CN102058524A - 一种环磷酰胺注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种环磷酰胺经注射给药的制剂及其制备方法。其特征在于由环磷酰胺和水溶性填充剂、pH调节剂、注射用水、渗透压调节剂组成。其中环磷酰胺的重量百分比为0.001-50％，余量为药用辅料或水。本发明制备的环磷酰胺经注射给药的制剂，稳定性好、生物利用度高，解决了临床急性、慢性粒细胞白血病治疗要求的注射药物的需求。

Description

一种环磷酰胺注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，更具体地说是涉及一种含活性成分环磷酰胺的经注射给药的制剂及其制备方法。

背景技术

环磷酰胺(cladribine)是本品为最常用的烷化剂类抗肿瘤药，进入体内后，在肝微粒体酶催化下分解释出烷化作用很强的氯乙基磷酰胺(或称磷酰胺氮芥)，而对肿瘤细胞产生细胞毒作用，此外本品还具有显著免疫作用。临床用于恶性淋巴瘤，多发性骨髓瘤，白血病、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌、支气管癌、肺癌等，有一定疗效。也可用于类风湿关节炎、儿童肾病综合征以及自身免疫疾病的治疗。环磷酰胺可使血清中假胆碱酯酶减少，使血清尿酸水平增高，因此，与抗痛风药如别嘌呤醇、秋水仙碱、丙磺舒等同用时，应调整抗痛风药物的剂量。此外也加强了琥珀胆碱的神经肌肉阻滞作用，可使呼吸暂停延长。环磷酰胺可抑制胆碱酯酶活性，因而延长可卡因的作用并增加毒性。大剂量巴比妥类、皮质激素类药物可影响环磷酰胺的代谢，同时应用可增加环磷酰胺的急性毒性。环磷酰胺可使血清中假胆碱酯酶减少，使血清尿酸水平增高，因此，与抗痛风药如别嘌呤醇、秋水仙碱、丙磺舒等同用时，应调整抗痛风药物的剂量。此外也加强了琥珀胆碱的神经肌肉阻滞作用，可使呼吸暂停延长。环磷酰胺可抑制胆碱酯酶活性，因而延长可卡因的作用并增加毒性。大剂量巴比妥类、皮质激素类药物可影响环磷酰胺的代谢，同时应用可增加环磷酰胺的急性毒性。

发明内容

本发明的目的是提供适合临床治疗毛细胞白血病要求的注射药物，本发明以注射给药的制剂及其制备方法，尤其是静脉注射给药，解决了急性、慢性粒细胞白血病治疗上的需求。

本发明的技术方案：一种含活性成分环磷酰胺经注射给药的制剂，其特征在于由活性成分环磷酰胺0.001-50％和水溶性填充剂、PH调节剂、增溶剂、抗氧剂、注射用水、渗透压调节剂组成。

本发明所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的制剂是指含有环磷酰胺的冻干粉针、小针注射液和小输液。

本发明所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的制剂是：

a.冻干剂中药物成分与其它药用辅料的重量百分比为0.1-50％；

b.小针注射液中药物的浓度为50mg/ml-0.5mg/ml；

c.小输液中药物的浓度为1mg/ml-0.02mg/ml。

本发明所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的小输液是指环磷酰胺与水组成的复方注射液。

本发明所述的经注射给药的制剂，其特征在于水溶性填充剂是甘露或吐温；PH调节剂是枸橼酸、磷酸、苹果酸等非挥发性的酸以及氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠盐、磷酸钠或钾或铵盐；增溶剂是聚乙烯吡咯烷酮、PEG6000、PEG4000、泊洛沙姆、卡波姆、吐温80、低分子右旋糖苷或三羟甲基氨基甲烷；抗氧剂是亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠或亚硫酸氢钠；有机硫抗氧剂为硫代甘油、硫脲素或1-硫代山梨糖醇。

本发明含活性成分环磷酰胺经注射给药制剂的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

I、组成

(1)冻干剂：环磷酰胺0.1％-30％，，水溶性填充剂50％-70％，增溶剂0.1％-12％，抗氧剂0.003％-3％，渗透压0.9％；

(2)小针注射液：环磷酰胺0.05％-1.0％，增溶剂0.1％-8％，抗氧剂0.001％-5％，注射用水70％-90％；

(3)小输液：环磷酰胺0.005-0.1％，增溶剂0.1％-8％，抗氧剂0.003％-1％，渗透压0.9％，注射用水88％-98％；

II.不同的经注射给药制剂的制备方法包括下列步骤：

(1)冻干剂：取环磷酰胺和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得白色疏松块状物，封口即的；

(2)小针注射液：取环磷酰胺和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，精滤、灌封、灭菌；

(3)小输液：取环磷酰胺和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量约20％，调节PH值至4-10使其溶解，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，加水至刻度，精滤、灌封、灭菌。

目前认为已糖醇类抗癌活性主要来自其α，ω二环氧化物的两个三元环的张力，它能和癌细胞的DNA结合，破坏DNA，从而阻止其复制，抑制癌细胞的增殖。引入两个乙酰基的DADAG脂溶性增加，易通过细胞膜，发挥对DNA烷化的潜力，故DADAG的疗效优于DAD。重庆医学院李维信等[6]用DAD进行“慢粒”治疗的超微结构观察结果与Kerr等人[7，8]所描述的“细胞收缩性坏死”以及后来改称的“凋亡”在形态表现上相符合。但DADAG抗肿瘤作用是否与诱导凋亡有关，目前尚不完全清楚。在本实验中，HL-60和K562细胞经DADAG作用后，其DNA经琼脂糖凝胶电泳出现凋亡细胞特征性的生化学变化-梯状条带；流式细胞仪同样检测到凋亡峰，并呈一定的量效和时效关系，这说明DADAG抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡有关。DADAG对K562细胞的IC50和诱导K562细胞凋亡的剂量明显大于HL-60，且不影响K562细胞的细胞周期分布，这与K562细胞连续表达有活性的Bcr/Abl酪氨酸激酶有关。研究表明：Bcr/Abl的表达可抑制生长因子的去除和Vp-16诱导的细胞凋亡，Abl酪氨酸激酶的功能与抑制凋亡的bcl-2相似[9，10]。这表明凋亡有细胞类型特异性，HL-60和K562细胞的凋亡信号途径不一样。对K562细胞生化途径的深入研究，将有助于阐明K562细胞对大多数化疗药不敏感和耐药的机理。

本发明对二乙酰二环磷酰胺(diacetyldianhydrogalactitol，DADAG)在体内外的抗肿瘤作用进行了药理实验，探讨其抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡的关系。方法：建立小鼠脑内接种艾氏腹水癌模型，观察DADAG体内抗瘤作用；MTT法观察DADAG对人早幼粒白血病细胞株HL-60和人红白血病细胞株K562的生长抑制作用，DNA电泳和流式细胞仪分析HL-60和K562细胞凋亡的情况。

结果：DADAG10mg/kgip，每天1次，连续给药7天，可显著延长小鼠中位生存时间；对HL-60和K562均有生长抑制作用，药物作用72h的IC50分别为3.7mg/L和25.5mg/L；作用HL-60和K562细胞后电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带，DNA直方图出现亚G1峰。

结论：DADAG抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡有关。对大鼠W256抑瘤率为90.6％(2mg/kg，ip×6)，Lewis肺癌抑瘤率为52.1％(3mg/kg，ip×7)，B16黑色素瘤抑瘤率为72.6％(3mg/kg，ip×7)，EAC实体瘤抑瘤率为32.8％(8mg/kg，ip×7)(待发表)。我们观察了DADAG对脑内移植性EAC实体瘤的作用，结果发现在10mg/kg高剂量下，DADAG对颅内荷瘤小鼠的生命延长率是29％，表明DADAG有可能透过血脑屏障。DADAG对脑瘤的抑制作用和对HL-60、K562细胞的生长抑制作用，表明其有体内外抗肿瘤作用，为DADAG临床应用提供理论依据。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅为解释性的说明，决不意味着它以任何方式限制本发明的范围。

实施例1

取环磷酰胺3g，置于容器中，加增溶剂聚乙烯吡咯烷酮0.1g，注射用水80ml，加氢氧化钠0.2g，搅拌使溶解，加1mol/L的枸橼酸调节PH至7-9.0，加入甘露醇28g、搅拌使溶解，补加水至100ml。加入0.5g活性碳，在30℃下搅拌20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液按每支1ml进行分装，预冻2小时后，冷冻下减压干燥12小时，至样品温度到室温后，再干燥5小时，制得白色疏松块状物，封口即得环磷酰胺冻干粉针。

实施例2

取环磷酰胺50g，置于容器中，加PEG-6000 2g，注射用水180ml，搅拌使溶解，以1mol/L的盐酸或氢氧化钠调节PH至5.0-9.0，加入甘露醇80g、山梨醇20g，搅拌使溶解，补加水至2000ml。加入0.5g活性碳，在30℃下搅拌20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液按每支2ml进行分装，预冻2小时后，冷冻下减压干燥18小时，至样品温度到室温后，再干燥5小时，制得白色疏松块状物，封口即得环磷酰胺冻干粉针。

实施例3

取环磷酰胺10g，木糖醇0.3g，加入到已溶解5g十二烷基硫酸钠的注射用水440ml中，加入2g硫代硫酸钠搅拌溶解，加入碳酸氢钠调节PH为5.5-8.5，加入0.5g活性炭，室温搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至500ml，精滤、以每支5ml灌封、灭菌，即得环磷酰胺注射液。

实施例4

取环磷酰胺10g，木糖醇0.3g，三羟甲基氨基甲烷5g的注射用水440ml中，加入2g EDTA-2Na搅拌溶解，加入碳酸氢钠调节PH为7.5-9.0，补加水至500ml，加入5g活性炭，室温搅拌吸附30分钟，除炭，精滤，以每支2ml灌封、灭菌，即得环磷酰胺注射液。

实施例5

取环磷酰胺1g，木糖醇0.1g加入注射用水180ml中，加0.5克NaOH搅拌使溶解，加入3g焦亚硫酸钠，搅拌溶解，调节PH为7.0-9.0，补加注射用水至200ml，加入2g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭、精滤、以每支2ml灌封、灭菌，即得环磷酰胺注射液。

实施例6

取环磷酰胺5g，木糖醇0.5g加入15g磷酸氢二钠和90g氯化钠，再加注射用水2000ml，搅拌使溶解，调节PH为7.5-9.0，加入10g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至10000ml，精滤、灌封每瓶100ml，灭菌，即得环磷酰胺氯化钠注射液。

实施例7

取环磷酰胺10g，加入15g氢氧化钠和1g木糖醇，15g焦亚硫酸钠，再加注射用水2000ml，搅拌使溶解，调节PH为5.0-8.0，加入10g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至10000ml，精滤、灌封每瓶100ml，灭菌，即得环磷酰胺木糖醇注射液。

实施例8

取环磷酰胺3.0g，木糖醇0.5g，加入PEG-400020g，注射用水2000ml，搅拌使溶解，再加入15g磷酸氢二钠和500g低分子右旋糖苷，15g EDTA-2Na，搅拌使溶解，调节PH为7.0-8.5，加入10g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至5000ml，精滤、灌封每瓶50ml，灭菌，即得环磷酰胺低分子右旋糖苷注射液。

Claims (6)

1.一种环磷酰胺注射液，其特征在于由活性成分环磷酰胺0.001-50％和水溶性填充剂、PH调节剂、增溶剂、抗氧剂、注射用水、渗透压调节剂组成。

2.如权利要求1所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的制剂是指含有环磷酰胺的冻干粉针、小针注射液和小输液。

3.如权利要求1所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的制剂是：

a.冻干剂中药物成分与其它药用辅料的重量百分比为0.1-50％；

b.小针注射液中药物的浓度为50mg/ml-0.5mg/ml；

c.小输液中药物的浓度为1mg/ml-0.02mg/ml。

4.如权利要求3所述的经注射给药的制剂，其特征在于所述的小输液是指环磷酰胺与水组成的复方注射液。

5.根据权利要求1所述的经注射给药的制剂，其特征在于水溶性填充剂是甘露或吐温；PH调节剂是枸橼酸、磷酸、苹果酸等非挥发性的酸以及氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠盐、磷酸钠或钾或铵盐；增溶剂是聚乙烯吡咯烷酮、PEG6000、PEG4000、泊洛沙姆、卡波姆、吐温80、低分子右旋糖苷或三羟甲基氨基甲烷；抗氧剂是亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠或亚硫酸氢钠；有机硫抗氧剂为硫代甘油、硫脲素或1-硫代山梨糖醇。

6.一种含活性成分环磷酰胺经注射给药制剂的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

不同的经注射给药制剂的制备方法包括下列步骤：

(1)冻干剂：取环磷酰胺和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得白色疏松块状物，封口即的；

(2)小针注射液：取环磷酰胺和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，精滤、灌封、灭菌；

(3)小输液：取环磷酰胺和水溶性填充剂、增溶剂、抗氧剂、渗透压剂等，加入注射用水适量约20％，调节PH值至4-10使其溶解，加入0.1-0.5％活性炭，在20-50℃下搅拌10-60分钟，脱碳，加水至刻度，精滤、灌封、灭菌。