CN101756891A - 一种克拉屈滨经注射给药的制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种克拉屈滨经注射给药的制剂及其制备方法。其特征在于由克拉屈滨和水溶性填充剂、pH调节剂、注射用水、渗透压调节剂组成。其中克拉屈滨的重量百分比为0.001-50％，余量为药用辅料或水。本发明制备的克拉屈滨经注射给药的制剂，稳定性好、生物利用度高，解决了临床急性、慢性粒细胞白血病治疗要求的注射药物的需求。

Description

一种克拉屈滨经注射给药的制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，更具体地说是涉及一种含活性成分克拉屈滨的经注射给药的制剂及其制备方法。

背景技术

克拉屈滨(cladribine)是一种腺苷脱氧酶抑制剂，由美国强生集团(Johnson & Johnson)下属子公司奥多生物技术公司(Ortho Biotec)与美国斯克利普斯研究院(Scripps Research Institute)开发，用于治疗多种肿瘤，包括急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、皮肤T细胞淋巴瘤、毛细胞白血病和非何杰金氏淋巴瘤；并于1993年2月首次在美国上市，同年随后在加拿大和瑞典上市，商品名为Leustatin。20世纪60年代，克拉屈滨(cladribine)首先作为合成2-脱氧核苷的中间体，直到1984年，它治疗淋巴瘤的潜在药效才被揭晓。2003年5月，Lipomed公司的Litak(cladribine，克拉屈滨)皮下给药配方获欧盟CPMP推荐批准，用于毛细胞白血病的治疗。

目前，有雪兰诺(Serono)公司的口服多发性硬化症(MS)治疗药Mylinax(cladribine)今年第一季度将推出本品的III期临床研究。十几年来的临床应用显示出，克拉屈滨(cladribine)可以有效地治疗淋巴细胞增殖类疾病，如毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、非何杰金氏淋巴瘤以及急性髓细胞白血病。但克拉屈滨(cladribine)的一个缺点是其口服生物利用度只有50％，原因是该化合物在酸性环境下不稳定，并且能被细菌的核苷酸磷酸酶降解，所以做成注射剂型。克拉屈滨注射液是一合成的抗肿瘤药物，用于静脉滴注治疗毛细胞白血病，本品为无色、无菌、不含防腐剂的注射液，每瓶含有10mg克拉屈滨-种绿色的嘌呤核苷类似体；每毫升包含1mg的克拉屈滨活性成分和9mg的氯化钠非活性成分。适应症：用于治疗毛细胞白血病，临场上表现为贫血、嗜中性白血球减少、血小板减少等症状。作用特点：本品是一种抗腺苷脱氨酶(ADA)的脱氧腺苷类似物。体外对类淋巴细胞和类髓细胞性肿瘤有广谱性抑制作用，但对多发性髓细胞瘤和许多实体肿瘤株的毒性不大，单核细胞在体外对本品很敏感。本品对分化的和未分化的细跑都有活性。用法用量：溶于500ml生理盐水中缓慢静脉滴注，推荐用量为每次0.09mg/kg/d，连续7天为一疗程。

白血病是造血系统的一种恶性疾病，其特点为体内有大量白血病细胞广泛而无控制地增生，出现于骨髓和许多其它器官和组织，并进入外周血液中。急性白血病以其起病急、进展快、病情凶险，严重危害人类健康。随着医学进步，急性白血病经过积极治疗，多数病人都能取得缓解，现在缓解白血病已不再是治疗的终极目标，如何提高治愈率，使大多数白血病病人得到根治，成为当今血液学研究的重点。

本品是一种抗腺苷脱氨酶(ADA)的脱氧腺苷类似物。体外对类淋巴细胞和类髓细胞性肿瘤有广谱性抑制作用，但对多发性髓细胞瘤和许多实体肿瘤株的毒性不大，单核细胞在体外对本品很敏感。本品对分化的和未分化的细跑都有活性。

发明内容

本发明的目的是提供适合临床治疗毛细胞白血病要求的注射药物，本发明以注射给药的制剂及其制备方法，尤其是静脉注射给药，解决了急性、慢性粒细胞白血病治疗上的需求。

本发明的技术方案：一种含活性成分克拉屈滨经注射给药的制剂，其特征在于由活性成分克拉屈滨0.001-50％和水溶性填充剂、PH调节剂、增溶剂、抗氧剂、注射用水、渗透压调节剂组成。

本发明所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的制剂是指含有克拉屈滨的冻干粉针、小针注射液和小输液。

本发明所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的制剂是：

a.冻干剂中药物成分与其它药用辅料的重量百分比为0.1-50％；

b.小针注射液中药物的浓度为50mg/ml-0.5mg/ml；

c.小输液中药物的浓度为1mg/ml-0.02mg/ml。

本发明所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的小输液是指克拉屈滨与水组成的复方注射液。

本发明所述的经注射给药的制剂，其特征在于水溶性填充剂是甘露或吐温；PH调节剂是枸橼酸、磷酸、苹果酸等非挥发性的酸以及氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠盐、磷酸钠或钾或铵盐；增溶剂是聚乙烯吡咯烷酮、PEG6000、PEG4000、泊洛沙姆、卡波姆、吐温80、低分子右旋糖苷或三羟甲基氨基甲烷；抗氧剂是亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠或亚硫酸氢钠；有机硫抗氧剂为硫代甘油、硫脲素或1-硫代山梨糖醇。

本发明含活性成分克拉屈滨经注射给药制剂的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

I、组成

(1)冻干剂：克拉屈滨0.1％-30％，，水溶性填充剂50％-70％，增溶剂0.1％-12％，抗氧剂0.003％-3％，渗透压0.9％；

(2)小针注射液：克拉屈滨0.05％-1.0％，增溶剂0.1％-8％，抗氧剂0.001％-5％，注射用水70％-90％；

(3)小输液：克拉屈滨0.005-0.1％，增溶剂0.1％-8％，抗氧剂0.003％-1％，渗透压0.9％，注射用水88％-98％；

II.不同的经注射给药制剂的制备方法包括下列步骤：

(1)冻干剂：取克拉屈滨和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得白色疏松块状物，封口即的；

(2)小针注射液：取克拉屈滨和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，精滤、灌封、灭菌；

(3)小输液：取克拉屈滨和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量约20％，调节PH值至4-10使其溶解，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，加水至刻度，精滤、灌封、灭菌。

目前认为已糖醇类抗癌活性主要来自其α，ω二环氧化物的两个三元环的张力，它能和癌细胞的DNA结合，破坏DNA，从而阻止其复制，抑制癌细胞的增殖。引入两个乙酰基的DADAG脂溶性增加，易通过细胞膜，发挥对DNA烷化的潜力，故DADAG的疗效优于DAD。重庆医学院李维信等[6]用DAD进行“慢粒”治疗的超微结构观察结果与Kerr等人[7，8]所描述的“细胞收缩性坏死”以及后来改称的“凋亡”在形态表现上相符合。但DADAG抗肿瘤作用是否与诱导凋亡有关，目前尚不完全清楚。在本实验中，HL-60和K562细胞经DADAG作用后，其DNA经琼脂糖凝胶电泳出现凋亡细胞特征性的生化学变化-梯状条带；流式细胞仪同样检测到凋亡峰，并呈一定的量效和时效关系，这说明DADAG抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡有关。DADAG对K562细胞的IC50和诱导K562细胞凋亡的剂量明显大于HL-60，且不影响K562细胞的细胞周期分布，这与K562细胞连续表达有活性的Bcr/Abl酪氨酸激酶有关。研究表明：Bcr/Abl的表达可抑制生长因子的去除和Vp-16诱导的细胞凋亡，Abl酪氨酸激酶的功能与抑制凋亡的bcl-2相似[9，10]。这表明凋亡有细胞类型特异性，HL-60和K562细胞的凋亡信号途径不一样。对K562细胞生化途径的深入研究，将有助于阐明K562细胞对大多数化疗药不敏感和耐药的机理。

本发明对二乙酰二克拉屈滨(diacetyldianhydrogalactitol，DADAG)在体内外的抗肿瘤作用进行了药理实验，探讨其抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡的关系。方法：建立小鼠脑内接种艾氏腹水癌模型，观察DADAG体内抗瘤作用；MTT法观察DADAG对人早幼粒白血病细胞株HL-60和人红白血病细胞株K562的生长抑制作用，DNA电泳和流式细胞仪分析HL-60和K562细胞凋亡的情况。

结果：DADAG10mg/kgip，每天1次，连续给药7天，可显著延长小鼠中位生存时间；对HL-60和K562均有生长抑制作用，药物作用72h的IC50分别为3.7mg/L和25.5mg/L；作用HL-60和K562细胞后电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带，DNA直方图出现亚G1峰。

结论：DADAG抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡有关。对大鼠W256抑瘤率为90.6％(2mg/kg，ip×6)，Lewis肺癌抑瘤率为52.1％(3mg/kg，ip×7)，B16黑色素瘤抑瘤率为72.6％(3mg/kg，ip×7)，EAC实体瘤抑瘤率为32.8％(8mg/kg，ip×7)(待发表)。我们观察了DADAG对脑内移植性EAC实体瘤的作用，结果发现在10mg/kg高剂量下，DADAG对颅内荷瘤小鼠的生命延长率是29％，表明DADAG有可能透过血脑屏障。DADAG对脑瘤的抑制作用和对HL-60、K562细胞的生长抑制作用，表明其有体内外抗肿瘤作用，为DADAG临床应用提供理论依据。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅为解释性的说明，决不意味着它以任何方式限制本发明的范围。

实施例1

取克拉屈滨3g，置于容器中，加增溶剂聚乙烯吡咯烷酮0.1g，注射用水80ml，加氢氧化钠0.2g，搅拌使溶解，加1mol/L的枸橼酸调节PH至7-9.0，加入甘露醇28g、搅拌使溶解，补加水至100ml。加入0.5g活性碳，在30℃下搅拌20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液按每支1ml进行分装，预冻2小时后，冷冻下减压干燥12小时，至样品温度到室温后，再干燥5小时，制得白色疏松块状物，封口即得克拉屈滨冻干粉针。

实施例2

取克拉屈滨50g，置于容器中，加PEG-6000  2g，注射用水180ml，搅拌使溶解，以1mol/L的盐酸或氢氧化钠调节PH至5.0-9.0，加入甘露醇80g、山梨醇20g，搅拌使溶解，补加水至2000ml。加入0.5g活性碳，在30℃下搅拌20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液按每支2ml进行分装，预冻2小时后，冷冻下减压干燥18小时，至样品温度到室温后，再干燥5小时，制得白色疏松块状物，封口即得克拉屈滨冻干粉针。

实施例3

取克拉屈滨10g，木糖醇0.3g，加入到已溶解5g十二烷基硫酸钠的注射用水440ml中，加入2g硫代硫酸钠搅拌溶解，加入碳酸氢钠调节PH为5.5-8.5，加入0.5g活性炭，室温搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至500ml，精滤、以每支5ml灌封、灭菌，即得克拉屈滨注射液。

实施例4

取克拉屈滨10g，木糖醇0.3g，三羟甲基氨基甲烷5g的注射用水440ml中，加入2g EDTA-2Na搅拌溶解，加入碳酸氢钠调节PH为7.5-9.0，补加水至500ml，加入5g活性炭，室温搅拌吸附30分钟，除炭，精滤，以每支2ml灌封、灭菌，即得克拉屈滨注射液。

实施例5

取克拉屈滨1g，木糖醇0.1g加入注射用水180ml中，加0.5克NaOH搅拌使溶解，加入3g焦亚硫酸钠，搅拌溶解，调节PH为7.0-9.0，补加注射用水至200ml，加入2g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭、精滤、以每支2ml灌封、灭菌，即得克拉屈滨注射液。

实施例6

取克拉屈滨5g，木糖醇0.5g加入15g磷酸氢二钠和90g氯化钠，再加注射用水2000ml，搅拌使溶解，调节PH为7.5-9.0，加入10g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至10000ml，精滤、灌封每瓶100ml，灭菌，即得克拉屈滨氯化钠注射液。

实施例7

取克拉屈滨10g，加入15g氢氧化钠和1g木糖醇，15g焦亚硫酸钠，再加注射用水2000ml，搅拌使溶解，调节PH为5.0-8.0，加入10g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至10000ml，精滤、灌封每瓶100ml，灭菌，即得克拉屈滨木糖醇注射液。

实施例8

取克拉屈滨3.0g，木糖醇0.5g，加入PEG-400020g，注射用水2000ml，搅拌使溶解，再加入15g磷酸氢二钠和500g低分子右旋糖苷，15gEDTA-2Na，搅拌使溶解，调节PH为7.0-8.5，加入10g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至5000ml，精滤、灌封每瓶50ml，灭菌，即得克拉屈滨低分子右旋糖苷注射液。

Claims (6)

1.一种活性成分克拉屈滨经注射给药的制剂，其特征在于由活性成分克拉屈滨0.001-50％和水溶性填充剂、PH调节剂、增溶剂、抗氧剂、注射用水、渗透压调节剂组成。

2.如权利要求1所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的制剂是指含有克拉屈滨的冻干粉针、小针注射液和小输液。

3.如权利要求1所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的制剂是：

a.冻干剂中药物成分与其它药用辅料的重量百分比为0.1-50％；

b.小针注射液中药物的浓度为50mg/ml-0.5mg/ml；

c.小输液中药物的浓度为1mg/m1-0.02mg/ml。

4.如权利要求3所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的小输液是指克拉屈滨与水组成的复方注射液。

5.根据权利要求1所述的经注射给药的制剂，其特征在于水溶性填充剂是甘露或吐温；PH调节剂是枸橼酸、磷酸、苹果酸等非挥发性的酸以及氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠盐、磷酸钠或钾或铵盐；增溶剂是聚乙烯吡咯烷酮、PEG6000、PEG4000、泊洛沙姆、卡波姆、吐温80、低分子右旋糖苷或三羟甲基氨基甲烷；抗氧剂是亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠或亚硫酸氢钠；有机硫抗氧剂为硫代甘油、硫脲素或1-硫代山梨糖醇。

6.一种含活性成分克拉屈滨经注射给药制剂的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

I、组成

(1)冻干剂：克拉屈滨0.1％-30％，，水溶性填充剂50％-70％，增溶剂0.1％-12％，抗氧剂0.003％-3％，渗透压0.9％；

(2)小针注射液：克拉屈滨0.05％-1.0％，增溶剂0.1％-8％，抗氧剂0.001％-5％，注射用水70％-90％；

(3)小输液：克拉屈滨0.005-0.1％，增溶剂0.1％-8％，抗氧剂0.003％-1％，渗透压0.9％，注射用水88％-98％；

II.不同的经注射给药制剂的制备方法包括下列步骤：

(1)冻干剂：取克拉屈滨和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得白色疏松块状物，封口即的；

(2)小针注射液：取克拉屈滨和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，精滤、灌封、灭菌；

(3)小输液：取克拉屈滨和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量约20％，调节PH值至4-10使其溶解，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，加水至刻度，精滤、灌封、灭菌。