05ppm处的嘌呤环的H8氢，底部图谱显示了由于鸟嘌呤通过该嘌呤环的N7位点结合至顺铂而导致的在8.43ppm处的H8质子的另一个信号，而中部图谱仅显示未结合的鸟嘌呤H8信号而非铂结合的信号。在48小时后记录底部图谱。在96和106小时后分别记录中部和上部的图谱。本发明络合物未共价地结合鸟嘌呤碱基(顺铂、卡铂和奥沙利铂的DNA结合位点)，这表明了不同于针对顺铂所提出的那些凋亡机理的凋亡机理。
图13显示1H NMR光谱数据，证实在经dach-2处理的人卵巢细胞中缺乏DNA结合。在相关的实验中，以比细胞剂量高250倍的浓度，dach-2与双链的小牛胸腺DNA、合成的寡核苷酸(5’-ATGATTTAGGTGACACTATAGCAGT-3’)、二核苷酸(dGpG)以及单磷酸核苷酸(5′-dGMP和5′-dAMP)反应。以1H NMR光谱法监测DNA结合的程度。在平行实验中，在同样条件下进行与顺铂相似的反应。图中显示了使用25-mer寡核苷酸的典型NMR实验结果，其表明了dach-2未表现出任何可检测到的DNA结合，而顺铂易于与DNA形成共价加合物，诚如在8.4至8.95ppm区域内新信号形成所证明的。然而，顺铂易于与上述所有的核苷酸都形成加合物，而甚至7天之后也没有dach-2结合至核苷酸的可检测NMR信号被观察到。
图14显示一些本领域中已知的、有活性的铂络合物的结构，它们在被用作药物、作为潜在药物正被评价或者在进行临床试验。
图15显示用于形成图1磷铂络合物的结构；X是卤素，R1、R2和R3各自独立地选自取代的或未取代的脂肪族胺或芳香族胺。
详述
本文提供了用于癌治疗的、稳定的、单体的铂(II)和(IV)焦磷酸盐络合物(命名为磷铂)，所述癌治疗包括顺铂和/或卡铂耐药性癌的治疗。通常，磷铂不易进行水解，可溶在中性pH的水溶液中，而且在中性pH水溶液中是稳定的。而且，磷铂显示在癌细胞系中普遍的细胞毒性，并且在对顺铂和卡铂中一种或两种均耐药的细胞系中有效。因此，与已知的铂抗癌药相比，磷铂在诱导癌细胞死亡方面是有效的，而且在有些情况下更有效，并且在适于患者用药的溶液中表现出期望的稳定性和溶解性。如本文提及本发明磷铂所使用的，稳定的是指当被维持在pH范围为6-8的水溶液中持续2天至六天之间的时间段时该络合物的抗水解性。
认为与顺铂、卡铂以及相关的基于铂的抗癌剂不同，磷铂非共价键地结合DNA。由于顺铂耐药性被认为是源自包括核切除修复酶的各种酶对DNA损伤的有效修复，而且由于磷铂非共价地结合DNA，所以因DNA修复机理导致磷铂耐药性是不可能的。数据表明，磷铂引发fas及fas相关转录因子和某些促凋亡基因如Bak和Bax的过度表达。此外，磷铂的细胞结合远小于顺铂，另外磷铂表现出极大的细胞毒性。因此，本发明提供了具有不同于本领域那些分子靶的、有效的铂抗癌剂。
在一些实施方案中，该络合物具有图1所示的通式，其中R1、R2和R3各自独立地选自取代的或未取代的脂肪族胺或芳香族胺，其中当R1和R2中的一个为NH3时，则R1和R2中的另一个不是NH3。在某些实施方案中，R1和R2选自胺、甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、丁胺、环己胺、苯胺、吡啶以及取代的吡啶。在某些实施方案中，R3选自乙二胺和环己二胺。S独立地选自氢氧化物、乙酸、丁酸和α-羟基酸。在某些实施方案中，本发明要求了这些化合物的药学上可接受的盐。因此，本发明的抗癌剂包括，在某些实施方案中，图2中的络合物。
本文还提供了合成与分离稳定的单体铂(II)和(IV)焦磷酸盐络合物的方法。在一种实例中，该方法包括将含过量磷酸盐与图15所示的式的铂络合物的含水反应混合物维持在温度为约30至约60摄氏度下持续约12至约18小时的时间段、pH为约7至约9，来形成具有图1式(I)和(III)的络合物，其中R1、R2和R3各自独立地选自取代的或未取代的脂肪族胺或者芳香族胺，而且其中当R1和R2中的一个为NH3时，则R1和R2中的另一个不是NH3；而且其中X独立地选自卤素。
图15中所示的络合物可用任何适宜的方式制备。在一些如本领域通常所描述的实例中，可通过加入碘化钾而将K2PtCl4转化成K2PtI4来制备顺式-(胺/二胺)二氯铂(II)络合物。然后它与期望的胺配体反应。然后通过加入二当量的硝酸银，将得到的顺式-(胺/二胺)二碘铂(II)络合物原位转变为相应的顺式-(胺/二胺)二水合铂(II)络合物。通过加入氯化钾，将该顺式-二水合物[Pt(胺/二胺)2(H2O)2 2+]转化为顺式-二氯络合物。
应当理解是，也可采用其他适宜的反应条件。例如，在一些实施方案中，温度可以是从约35至约45℃。因此，反应温度可以是从约30-31、31-32、32-33、33-34、34-35、35-36、36-37、37-38、38-39、39-40、40-41、41-42、42-43、43-44、44-45、45-46、46-47、47-48、48-49、49-50、50-51、51-52、52-53、53-54、54-55、55-56、56-57、57-58、58-59、59-60℃，以及它们之间的增量。在40℃已获得了优良的结果。在一些实例中，使反应进行约13至约16小时。因此，反应时间可以是从约12-13、13-14、14-15、15-16、16-17和17-18小时，以及它们之间的增量。在反应15个小时已获得优良的结果。在一些实例中，pH可以是从约6-7、7-8和8-9，以及它们之间的增量。在pH约为8，已获得了优良的结果。
所述方法还包括随后浓缩含水反应混合物使得不形成焦磷酸盐沉淀。应当理解为，可用任何适宜的方式浓缩含水反应混合物。例如，可用旋转蒸发浓缩含水反应混合物。
所述方法还包括通过加入一种适宜的酸来将反应混合物的pH迅速降至pH小于约2。在一些实例中，可用硝酸来降低pH。在一些实施方案中，pH是在约1与约2之间的范围。在pH 1时已获得了优良的结果。
在一些实例中，所述方法也包括在浓缩反应混合物后使反应混合物到5摄氏度与环境温度之间的温度。在另外的实例中，所述方法也包括在降低反应混合物pH之后将反应混合物冷却至5摄氏度与环境温度之间的温度。
在另外的实施方案中，本发明提供了形成根据图1(II)和(IV)络合物的方法。该方法如上所述，但还包括在维持反应混合物在约30至约60摄氏度的温度下持续约12至约18小时的时间段、pH为约7至约9之后，向反应混合物加入过氧化氢，以及选自乙酸盐、丁酸盐和α-羟基酸的盐的任选试剂。
在一些实例中，在浓缩反应混合物前与过氧化氢一起加入的任选试剂选自乙酸钠、丁酸钠以及α-羟基丁酸钠盐。在另外的实例中，在浓缩反应混合物前与过氧化氢一起加入的任选试剂选自乙酸钾、丁酸钾以及α-羟基丁酸钾盐。
本文所述的单体络合物的合成和分离方法可以有别于现有技术，因为新方法不产生二聚或寡聚的磷酸盐化合物。例如，Bose等在Inorg.Chem.1985，24，3989-3996(″Bose 1985″)中所报道的方法，它包括通过在中性pH下将阴离子焦磷酸络合物吸附在阴离子交换树脂上并且用较低pH洗脱液对其洗脱来从反应混合物中分离Pt(NH3)2(H2P2O7)(am-2)，该方法对于am-4、en-2、en-4、dach-2以及dach-4的合成和分离是无用的。当使用Bose 1985方法时，在尝试用较低pH电解液洗脱而进行分离时这些络合物在离子交换床上分解。最初，络合物变成棕黑色，随后在离子交换树脂内形成不溶性黑色沉淀物。只有对Bose 1985方法进行如本文所述的改进，才可能从其各自反应混合物中分离am-4、en-2、en-4、dach-2以及dach-4。用真空蒸发将每个反应混合物浓缩至当在下列步骤中降低pH(焦磷酸盐配体的溶解性随着pH而变化很大)时未反应的焦磷酸不会沉淀出的程度。为了引起选择性沉淀，最终的浓度为0.05M与0.08M之间，因为体积的进一步减少导致了反应过程中必须过量存在的未反应焦磷酸盐的共沉淀。浓缩后，将反应混合物冷却，并将pH迅速调低至1.0，以便利用络合物的质子化与去质子化形式之间的溶解度差异来诱导沉淀。
在中性pH时，本发明的分离的单体Pt(II)和Pt(IV)络合物是稳定的。如31PNMR谱所示，在pH 6-8的范围内，该络合物没有经受因为在中性pH水溶液中经六天的时间间隔后胺或焦磷酸盐配体丧失而导致的任何解络合物形成作用(deligation)。但是，在相同的时间间隔、pH 4.2，通过在-10.3ppm处游离焦磷酸盐信号的出现，因焦磷酸盐配体释放导致的缓慢的解络合物形成作用是明显的。同时，形成不溶性焦磷酸桥接的双核铂(II)产物。数据也表明酸分解大大地取决于酸度-酸度越高，分解越快(参见图5，表1和表2)。
表1.去质子化的铂(II)和铂(IV)焦磷酸络合物的化学位移(d，ppm)以及
Pt-P偶合常数
               δ-31P     δ-195Pt
络合物          ppm        ppm        JP-Pt，Hz
am-2            2.12       -1503      23.44
dach-2          1.78       -1729      25.03
en-2            1.93       N/A        29.73
am-4            2.32       1733       15.38
dach-4          2.41       1613       25.91
en-4            2.35       1582       25.91
表2.从磷-31化学位移确定的Pt(II)-和Pt(IV)-焦磷酸络合物的计算的pKa(酸度常数的log)值
络合物        pKa1        pKa2
am-2          2.9±0.3    4.7±0.2
              (3.8±0.1)
en-2          2.2±0.1    4.4±0.1
dach-2        2.6±0.2    4.4±0.2
              (3.3±0.1)
am-4          2.0±0.1    4.7±0.1
en-4          ＜2         4.3±0.1
本发明的络合物用于治疗各种癌是有用的。人卵巢细胞系(A2780)和中国卵巢细胞(CHO)的细胞毒性试验证明，这些络合物作为第一轮治疗是有效的，而且对于顺铂和卡铂均耐药的卵巢细胞(C30)的试验(参见表3)表明，这些络合物适合于耐药性癌的第二轮治疗。本发明络合物是特别期望的，因为它们可减少体内毒性。相比于顺铂，这些络合物以减少的量被细胞所摄取，表明与顺铂及其他铂抗癌治疗药的剂量相比可能需要较低的剂量。例如，在10μM浓度，在A2780细胞中顺铂积聚为3.0ng Pt/106细胞，而dach-2显示为1.0ng Pt/106细胞，而且在耐药性细胞系中dach-2显示为在其IC50值处1.4ngPt/106细胞，而顺铂显示为＞5ng Pt/106细胞，然而前者络合物的IC50值小于后者络合物的一半(参见图10和表4)。
表3.磷铂、顺铂和卡铂在A270和A2780/C30、CHO细胞系中的按μM浓度的IC50值
络合物      A780       A2780/C30     CHO
顺铂        7.5±1.5   110±11.29    29±3
卡铂        90±13     ＞200         ＞200
dach-2      20±4      48±5         35±5
dach-4      180±15    155±17       116±17
am-2        100±11    ＞200         120±30
am-4        175±22    ＞200         ＞200
en-4        170±33    ＞200         ＞200
表4.顺铂和焦dach-2(pyrodach-2)在A2780与A2780/C30细胞系中对比的铂细胞积聚(ng/106细胞)
                  A2780               A2780/C30
浓度(μM)     顺铂         dach-2      顺铂        dach-2
10            3.00±0.05   1.00±0.20  1.00±0.10  1.00±0.08
20            5.00±0.06   1.50±0.30  2.00±0.40  1.00±0.02
30            6.00±0.10   3.00±1.00  2.00±0.50  1.00±0.02
50            20.00±1.00  5.00±0.30  5.00±1.00  2.00±0.10
数据表明，本发明的络合物可通过与顺铂和其他铂药物不同的分子机理与细胞机理来诱导凋亡。首先，不存在共价键合(参见图12和实施例13)表明了本发明络合物不是通过DNA结合途径发挥作用的。本领域的技术人员通常认为，获得性顺铂耐药性是由于核苷酸切除修复过程将铂从DNA有效地去除。因为明显不存在DNA结合，所以在本发明的络合物上不可能进行DNA修复机理，对该络合物的细胞耐药性可被消除。此结论在细胞毒性数据中获得支持，该数据表明dach-2在对顺铂和卡铂均耐药的细胞系中是有活性的(参见表3)。
第二，本发明的络合物是通过与顺铂及其他铂药物不同的分子机理和细胞机理来诱导凋亡的证据，来自于使dach-2与半胱氨酸和谷胱甘肽反应的实验(数据未标出)。dach-2的焦磷酸盐配体容易被通过巯基的伴发的络合物形成作用而替换，表明通过半胱氨酸或甲硫氨酸残基的细胞表面蛋白的可能的蛋白质锚定位点。
第三，本发明的络合物是通过与顺铂及其他铂药物不同的分子机理和细胞机理来诱导凋亡的证据，也来自于关于fas及其相关成员的过度表达的实验(参见实施例11)。对本发明络合物反应的这种过度表达，说明了在表现本发明络合物的细胞毒性活性方面极可能涉及信号转导途径，而非DNA损伤途径。当用本发明络合物处理细胞时，平均地，fas被过度表达六倍，而在用顺铂处理的细胞中没有显著的过度表达被观察到。
如本文所述的，本发明络合物与经常使用的顺铂和卡铂相比一样有效或者更有效，因此为早期缺乏有效的顺铂和卡铂治疗的替代选择的患者提供了一种癌治疗方法。但是，患者不必为了用本文所述的络合物以及方法治疗而先用顺铂或卡铂治疗，这种治疗的用药可由医疗人员在医院或其他医疗设施里实施。
本发明络合物的用药和剂量是根据良好医学执业规范，考虑到个体患者临床病况，用药的部位和方法，用药方案，患者的年龄、性别、体重以及医疗从业者已知的其他因素。因此，本文所用的药学上“有效量”是由本领域已知的这类考虑而决定的。该量必须是有效的以实现改善，所述改善包括但不限于改善存活率或更快的康复，或者改善或消除症状以及被本领域技术人员选为合适措施的其他指标。可将本发明络合物向动物包括哺乳动物用药。
在本发明的治疗方法中，可以各种方式施用本发明络合物。应当注意的是，它们可作为络合物而被施用，而且可利用这些络合物优异溶解性而单独地以水溶液施用，或者作为活性成分与药学上可接受载体、稀释剂、佐剂和媒介物组合。该络合物可口服地，皮下地或非胃肠地包括静脉内、动脉内、肌内、腹膜内、扁桃体内和鼻内用药，以及鞘内和输注技术而给药。络合物植入体也是有用的。治疗的患者是温血动物，以及特别是包括人的哺乳动物。所述药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂和媒介物以及植入物载体通常是指与本发明活性成分不反应的、惰性的、无毒的固态或液态填充物、稀释剂或包封材料。
所述剂量可以是单次剂量或超过数天时间的多次剂量。治疗的时间通常与病程的时间和药物的有效性以及治疗患者的种类成比例。
当非胃肠施用本发明络合物时，通常将它们配制成单位剂量可注射形式(溶液、混悬剂、乳剂)。适于注射的药用制剂包括无菌水溶液或分散液以及重组为无菌可注射溶液或分散液用的无菌粉。所述载体可以是溶剂或分散媒介，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液态聚乙二醇及类似物)、它们适宜的混合物以及植物油。
可保持适当的流动性，例如通过使用如卵磷脂的包衣，通过在分散液情形下维持所需的颗粒大小以及通过使用表面活性剂。非水性媒介物如棉籽油、芝麻油、橄榄油、豆油、玉米油、向日葵油、或花生油及酯诸如肉豆蔻异丙酯，也可用作组合物的溶剂体系。另外，可以加入各种提高组合物稳定性、无菌性和等渗性的添加剂，包括抗菌防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂。可通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸及类似物，来确保防止微生物的作用。在许多情况下，比较理想的是包含等渗剂，例如糖、氯化钠及类似物。可通过使用延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来产生可注射药用形式的延长的吸收。然而，根据本发明，所使用的任何媒介物、稀释剂或添加剂都得是与本发明络合物相容的。
将实施本发明所用的络合物与各种所需的其他成分一起加入所需量的合适溶剂中，可制备无菌的可注射溶液。
可以用可注射制剂对患者施用本发明的药理学制剂，该制剂包括任何相容性载体，诸如各种媒介物、佐剂、添加剂和稀释剂；或者本发明中所用的络合物可以对患者非胃肠用药，以缓释皮下植入体或靶向传输系统如单克隆抗体、定向传输、离子导入、聚合物基质、脂质体以及微球的形式。对于本领域的技术人员而言，许多其他这类植入体、传输系统和模式都是熟知的。
参照下面的实验性实例来进一步详述本发明。提供这些实例只是为了举例说明，而不意欲是限制性的。因此，应当将本发明解释为包含了由于本文所提供的教导而将会变得明显的任何及全部的变化。
以上描述及随后的实例说明了以与之前所披露的合成方法不同的方式合成焦磷酸铂络合物。已显示这些络合物具有抗癌活性，包括在顺铂和卡铂耐药性癌中。令人预料不到地，所显示的抗癌活性是与一些当前施用的铂络合物相当的，并且在相对较低剂量下是比一些当前施用的铂络合物有活性的。同样令人预料不到地，数据表明了本发明络合物具有与当前施用的铂络合物不同的作用机理，即它们在治疗过程中不结合DNA。因此，本发明络合物代表了用于治疗癌有用的新类别的铂治疗药，所述癌包括之前难于实现有效治疗的顺铂和卡铂耐药性癌。
本发明是以示例性方式进行描述，并且应当理解为，所使用的术语意欲是具有词语描述性质，而非限制性的。显然，根据本文教导，本发明的许多改进和变化是可能的。因此，应当理解为，在所附的权利要求的范围内，本发明可以如具体描述不同的其它方式实施。
实施例1：二氨合(二氢焦磷酸)铂(II)(am-2)
将焦磷酸钠十水合物(0.4g)和0.1g顺铂溶于250mL蒸馏水中，pH 8，并于40℃培育15小时。培育期后，用旋转蒸发浓缩该溶液至5-10mL，并过滤以除掉任何未反应的起始材料。通过加入1N HNO3来迅速将pH降至约1.0，沉淀出淡黄色粉末的产物。在冰上冷却来完成沉淀，并且通过真空过滤来分离产物，并用冷水和丙酮洗涤。得到Pt(NH3)2(H2P2O7)：0.04g(30％)。31P NMR谱图显示了在2.12ppm处单峰，pH 7.99，参照85％磷酸的外标。在-1503ppm处检测到195Pt NMR共振。
实施例2：顺式-二氨合-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)(am-4)
将焦磷酸钠十水合物(0.4g)和0.1g顺铂溶于250mL蒸馏水中，pH 8，并于40℃培育15小时。培育期后，将1mL 30％H2O2加至反应混合物，并使反应再进行3小时。然后用旋转蒸发浓缩该溶液至5-10mL，过滤以除掉任何未反应的起始材料。通过加入1N HNO3来迅速将pH降至约1.0，沉淀出淡黄色的粉末的产物。在冰上冷却来完成沉淀，并且通过真空过滤来分离产物，并用冷水和丙酮洗涤。得到顺式，反式-Pt(NH3)2(OH)2(H2P2O7)：0.05g(34％)。31P NMR谱图显示了在2.32ppm处单峰，pH 8.11，以及195Pt-31P耦合常数为15.4Hz。195Pt NMR谱图显示了在1733ppm处五重峰，以及195Pt-14N耦合常数为232Hz。
实施例3：1，2-乙二胺(二氢焦磷酸)铂(II)(en-2)
将焦磷酸钠十水合物(0.4g)和0.1g二氯(乙二胺)铂(II)溶于250mL蒸馏水中，pH 8，并于40℃培育15小时。培育期后，用旋转蒸发浓缩该溶液至5-10mL，并过滤以除掉任何未反应的起始材料。通过加入1N HNO3来迅速将pH降至约1.0，未沉淀出产物。用31P NMR来原位表征产物。在31P NMR谱图中观察到1.93ppm处单峰，以及195Pt-31P常数为29.73Hz。
实施例4：1，2-乙二胺-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)(en-4)
将焦磷酸钠十水合物(0.4g)和0.1g二氯(乙二胺)铂(II)溶于250mL蒸馏水中，pH 8，并于40℃培育15小时。培育期后，将1mL 30％H2O2加至反应混合物，并使反应再进行3小时。然后用旋转蒸发浓缩该溶液至5-10mL，并过滤以除掉任何未反应的起始材料。通过加入1N HNO3来迅速将pH降至约1.0，沉淀出淡黄色粉末的产物。在冰上冷却来完成沉淀，并且通过真空过滤来分离产物，并用冷水和丙酮洗涤。得到反式-Pt(OH)2(C2H8N2)(H2P2O7)：0.07g(49％)。31P NMR谱图显示了在2.30ppm处单峰，pH 8.13，以及195Pt-31P耦合常数为25.9Hz。195Pt NMR谱图显示在1582ppm处宽峰。
实施例5：(反式-1，2-环己二胺)(二氢焦磷酸)铂(II)(dach-2)
将焦磷酸钠十水合物(0.4g)和0.1g二氯(反式-1，2-二氨基环己基)铂(II)溶于250mL蒸馏水中，pH 8，并于40℃培育15小时。培育期后，用旋转蒸发浓缩该溶液至5-10mL，并过滤以除掉任何未反应的起始材料。通过加入1N HNO3来迅速将pH降至约1.0，沉淀出淡黄色粉末的产物。在冰上冷却来完成沉淀，并且通过真空过滤来分离产物，并用冷水和丙酮洗涤。得到反式-Pt(C6H14N2)(H2P2O7)：0.05g(38％)。31P NMR谱图显示了在1.78ppm处单峰，pH 7.93，以及195Pt-31P常数为25.03Hz。在-1729ppm处记录到195Pt NMR信号。
实施例6：(反式-1，2-环己二胺)-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)(dach-4)
将焦磷酸钠十水合物(0.4g)和0.1g二氯(反式-1，2-二氨基环己基)铂(II)溶于250mL蒸馏水中，pH 8，并于40℃培育15小时。培育期后，将1mL 30％H2O2加至反应混合物，并使反应再进行3小时。然后用旋转蒸发来浓缩该溶液至5-10mL，并过滤以除掉任何未反应的起始材料。通过加入1NHNO3来迅速将pH降至约1.0，沉淀出淡黄色粉末的产物。在冰上冷却来完成沉淀，并且通过真空过滤来分离产物，并用冷水和丙酮洗涤。得到反式-Pt(OH)2(C6H14N2)(H2P2O7)：0.07g(52％)。31P NMR谱图显示了在2.41ppm处单峰，pH 7.95，以及195Pt-31P耦合常数为25.9Hz。195Pt NMR谱图显示了在1613ppm处宽峰。
实施例7
可使用31P NMR光谱法以证实图2中所示的以及实施例1-6中所述的各自的二胺(焦磷酸)铂(II)和二胺(二羟配位基)(焦磷酸)铂(IV)络合物是用本文所述的新方法合成和分离的。
这些络合物中的每个显示了在化学位移1.78-2.12ppm范围中单一31PNMR共振。这些化学位移相比于游离焦磷酸盐配体是在9-11ppm的低场，与本领域所报道的磷酸盐螯合物的已观测到配位化学位移相一致。如不存在预期的两组二重峰所揭示的，在最终产品中未检测到单齿的焦磷酸络合物。31PNMR数据也显示了用H2O2将Pt(II)络合物氧化为Pt(IV)络合物是选择性的，如在每种情况中单一焦磷酸铂(IV)络合物的形成所证明的。
实施例8
人卵巢癌细胞，A2780，获得自Thomas Hamilton博士(Fox Chase CancerCenter，费城，宾夕法尼亚州)。使用补充了10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、0.25单位/mL胰岛素以及青霉素/链霉素的RPMI 1640，在连续充气5％CO2的37℃培养箱中单层培养细胞。为了维持细胞指数生长，使用在HBSS中0.0625％的胰蛋白酶将细胞传代培养。
使用集落形成(clonogenic)试验来测定IC50值。简要地说，在药物处理前24小时，将来自单个细胞悬浮液的500个A2780细胞平铺在60mm Peri培养皿上，以使细胞贴壁。在药物处理当天，将培养基倾析，并用药物替换，而且将这些已处理的细胞放回37℃培养箱中，持续1小时。对于每个药物浓度建立一式三份的培养皿。在药物处理1小时后，倾析含药物的培养基并用新培养基替换。将这些培养皿放回37℃培养箱中，持续集落形成1星期。固定集落，并且用在纯甲醇中2％结晶紫染色。对含50个细胞以上的集落计数。将来自一式三份培养皿的计数的集落数目进行平均，将这个数目除以所平铺的细胞数目，以获得集落形成细胞的分数值。然后，针对培养皿效率校正这些集落形成细胞的分数值，通过将其除以在药物未处理培养皿中集落形成细胞的数目。
表3显示了本文所述络合物的抗癌活性，以IC50值表示，对比顺铂和卡铂。如从这些数据可看到的，在耐药性细胞系中dach-2表现出比顺铂和卡铂两者均更佳的性质。而且，dach-4显示了比卡铂高得多的活性。数据也表明，对于顺铂/卡铂耐药性癌细胞和顺铂敏感性细胞，dach-4一样有效或更有效，这进一步表明磷铂不可能发展耐药性。
不同于顺铂和卡铂，预计本发明的磷酸络合物由于磷酸配体的存在而表现出较低的毒性，其可能有助于有效地将这些络合物运输至细胞。而且，与顺铂不同，这些磷酸络合物在72小时内未显示出任何可检测到的对DNA的结合，如图12所示。顺铂被认为是通过结合基因组DNA而发挥作用。因此，本发明的磷酸络合物具有不同的细胞靶。
实施例9
顺铂耐药性卵巢细胞系(C30)(Hamaguchi等，1993)，获得自ThomasHamilton博士(Fox Chase Cancer Center，费城，宾夕法尼亚州)，用本发明的单体铂络合物(图2所示)进行处理。该细胞系也是卡铂交叉耐药性的。使用补充了10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、0.25单位/mL胰岛素以及青霉素/链霉素的RPMI 1640，在连续充气5％CO2的37℃培养箱中单层培养细胞。为了维持细胞指数生长，使用在HBSS中0.025％的胰蛋白酶将细胞传代培养。
使用集落形成试验来测定IC50值。简要地说，在药物处理前24小时，将来自单个细胞悬浮液的500个C30细胞平铺在60mm Petri培养皿上，以使细胞贴壁。在药物处理当天，将培养基倾析，并用药物替换，而且将这些已处理的细胞放回37℃培养箱中，持续1小时。对于每个药物浓度建立一式三份的培养皿。在药物处理1小时后，倾析含药物的培养基并用新培养基替换。将这些培养皿放回37℃培养箱中，持续集落形成1星期。固定集落，并且用在纯甲醇中2％结晶紫染色。对含50个细胞以上的集落计数。将来自一式三份培养皿计数的集落数目进行平均，将这个数目除以所平铺的细胞数目，以获得集落形成细胞的分数值。然后，针对培养皿效率校正这些集落形成细胞的分数值，通过将其除以在药物未处理培养皿中集落形成细胞的数目。
实施例10
源自人头颈鳞状细胞癌的UMSCC10b(顺铂敏感性)和UMSCC10b/15s(顺铂耐药性)细胞系，是获得自加州大学(圣迭戈)的Stephen B.Howell博士的细胞系。在含有10％胎牛血清、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的1640RPMI中培养细胞。将细胞接种至24孔板，每孔板中大约20,000个细胞/500μl培养基。将细胞曝露于dach-2，可变的浓度范围是1.12μM至最大72μM。制备dach-2络合物的贮存液，并且添加这些溶液的等份小样以制备那些有效的浓度。然后，使细胞生长72小时。在本研究中使用了十二种不同的浓度。每个浓度具有一个对照，总计12个对照。
可估计UMSCC10b(顺铂敏感性)的IC50低于1.0μM。相比之下，在同样的细胞系中顺铂的IC50值为17μM(参见Zheng等，Clinical Cancer Research，1997，3，1157-1165)。测得UMSCC10b/15s(顺铂耐药性)的IC50为5μM。图9显示了顺铂敏感性细胞系和顺铂耐药性细胞系的细胞存活曲线。
实施例11
使用包含84个基因的细胞凋亡阵列、实时PCR进行涉及本发明络合物(数据未标示)相比于顺铂的初步基因表达实验，包括了BCL2超家族，促细胞凋亡及抗细胞凋亡两种，半胱氨酸蛋白酶，BIR-家族，TNF受体激活剂因子，P53及其同源物、以及fas相关成员。对两组基因表达的密切观察清楚地表明了在表达模式上的一些不同。例如，fas及fas超家族基因成员在dach-2处理的细胞中过度表达，而顺铂在这些基因的表达中引起微小变化。具体地说，fas相比于对照被过度表达6倍，而TNFRS基因诸如TNFRSF-10B比对照被过度表达2-3倍。这些后者的受体因子属于fas超家族。有趣的是，观察到dach-2使促细胞凋亡的BCL2成员诸如BAK1和BAX被过度表达约2-3倍，而顺铂在它们的表达中没有显著的变化。
实施例12铂的细胞积聚和DNA结合的铂的估算
由通过使用水中的顺铂或焦dach-2所建立的校正曲线，来在石墨炉原子吸收光谱仪(Perkin Elmer AA-600)上定量地估算铂含量。将细胞(5×106)接种在T75cm2烧瓶中。24小时后，然后用不同浓度(0μM、10μM、20μM、30μM和50μM)的顺铂和焦dach-2处理这些细胞。用铂络合物曝露1小时后，除去含药物的培养基，并用冰冷的磷酸盐缓冲的盐水(PBS)冲洗细胞。然后，将细胞胰蛋白酶化并离心成球团。根据McGahan的方法，在分析前将细胞球团在浓HNO3和H2O2中浸渍。表4所报告的数据收集自三个独立实验，每个实验进行两次。关于顺铂积聚，数据获得自给定浓度的单一样品三次操作。
关于DNA-Pt的检测，将1.0×107细胞接种在T75cm2烧瓶中。24小时后，加入不同浓度0μM、10μM、20μM、30μM和50μM的铂络合物。用铂络合物处理细胞，持续24小时。处理后，除去培养基，而且用冰冷的PBS冲洗。将细胞胰蛋白酶化并离心成球团。使用
Figure GPA00001013604000171
SV DNA纯化试剂盒(Promega)来提取DNA。使用NanoDrop UV-Vis仪器来从260nm处的吸收定量地估算DNA。
实施例13：NMR检测铂-DNA结合
在Bruker 500MHz NMR仪器上99％(原子)D2O中以水抑制脉冲序列进行质子NMR光谱法实验。样品含有顺铂(2.0mM)或焦dach-2(2.0mM)和核苷酸(5’-dGMP，5’-dAMP，dGpG(5.0mM))，以及单链和双链的DNA(小牛胸腺，5.0mM)，用磷酸盐和碳酸盐缓冲液(10-20mM)保持pH 7.0。在相同的条件下，也进行顺铂(0.25mM)和焦dach-2(0.25mM)与合成的25-mer：5’-ATGATTTAGGTGACACTATAGCAGT-3’(0.25mM)反应。反应进行长达7天，并且以固定时间间隔记录了1H和31P NMR谱图。通常，检测中使用5μs脉冲宽度以及1.0s重复延时。一般选择扫描宽度10,000Hz和32K数据点来收集自由感应衰减。对于所应用的傅里叶变换，线增宽因子为1Hz。化学位移参照H-O-D峰，位于4.67ppm。

Claims (46)

1.一种用于治疗癌的组合物，其包括：
一种或更多种式I、II和IV的分离的单体铂(II)或(IV)络合物：
Figure FSB00000711154100011
其中R1和R2各自独立地选自NH3、取代的或未取代的脂肪族胺及取代的或未取代的芳香族胺；
其中R1和R2不都是NH3；
其中R3选自取代的或未取代的脂肪族胺；
而且
其中每个S独立地选自氢氧化物、乙酸、丁酸和α-羟基酸；或者其药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的组合物，其中R1和R2各自独立地选自NH3、甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、丁胺、环己胺、苯胺、吡啶和取代的吡啶。
3.如权利要求1所述的组合物，其中R3选自乙二胺和环己二胺。
4.如权利要求1所述的组合物，其中所述分离的单体铂络合物是1，2-乙二胺-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)。
5.如权利要求1所述的组合物，其中所述分离的单体铂络合物是反式-1，2-环己二胺)-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)。
6.一种用于治疗癌的组合物，其包含：
一种或更多种选自以下的分离的单体铂络合物：
(i)顺式-二氨合-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)；
(ii)1，2-乙二胺(二氢焦磷酸)铂(II)；
(iii)1，2-乙二胺-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)；
(iv)(反式-1，2-环己二胺)(二氢焦磷酸)铂(II)；
(v)(反式-1，2-环己二胺)-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)；和(vi)其药学上可接受的盐；
其中所述分离的单体铂络合物或盐在pH 6至8之间的水溶液中是稳定的。
7.如权利要求6所述的组合物，其中所述分离的单体铂络合物引发fas以及fas相关转录因子的过度表达。
8.如权利要求6所述的组合物，其中所述分离的单体铂络合物引发促细胞凋亡基因的过度表达。
9.如权利要求8所述的组合物，其中所述促细胞凋亡基因是Bak和Bax。
10.一种制备分离的单体铂(II)络合物的方法，所述方法包括：
(i)将含过量焦磷酸盐与式V或式VI铂络合物的含水反应混合物：
其中R1和R2各自独立地选自NH3、取代的或未取代的脂肪族胺和取代的或未取代的芳香族胺；
其中R3选自取代的或未取代的脂肪族胺；而且
其中X独立地选自卤素；
维持在30至60摄氏度的温度，持续12至18小时的时间，pH为7至9；
(ii)随后浓缩所述含水反应混合物，以使不形成焦磷酸盐沉淀；
(iii)通过加入酸来将反应混合物的pH迅速降至pH小于2；
其中，所述分离的单体铂(II)络合物如式I或III所示：
Figure FSB00000711154100031
其中R1和R2各自独立地选自NH3、取代的或未取代的脂肪族胺和取代的或未取代的芳香族胺；
其中R3选自取代的或未取代的脂肪族胺；而且
其中所述分离的单体铂络合物在pH 6至9之间的水溶液中是稳定的。
11.如权利要求10所述的方法，其中R3选自乙二胺和环己二胺。
12.如权利要求10所述的方法，其中所制备的分离的单体铂络合物是(反式-1，2-环己二胺)(二氢焦磷酸)铂(II)。
13.如权利要求10所述的方法，其中所述温度是40摄氏度，且反应时间是15小时，并且pH是在7与8之间。
14.如权利要求10所述的方法，其还包括在浓缩反应混合物之后将反应混合物冷却至5摄氏度与环境温度之间的温度。
15.如权利要求10所述的方法，其还包括在降低反应混合物的pH之后将反应混合物冷却至5摄氏度与环境温度之间的温度。
16.一种制备分离的单体铂(IV)络合物的方法，所述方法包括：
(i)将含过量焦磷酸盐与式V或式VI铂络合物的含水反应混合物：
Figure FSB00000711154100032
其中R1和R2各自独立地选自NH3、取代的或未取代的脂肪族胺和取代的或未取代的芳香族胺；
其中R3选自取代的或未取代的脂肪族胺；而且
其中X独立地选自卤素；
维持在30至60摄氏度的温度，持续12至18小时，pH为7至9；
(ii)向反应混合物加入过氧化氢，以及选自由乙酸盐、丁酸盐和α-羟基酸的盐及其组合所组成的组的任选试剂；
(iii)随后浓缩含水反应混合物，以使不形成焦磷酸盐沉淀；
(iv)通过加入硝酸来将反应混合物的pH迅速降至pH小于2；
其中，所述分离的单体铂(IV)络合物如式II或IV所示：
其中R1和R2各自独立地选自NH3、取代的或未取代的脂肪族胺和取代的或未取代的芳香族胺；
其中，所述R3选自取代的或未取代的脂肪族胺；
其中每个S独立地选自氢氧化物、乙酸、丁酸和α-羟基酸；而且
其中所述分离的单体铂络合物在pH6与9之间的水溶液中是稳定的。
17.如权利要求16所述的方法，其中R3选自乙二胺和环己二胺。
18.如权利要求16所述的方法，其中所述温度是40摄氏度，且反应时间是15小时，而且pH在7与8之间。
19.如权利要求16所述的方法，其还包括在浓缩反应混合物之后将反应混合物冷却至5摄氏度与环境温度之间的温度。
20.如权利要求16所述的方法，其还包括在降低反应混合物的pH之后将反应混合物冷却至5摄氏度与环境温度之间的温度。
21.如权利要求16所述的方法，其中在浓缩反应混合物前与过氧化氢一起加入的任选试剂选自乙酸钠、丁酸钠和α-羟基酸钠盐。
22.如权利要求16所述的方法，其中在浓缩反应混合物前与过氧化氢一起加入的任选试剂选自乙酸钾、丁酸钾和α-羟基酸钾盐。
23.如权利要求16所述的方法，其中过氧化氢的初始体积比浓度为30％。
24.如权利要求16所述的方法，其中所制备的分离的单体铂络合物是顺式-二氨合-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)。
25.如权利要求16所述的方法，其中所制备的分离的单体铂络合物是1，2-乙二胺-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)。
26.如权利要求16所述的方法，其中所制备的分离的单体铂络合物是反式-1，2-环己二胺)-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)。
27.治疗上有效量的至少一种选自权利要求1所述络合物的分离的单体铂络合物，以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物在制备治疗癌的药物中的应用。
28.如权利要求27所述的应用，其中所述癌选自卵巢癌、睾丸癌、小细胞肺癌和头颈癌。
29.治疗上有效量的至少一种选自二氨合(二氢焦磷酸)铂(II)和权利要求1所述络合物的分离的单体铂络合物，以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物在制备治疗对选自顺铂、卡铂和奥沙利铂的一种或更多种抗癌剂耐药的癌的药物中的应用。
30.如权利要求29所述的应用，其中所述癌选自卵巢癌、睾丸癌、小细胞肺癌和头颈癌。
31.一种用于治疗癌的组合物，包括：
一种或更多种式II的分离的单体铂(IV)络合物：
Figure FSB00000711154100051
其中R1和R2分别独立地选自NH3、甲胺、乙胺、丙胺，异丙胺、丁胺、环己胺、苯胺、吡啶和取代的吡啶；以及
其中每个S独立地选自氢氧化物、乙酸、丁酸和α-羟基酸；或者或其药学上可接受的盐。
32.如权利要求31所述的组合物，其中所述分离的单体铂络合物是顺式-二氨合-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)。
33.一种用于治疗癌的组合物，其包括：
一种或更多种式III的分离的单体铂(II)络合物；
Figure FSB00000711154100061
其中，所述R3选自取代的或未取代的脂肪族胺；
或其药学上可接受的盐。
34.如权利要求33所述的组合物，其中，R3选自乙二胺和环己二胺。
35.如权利要求34所述的组合物，其中所述分离的单体铂络合物是1，2-乙二胺(二氢焦磷酸)铂(II)。
36.如权利要求34所述的组合物，其中所述分离的单体铂络合物是(反式-1，2-环己二胺)(二氢焦磷酸)铂(II)。
37.治疗上有效量的组合物在制备治疗癌的药物中的应用，所述组合物包括：(i)至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物；以及(ii)一个或更多个选自以下的含铂化合物：
(a)式II的分离的单体铂络合物：
Figure FSB00000711154100071
其中R1和R2分别独立地选自NH3、甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、丁胺、环己胺、苯胺、吡啶和取代的吡啶；以及
其中每个S独立地选自氢氧化物、乙酸、丁酸和α-羟基酸；
或
其药学上可接受的盐；
(b)式I、II和IV的分离的单体铂络合物：
其中R1和R2分别独立地选自NH3、取代的或未取代的脂肪族胺和取代的或未取代的芳香族胺；
其中，R3选自取代的或未取代的脂肪族胺；以及
其中，R1和R2不都是NH3；以及
其中，每个S独立地选自氢氧化物、乙酸、丁酸和α-羟基酸；或
其药学上可接受的盐；以及
(c)式III的分离的单体铂络合物：
其中，R3选自取代的或未取代的脂肪族胺；或
其药学上可接受的盐。
38.如权利要求37所述的应用，其中(a)中分离的单体铂络合物为顺式-二氨合-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)。
39.如权利要求37所述的应用，其中所述R3选自乙二胺或环己二胺。
40.如权利要求38所述的应用，其中所述癌为对顺铂、卡铂和奥沙利铂中的一个或多个耐药的癌。
41.如权利要求40所述的应用，其中所述癌选自睾丸癌、小细胞肺癌和头颈癌。
42.如权利要求40所述的应用，其中所述癌是卵巢癌。
43.治疗上有效量的组合物在制备治疗癌的药物中的应用，所述癌为对顺铂、卡铂、奥沙利铂或它们的组合耐药的癌，所述组合物包括(i)至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物；以及(ii)一个或更多个选自以下的含铂化合物：
(a)二氨合(二氢焦磷酸)铂(II)；
(b)式II的分离的单体铂络合物：
Figure FSB00000711154100082
其中R1和R2分别独立地选自NH3、甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、丁胺、环己胺、苯胺、吡啶和取代的吡啶；以及
其中每个S独立地选自氢氧化物、乙酸、丁酸和α-羟基酸；或其药学上可接受的盐；
(c)式I、I I和IV的分离的单体铂络合物：
Figure FSB00000711154100091
其中R1和R2分别独立地选自NH3、取代的或未取代的脂肪族胺和取代的或未取代的芳香族胺；
其中，R3选自取代的或未取代的脂肪族胺；以及
其中，R1和R2不都是NH3；以及
其中，每个S独立地选自氢氧化物、乙酸、丁酸和α-羟基酸；或
其药学上可接受的盐；以及
(d)式III的分离的单体铂络合物：
Figure FSB00000711154100092
其中，R3选自取代的或未取代的脂肪族胺；或
其药学上可接受的盐。
44.如权利要求43所述的应用，其中(b)中分离的单体铂络合物为顺式-二氨合-反式-二羟配位基(二氢焦磷酸)铂(IV)。
45.如权利要求43所述的应用，其中所述R3选自乙二胺或环己二胺。
46.如权利要求44所述的应用，其中所述癌选自卵巢癌、睾丸癌、小细胞肺癌和头颈癌。
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