CN101721567B - 一种石菖蒲提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种石菖蒲提取物的制备方法：将石菖蒲用水提取，将提取液浓缩得浓缩液，之后上非极性大孔吸附树脂柱，梯度洗脱，洗脱梯度为从水至35％乙醇水溶液，收集15～35％的乙醇水溶液的洗脱液，干燥，即可制得石菖蒲提取物；百分比为体积百分比。本发明还公开了由上述方法制得的石菖蒲提取物，以及其在制备提高学习和记忆能力的药物、保健品或食品，或者在制备治疗老年痴呆症药物中的应用。本发明的石菖蒲提取物具有显著的改善学习和记忆能力的效果，并且毒副成分α和β-细辛醚的含量低，安全性高，其为制备提高学习和记忆能力的药物、保健品或食品，以及治疗老年痴呆症药物提供了新途径。
Description
技术领域
本发明涉及一种石菖蒲提取物及其制备方法和应用。
背景技术
目前，老年痴呆症(AD)的病因尚不清楚，因此缺乏有效的治疗药物。国内外的研究人员从病理基础到对症治疗多环节寻找治疗药物。我国的医药研究工作者也在深入进行抗老年痴呆症新药的研发。我国有着广博的中药资源，在我国的中药宝库中有许多能改善学习和记忆的有效药物，这些药物中有可能开发出治疗老年痴呆症的新药。
石菖蒲是中药中为数不多的几味芳香开窍药之一，其常用于醒脑开窍，改善学习记忆的中药配方中。据文献记载，石菖蒲的主要药效学作用包括：①.对中枢神经系统的影响：镇静催眠、抗惊厥、益智健脑；②.对心血管系统的影响：抑制血小板聚集、增强血小板变形能力、抗心率失常、减慢心率；③.对消化系统的影响：抑制胃肠肌电活动；④.对免疫功能的影响：提高正常小鼠血清IgG含量、胸腺重量、血清补体C3含量以及巨嗜细胞的吞噬功能等。石菖蒲与中枢神经系统有关的药理药效研究报道有：①.水提液主要兴奋中脑和大脑，而挥发油既兴奋脊髓、又有抑制中脑和大脑的作用；②.去油煎剂、总挥发油和α、β-细辛醚都对小鼠的学习记忆有改善作用；③.水煎液有一定的抗抑郁作用；④.可以明显提高胆碱乙酰化转移酶的活性，促进乙酰胆碱的合成，这可能是石菖蒲改善学习记忆作用的环节之一。因此，很有必要对石菖蒲进行深入研究，以期开发为临床有效的中枢神经系统的治疗药物。此外，有文献报道α、β-细辛醚有致癌、致突变的可能。因此，为了提高药物治疗的安全性，应尽可能降低有毒副作用的α、β-细辛醚的含量。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种具有显著的改善学习和记忆能力的石菖蒲提取物及其制备方法和应用。
本发明的石菖蒲提取物的制备方法包括如下步骤：将石菖蒲用水提取，将提取液浓缩得浓缩液，之后上非极性大孔吸附树脂柱，梯度洗脱，洗脱梯度为从水至35％乙醇水溶液，收集15～35％的乙醇水溶液的洗脱液，干燥，即可得本发明的石菖蒲提取物；百分比为体积百分比。本发明中，该石菖蒲提取物简称为SCP-B。
所述的用水提取的步骤可按本领域常规方法进行操作，优选条件如下：水的用量较佳的为石菖蒲质量的8～12倍，更佳的为10倍。提取的温度较佳的为90～100℃。提取的时间较佳的为15分钟～1.5小时，更佳的为40～80分钟。提取的次数较佳的为1～3次，更佳的为2次。
所述的浓缩可按本领域常规浓缩方法进行操作，如减压浓缩。较佳的，将溶液浓缩至0.5～2g石菖蒲生药材/ml为止。
较佳的，将石菖蒲用水提取后，向提取液中加入醇类溶剂进行沉降，收集沉淀，将沉淀的水溶解液，上非极性大孔吸附树脂柱梯度洗脱。所述的向提取液中加入醇类溶剂进行沉降的步骤可按本领域常规醇沉方法进行操作，优选条件如下：所述的醇类溶剂较佳的为甲醇和/或乙醇；所述的醇类溶剂的加入量较佳的为加入至溶液中含体积百分比60～90％的醇类溶剂。所述的收集沉淀的步骤可按本领域常规方法操作，如：离心收集沉淀。所述的沉淀的水溶解液按本领域常规方法，加入少量水使沉淀溶解即可制得。
所述的上非极性大孔吸附树脂柱，梯度洗脱的步骤可按本领域常规柱洗脱方法进行操作，优选条件如下：所述的非极性大孔吸附树脂柱较佳的为D101型大孔吸附树脂柱，美国R
hm&Haas公司的AmberliteXAD-2，美国R
hm&Haas公司的AmberliteXAD-5，日本Organo三菱化成的Diaion HP-10或日本Organo三菱化成的Diaion HP-50。所述的大孔吸附树脂的用量较佳的为0.1～10g石菖蒲生药材/ml树脂，更佳的为0.5～2g石菖蒲生药材/ml树脂。较佳的洗脱梯度为水，10％乙醇水溶液，20％乙醇水溶液，30％乙醇水溶液，每个梯度的洗脱液的用量较佳的为2～8倍柱体积，更佳的为5倍柱体积。梯度洗脱步骤中，较佳的收集15～25％和/或25～35％的乙醇水溶液的洗脱液，最佳的收集20％和/或30％的乙醇水溶液的洗脱液。
所述的干燥可按本领域常规干燥方法操作，较佳的为冷冻干燥或减压干燥。
较佳的，可将上述方法制得的石菖蒲提取物采用高速逆流色谱(HSCCC分离)进一步分离提取制得药效更佳的石菖蒲提取物。本发明中，该石菖蒲提取物简称为SIPI-SCP。高速逆流色谱条件如下：
转速为500～1200rpm，较佳的为700～900rpm。温度为16～34℃，较佳的为22～28℃。流速为1.0～3.0ml/min，较佳的为2.0ml/min。
分离溶剂为A-B-水体系，A为氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷或四氯甲烷；B为甲醇或乙醇；A的体积百分含量为20％～70％，较佳的为30％～60％，最佳的为40％～50％；B的体积百分含量为5％～60％，较佳的为15％～50％，最佳的为25％～40％；水的体积百分含量为5％～50％，较佳的为10％～35％，最佳的为20％～25％。所述的分离溶剂体系的所有组合列举如下：
氯仿-甲醇-水体系；其中，氯仿体积百分含量为20％～70％，较佳的为30％～60％，最佳的为40％～50％；甲醇体积百分含量为5％～60％，较佳的为15％～50％，最佳的为25％～40％；水体积百分含量为5％～50％，较佳的为10％～35％，最佳的为20％～25％；
或者，二氯甲烷-甲醇-水体系；其中，二氯甲烷体积百分含量为20％～70％，较佳的为30％～60％，最佳的为40％～50％；甲醇体积百分含量为5％～60％，较佳的为15％～50％，最佳的为25％～40％；水体积百分含量为5％～50％，较佳的为10％～35％，最佳的为20％～25％；
或者，氯仿-乙醇-水体系，其中，氯仿体积百分含量为20％～70％，较佳的为30％～60％，最佳的为40％～50％；乙醇体积百分含量为5％～60％，较佳的为15％～50％，最佳的为25％～40％；水体积百分含量为5％～50％，较佳的为10％～35％，最佳的为20％～25％；
或者，二氯甲烷-乙醇-水体系；其中，二氯甲烷体积百分含量为20％～70％，较佳的为30％～60％，最佳的为40％～50％；乙醇体积百分含量为5％～60％，较佳的为15％～50％，最佳的为25％～40％；水体积百分含量为5％～50％，较佳的为10％～35％，最佳的为20％～25％；
或者，四氯甲烷-甲醇-水体系；其中，四氯甲烷体积百分含量为20％～70％，较佳的为30％～60％，最佳的为40％～50％；甲醇体积百分含量为5％～60％，较佳的为15％～50％，最佳的为25％～40％；水体积百分含量为5％～50％，较佳的为10％～35％，最佳的为20％～25％；
或者，四氯甲烷-乙醇-水体系；其中，四氯甲烷体积百分含量为20％～70％，较佳的为30％～60％，最佳的为40％～50％；乙醇体积百分含量为5％～60％，较佳的为15％～50％，最佳的为25％～40％；水体积百分含量为5％～50％，较佳的为10％～35％，最佳的为20％～25％；
或者，二氯乙烷-甲醇-水体系；其中，二氯乙烷体积百分含量为20％～70％，较佳的为30％～60％，最佳的为40％～50％；甲醇体积百分含量为5％～60％，较佳的为15％～50％，最佳的为25％～40％；水体积百分含量为5％～50％，较佳的为10％～35％，最佳的为20％～25％；
或者，二氯乙烷-乙醇-水体系；其中，二氯乙烷体积百分含量为20％～70％，较佳的为30％～60％，最佳的为40％～50％；乙醇体积百分含量为5％～60％，较佳的为15％～50％，最佳的为25％～40％；水体积百分含量为5％～50％，较佳的为10％～35％，最佳的为20％～25％)。
本发明的提取方法中，各步骤的优选条件可任意组合，即得到本发明的较佳实例。
本发明还进一步涉及上述方法制得的石菖蒲提取物。经HPLC测定，本发明的石菖蒲提取物SCP-B中，α-细辛醚的含量为0.03～0.04％、β-细辛醚的含量为0.05～0.07％，α和β-细辛醚的总含量为0.08～0.11％，百分比为α和/或β-细辛醚的色谱峰积分面积占石菖蒲提取物总色谱峰积分面积的百分比。本发明的较佳实例中，经高速逆流色谱进一步分离提取的石菖蒲提取物SIPI-SCP中，不含α或β-细辛醚成分。经药效试验证明，上述石菖蒲提取物均具有显著的改善学习和记忆能力的效果，参见效果实施例。
本发明进一步涉及上述石菖蒲提取物在制备提高学习和记忆能力的药物、保健品或食品中的应用。
本发明再进一步涉及上述石菖蒲提取物在制备治疗老年痴呆症药物中的应用。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明的石菖蒲提取物具有显著的改善学习和记忆能力的效果，并且毒副成分α和β-细辛醚的含量低，安全性高，其为制备提高学习和记忆能力的药物、保健品或食品，以及治疗老年痴呆症药物提供了新途径。
具体实施方式
下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。
下述实施例中，洗脱液百分比均为体积百分比。
对比实施例1 石菖蒲提取物SCP-A的制备
取200g石菖蒲药材，加2L(2000g)水微沸(100℃)提取2次，1h/次，提取液过滤。浓缩至400ml，上D101型大孔吸附树脂柱，柱体积为200ml，大孔吸附树脂的用量为1g石菖蒲生药材/ml树脂，分别用800ml水、1000ml10％乙醇溶液洗脱，收集10％乙醇洗脱液，浓缩干燥即得3.4451g。
对比实施例2 石菖蒲提取物SCP-C的制备
取200g石菖蒲药材，加2L(2000g)水微沸(100℃)提取2次，1h/次，提取液过滤。浓缩至400ml，上D101型大孔吸附树脂柱，柱体积为200ml，大孔吸附树脂的用量为1g石菖蒲生药材/ml树脂，分别用800ml水、1000ml10％乙醇溶液、1000ml20％乙醇溶液、1000ml30％乙醇溶液、1000ml40％乙醇溶液、1000ml50％乙醇溶液洗脱，收集40％乙醇洗脱液、50％乙醇洗脱液，合并，浓缩干燥即得2.5767g。
实施例1 石菖蒲提取物SCP-B的制备
取200g石菖蒲药材，加2L(2000g)水微沸(100℃)提取2次，1h/次，提取液过滤。浓缩至400ml，上D101型大孔吸附树脂柱，柱体积为200ml，大孔吸附树脂的用量为1g石菖蒲生药材/ml树脂，分别用800ml水、1000ml10％乙醇溶液、1000ml20％乙醇溶液、1000ml30％乙醇溶液洗脱，收集20％乙醇洗脱液、30％乙醇洗脱液，合并，浓缩干燥即得4.3944g。
实施例2 石菖蒲提取物SIPI-SCP的制备
将实施例1制得的石菖蒲提取物SCPB溶于上相(溶剂系统为氯仿-甲醇-水＝40％：40％：20％，体积百分比)中，流动相为下相，转速为800rpm；温度为25℃；流速为2.0ml/min，收集350min以后的峰，浓缩干燥即得。
实施例3 石菖蒲提取物SCP-B的制备
取200g石菖蒲药材，加1.6L(1600g)水，90℃提取3次，15分/次，提取液过滤。提取液中加入甲醇至溶液中含体积百分比60％的甲醇，收集沉淀，加水100ml溶解，上D101型大孔吸附树脂柱，柱体积为500ml，大孔吸附树脂的用量为0.1g石菖蒲生药材/ml树脂，分别用1000ml水、1000ml5％乙醇溶液、1000ml15％乙醇溶液、1000ml35％乙醇溶液洗脱，收集15％和35％乙醇洗脱液，合并，浓缩干燥即得。
实施例4 石菖蒲提取物SCP-B的制备
取200g石菖蒲药材，加1.2L(1200g)水，95℃提取1次，1.5h/次，提取液过滤。提取液中加入甲醇至溶液中含体积百分比90％的甲醇，收集沉淀，加水200ml溶解，上AmberliteXAD-2型大孔吸附树脂柱(美国Rhm&Haas公司)，柱体积为500ml，大孔吸附树脂的用量为10g石菖蒲生药材/ml树脂，分别用4000ml水、4000ml5％乙醇溶液、4000ml15％乙醇溶液、4000ml25％乙醇溶液洗脱，收集15％和25％乙醇洗脱液，合并，浓缩干燥即得。
实施例5 石菖蒲提取物SCP-B的制备
取200g石菖蒲药材，加2L(2000g)水，98℃提取2次，80分/次，提取液过滤。提取液中加入甲醇至溶液中含体积百分比75％的甲醇，收集沉淀，加400ml溶解，上AmberliteXAD-5型大孔吸附树脂柱(美国Rhm&Haas公司)，柱体积为200ml，大孔吸附树脂的用量为0.5g石菖蒲生药材/ml树脂，分别用800ml水、1000ml10％乙醇溶液、1000ml25％乙醇溶液洗脱，1000ml35％乙醇溶液、收集25％和35％乙醇洗脱液，浓缩干燥即得。
实施例6 石菖蒲提取物SCP-B的制备
取200g石菖蒲药材，加2L(2000g)水，98℃提取2次，40分/次，提取液过滤，浓缩至400ml，上Diaion HP-10型大孔吸附树脂柱(日本Organo三菱化成)，柱体积为200ml，大孔吸附树脂的用量为2g石菖蒲生药材/ml树脂，分别用800ml水、1000ml10％乙醇溶液、1000ml20％乙醇溶液和1000ml30％乙醇溶液洗脱，收集30％乙醇洗脱液，浓缩干燥即得。
实施例7 石菖蒲提取物SCP-B的制备
取200g石菖蒲药材，加2L(2000g)水，98℃提取2次，60分/次，提取液过滤。提取液中加入甲醇至溶液中含体积百分比80％的甲醇，收集沉淀加水400ml溶解，上Diaion HP-50型大孔吸附树脂柱(日本Organo三菱化成)，柱体积为200ml，大孔吸附树脂的用量为2g石菖蒲生药材/ml树脂，分别用800ml水、1000ml10％乙醇溶液、1000ml20％乙醇溶液洗脱，收集20％乙醇洗脱液，浓缩干燥即得。
实施例8 石菖蒲提取物SIPI-SCP的制备
将实施例1制得的石菖蒲提取物SCPB溶于上相中(溶剂系统为氯仿-乙醇-水＝20％：60％：20％，体积百分比)，流动相为下相，转速为500rpm；温度为16℃；流速为2.0ml/min，收集350min以后的峰，浓缩干燥即得。
实施例9 石菖蒲提取物SIPI-SCP的制备
将实施例1制得的石菖蒲提取物SCPB溶于上相中(溶剂系统为二氯甲烷-甲醇-水＝70％：5％：25％，体积百分比)，流动相为下相，转速为1200rpm；温度为25℃；流速为1.0ml/min，收集350min以后的峰，浓缩干燥即得。
实施例10 石菖蒲提取物SIPI-SCP的制备
将实施例1制得的石菖蒲提取物SCPB溶于上相中(溶剂系统为二氯乙烷-甲醇-水＝30％：50％：20％，体积百分比)，流动相为下相，转速为700rpm；温度为28℃；流速为3.0ml/min，收集350min以后的峰，浓缩干燥即得。
实施例11 石菖蒲提取物SIPI-SCP的制备
将实施例1制得的石菖蒲提取物SCPB溶于上相中(溶剂系统为二氯甲烷-乙醇-水＝60％：15％：25％，体积百分比)，流动相为下相，转速为900rpm；温度为34℃；流速为2.0ml/min，收集350min以后的峰，浓缩干燥即得。
实施例12 石菖蒲提取物SIPI-SCP的制备
将实施例1制得的石菖蒲提取物SCPB溶于上相中(溶剂系统为二氯乙烷-乙醇-水＝50％：25％：25％，体积百分比)，流动相为下相，转速为600rpm；温度为22℃；流速为2.0ml/min，收集350min以后的峰，浓缩干燥即得。
实施例13 石菖蒲提取物SIPI-SCP的制备
将实施例1制得的石菖蒲提取物SCPB溶于上相中(溶剂系统为四氯甲烷-乙醇-水＝55％：40％：5％，体积百分比)，流动相为下相，转速为1000rpm；温度为28℃；流速为2.0ml/min，收集350min以后的峰，浓缩干燥即得。
实施例14 石菖蒲提取物SIPI-SCP的制备
将实施例1制得的石菖蒲提取物SCPB溶于上相中(溶剂系统为四氯甲烷-甲醇-水＝20％：30％：50％，体积百分比)，流动相为下相，转速为800rpm；温度为30℃；流速为2.0ml/min，收集350min以后的峰，浓缩干燥即得。
实施例15 石菖蒲提取物SIPI-SCP的制备
将实施例1制得的石菖蒲提取物SCPB溶于上相中(溶剂系统为四氯甲烷-甲醇-水＝60％：30％：10％，体积百分比)，流动相为下相，转速为800rpm；温度为30℃；流速为2.0ml/min，收集350min以后的峰，浓缩干燥即得。
实施例16 石菖蒲提取物SIPI-SCP的制备
将实施例1制得的石菖蒲提取物SCPB溶于上相中(溶剂系统为四氯甲烷-甲醇-水＝35％：30％：35％，体积百分比)，流动相为下相，转速为800rpm；温度为30℃；流速为2.0ml/min，收集350min以后的峰，浓缩干燥即得。
效果实施例1 石菖蒲提取物中α和β-细辛醚的含量
以标准品α和β-细辛醚为参照，以实施例1和2和对比实施例1和2制得的石菖蒲提取物为样品，采用HPLC测定α和β-细辛醚在上述石菖蒲提取物中的含量。HPLC测试条件：C18柱，流动相为乙腈-水＝6：4(体积比)，流速为1ml/min，柱温：30℃，检测波长257nm，标准品由sigma公司提供。结果如表1所示：
表1石菖蒲提取物中α和β-细辛醚的含量
由表1可见，SCP-B中α和
细辛醚的含量非常低，这避免了α和β-细辛醚可能带来的致癌作用，其具有较高的安全性。SIPI-SCP中不含α和β-细辛醚，安全性更高。
效果实施例2 石菖蒲提取物SCP-A、-B和-C对东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍的影响
采用记忆获得障碍模型研究实施例1和对比实施例1和2制得的石菖蒲提取物SCPA、B和C对动物记忆障碍的改善作用。
实验动物采用小鼠。记忆获得障碍药理实验方法：动物经口灌胃(i.g)给药，第1组(空白组)和第2组(模型组)小鼠给予生理盐水，第3组(阳性药物组)i.g给予石杉碱甲66.7μg/kg，第4～12组(石菖蒲提取物实验组)分别给予10、5、2.5g生药/kg的SCP-A、SCP-B、SCP-C，0.2ml/10g体重，连续给药两周。第2～12组小鼠最后一次给药后1小时，腹腔注射东莨菪碱2mg/kg。30min后，将1～12组小鼠放入跳台仪内适应5min。然后通电，动物受到电击后的正常反应是跳回平台以躲避伤害性刺激，多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击后又迅速跳回平台，如此训练5min，记录每鼠受电击的次数。24小时后重测，记录受电击的动物数，第一次跳下平台的潜伏期和3min内的错误总数。
结果如表2所示，由表2数据可见，石菖蒲提取物SCP-B有明显的改善小鼠学习的作用。
表2SCP-A、-B和-C对东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍的影响
| 组别 | 药物 | 第1次跳下平台的潜伏期(秒) | 3min内的错误次数 |
| 空白对照 | N.S | 183.8±131.4 | 12 |
| 模型组 | N.S | 40.1±41.1## | 21## |
| 石杉碱甲 | 66.7μg/kg | 158.2±105.9** | 14* |
| SCP-A | 10g生药/kg | 152.3±128.7* | 13* |
| SCP-A | 5g生药/kg | 131.4±122.7* | 12* |
| SCP-A | 2.5g生药/kg | 79.5±93.8 | 11* |
| SCP-B | 10g生药/kg | 169.3±130.6* | 13* |
| SCP-B | 5g生药/kg | 151.3±125.3* | 14* |
| SCP-B | 2.5g生药/kg | 89.6±97.8* | 14* |
| SCP-C | 10g生药/kg | 132.5±110.1* | 12* |
| SCP-C | 5g生药/kg | 96.6±89.1 | 14* |
| SCP-C | 2.5g生药/kg | 51.1±33.4* | 18 |
##P<0.01，与空白对照组相比
*P<0.05，**P<0.01，与模型组相比
效果实施例3 石菖蒲提取物SCP-A、-B和-C对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响
采用记忆再现障碍模型研究实施例1和对比实施例1和2制得的石菖蒲提取物SCP-A、-B和-C对动物记忆障碍的改善作用。
记忆再现障碍药理实验方法：动物(i.g)给药，第1组(空白组)和第2组(模型组)小鼠给予生理盐水，第3组(阳性药物组)i.g给予石杉碱甲66.7μg/kg，第4～12组(石菖蒲提取物实验组)分别给予10、5、2.5g生药/kg的SCP-A、SCP-B、SCP-C，0.2ml/10g体重，连续给药两周。末次给药后1小时，所有组别的小鼠分别以避暗法训练一次。将小鼠放入避暗箱内，背朝洞口放入明室，同时启动计时器，动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时自动停止。取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24小时后进行测试，测试前30min，第2～12组小鼠口服给予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)。记录动物由明室进入暗室的潜伏期和5min内的电击次数(错误次数)。
结果如表3所示，由表3数据可见，石菖蒲提取物SCP-B有明显的改善小鼠记忆的作用。
表3SCPA、B和C对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响
| 组别 | 药物 | 由明室进入暗室的潜伏期(秒) | 错误次数 |
| 空白对照 | N.S | 122.4±87.2 | 1.9±1.4 |
| 模型组 | N.S | 13.8±11.9## | 5.6±2.7## |
| 石杉碱甲 | 66.7μg/kg | 72.0±85.5** | 4.5±2.2 |
| SCP-A | 10g生药/kg | 69.1±33.5** | 3.5±2.2 |
| SCP-A | 5g生药/kg | 47.2±31.9** | 5.2±2.0 |
| SCP-A | 2.5g生药/kg | 43.2±38.6* | 5.2±3.7 |
| SCP-B | 10g生药/kg | 59.7±28.1** | 6.1±3.4 |
| SCP-B | 5g生药/kg | 54.7±29.4** | 4.9±2.4 |
| SCP-B | 2.5g生药/kg | 52.5±38.3** | 5.8±3.7 |
| SCP-C | 10g生药/kg | 48.1±23.5** | 6.9±2.7 |
| SCP-C | 5g生药/kg | 38.9±26.0* | 6.0±2.5 |
| SCP-C | 2.5g生药/kg | 29.2±18.2 | 6.5±3.4 |
##P<0.01，与空白对照组相比
*P<0.05，**P<0.01，与模型组相比
效果实施例4 石菖蒲提取物SIPI-SCP对东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍的影响
采用记忆获得障碍模型研究实施例2制得的石菖蒲提取物SIPI-SCP对动物记忆障碍的改善作用。方法同效果实施例2。结果如表4所示，由表4数据可见，石菖蒲提取物SIPI-SCP有明显的改善小鼠学习的作用，有效剂量为5-10g生药/kg。
表4SIPI-SCP对东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍的影响
| 组别 | 药物 | 第1次跳下平台的潜伏期(秒) | 3min内的错误次数 |
| 空白对照 | N.S | 207.3±105.5 | 9 |
| 模型组 | N.S | 82.8±94.3## | 16## |
| 石杉碱甲 | 66.7μg/kg | 217.0±109.9* | 8** |
| SIPI-SCP | 10g生药/kg | 248.8±107.9** | 4** |
| SIPI-SCP | 5g生药/kg | 202.3±128.7** | 4** |
| SIPI-SCP | 2.5g生药/kg | 98.5±80.8 | 16 |
##P<0.01，与空白对照组相比
*P<0.05，**P<0.01与模型组相比
效果实施例5 石菖蒲提取物SIPI-SCP对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响
采用记忆再现障碍模型研究实施例2制得的石菖蒲提取物SIPI-SCP对动物记忆障碍的改善作用。方法同效果实施例3。结果如表5所示，由表5数据可见，石菖蒲提取物SIPI-SCP有明显的改善小鼠记忆的作用。
表5SIPI-SCP对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响
| 组别 | 药物 | 由明室进入暗室的潜伏期(秒) | 错误次数 |
| 空白对照 | N.S | 265.9±56.8 | 0.5±0.5 |
| 模型组 | N.S | 82.3±62.1## | 6.1±4.3## |
| 石杉碱甲 | 66.7μg/kg | 209.4±92.6** | 2.5±3.1* |
| SIPI-SCP | 10g生药/kg | 198.1±65.5** | 2.2±1.5* |
| SIPI-SCP | 5g生药/kg | 127.2±88.0* | 5.9±5.6 |
| SIPI-SCP | 2.5g生药/kg | 94.6±85.1 | 7.8±6.5 |
##P<0.01，与空白对照组相比
*P<0.05，**P<0.01与模型组相比
效果实施例6SIPI-SCP小鼠经口灌胃给药的LD50
小鼠一次性i.g给予120倍药效剂量的SIPI-SCP(1200g生药/kg，实施例2所制备)，在两周的观察期内，动物一切活动正常，无死亡发生。由此说明，SIPI-SCP在具有明显的改善学习记忆效果的同时，还具有较高的安全性。
Claims (18)
1.一种石菖蒲提取物的制备方法，包括如下步骤：将石菖蒲用水提取，将提取液浓缩得浓缩液，之后上非极性大孔吸附树脂柱，梯度洗脱，洗脱梯度为从水至35％乙醇水溶液，收集15～35％的乙醇水溶液的洗脱液，干燥，即可制得石菖蒲提取物；百分比为体积百分比。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的将石菖蒲用水提取的步骤中，水的用量为石菖蒲质量的8～12倍；提取的温度为90～100℃；提取的时间为15分钟～1.5小时；提取的次数为1～3次。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的将石菖蒲用水提取的步骤中，水的用量为石菖蒲质量的10倍；提取的时间为40～80分钟；提取的次数为2次。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的将石菖蒲用水提取后，向提取液中加入醇类溶剂进行沉降，收集沉淀，将沉淀的水溶解液，上非极性大孔吸附树脂柱梯度洗脱；所述的醇类溶剂为甲醇和/或乙醇；所述的醇类溶剂的加入量为加入至溶液中含体积百分比60～90％的醇类溶剂。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的浓缩步骤为将溶液浓缩至0.5～2g石菖蒲生药材/ml为止。
6.如权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于：所述的非极性大孔吸附树脂柱为D101型大孔吸附树脂柱，美国
公司的AmberliteXAD-2，美国
公司的AmberliteXAD-5，日本Organo三菱化成的Diaion HP-10或日本Organo三菱化成的Diaion HP-50。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂的用量为0.1～10g石菖蒲生药材/ml树脂。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂的用量为0.5～2g石菖蒲生药材/ml树脂。
9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的洗脱梯度为水，
10％乙醇水溶液，20％乙醇水溶液，30％乙醇水溶液；每个梯度的洗脱液的用量为2～8倍柱体积。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于：所述的每个梯度的洗脱液的用量为5倍柱体积。
11.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的梯度洗脱步骤中，收集15～25％和/或25～35％的乙醇水溶液的洗脱液。
12.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于：所述的梯度洗脱步骤中，收集20％和/或30％的乙醇水溶液的洗脱液。
13.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：将所述的石菖蒲提取物采用高速逆流色谱进一步分离提取制得药效更佳的石菖蒲提取物，高速逆流色谱条件如下：转速为500～1200rpm；温度为16～34℃；流速为1～3ml/min；分离溶剂为A-B-水体系，A为氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷或四氯甲烷；B为甲醇或乙醇；A的体积百分含量为20％～70％；B的体积百分含量为5％～60％；水的体积百分含量为5％～50％。
14.如权利要求13所述的制备方法，其特征在于：所述的转速为700～900rpm；所述的温度为22～28℃；所述的流速为2ml/min。
15.如权利要求13所述的制备方法，其特征在于：分离溶剂为A-B-水体系，所述的A的体积百分含量为30％～60％；B的体积百分含量为15％～50％；水的体积百分含量为10％～35％。
16.如权利要求15所述的制备方法，其特征在于：分离溶剂为A-B-水体系，所述的A的体积百分含量为40％～50％；B的体积百分含量为25％～40％；水的体积百分含量为20％～25％。
17.如权利要求1～16任一项所述的制备方法制得的石菖蒲提取物。
18.如权利要求17所述的石菖蒲提取物在制备提高学习和记忆能力的药物、保健品或食品，或者在制备治疗老年痴呆症药物中的应用。
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