KR100794499B1 - 개구린 ５로부터 합성 및 제조된 항생 및 항암 신규펩타이드 유도체 - Google Patents
개구린 ５로부터 합성 및 제조된 항생 및 항암 신규펩타이드 유도체 Download PDFInfo
- Publication number
- KR100794499B1 KR100794499B1 KR1020060043832A KR20060043832A KR100794499B1 KR 100794499 B1 KR100794499 B1 KR 100794499B1 KR 1020060043832 A KR1020060043832 A KR 1020060043832A KR 20060043832 A KR20060043832 A KR 20060043832A KR 100794499 B1 KR100794499 B1 KR 100794499B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- cancer
- antibiotic
- anticancer
- peptide
- model
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 85
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 title claims abstract description 54
- 108010061967 gaegurin 5 Proteins 0.000 title abstract 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 title description 7
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 66
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 28
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010007882 Cellulitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000001976 Endocrine Gland Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017916 Gastroenteritis staphylococcal Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061252 Intraocular melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002231 Muscle Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000821 Parathyroid Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010034299 Penile cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008582 Staphylococcal Food Poisoning Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023915 Ureteral Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046392 Ureteric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005969 Uveal melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003761 Vaginal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010047741 Vulval cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024447 adrenal gland neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003146 cystitis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011523 endocrine gland cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003914 endometrial carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001343 fallopian tube carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 2
- 208000029559 malignant endocrine neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026045 malignant tumor of parathyroid gland Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002077 muscle cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002575 ocular melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002314 small intestine cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002190 staphyloenterotoxemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011294 ureter cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004916 vulva carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000013013 vulvar carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032271 Malignant tumor of penis Diseases 0.000 claims 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 201000003265 lymphadenitis Diseases 0.000 claims 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 28
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 abstract description 11
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 abstract description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 abstract description 4
- 241000269350 Anura Species 0.000 abstract description 3
- 206010063409 Acarodermatitis Diseases 0.000 abstract 1
- 241000270980 Rugosa rugosa Species 0.000 abstract 1
- 241000447727 Scabies Species 0.000 abstract 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract 1
- 208000005687 scabies Diseases 0.000 abstract 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 21
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 19
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 17
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 10
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 9
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 3
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 3
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229940041476 lactose 100 mg Drugs 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 101800002712 p27 Proteins 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- SKYZYDSNJIOXRL-BTQNPOSSSA-N (6ar)-6-methyl-5,6,6a,7-tetrahydro-4h-dibenzo[de,g]quinoline-10,11-diol;hydrochloride Chemical compound Cl.C([C@H]1N(C)CC2)C3=CC=C(O)C(O)=C3C3=C1C2=CC=C3 SKYZYDSNJIOXRL-BTQNPOSSSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCSZKGMHDFZUEV-UHFFFAOYSA-N 1-phenylsiline Chemical compound C1=CC=CC=[Si]1C1=CC=CC=C1 KCSZKGMHDFZUEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000242757 Anthozoa Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 101710114744 Bombinin Proteins 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 101100014594 Glandirana rugosa GGN5 gene Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 239000006391 Luria-Bertani Medium Substances 0.000 description 1
- 108060003100 Magainin Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000219470 Mirabilis Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000005764 Theobroma cacao ssp. cacao Nutrition 0.000 description 1
- 235000005767 Theobroma cacao ssp. sphaerocarpum Nutrition 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010046431 Urethral cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046458 Urethral neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000269368 Xenopus laevis Species 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002587 anti-hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002358 autolytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 150000001576 beta-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 235000001046 cacaotero Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000002542 deteriorative effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N lauric acid triglyceride Natural products CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCC VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 206010025226 lymphangitis Diseases 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- -1 β-amino acids Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/463—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from amphibians
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
본 발명은 국내산 옴개구리(Rana rugosa)로부터 분리된 항생 및 항암 펩타이드인 개구린 5(Gaegurin 5)의 체계적인 펩타이드 엔지니어링을 통해 분자 크기가 개구린 5의 절반 이하이면서도 높은 항생 및 항암활성을 가지는 펩타이드에 관한 것으로서, 상세하게는 국내산 개구리의 표피로부터 분리된 펩타이드 중, 가장 짧은 길이를 가진 개구린 5로부터 합성, 제조된 항생 및 항암 펩타이드 유도체들은 지금까지 알려진 개구리 유래 항생 및 항암 펩타이드 중 가장 짧은 길이를 가지며, 세포 독성이 없고 탁월한 항생 및 항암 활성을 나타낼 뿐만 아니라 인간 적혈구 세포에 대한 용혈활성이 적으므로 인체에 안전한 최적의 항생제 또는 항암제로서 유용하게 이용될 수 있다.
옴개구리, 항생 펩타이드, 항암 펩타이드,
Description
도 1a는 SDS 미셀(micells)에서 개구린 5(GGN5)의 펩타이드를 측면에서 본 구조를 나타낸 도이고,
도 1b는 SDS 미셀에서 개구린 5의 α-헬릭스(helix) 구역의 N-말단 부분(G3~V13)을 상면에서 본 구조를 나타낸 도이며,
도 2a는 개구린 5의 유도체인 모델 펩타이드 25의 헬리컬 휠 다이어그램(helical wheel diagram)을 나타낸 도이고,
도 2b는 개구린 5의 유도체인 모델 펩타이드 26의 헬리컬 휠 다이어그램(helical wheel diagram)을 나타낸 도이며,
도 2c는 개구린 5의 유도체인 모델 펩타이드 27의 헬리컬 휠 다이어그램(helical wheel diagram)을 나타낸 도이고,
도 2d는 개구린 5의 유도체인 모델 펩타이드 28의 헬리컬 휠 다이어그램(helical wheel diagram)을 나타낸 도이며,
도 3a는 7종의 암세포 주에 대한 모델 펩타이드 25의 항암 활성을 나타낸 도 이고,
도 3b는 7종의 암세포 주에 대한 모델 펩타이드 26의 항암 활성을 나타낸 도이며,
도 3c는 7종의 암세포 주에 대한 모델 펩타이드 27의 항암 활성을 나타낸 도이고,
도 3d는 7종의 암세포 주에 대한 모델 펩타이드 28의 항암 활성을 나타낸 도이며,
도 3e는 8종의 암세포 주에 대한 A4W,V8W-GGN5N11의 항암 활성을 나타낸 도이다.
본 발명은 개구린 5로부터 합성 및 제조된 항생 및 항암 펩타이드 유도체에 관한 것이다.
세균의 감염은 인간의 질병에서 가장 흔하고 치명적인 원인 중의 하나인데, 불행하게도 항생제의 남용으로 인하여 세균의 항생제 저항성이 야기되었다. 실제로, 세균이 새로운 항생제에 저항성을 나타내는 속도는 새로운 항생제의 유사체가 개발되는 속도보다 훨씬 빨리 일어난다. 예를 들어, 생명에 위협을 가할 수 있는 엔테로코쿠스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 마이코박테리움 투버쿨로시스 (Mycobacterium tuberculosis) 및 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 등의 세균 종들은 지금까지 알려진 모든 항생제에 대한 저항력을 키워왔다(stuart B. Levy., Scientific American, pp 46-53, 1998).
항생제에 대한 내성(tolerance)은 항생제에 대한 저항성(resistance)과는 구별되는 현상인데, 1970년대에 뉴모코커스(Pneumococcus sp.)에서 최초로 발견되었으며, 페닐실린의 작용 기작에 대한 중요한 단서를 제공하였다. 내성을 보이는 종은 통상적인 농도의 항생제 존재 하에서 성장을 멈추지만 결과적으로 죽지는 않는다. 내성은 항생제가 세포벽 합성 효소를 저해할 때 오토라이신(autolysin) 등과 같은 세균의 자가분해(autolytic) 효소의 활성이 일어나지 않기 때문에 생기는데, 이러한 사실은 페니실린이 내인성 가수분해 효소(endogenous hydrolytic enzyme)를 활성화시킴으로써 세균을 죽이며 세균은 또한 이들의 활성을 억제해서 항생제 치료 시에도 생존하는 결과를 나타내게 된다.
세균이 항생제에 대한 내성을 가지는 것은 임상적으로 대단히 중요한데, 내성 세균을 박멸하는 것이 불가능하게 되면 임상적인 감염에서 항생제 치료의 효용이 떨어지기 때문이다(Handwerger and Tomasz, Rev. Infec. Dis., 7, pp 368-386, 1985). 아울러, 내성이 생기는 것은 항생제에 대한 저항성이 생기게 되는 선행조건이라고 간주되는데, 이것은 항생제 치료에도 불구하구 살아남는 균주가 생기기 때문이다. 이러한 균주는 항생제에 저항성을 가지는 새로운 유전 요소를 획득해서 항생제의 존재 하에서도 계속 성장하게 된다. 실제적으로 모든 저항성을 보이는 세균들은 내성도 가지고 있는 것으로 알려져 있으므로(Liu and Tomasz, J. Infect. Dis., 152, pp 365-372, 1985), 이러한 항생제 저항성을 가지는 세균을 죽일 수 있는 새로운 항생제의 개발이 필요하다
생체막에 작용하는 항생 펩타이드는 현재 거의 모든 생물종에서 발견되고 있다. 최근 내성균의 증가와 더불어 이를 극복할 수 있는 새로운 항생제 개발의 대상으로서 항생 펩타이드가 주목받고 있는데, 특히, 1969년 봄비닌(bombinin)이란 항생 펩타이드가 발견된 이래로, 개구리나 두꺼비와 같은 양서류의 표피가 풍부한 항생 펩타이드를 제공한다는 것이 밝혀졌고, 이러한 항생 펩타이드들이 현재 세계적으로 가장 많이 연구되어 있다. 이후, 1987년 아프리카 발톱 개구리의 표피로부터 마가이닌(magainin)이라는 항생 펩타이드가 발견되면서부터 개구리 표피 항생 펩타이드가 새로운 항생제 개발의 대상으로 더욱 주목받게 되었다.
항생 펩타이드는 세균의 세포막에만 선택적으로 작용하여 세포막을 파괴함으로써 세균을 사멸시키는 작용기전을 가지고 있기 때문에, 이는 기존 항생제들의 작용기전들과 전혀 다른 새로운 기전이므로, 내성균 극복의 대안으로서 가치가 높다. 또한 일반적으로 항생 펩타이드들은 그램 양성 및 그램 음성균과 진균 및 바이러스를 비롯하여 암세포 등에 대해서까지 폭넓은 항생 작용을 나타내며, 자연 물질이므로 약으로 개발될 경우 부작용이 적을 것으로 예상되고 있다. 또한, 제제학적인 측면에서도 항생 펩타이드는 수용성과 지용성을 모두 가지는 양성 친화적 성질을 가지고 있기 때문에 약물로 개발시 흡수 및 약물수송 등에서도 매우 유리할 것으로 기대되고 있다. 그러나, 이러한 다양한 이점에도 불구하고 약물개발 대상으로서 항생 펩타이드가 가지는 가장 큰 문제점은 안정성과 분자량이다. 첫째 안정성 측면에 서, 항생 펩타이드는 생체 내에 존재하는 수많은 단백질 분해효소들에 대한 저항성을 가지지 않으므로 분해되기가 쉽다. 이러한 문제는 현재, D-아미노산의 도입, β-아미노산 등의 비-자연 물질(unnatural) 유래의 아미노산의 도입 및 화학적 구조 변형 등으로 극복될 수 있다는 것이 많이 제안되고 있으나, 일반적으로 항생 펩타이드의 분자량이 3,000 이상으로 매우 크다는 점은 약물 개발시 흡수와 수송 면에서 매우 어려운 점으로 작용할 수밖에 없다. 이는, 기본적으로 작은 크기의 항생 펩타이드를 발견 또는 설계하는 것으로서만 극복될 수 있다.
암은 인류가 해결해야 될 난치병 중의 하나로, 전 세계적으로 이를 치유하기 위한 개발에 막대한 자본이 투자되고 있는 실정이며, 우리나라의 경우, 질병 사망원인 중 제 1위의 질병으로서 연간 약 10 만 명 이상이 진단되고, 약 6 만 명 이상이 사망하고 있다. 암 환자 증가율도 10%에 이르고 있다. 1999년 국립 암 센터의 통계에 따르면 환자는 12만 명으로서 남자는 위암(24%), 간암(16%), 폐암(16%), 대장암(10%)의 순서이며, 여자는 위암(16%), 자궁경부암(12%), 유방암(15%), 대장암(10%)의 순서로 암 환자가 발생했다. 이러한 암의 유발 인자인 발암물질로는 흡연, 자외선, 화학물질, 음식물, 기타 환경인자들이 있으나, 그 유발 원인이 다양하여 치료제의 개발이 어려울 뿐만 아니라 발생하는 부위에 따라 치료제의 효과 또한 각기 다르다. 현재 치료제로 사용되는 물질들은 상당한 독성을 지니고 있으며, 암 세포만을 선택적으로 제거하지 못하므로, 암의 발생 후 이의 치료뿐 아니라, 암의 발생을 예방하기 위한 독성이 적고 효과적인 항암제의 개발이 절실히 필요하다.
현재 사용되고 있는 항암제들은 효소제제나 백신 등의 생물학적 제제, 순수 합성 의약품 및 천연물 유래의 의약품 등으로 크게 구분할 수 있는데, 이 중 유전자, 효소, 백신 등을 이용한 항암제는 실용단계에 있는 상태는 아니며 화학요법에 의해 개발된 많은 항암제는 암의 종류에 따라 약리작용이 다양하고(Gillman et al., The pharmacological Basis of therapeutics, Maxwell Macmillan., 18, p 1202, 1986), 독성에 의한 부작용이 다양하게 나타났기 때문에 암 치료시 문제점으로 지적되고 있다(Chung et al., J. Wonkwang Medical Sci., 3, pp 13-34, 1987). 또한 항암제는 암세포의 성장을 효과적으로 억제하기도 하지만, 때로는 정상 세포에 대해서 독성을 나타내기도 하고 암세포가 성장, 증식과 전이를 일으키는 과정에서 변이되면서 항암제에 대한 저항성을 보이는 등 암 치료의 커다란 문제점으로 대두되고 있다. 이러한 원인은 대부분의 항암제가 1,000 이하의 분자량을 가지고 있기 때문에, 항암제를 투여하였을 경우 암 조직 뿐 아니라 정상조직에도 침투하여 정상조직, 특히 세포분열이 활발한 조직세포에도 손상을 입히기 때문에 골수기능저하, 위장장애, 탈모증 등의 여러 가지 부작용이 나타나게 된다. 뿐만 아니라 작은 분자량을 가지고 있기 때문에 체내에서 오줌으로 쉽게 배출되어 암 치료에 있어서 많은 양의 약물이 요구되는데서 기인된다. 그러므로 항암제가 지니는 정상세포에 대한 독성, 몸 밖으로의 배출, 그리고 암세포의 저항성이 암 치료에 있어서 가장 큰 문제로 대두되며, 이는 현대 의학이 반드시 풀어야만 하는 과제이다. 따라서 많은 학자들은 이 같은 독성의 작용기전을 밝히기 위하여 많은 연구를 수행하고 있으며(Yamazaki et al., Biosci, Biotech Biochem., 56(1), p 149, 1992 ; Tompson et al., Exp . Cell Res., 41, pp 411-427, 1966 ; Ellem et al., Devel , Biol ., 118, pp 311-330, 1968), 근래에는 세포 배양 기술이 급격히 발달함에 따라 각종 세포를 배양한 후, 여러 독성물질을 투여함으로써 이들의 세포독성에 대한 기전을 세포 수준에서 규명하려는 연구도 활발히 진행되고 있으며, 항암제의 부작용을 최소화하고 치료효과를 높이기 위하여 생약 및 천연물을 이용한 항암제의 개발이 지속적으로 시도되고 있다.
이에 본 발명자들은 상기와 같은 종래 항생 펩타이드 및 항암제들의 단점을 극복하기 위하여, 본 발명자들에 의해 이미 그 구조가 밝혀진 국내산 개구리로부터 분리된 6종의 항생 펩타이드(개구린 1 내지 개구린 6)들 중 가장 짧은 길이를 가진 개구린 5를 기반으로 하여 훨씬 더 작은 크기의 새로운 항생 및 항암 펩타이드를 설계하고 합성하여, 이와 같이 합성된 항생 및 항암 펩타이드들의 탁월한 항균, 항암 및 용혈활성을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 생물학적 활성도가 높고, 인체에 사용할 경우, 용혈현상을 일으키지 않는 개구린 5로부터 설계 및 합성된 신규 구조의 항생 및 항암 펩타이드 유도체 및 이를 포함하는 약학 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 개구린 5로부터 설계 및 합성된 F-L-G-W-L-F-K-W-A-K-K(모델 25), F-L-K-W-L-F-K-W-A-K-K(모델 26), F-L-G-W-L-F-K- W-A-W-K(모델 27) 및 F-L-W-W-L-F-K-W-A-W-K(모델 28)로 표시되는 항생 및 항암 펩타이드 유도체를 제공한다.
상기 항생 및 항암 펩타이드 유도체는 펩타이드의 특정 부위를 트립토판(Tryptopan) 및 리신(Lysine)으로 치환시켜 합성하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 상기의 개구린 5로부터 설계 및 합성된 항생 및 항암 펩타이드 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 미생물로 인한 감염성 질환 및 암질환 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.
상기 미생물로 인한 감염성 질환은 포도상구균 식중독, 봉와직염(蜂窩織炎), 뇨로감염증, 수막염, 복막염, 방광염, 림프관염, 표저(疽), 중이염, 호흡기 질환, 폐렴, 화농성 염증, 패혈증등 을 포함한다.
상기 암 질환은 자궁경부암, 폐암, 췌장암, 비소세포성폐암, 간암, 결장암, 골암, 피부암, 두부 또는 경부 암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 위암, 항문부근암, 결장암, 유방암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 바람직하게는 자궁경부암, 폐암, 간암, 결장암, 피부암, 위암, 전립선암, 신장암을 포함하며, 본 발명의 조성물은 암 질환 및 전이 치료에도 사용가능하다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 개구린 5로부터 설계 및 합성된 항생 및 항암 펩타이드 유도체는 하기와 같은 방법으로 수득될 수 있다.
본 발명의 한국산 개구리인 옴개구리로부터 분리된 6종의 펩타이드(개구린 1 내지 개구린 6) 중 가장 짧은 길이(24잔기)를 가지는 개구린 5의 공학적 변형을 통하여 본 발명의 항생 및 항암 펩타이드 유도체들을 합성 및 제조할 수 있다.
구체적으로 최적의 항생 및 항암 펩타이드 유도체를 합성하기 위하여, 개구린 4 및 개구린 5를 모분자로 하여 Fmoc 아미노기 보호 용기를 이용한 고체상 합성방법을 사용하여 합성할 수 있으며, 바람직하게는 개구린 4에 대하여 개구린 4의 C-말단 잔기들을 하나씩 제거하면서 펩타이드 유도체들의 항생능을 검증하여 개구린 4의 C-말단 14 잔기를 제거하여 N-말단의 23 잔기만을 남겼을 경우 항생능이 모두 사라짐을 확인한 후, 이렇게 비활성화된 개구린 4 유도체의 16번 위치에 Trp(트립토판) 잔기로 치환하여 개구린 4의 유도체(D16W-GGN4N23)를 합성하고 이의 항생능을 검증한 결과, 항생능을 다시 가지게 됨을 확인하여 Trp 잔기 도입의 중요성을 인지하여 이를 개구린 5의 유도체 합성에 이용할 수 있다.
상기와 같은 방법으로 개구린 5에 대하여도 개구린 5의 C-말단 잔기들을 하나씩 제거하면서 항생 및 항암활성을 검증한 결과, 활성을 가지는 최소 잔기가 13 잔기임을 확인하고, 상기 언급한 바와 같이 개구린 4의 유도체 연구로부터 항생 및 항암 펩타이드 유도체 개발시 Trp 도입의 유용성이 예상되므로, 개구린 5의 13 잔기 활성 분절 대신 11 잔기 불활성 분절에 Trp 잔기를 치환하여 총 11가지의 개구린 5의 Trp 치환체를 합성할 수 있으며, 이들의 활성을 검토하여 개구린 5의 Trp 치환체들 중, 4번 위치에 Trp를 도입한 A4W-GGN5N11 및 8번 위치에 Trp를 도입한 V8W-GGN5N11 유도체가 모분자인 개구린 5와 유사한 항생, 항암 및 용혈활성을 보임 을 확인한 다음, 4번과 8번 위치에서 Trp만이 특이적인지를 알아보기 위하여 다른 아미노산, 바람직하게는 소수성 잔기 Leu(로이신), 친수성이며 특히 양성이온을 가지는 Lys(리신) 및 Trp과 같이 방향성 고리(aromatic ring)를 가지고 있는 Phe(페닐 알라닌)의 세 가지 아미노산으로 치환하여 총 7가지의 개구린 5의 아미노산 치환체를 합성할 수 있다.
위와 같은 방법으로 얻은 A4W-GGN5N11 및 V8W-GGN5N11 유도체의 항생 및 항암 활성을 증가시키기 위하여, Trp(트립토판)의 개수를 증가시키고, 친수성 끝과 소수성 시작 면 사이의 잔기를 친수성 잔기인 Lys(리신)으로 치환시켜 활성이 증가된 모델 펩타이드 유도체를 얻을 수 있다.
또한, 본 발명의 항생 및 항암 펩타이드의 유도체들은, 펩타이드 합성기를 이용하는 화학적 방법에 의하여 얻을 수 있을 뿐만 아니라, 펩타이드를 암호화하는 DNA 또는 RNA 서열을 포함하고, 상기의 항생 및 항암 펩타이드들을 발현하기에 적합한 유전자 클론을 유전자 조작에 의하여 만들고 이를 적합한 세포에 이식하여 발현된 상기의 항생 및 항암 펩타이드를 수득하는 유전자 재조합 기술에 의하여도 수득될 수 있다.
본 발명은 상기와 같은 방법으로 수득된 항생 및 항암 펩타이드 유도체를 제공한다.
상기와 같이 수득된 본 발명의 항생 및 항암 펩타이드 유도체들 중에서 분자량과 안정성면에서 탁월한 최적의 펩타이드를 찾기 위하여, 항생 및 항암 펩타이드 유도체들의 항균활성 및 용혈활성 등을 조사한 결과, 개구린 5의 유도체 중, 하기 와 같은 유도체들은 개구린 5로부터 합성 및 제조된 A4W-GGN5N11 및 V8W-GGN5N11과 유사한 항생, 항암 및 용혈활성을 나타냄을 확인하였다.
모델 25 : F-L-G-W-L-F-K-W-A-K-K
모델 26 : F-L-K-W-L-F-K-W-A-K-K
모델 27 : F-L-G-W-L-F-K-W-A-W-K
모델 28 : F-L-W-W-L-F-K-W-A-W-K
반면에, 개구린 5의 유도체들 중, 하기와 같은 유도체들은 유사한 항균 및 항암활성을 보였으나, 용혈활성이 높게 나타남을 확인하였다.
W4,8-GGN5N13 : F-L-G-W-L-F-K-W-A-S-K-V-L
본 발명의 항생 및 항암 펩타이드 유도체들이 개구린 5에 대하여 구조적 유사성을 가지는지 여부, 항생활성, 항암활성 및 용혈활성을 가지는지 여부에 근거하여 개구린 5와 유사한 구조, 항생, 항암 및 용혈활성을 가지기 위해서는 이것의 유도체들이 개구린 5의 23개의 아미노산 잔기 중 최소한 11개의 잔기를 가지고 있어야 하며, 또한 유도체들이 충분한 활성을 가지기 위해서는 친수성 끝과 소수성 시작 면 사이의 위치에서의 Trp 치환을 통하여 양친화성을 가져야 함을 확인할 수 있었으며, 4번과 8번 잔기에서의 치환이 활성을 가장 크게 증가시킨다는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 두 개보다 많은 수의 Trp 도입시 활성은 뛰어나지만, 용혈활성이 상대적으로 커짐을 알 수 있었고, 양극(amphipathic) 경계면에 위치한 잔기를 Lys으로 치환했을 경우 활성을 증가시킬 수 있었다.
본 발명의 미생물로 인한 감염성 질환 및 암 질환의 예방 및 치료용 약학조 성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.
본 발명의 화합물을 포함하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 화합물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 화합물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골(macrogol), 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 1일 0.0001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위을 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 화합물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용 이 하기 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 펩타이드의 합성 및 정제
양친화성 구조를 갖는 최적의 항생 및 항암 펩타이드를 합성하기 위하여, 국내산 옴개구리의 표피에서 분리된 항생 및 항암 펩타이드인 개구린 5를 모분자로하여 이보다 훨씬 더 작은 크기의 새로운 항생 및 항암 펩타이드를 표준화된 Fmoc-법을 이용한 고상법 (Wellings, D. A., and Atherton, E., Methods Enzymol., 289 , pp44-67, 1997)으로 펩타이드 합성기(Model 90 manufactured by Advanced Chemtech, Inc.)를 사용하여 자동으로 합성하였다. 즉, 수지(Rink Resin) 70 mM을 반응 용기(reaction vessel)에 넣은 후에 수지에 대해 3 당량에 해당하는 아미노산, 아미노산에 대해 2 당량에 해당하는 HOBT(1-Hydroxybenzotriazole) 및 아미노산에 대해 2 당량에 해당하는 DIC(1,3-Diisopropylcarbodiimide)를 아미노산 용기(amino acid vessel)에 넣고 DMF(Dimethylformamide)10㎖로 녹인 다음, DMF를 사용하여 반응 용기의 수지를 스웰링(swelling)시켰다. 25% 피페리딘/DMF를 사용하여 수지의 Fmoc 기를 제거한 다음, DMF, DCM(Dichloromethane) 및 IPA(Isopropanol)을 사용하여 수지를 씻어내었다. 아미노산 용기 안에 녹아있는 아미노산을 반응 용기로 옮겨 수지와 함께 2~3시간 반응시켰다. 여러 개의 아미노산을 붙여나갈 경우, 상기의 과정을 연속해서 실행시켜 아미노산을 차례로 결합시킨 다음, 맨 마지막 아미노산의 N-말단에 붙어있는 Fmoc 기를 25% 피페리딘/DMF를 사용하여 제거하였다. 라이신이나 세린 잔기에 붙어있는 보호기(protecting group)를 제거하고, 합성된 펩타이드를 수지로부터 분리하기 위하여 10% TFA(Trifluoro acetic acid)/DCM 20㎖를 넣어 4시간 동안 반응시킨 후, 고체 수지를 걸러내고 반응액을 둥근 플라스크에 넣어 증류시켰다. 용매가 모두 증발되면 20% 아세토니트릴(0.1% TFA) 10㎖를 적가하여 다시 녹인 다음, 원심분리나 필터를 이용하여 여과한 후, 상등액을 동결건조하고 C-18 컬럼을 이용한 역상 HPLC(WE J55B5, HITACHI, 이동상:아세토나이트릴, 고정상:C-18 레진, 유속:1ml/min) 를 수행하여 정제하였다. 0.1% 트리플루오로아세트산(trifluoracetic acid)을 포함한 아세토니트릴/물 혼합용매를 사용하여 1㎖/분의 유속으로 45분간 수행하여 용리액 중 목적 펩타이드만이 검출된 분획들을 모아 동결건조하여 합성된 개구린 5의 항생 및 항염 펩타이드 유도체들인 모델25: F-L-G-W-L-F-K-V-A-K-K, 모델26: F-L-K-W-L-F-K-V-A-K-K, 모델27: F-L-G-W-L-F-K-V-A-W-K 및 모델28: F-L-W-W-L-F-K-W-A-W-K을 수득하였다.
실험예 1. 펩타이드의 항생 활성 측정
1-1. 생육 최소 저해 농도(MIC)의 측정
표준화된 마이크로딜루션 브로스 법(microdilution broth assay)으로 다양한 균주에 대한 MIC 측정을 함으로써 항생활성을 검증하였다. 브로스(Broth) 배지로는 루리아-베르타니(Luria-Bertani) 배지를 사용하여, 96-웰 마이크로타이터 플레이트의 레인 1 웰에 2㎎/㎖의 약물(상기 실시예 1에서 얻은 항생 펩타이드 유도체) 30㎕와 액체배지 270㎕ 넣고, 나머지 레인의 웰에는 배지만을 150㎕ 넣었다. 레인 1의 약물액 150㎕를 취해 레인 2에 섞어줌으로써 약물농도 2배 희석액을 만들었다. 같은 방식으로 이후 레인들에 대하여 2배씩 연속 희석(serial dilution)시킴으로써 각 웰에 최종 약물농도가 1.6 ~ 200㎍/㎖에서 2배 간격으로 희석되어 있는 150㎕의 약물액을 만들었다. 이후 3㎖ 브로스에서 106~108 cfu/㎖까지 키운 균주액을 각각의 웰에 25㎕ 씩 첨가한 후, 마이크로타이터 플레이트(microtiter plate)를 37℃에서 하루 밤 동안 배양한 다음, 각 샘플액의 UV 흡광도를 630nm에서 측정함으로써 균의 성장 여부를 파악하였다. 결과를 바탕으로 균의 성장을 완전히 저해시킨 약물농도 중 가장 작은 값을 생육 최소 저해 농도(MIC)로 결정하였다.
그 결과, 하기 표 1 에 나타낸 바와 같이 모델 펩타이드 유도체 모두 다양한 균주에 대해 항생작용을 보였으며, 항생능 또한 모분자인 개구린 5 에 비교하여 떨어지지 않았다.
1-2. 용혈활성(Hemolysis) 측정
건강한 남성으로부터 채취된 혈액 3㎖를 PBS(phosphate buffered saline, 등장액)와 1:1(v/v)로 섞은 후, 원심 분리하여 연막(buffy coat) 및 혈장을 제거하고 다시 생리식염수를 사용하여 3회 세척하여 순수한 적혈구를 분리하였다. 이를 20㎖ PBS에 현탁시켜 37℃, 수욕조에서 15분간 전배양하였다. 적혈구액 190㎖ 당 펩타이드액 10㎖씩 혼합하여 최종 펩타이드 농도가 100, 50, 25㎎/㎖ 인 혼합액을 각각 만든 다음, 이들을 37℃, 수욕조에서 30분간 배양한 후 원심분리하고 상등액을 100㎖ 씩 취해 각각 PBS 1㎖에 희석하여 550nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정된 흡광 도와 0.2% 트리톤(Triton) X-100으로 처리한 세포 현탁액(cell suspension)의 흡광도와의 비로부터 % 용혈활성(hemolysis)을 계산하였다.
그 결과, 하기 표 1에 나타낸 바와 같이 모델 펩타이드 유도체의 용혈 활성능도 모분자인 개구린 5와 마찬가지로 미약하므로 항생제 개발에 적합한 물질임을 확인할 수 있었으며, 특히 모델26이 좀 더 작은 용혈활성을 나타내었다.
| 최소 성장 저해 농도(㎍/㎖) | |||||
| 미생물 | 모델 25 | 모델 26 | 모델 27 | 모델 28 | W4,8-GGN5N11 |
| 그램-양성 박테리아 | |||||
| 바실리스 서브틸리스 | 6.3 | 3.2 | 6.3 | 3.2 | 3.2 |
| 스타필로코쿠스 아우레스 | 3.2 | 3.2 | 3.2 | 3.2 | 1.6 |
| 스타필로코쿠스 에피더미스 | 6.3 | 6.3 | 6.3 | 3.2 | 3.2 |
| 마이크로코쿠스 루테스 | 6.3 | 6.3 | 6.3 | 3.2 | 3.2 |
| 그램-음성 박테리아 | |||||
| 에스체르치아 코라이(대장균) | 12.5 | 12.5 | 25 | >200 | 50 |
| 시겔라 디센타리아 | 25 | 25 | 12.5 | >200 | 12.5 |
| 살모넬라 티피무리움 | 50 | 50 | 100 | >200 | >200 |
| 크레브지엘라 퓨움모니아 | 12.5 | 12.5 | 12.5 | >200 | 50 |
| 프로테스 미라빌리스 | >200 | >200 | >200 | >200 | >200 |
| 슈도모나스 아에루기노사 | 25 | 12.5 | >200 | >200 | >200 |
| 펩타이드 농도 | 용혈 활성(Hemolysis) % | ||||
| 100㎍/㎖ | 19.41 | 16.26 | 20.28 | 19.37 | 26.20 |
실험예 2. 펩타이드의 항암 활성 측정
2-1. 50% 저해 농도(IC
50
)의 측정
상기 실시예 1에서 얻은 본 발명의 펩타이드 유도체의 항암활성을 확인하기 위하여 문헌에 기재되어 표준화된 마이크로컬쳐 MTT 법(microculture MTT method , Angelina Quintero et al., J Pharm Pharmaceut Sci Vol.2, No.3, p 108-112, 1999 ; Jin Yung Kim et al., Bioog Med Chem Lett Vol.11, p 2405-2408, 2001 ; Ashutosh K. Pathak et al., J Am Coll Nutr . Vol. 21, No. 5, p 416-421, 2002)으로 8종의 세포 주(cell line)에 대한 IC50 측정을 함으로써 항암활성을 검증하였다.
본 실험에 사용한 8종의 세포주(cell lines)는 다음과 같다 : A498(신장), A549(폐), HCT116(결장), MKN45(위), NCl-H630(간), PC-3(전립선), SK-MEL-2(피부), and SK-OV-3(난소암 세포 주). 세포는 96 웰 마이크로타이터 플레이트(microtiter plates)에 분주되어 37℃ 온도에서 24시간동안 배양하였으며, 기하급수적인 성장시기(exponetial growth phase)시 약물을 가하였다. 웰의 세포는 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide)를 녹인 것과 녹이지 않은 것에 접종되었다. 3일 동안의 배양 후에, 각각의 웰에 2 mg/ml 농도의 MTT 시약을 50ul씩 넣어주고, 3시간동안 배양했다. 상등액을 제거하고, 웰에 남아있는 포르마잔 크리스탈 (formazan crystals)을 녹이기 위해 약하게 흔들어 준 다음, 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide) 150ul를 넣어주었다. 세포를 넣지 않은 웰을 블랭크(blank)로 잡고, 약물을 넣어주지 않은 웰의 세포를 세포 생존율(cell viability)의 기준으로 하여, 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용해서 570nm에서 광학기(SAFIRE, Tecan, Austria)흡광도를 즉시 측정하였다. 세포 성장에 대한 저해율은 하기와 같은 수학식 1로 계산하였다.
각각 세포의 IC50 값은 비처리된 기준 세포와 비교하여, 50% 흡수성의 감소를 유발하는 약물의 양으로 계산하였다.
그 결과, 하기 표 2, 도 3a 및 3e 에 나타낸 바와 같이 모델 펩타이드 모두 다양한 균주에 대해 항암작용을 보였으며, 항암능 또한 모분자인 개구린 5와 유사한 효능을 나타내었다.
| 암 세포주 (Tumor cell lines) | IC50: mM | |||
| 모델 25 | 모델 26 | 모델 27 | 모델 28 | |
| A498 | 41.21 | 21.48 | n.a. | n.a. |
| A549 | 25.2 | 14.53 | 20.36 | 15.88 |
| HCT116 | 27 | 14.8 | 24.63 | 14.8 |
| MKN45 | 26.7 | 22.51 | 24.31 | 13.77 |
| NCI-H630 | n.a. | n.a. | 48 | 57 |
| PC-3 | 47.69 | 29.1 | 46.51 | 24.32 |
| SK-MEL-2 | 27.39 | 22.25 | 13.97 | 13.16 |
| SK-OV-3 | 24.76 | 12.55 | 22.06 | 14.58 |
| *n.a.: not available; 3번의 독립적인 실험을 통해서도 신뢰할 수 있는 결과를 얻지 못함 | ||||
본 발명의 약학조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예
1.
산제의
제조
실시예 1의 펩타이드 유도체 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
실시예 1의 펩타이드 유도체 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캅셀제의 제조
실시예 1의 펩타이드 유도체 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제조
실시예 1의 펩타이드 유도체 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO4·12H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
실시예 1의 펩타이드 유도체 20 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 개구린 5로부터 설계 및 합성된 항생 및 항암 펩타이드 유도체들은 그램 양성균 및 그램 음성균 모두에서 탁월한 항균활성을 나타낼 뿐만 아니라, 8종의 암 세포주(cancer cell lines) 에서 탁월한 항암활성을 나타내었다. 또한 인간 적혈구 세포에 대한 용혈활성 또한 매우 낮으므로 인체에 안전하며, 지금까지 알려진 항생 및 항암 펩타이드 중 가장 짧은 길이를 가지고 있으므로 약물로 개발시 흡수 및 약물 수송 등에서 매우 유리하므로 최적의 항생제 및 항암제로서 유용하게 사용될 수 있다.
서열목록 전자파일 첨부
Claims (10)
- F-L-G-A-L-F-K-V-A-S-K-V-L-P-S-V-K-C-A-I-T-K-K-C로 표기되는 개구린 5로부터 설계 및 합성된 F-L-G-W-L-F-K-W-A-K-K(Model 25)로 표시되는 항생 및 항암 페타이드 유도체.
- F-L-G-A-L-F-K-V-A-S-K-V-L-P-S-V-K-C-A-I-T-K-K-C로 표기되는 개구린 5로부터 설계 및 합성된 F-L-K-W-L-F-K-W-A-K-K(Model 26)로 표시되는 항생 및 항암 펩타이드 유도체.
- F-L-G-A-L-F-K-V-A-S-K-V-L-P-S-V-K-C-A-I-T-K-K-C로 표기되는 개구린 5로부터 설계 및 합성된 F-L-G-W-L-F-K-W-A-W-K(Model 27)로 표시되는 항생 및 항암 펩타이드 유도체.
- F-L-G-A-L-F-K-V-A-S-K-V-L-P-S-V-K-C-A-I-T-K-K-C로 표기되는 개구린 5로부터 설계 및 합성된 F-L-W-W-L-F-K-W-A-W-K(Model 28)로 표시되는 항생 및 항암 펩타이드 유도체.
- 삭제
- 삭제
- 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 기재된 항생 및 항암 펩타이드 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 미생물로 인한 감염성 질환의 예방 및 치료용 약학조성물.
- 제 7항에 있어서, 상기 감염성 질환은 포도상구균 식중독, 봉와직염(蜂窩織炎), 림프관염, 표저(疽), 뇨로감염증, 수막염, 복막염, 방광염, 호흡기 질환, 중이염, 폐렴 등의 화농성 염증 및 패혈증인 약학 조성물.
- 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 기재된 항생 및 항암 펩타이드 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 암 질환 예방 및 치료용 약학조성물.
- 제 9항에 있어서, 상기 암질환은 자궁경부암, 폐암, 췌장암, 비소세포성폐암, 간암, 결장암, 골암, 피부암, 두부 또는 경부 암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 위암, 항문부근암, 결장암, 유방암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암인 약학 조성물.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020060043832A KR100794499B1 (ko) | 2006-05-16 | 2006-05-16 | 개구린 ５로부터 합성 및 제조된 항생 및 항암 신규펩타이드 유도체 |
| JP2009510885A JP2009537511A (ja) | 2006-05-16 | 2007-05-14 | ガエグリン５から合成され取り出された抗菌性及び抗癌性の新規ペプチド類縁体 |
| US12/301,028 US8076284B2 (en) | 2006-05-16 | 2007-05-14 | Analogues of antimicrobial and anticancer peptide synthesized and produced from Gaegurin 5 |
| EP07746507A EP2016094A4 (en) | 2006-05-16 | 2007-05-14 | NOVEL ANTIMICROBIAL AND ANTICANCER PEPTIDE ANALOGS SYNTHESIZED AND PRODUCED FROM GAEGURIN 5 |
| CNA2007800173117A CN101443352A (zh) | 2006-05-16 | 2007-05-14 | 从Gaegurin 5合成和制备的抗菌和抗癌多肽的新型类似物 |
| PCT/KR2007/002358 WO2007133033A1 (en) | 2006-05-16 | 2007-05-14 | Novel analogues of antimicrobial and anticancer peptide synthesized and produced from gaegurin 5 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020060043832A KR100794499B1 (ko) | 2006-05-16 | 2006-05-16 | 개구린 ５로부터 합성 및 제조된 항생 및 항암 신규펩타이드 유도체 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20070111027A KR20070111027A (ko) | 2007-11-21 |
| KR100794499B1 true KR100794499B1 (ko) | 2008-01-16 |
Family
ID=38694095
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020060043832A KR100794499B1 (ko) | 2006-05-16 | 2006-05-16 | 개구린 ５로부터 합성 및 제조된 항생 및 항암 신규펩타이드 유도체 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8076284B2 (ko) |
| EP (1) | EP2016094A4 (ko) |
| JP (1) | JP2009537511A (ko) |
| KR (1) | KR100794499B1 (ko) |
| CN (1) | CN101443352A (ko) |
| WO (1) | WO2007133033A1 (ko) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101648993B (zh) * | 2009-09-17 | 2011-08-10 | 山东大学 | 具有抑菌与抗癌作用的小肽a及其应用 |
| TWI448297B (zh) * | 2010-07-05 | 2014-08-11 | Univ Nat Ilan | 一種人工合成胜肽用於製備具抗肝癌活性之藥物的用途 |
| CN104558121B (zh) * | 2014-12-31 | 2018-11-16 | 常熟理工学院 | 一种虎纹蛙抗菌肽及其编码基因与应用 |
| KR101644982B1 (ko) | 2015-07-23 | 2016-08-02 | 주식회사 엔솔바이오사이언스 | 신규 펩타이드 및 그 용도 |
| CN107759664B (zh) * | 2017-11-08 | 2021-02-12 | 中国科学院新疆理化技术研究所 | 一种小分子多肽akk10及其应用 |
| CN111334544B (zh) * | 2020-03-26 | 2023-05-23 | 吉林大学 | 一种具有免疫活性的林蛙骨肉寡肽的制备方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995027728A1 (en) | 1994-04-07 | 1995-10-19 | Luminis Pty. Limited | Peptides |
| KR19990076025A (ko) * | 1998-03-27 | 1999-10-15 | 허일섭 | 다용도 항생 활성을 갖는 폴리펩티드 및 그제조방법 |
| WO2000009553A2 (en) | 1998-08-14 | 2000-02-24 | Bionebraska, Inc. | Antimicrobial peptides isolated from the skin of american frogs |
| KR20050072337A (ko) * | 2004-01-06 | 2005-07-11 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 개구린 5로부터 합성 및 제조된 항생 펩타이드 유도체 |
| KR20050095669A (ko) * | 2004-03-25 | 2005-09-30 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 개구린 5로부터 합성 및 제조된 항암 펩타이드 유도체 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5595756A (en) * | 1993-12-22 | 1997-01-21 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents |
-
2006
- 2006-05-16 KR KR1020060043832A patent/KR100794499B1/ko active IP Right Grant
-
2007
- 2007-05-14 JP JP2009510885A patent/JP2009537511A/ja active Pending
- 2007-05-14 CN CNA2007800173117A patent/CN101443352A/zh active Pending
- 2007-05-14 EP EP07746507A patent/EP2016094A4/en not_active Withdrawn
- 2007-05-14 WO PCT/KR2007/002358 patent/WO2007133033A1/en active Application Filing
- 2007-05-14 US US12/301,028 patent/US8076284B2/en active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995027728A1 (en) | 1994-04-07 | 1995-10-19 | Luminis Pty. Limited | Peptides |
| KR19990076025A (ko) * | 1998-03-27 | 1999-10-15 | 허일섭 | 다용도 항생 활성을 갖는 폴리펩티드 및 그제조방법 |
| WO2000009553A2 (en) | 1998-08-14 | 2000-02-24 | Bionebraska, Inc. | Antimicrobial peptides isolated from the skin of american frogs |
| KR20050072337A (ko) * | 2004-01-06 | 2005-07-11 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 개구린 5로부터 합성 및 제조된 항생 펩타이드 유도체 |
| KR20050095669A (ko) * | 2004-03-25 | 2005-09-30 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 개구린 5로부터 합성 및 제조된 항암 펩타이드 유도체 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2016094A1 (en) | 2009-01-21 |
| US8076284B2 (en) | 2011-12-13 |
| CN101443352A (zh) | 2009-05-27 |
| EP2016094A4 (en) | 2009-09-30 |
| US20100105626A1 (en) | 2010-04-29 |
| KR20070111027A (ko) | 2007-11-21 |
| JP2009537511A (ja) | 2009-10-29 |
| WO2007133033A1 (en) | 2007-11-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100794499B1 (ko) | 개구린 ５로부터 합성 및 제조된 항생 및 항암 신규펩타이드 유도체 | |
| KR101038542B1 (ko) | 라이신과 프롤린 잔기 치환으로 박테리아 선택성을 높인새로운 수딘 유도체 항생 펩타이드 및 그 용도 | |
| US11046730B2 (en) | Antimicrobial compositions | |
| KR20100014596A (ko) | 주형 고정된 펩타이드 모방체 | |
| ES2213862T3 (es) | Lantibiotico relacionado con actagardina, procedimiento para su preparacion y empleo del mismo. | |
| KR20080107794A (ko) | 우방자 추출물을 함유하는 항암 조성물 | |
| WO2014107042A1 (ko) | 헬리코박터 파일로리균의 리보좀 단백질 l1으로부터 유래된 신규한 항생 펩타이드 및 이의 용도 | |
| JP5202649B2 (ja) | ヘリコバクター・ピロリ菌のリボソームタンパク質ｌ１由来の新しい抗生ペプチド及びその使用 | |
| KR101077180B1 (ko) | 헬리코박터 파이로리균의 리보좀 단백질 ｌ１ 유래의 새로운 항생 펩타이드 및 그의 용도 | |
| KR101131224B1 (ko) | 염주괴불주머니 유래 쿠마린계 화합물, 및 이를 함유하는 항암용 조성물 | |
| KR100438416B1 (ko) | Ｃａ－ｍａ 펩타이드의 아미노산 중 하나 또는 그 이상을치환하여 ＋ 전극과 소수성 영역이 증가된 신규한펩타이드 및 그를 포함하는 약학적 조성물 | |
| CN113045627B (zh) | 一种抗菌多肽sa-2及其制备方法和应用 | |
| KR20050059158A (ko) | 신규 뎁시펩타이드 화합물 | |
| US8598313B2 (en) | Compositions for ameliorating cell proliferative disorders and methods of making and using them | |
| KR101686428B1 (ko) | 바퀴벌레에서 유래한 항균 펩타이드 페리플라네타신-2 및 그의 조성물 | |
| KR100615971B1 (ko) | 개구린 5로부터 합성 및 제조된 항암 펩타이드 유도체 | |
| KR102146935B1 (ko) | 광대노린재로부터 유래된 포에실로코리신-1 펩타이드, 이를 유효성분으로 포함하는 항균, 항진균 또는 항염증용 조성물 | |
| KR20020049443A (ko) | 헬리코박터 파이로리균의 리보좀 단백질 ｌ1 유래의새로운 항생 펩타이드 및 그의 용도 | |
| KR100547565B1 (ko) | 개구린 5로부터 합성 및 제조된 항생 펩타이드 유도체 | |
| KR102008722B1 (ko) | 왕지네 유래의 항염증성 펩타이드 스콜로펜드라신-9, 이를 유효성분으로 포함하는 패혈증의 치료용 조성물 | |
| US20060293242A1 (en) | Transporting of taxoid derivatives through the blood brain barrier | |
| CN111529688B (zh) | 抗菌肽在制备肺癌治疗药物中的应用 | |
| US20230181678A1 (en) | Novel antibacterial peptide or peptide analog and use thereof | |
| KR100935029B1 (ko) | 헬리코박터 파일로리균의 리보좀 단백질 ｌ１유래의 새로운접힘 구조를 갖는 항생 펩타이드 및 조성물 | |
| US7750114B2 (en) | Peptides having a high cysteine content |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| N231 | Notification of change of applicant | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130108 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140108 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20150105 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20151209 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190108 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20200108 Year of fee payment: 13 |
|
| R401 | Registration of restoration |