TWI448297B - 一種人工合成胜肽用於製備具抗肝癌活性之藥物的用途 - Google Patents

Description

一種人工合成胜肽用於製備具抗肝癌活性之藥物的用途

本發明係關於人工合成胜肽之新穎醫藥用途之開發及應用領域，特別係關於抗菌人工合成胜肽之新穎醫藥用途，係用於治療癌症之技術領域。

肝癌為一種惡性腫瘤，係可分為發生於肝臟的「原發性肝癌」，及發生於其他臟器後轉移到肝臟的「轉移性肝癌」。原發性肝癌係指肝臟本身組織癌化形成的腫瘤，主要可分為3類：(1)肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma)，佔肝癌發生率80%，一般指的肝癌即為肝細胞癌；(2)膽管癌(Cholangiocarcinoma)，佔肝癌發生率的20%；(3)肝細胞膽管癌(Hepatocholangiocarcinoma)，由肝細胞癌及膽管細胞癌組成，則較為少見。肝癌目前是國人十大死亡原因的第一位，在西方已開發國家中，每十萬人約有1-4人罹患肝癌，而在中國大陸、台灣和韓國等亞洲地區則每十萬人約有20-150人(Dominguez-Malagonet al .,Ultrastruct Pathol 2001,25:497-516)。

早期發現癌症病兆時，可藉由外科手術切除以治療之，然而肝癌患者多半合併嚴重的肝硬化、腹水、肝腫瘤過大或是肝癌轉移至肝臟外部等症狀，因此僅有9-27%的患者是適合施以外科手術，且其復發率有40%，因此侵入性治療仍無法有效對抗肝癌。一旦發生癌轉移現象時，全身性化學療法(化療)將是唯一的治療選擇。使用常規化療藥劑通常是針對迅速分裂的癌細胞，但同樣的對健康細胞和組織出現有害的副作用(Cassidyet al .,Semin Oncol 2002,29:11-20;Kalyanaramanet al .,Mol Cell Biochem 2002,234-235:119-124)。此外，癌細胞如果是靜止或緩慢地增殖，則施予作用在癌細胞DNA合成的化療藥物，其效果不彰(Naumovet al.,Breast Cancer Res Treat 2003,82:199-206)。另，癌細胞常藉由增加分解藥物酵素表現和藥物轉運蛋白，影響藥物與目標癌細胞的交互作用，變得較易抵抗化療藥物。(Gattiet al.,Methods Mol Med 2005,111:127-148)。因此，若能發展一種新的抗癌藥物，對於正常細胞不會造成傷害且仍能有效抑制癌細胞生長，則將會是於癌症治療領域上一重大之進展。

胜肽(peptide)除了本身具其生物功能外，亦有許多報導指出胜肽可殺死革蘭氏陰、陽性菌，同時也有部分之抗菌胜肽具有抗癌及抗病毒活性(Suttmannet al.,BMC Urol 2008,8:5;Hancocket al.,Trends Microbiol 2000,8:402-410)；其抗菌機制可能藉由破壞細胞膜以達到抑制細菌生長之功效。本案發明人亦於2008年人工合成出數種具抗菌活性之胜肽(Chenet al .,Antimicrobial Agents 2008)。另，於本案中對於該些胜肽進行進一步評估及驗證，以測試該些胜肽是否能抑制肝癌細胞之生長，且對宿主細胞不具傷害性。因此，提供本件「用於治療肝癌之新穎合成胜肽」，以期提供肝癌患者一安全、具療效之新穎治療方法及其醫藥組合物。

本發明之目的即在於提供一種抗菌胜肽之新穎醫藥用途，係可用以誘發肝癌細胞之凋亡，進而可治療肝癌。

本發明之次一目的係在於提供一種抗肝癌之醫藥組成物，係包含本發明所述之抗菌胜肽。

本發明之另一目的係在於將該等抗菌胜肽製備於一醫藥組合物之用途。

可達成上述發明目的之方法，包括有：將人工合成抗菌胜肽及天然抗菌胜肽進行活體外抗癌活性分析，該等分析包含J5、Huh7肝癌細胞株之細胞存活率(細胞凋亡)之分析、3T3老鼠纖維母細胞之細胞存活率(細胞凋亡)之分析、流式細胞儀之分析(細胞週期)、半胱胺酸蛋白酶-3分析(Caspase-3assay)等。經試驗評估分析後，結果顯示，該等抗菌胜肽除可誘發肝癌細胞株之凋亡，且對正常細胞無明顯之毒性，此外，亦可活化半胱胺酸蛋白酶-3，實具其抗癌之活性，此等抗菌胜肽將有裨於往後癌症治療所使用。

本說明書中所述之所有技術性及科學術語，除非另外有所定義，皆為該所屬領域具有通常技藝者可共同瞭解的意義。

本發明提供一種抗菌人工合成胜肽之新穎醫藥用途，係可用以誘發肝癌細胞之凋亡，進而可治療肝癌。

本發明亦提供將該等抗菌人工合成胜肽製備於一抗肝癌醫藥組合物之用途。

前述用途可進一步包含將該等抗菌人工合成胜肽與一或多個抗癌化合物一起用於製備一醫藥組合物之用途，該醫藥組合物係用以治療肝癌。

一較佳實施例中，其中該等抗菌人工合成胜肽，其胺基酸序列係選自由下列胺基酸序列所組成群組中至少一者：(1)具有如SEQ ID NO: 1所示之胺基酸序列；(2)具有如SEQ ID NO: 2所示之胺基酸序列；(3)具有如SEQ ID NO: 3所示之胺基酸序列；(4)具有如SEQ ID NO: 4所示之胺基酸序列；(5)具有如SEQ ID NO: 5所示之胺基酸序列；(5)具有與前述(1)^~ (4)所述之序列相似且仍具抗肝癌活性者。此外，本發明所述之人工合成胜肽可包含D構型或L構型之胜肽序列，人工合成胜肽的所有異構形式都包括在本發明中。

前述「序列相似且仍具抗肝癌活性者」係指胺基酸序列與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5具80%相似性(similarity)，且仍具抗肝癌活性者。其中該胺基酸序列之改變方式，可藉由突變、置換、重組等習知技藝或自然發生之突變等方式進而改變胺基酸序列。

術語「給藥」或「投予」或「施予」係指醫藥組合物中的活性成分可經由醫學上認定之任何方式投予病患，例如以口服、浸泡、注射、塗抹、貼片、非腸道、鼻腔或局部給藥等。給藥的實際較佳方法及次序需根據活性成分之特殊配方的利用情況、接受治療的腫瘤移轉模式及患者的個別差異而調整。

本發明醫藥組合物的形式可配成如口服的懸浮片、錠劑、膠囊、糖錠、乳劑、粉末、溶液等。非腸道給藥包括經由皮下、靜脈內或肌肉注射而投予組成成分，例如將活性成分溶於生理可接受的稀釋液中製成可注射的形式，再加上藥用載體，如水、生理食鹽水、水性糊精或相關糖溶液、乙醇、聚乙烯甘油400或油類等。藥物也可製成鼻腔吸入劑或懸浮用藥經由皮膚或黏膜吸收。

一較佳實施例中，醫藥組合物之劑型包含但不限於：包埋物、浸泡液、飼料、飼料添加物、口服液、注射疫苗、貼片、粉末、錠劑、注射液體、懸浮液、外用液、滴劑、擦劑、塗劑、乳霜、油膏、軟膏、糊狀劑、膠、凝膠。

其中所述之「載劑」包含但不限於：賦形劑、稀釋劑、增稠劑、填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、油脂或非油脂的基劑、介面活性劑、懸浮劑、膠凝劑、輔助劑、防腐劑、抗氧化劑、穩定劑、著色劑、香料。所述之「潤滑劑」包含但不限於：甘油及油類(如：花生油、蓖麻油)。所述之「基劑」包含但不限於：硬石蠟、軟石蠟、石蠟油、甘油、蜂蠟、金屬皂、天然油(如：杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或橄欖油)、羊毛脂及其衍生物、脂肪酸(如：硬脂酸或油酸)或其組合物。所述之「介面活性劑」包含但不限於：陰離子介面活性劑、陽離子介面活性劑、非離子介面活性劑，該介面活性劑包含但不限於山梨醇酐酯、聚氧化乙烯及其衍生物(如：聚氧化乙烯脂肪酸酯)、聚羧乙烯及其衍生物(如：卡伯漢樹脂carbopol)。所述之「懸浮劑」包含但不限於：天然樹酯、纖維素衍生物無機物質(如：silicaceous silicas)、聚乙二醇540、聚乙二醇3350及丙二醇等。所述之「膠凝劑」包含但不限於：纖維素衍生物(如：甲基纖維素、羥基乙基纖維素以及羧甲基纖維素等)、乙烯基聚合物(如：聚乙烯醇、olyvinyl pyrrolidones)、聚羧乙烯衍生物(如：卡伯漢樹脂carbopol)、果膠、膠類(如：阿拉伯樹膠、黃著膠、藻膠、瓊脂、明膠以及carrageenates)。

在本發明之一則具體實施態樣中，醫藥組合物係可將有效量之人工合成胜肽預溶於一溶劑，如生理食鹽水稀釋成適當劑量後成為皮下注射用藥。

醫藥組合物中活性成分的用量及給藥頻率會根據接受治療的患者的嚴重度及個別差異有所不同，如活性成分組合後的代謝穩定度及作用長度、患者年齡、體重、健康狀況、性別、飲食、給藥途徑、給藥時間、排泄速度及賦形劑等因素，需由此技術領域中具有通常知識者做決定。

在本發明中人工合成胜肽的給藥，一般使用的治療有效量介於每天100毫克/公斤至每天500毫克/公斤間。

術語“抗肝癌活性”意謂，相較於未使用本發明者，使用本發明者將可有效減緩、降低、消除、控制、抑制肝癌細胞之生長、半胱胺酸蛋白酶-3(Caspase-3)之活性，進而可治療肝癌。術語「對於正常細胞無明顯之毒性」係指使用本發明者對於其正常細胞、組織而言，沒有明顯的生理毒性或是骨髓抑制、產生神經毒性等相關情形。其中所述之肝癌細胞，一較佳實施例中，可包含但不限於：J5和Huh7肝癌細胞株；所述之正常細胞，一較佳實施例中，可包含但不限於：3T3纖維母細胞株。

術語“有效量”意謂可有效改善、治療、減弱或消除疾病(如：肝癌)之一或多個症狀的活性成分有效量，或可稱“治療有效量”或“改善有效量”。術語"藥學上可接受"意謂物質或組合物必須與調配物之其他成份相容，且對患者無害。

本發明係以下面的實施例予以示範闡明，但本發明不受下述實施例所限制；此外，下列實施例係以習知技術用以分析本發明之人工合成胜肽對肝癌細胞生長的抑制能力，該等分析方法均為所屬技術領域中具有通常知識者所知悉者；本發明中所使用之材料皆市售易於取得，下列僅為示例可取得之管道。

實施例一　抗菌胜肽之種類及序列

本發明係分析2008年人工合成之數種具抗菌活性之胜肽(Chen et al.,Antimicrobial Agents 2008)，係藉由下述實施例評估分析該等胜肽是否具有抗癌之活性；另，亦將該等人工合成胜肽與天然抗菌胜肽進行抗癌活性之分析及比較，其胺基酸序列請參閱表一所示。

^a Magainin 2(M2)分離自非洲青蛙(Xenopus laevis)；^b Magainin 2 carboxyl-terminus amidation(M2a)；^c Pleurocidin(Ple)分離自冬季比目魚(winter flounder)；^d Pleurocidin carboxyl-terminus amidation(Ple-a)。

實施例二　MTT細胞活性分析(MTT cell viability assay)

藉由MTT細胞存活分析(Pavwels等著，J. Virol. Methods,1988,20,309-321)來研究人工合成胜肽之抗癌活性。將人工合成胜肽沿96孔(well)微量孔盤內壁滴入，每次分析要5個微量孔盤，而每種不同濃度的人工合成胜肽要用8個孔。人工合成胜肽濃度稀釋分別為5 μM、10 μM、25 μM、50 μM、100 μM，第一排放入溶劑做為對照組。

通常每個孔中培養3×10³ 個J5(由台大醫學院楊照雄教授所建構的肝癌細胞株(Hosono,S.,Lee,C.S.,Chou,M.J.,Yang,C.S. and Shih,C.H.,1991. Molecular analysis of the p53 alleles in primary hepatocellular carcinomas and cell lines. Oncogene 6 2,pp. 237-243.)和Huh7肝癌細胞(JCRB0403)，培養至隔天後再加入人工合成胜肽培養1天，然後將培養液吸出後改加入含500微克(μg)/毫升MTT的200微升(μl)培養液繼續培養4小時，將培養液吸出後加入100微升二甲基亞碸(DMSO)，然後用微量孔盤分光光度計測量其在570奈米(nm)的吸光值。利用各個人工合成胜肽的O.D.平均值可以算出不同人工合成胜肽劑量的抑制癌細胞活性曲線。

請參閱圖一(J5肝癌細胞株)及圖二(Huh7肝癌細胞株)所示，結果顯示人工合成胜肽具有抑制肝癌細胞株J5和Huh7的活性，並且對於3T3老鼠纖維母細胞(Mouse fibroblast cell line 3T3)不會造成明顯毒殺活性(圖三)且隨著劑量提高癌細胞死亡愈明顯，因此，人工合成胜肽是具有選擇性殺死癌細胞的能力。

另，請參閱表二所示，為該等人工合成胜肽的IC₅₀ (抑制一半細胞生長的濃度)。結果顯示該五個人工合成胜肽皆可有效抑制肝癌細胞株之生長，其中人工合成胜肽GW-H1(SEQ ID NO: 5)對於抑制J5肝癌細胞株之生長，效果最佳，可於20 μM濃度下抑制癌細胞生長，同樣的也對另一株肝癌細胞Huh7有顯著抑制效果且對3T3老鼠纖維母細胞並無造成明顯毒殺活性。另，相對於天然胜肽，人工合成胜肽實具更佳之抑癌效果且能夠不造成3T3老鼠纖維母細胞明顯死亡的情形。

IC₅₀ 值係藉由對數外插分析法推得；n.d.表示無法測得。

實施例三　凋亡細胞：亞二倍體分析

Propidium iodide(PI)係為一種螢光染劑，其染色原理係藉由酒精將細胞膜打洞並固定後，進入細胞內之PI可與核酸進行鍵結，當其以嵌合的方式(intercalation)與雙股核酸鏈結合可產生紅色螢光(640 nm)，由於凋亡細胞中內切酶的活化，導致DNA斷裂成小片段，配合檸檬酸-磷酸溶液(phosphate-citrate buffer)浸潤，使細胞內DNA滲透出胞膜外而使細胞內的DNA含量减少，再藉由流式細胞儀分析之，即可反映出細胞內之DNA狀態或進行細胞週期分析。

方法如下：將細胞種植於6孔(well)微量孔盤中，細胞依照2×10⁵ 細胞/孔種植於培養皿中，經過24小時靜置培養後，待細胞貼附後加入不同濃度的人工合成胜肽(0 μM,20 μM,40 μM)，培養72小時後；再將細胞收集至微量離心管中離心(1500 rpm，5分鐘)後，再用磷酸鹽緩衝液清洗細胞表面後離心(3000 rpm，5分鐘)，再用冰冷磷酸鹽緩衝液(PBS) 1毫升懸浮細胞，濃度2×10⁵ 細胞/毫升，之後用快速混合法固定細胞，把細胞懸浮液加入含有10毫升70%預冷酒精的15 ml離心管中，快速吸抽混合，靜置定細胞至少2小時或在低溫-20℃下靜置過夜。固定細胞後，離心(300×g，5分鐘)去除酒精後，加入檸檬酸-磷酸溶液(phosphate-citrate buffer)放入37℃水浴槽作用2小時。離心(300×g，5分鐘)後把配好碘化丙啶(Propidium iodide)溶液加入，懸浮細胞要充分混合，把細胞懸浮液吸到之前的褐色微量離心管中，低溫4℃避光作用30分鐘。3小時內上機，上機前輕輕混勻細胞懸浮液，57 μm尼龍篩網過濾細胞，利用流式細胞儀測定之，結果在72小時的測試下，所得之結果以FLOW JO軟體分析之。

請參閱圖四A至C所示，結果顯示，在72小時的測試下，以流式細胞儀分析下，在給予不同濃度的人工合成胜肽GW-H1(SEQ ID NO: 5)促使J5肝癌細胞株愈趨向凋亡，可觀察到sub-G1形成波峰，而經由量化後(圖四D)亦可觀察到，隨著濃度之提高所造成細胞凋亡的比例也明顯提高。

實施例四　半胱胺酸蛋白酶-3分析法(Caspase-3 assay kit)

半胱胺酸蛋白酶-3分析法是藉由給予細胞藥物，促使其進行細胞凋亡，進而活化半胱胺酸蛋白酶-3，再利用加入半胱胺酸蛋白酶-3受質，經活化的半胱胺酸蛋白酶-3切割後即會釋出螢光物質，藉此來評估半胱胺酸蛋白酶-3活化情形，進而分析細胞凋亡之可能機制。

方法如下：首先將1×10⁶ 顆J5肝癌細胞株種植於6公分細胞培養皿中，經過24小時靜置培養後，待細胞貼附後分別加入不同濃度的人工合成胜肽(0 μM,10 μM,20 μM,40 μM)，培養72小時後。再將細胞收集至微量離心管中離心(1500 rpm，5分鐘)後，接著用冰冷磷酸鹽緩衝液(PBS)清洗細胞後再離心(3000 rpm，5分鐘)，加入蛋白質萃取液(protein extraction buffer)放置冰上作用30分鐘後，以高速離心12000×g，4℃，10分鐘，收取上清液即為蛋白質萃取液，將待測蛋白質樣本進行蛋白質定量，取10微升的蛋白質放入96微量孔盤，做二重複試驗，每孔加入200微升之Bradford染劑，利用微量盤分析儀在595奈米(nm)波長下測定各蛋白質標準品之吸光值並取得其平均值；將吸光值帶入趨勢線方程式，則可求得待測蛋白質樣本之實際濃度。再利用Promega G3540 caspACETM assay kit商業套組依照其說明步驟進行實驗。將所需之試劑與待測蛋白質配製於96孔(well)微量孔盤中，靜置於30℃培養箱中，避光培養30分鐘，接著加入2微升(μl)半胱胺酸蛋白酶-3受質進行作用，靜置於30℃培養箱中，避光培養60分鐘，再利用微量盤分析儀測量螢光值(激發波長：360奈米；發散波長：460 nm)。

請參閱圖五所示，結果顯示不同濃度的人工合成胜肽GW-H1(SEQ ID NO: 5)皆可明顯活化半胱胺酸蛋白酶-3之活性。

實施例五　西方墨點法(Western blotting) 5-1.　十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺膠體電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)

將萃取出的樣本蛋白質經過蛋白質定量分析後，取出需要濃度，加入6X SDS樣本緩衝液混勻後，於95℃乾浴槽加熱10分鐘後，分別加入20 μg的蛋白質，於每個樣品槽內，之後進行SDS-PAGE。完成SDS-PAGE後，將膠片浸泡於轉漬緩衝液(Transfer buffer: 25 mM Tris、192 mM glycine、22% methanol,pH 8.3)中平衡備用。

5-2.　蛋白質轉漬

裁切出適當大小的聚偏氟乙烯膜(Polyvinylidene fluoride,PVDF)以甲醇浸泡活化後，再以轉漬緩衝液洗淨，最後以厚濾紙、PVDF膜、SDS-PAGE膠片、厚濾紙，隨後蓋上電極版，以固定電壓15伏特進行轉漬20分鐘。完成轉漬後將PVDF膜浸泡於覆蓋溶液(blocking solution: 5% non-fat milk in PBS-T)，於室溫下搖晃作用2小時或4℃隔夜反應，其目的是將PVDF膜上之非特異性結合位置覆蓋(blocking)。

5-3.　免疫呈色

將PVDF膜以PBS-T(0.05% Tween-20 in PBS)清洗搖晃三次後，浸置在已稀釋之一級抗體於室溫下搖晃作用2小時或4℃隔夜。接著以PBS-T清洗搖晃以去除殘留的一級抗體，再以稀釋之二級抗體於室溫下搖晃作用1小時，之後同樣以PBS-T清洗搖晃，然後經由HRP substrate螢光呈色，以螢光影像分析系統進行分析及定量。

請參閱圖六所示，結果顯示原態-半胱胺酸蛋白酶-3(pro-caspase-3)可觀察到減少的情形，且亦可觀察到PAPP片段之產生(經半胱胺酸蛋白酶-3活化態切割的受質Poly ADP ribose polymerase)，因此人工合成胜肽GW-H1(SEQ ID NO: 5)可造成J5肝癌細胞株進行凋亡，且亦會活化半胱胺酸蛋白酶-3之相關細胞凋亡路徑。

本發明所提供之用於治療肝癌之新穎合成胜肽，與其他藥物、療法相互比較時，更具有下列之優點：

1.本發明之治療肝癌之新穎合成胜肽，經試驗分析其可有效抑制肝癌細胞之生長且對正常細胞無明顯之毒性，故，相較於習用化學藥物，除更具安全性、無副作用外，且亦具有治療肝癌之功效。

2.本發明之治療肝癌之新穎合成胜肽，經試驗證明，除可造成肝癌細胞凋亡外，亦可活化半胱胺酸蛋白酶-3之活性。

上列詳細說明係針對本發明之一可行實施例之具體說明，惟該實施例並非用以限制本發明之專利範圍，凡未脫離本發明技藝精神所為之等效實施或變更，均應包含於本案之專利範圍中。

綜上所述，本案所發現該等人工合成抗菌胜肽具有治療肝癌之新用途，應已充分符合新穎性及進步性之法定發明專利要件，爰依法提出申請，懇請　貴局核准本件發明專利申請案，以勵發明，至感德便。

<110> 國立宜蘭大學

<120> 用於治療肝癌之新穎合成胜肽

<160> 5

<210> 1

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工合成之抗菌胜肽GW-Q3

<400> 1

<210> 2

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工合成之抗菌胜肽GW-Q4

<400> 2

<210> 3

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工合成之抗菌胜肽GW-Q6

<400> 3

圖一為J5肝癌細胞株經人工合成抗菌胜肽或天然抗菌胜肽處理，其細胞存活率分析。

圖二為Huh7肝癌細胞株經人工合成抗菌胜肽或天然抗菌胜肽處理，其細胞存活率分析。

圖三為3T3老鼠纖維母細胞(正常細胞)經人工合成抗菌胜肽或天然抗菌胜肽處理，其細胞存活率分析。

圖四A為0μM人工合成胜肽GW-H1(即無添加)在72小時的測試下，其流式細胞儀分析結果；圖四B為20μM人工合成胜肽GW-H1(即無添加)在72小時的測試下，其流式細胞儀分析結果；圖四C為40μM人工合成胜肽GW-H1(即無添加)在72小時的測試下，其流式細胞儀分析結果；圖四D為圖四A至圖四C之量化結果。

圖五為細胞經不同濃度之人工合成胜肽GW-H1處理後，其半胱胺酸蛋白酶-3活性(Caspase-3 activity)分析。

圖六為細胞經人工合成胜肽GW-H1處理後，其原態-半胱胺酸蛋白酶-3(pro-caspase-3)及Poly ADP ribose polymerase(PARP)片段(經半胱胺酸蛋白酶-3活化態切割的受質)之蛋白質表現分析(西方墨點法)。

Claims (7)

1. 一種人工合成胜肽用於製備具抗肝癌活性之藥物的用途，係選自由下列胺基酸序列所組成群組中至少一者：(1)具有如SEQ ID NO：1所示之胺基酸序列；(2)具有如SEQ ID NO：2所示之胺基酸序列；(3)具有如SEQ ID NO：3所示之胺基酸序列；(4)具有如SEQ ID NO：4所示之胺基酸序列；(5)具有如SEQ ID NO：5所示之胺基酸序列。
2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，係可毒殺對肝癌細胞，而對正常細胞則無影響。
3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，隨著該胜肽劑量提高，而對癌細胞的毒殺效果愈明顯。
4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中具有如SEQ ID NO：5所示之胺基酸序列係可活化半胱胺酸蛋白酶-3，進而誘導肝癌細胞凋亡。
5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，可進一步將該人工合成胜肽與一或多個抗癌化合物一起用於製備一醫藥組合物及藥學上可接受之載劑，該醫藥組合物係用以治療肝癌。
6. 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該載劑包含賦形劑、稀釋劑、增稠劑、填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、油脂或非油脂的基劑、介面活性劑、懸浮劑、膠凝劑、輔助劑、防腐劑、抗氧化劑、穩定劑、著色劑或香料等。
7. 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該醫藥組合物係以口服、浸泡、注射、塗抹或貼片等方式投予至人體內。