CN101721530B - 金鸡制剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种金鸡制剂的质量控制方法，采用的是高效液相色谱法，此方法精密度、稳定性、重现性良好，能够有效地控制金鸡制剂的产品质量。
Description
发明领域
本发明涉及一种药物制剂的质量控制方法，特别涉及治疗妇科疾病的金鸡制剂的含量测定方法。
背景技术
金鸡胶囊为已上市药品，批准文号为国药准字Z45020293，具有清热解毒，健脾除湿，通络活血功能，用于湿热下注引起的附件炎。本品由金樱根、鸡血藤、千斤拔、功劳木、两面针、穿心莲等药材经提取精制而成。功劳木具有清热燥湿、泻火解毒之功效，民间常用于清热、解毒、治感冒等，其主要活性成分为生物碱类，主要为盐酸小檗碱、盐酸巴马汀及药根碱等；穿心莲具有清热解毒、消肿止痛、抗菌及抗癌作用，常用于急性细菌性痢疾、咽喉肿痛、温热下痢、毒蛇咬伤、疮痈疔毒、外伤感染等，其主要活性成分为二萜内酯类化合物，主要有穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯等。
金鸡胶囊标准中，含量测定的指标成分过少，唯一的测定成分为盐酸小檗碱，难以有效保证产品质量，因此有必要建立多个指标成分进行质量控制。申请号为200510200479.4的专利公开了金鸡胶囊中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定方法，但该方法不能有效除去干扰的杂质，色谱峰与杂峰分离不佳。文献“反相高效液相色谱法测定金鸡胶囊中盐酸巴马汀及盐酸小檗碱的含量.中国医院药学杂志.22(12)：723”报道了金鸡胶囊中盐酸巴马汀及盐酸小檗碱的含量测定方法，但该方法供试液制备需用中性氧化铝柱除杂，且流动相使用了对柱子损害较大的离子对试剂，而我们制定的含量测定方法供试液制备简单，流动相不需离子对试剂，且最终分离效果满足含量测定的要求。
发明内容
本发明目的在于提供一种金鸡制剂的质量控制方法，该质量控制方法包括盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的含量测定方法，和/或穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定方法。
金鸡制剂中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的含量测定方法如下：
金鸡制剂的含量测定方法采用高效液相色谱法，该法包括色谱条件与系统适用性试验，对照品溶液的制备，供试品溶液的制备和盐酸巴马汀与盐酸小檗碱含量测定步骤。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸二氢盐缓冲液(用磷酸调pH值至2.8～3.5)(25～35∶75～65)为流动相；紫外检测器。
对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品、盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙腈-水(25～35∶75～65)的混合溶液制成一定浓度的混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡制剂药物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入一定体积的盐酸-甲醇(1∶25～200)混合溶液，称定重量，冷浸，超声处理，放冷至室温，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶25～200)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取一定体积的续滤液，蒸干，残渣加乙腈-水(25～35∶75～65)混合溶液使溶解，转移至一定体积的量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
每1ml含盐酸巴马汀20.64μg，含盐酸小檗碱15.06μg
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
所述流动相中的磷酸二氢盐可以是磷酸二氢钾或磷酸二氢钠等，其浓度范围为0.01mol/L～0.08mol/L。
所述的紫外检测器的检测波长较佳范围是260nm～270nm或330nm～350nm。
所述的一定浓度的混合对照品溶液，盐酸巴马汀对照品的浓度范围是5μg/ml～50μg/ml，盐酸小檗碱对照品的浓度范围是5μg/ml～50μg/ml。
金鸡制剂中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的含量测定优选方法如下：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸二氢盐缓冲液(用磷酸调pH值至3.0)(30∶70)为流动相；紫外检测器。
对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品、盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙腈-水(30∶70)的混合溶液制成一定浓度的混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡制剂药物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入一定体积的盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液，称定重量，冷浸，超声处理，放冷至室温，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取一定体积的续滤液，蒸干，残渣加乙腈-水(30∶70)混合溶液使溶解，转移至一定体积的量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
金鸡制剂穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定方法如下：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(45～55∶55～45)为流动相；紫外检测器。
对照品溶液的制备精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇-水(100～50∶0～50)制成一定浓度的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡制剂药物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-水(100～50∶0～50)，称定重量，浸泡，超声处理，放冷，再称定重量，加甲醇-水(100～50∶0～50)补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取一定体积的续滤液，置中性氧化铝柱上，用甲醇洗脱，收集洗脱液，置量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
所述的紫外检测器的检测波长较佳范围是：穿心莲内酯220nm～230nm，脱水穿心莲内酯220nm～230nm或250nm～260nm。
所述的一定浓度的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的对照品溶液，穿心莲内酯对照液的浓度范围是10μg/ml～80μg/ml，脱水穿心莲内酯对照液的浓度范围是20μg/ml～160μg/ml。
本发明金鸡制剂中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱、穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定方法重现性好，各种制剂的取样量是指去除外包材、按常规取样量而定。
本发明所用的金鸡制剂，是指按金鸡胶囊处方比例制备，制剂包括片剂，胶囊剂，颗粒剂，口含片，滴丸剂，口服液，煎膏剂等临床或药学上可接受的常用剂型。
本发明的质量控制方法精密度、稳定性、重现性良好，符合定量测定的要求。
下面实验例用于进一步说明本发明的技术方案和技术效果。
实验例1：金鸡胶囊中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的含量测定
1仪器、试药与样品
仪器：日本岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，日本岛津SPD-10Avp紫外检测器，威玛龙工作站；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Agilent TC-C18，4.6×150mm)，菲罗门C184×3.0mm保护柱；梅特勒-托利多AB265-S电子天平；HS-10260D超声波清洗仪，天津市恒奥科技发展有限公司。
试药：盐酸小檗碱化学对照品(含量测定用，批号：110713-200208，中国药品生物制品检定所提供)，盐酸巴马汀化学对照品(鉴别用，批号：0732-200005，中国药品生物制品检定所提供)，纯度经检查均符合含量测定用化学对照品的技术要求，盐酸小檗碱含量为99.3％，盐酸巴马汀含量为99.1％，测定时按100％计算；乙腈(色谱纯)，水(自制双蒸水)，磷酸(分析纯)，磷酸二氢钾(分析纯)。
样品：金鸡胶囊。
2方法与结果
2.1测定波长的选择
根据盐酸巴马汀及盐酸小檗碱对照品紫外吸收光谱图，两者约在265nm和345nm附近有最大吸收，在260nm～270nm及330nm～350nm范围均有较大吸收。因此测定波长在260nm～270nm及330nm～350nm范围内均可较好地检测出目标物，以波长为265nm为最佳检测波长。
2.2对照品及供试品溶液的制备
对照品溶液的制备精密称取盐酸巴马汀对照品10.32mg，盐酸小檗碱对照品10.04mg，分别置100ml量瓶中，加乙腈-水(3∶7)混合溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取盐酸巴马汀对照品溶液2ml，盐酸小檗碱对照品溶液1.5ml置10ml量瓶，加混合溶液至刻度，摇匀，即得(每1ml含盐酸巴马汀20.64μg，含盐酸小檗碱15.06μg)。
供试品溶液的制备取金鸡胶囊内容物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液50ml，称定重量，冷浸30分钟，超声处理(功率260W，频率50kHz)30分钟，放冷至室温，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈-水(3∶7)混合溶液使溶解，转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
阴性样品溶液的制备阴性样品溶液是按处方比例称取除功劳木外其余味药，按制法制成功劳木阴性样品，再取此阴性样品按上述“供试品溶液的制备”方法制备不含功劳木的阴性样品溶液。
供试品溶液制备中，对提取方法和提取时间进行考察。①提取方法的考察了超声处理后过中性氧化铝柱和不过中性氧化铝柱的比较，结果表明两者的提取效率无明显差别，且不过中性氧化铝柱的样品盐酸巴马汀和盐酸小檗碱色谱均无干扰，故提取方法无需过中性氧化铝柱，操作较为简单；②提取时间考察了超声15分钟、30分钟和45分钟，结果表明超声处理30分钟已经可以提取完全。
2.3色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Agilent TC-C18，4.6×150mm)；保护柱：菲罗门C184×3.0mm；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调pH值至3.0)(30∶70)为流动相；流速：1ml/min；柱温：室温；检测波长：265nm。
分别吸取对照品溶液、供试品溶液和不含功劳木的阴性样品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定。此条件下盐酸巴马汀、盐酸小檗碱与其它组分达到基线分离，分离度R＞1.5，理论板数按盐酸巴马汀计算大于2000，按盐酸小檗碱计算大于2000，盐酸巴马汀保留时间约为12分钟，盐酸小檗碱保留时间约为14分钟。阴性样品溶液色谱在相应位置无吸收峰，可见阴性无干扰。
流动相曾考察了不同浓度的磷酸二氢钾缓冲液，不同的pH值，不同的流动相比例，结果 表明缓冲液浓度为0.01mol/L～0.08mol/L，缓冲液pH值为2.8～3.5，流动相比例为(25～35∶75～65)时，目标物均能较好地分离。
2.4方法学验证结果对照品纯度检查：以峰面积归一化法计算盐酸巴马汀对照品含量为99.1％，盐酸小檗碱对照品含量为99.3％，符合含量测定要求，测定时按100％计算。线性关系考察：以盐酸巴马汀和盐酸小檗碱进样量C(μg)为横坐标，以峰面积积分A为纵坐标进行线性回归分析，得盐酸巴马汀回归方程为：A＝4.59×106C-1.38×104，r＝0.9999；盐酸小檗碱回归方程为：A＝4.46×106C-1.24×104，r＝0.9997。表明盐酸巴马汀进样量在0.1032～1.032μg，盐酸小檗碱进样量在0.1004～1.004μg范围内线性关系良好，且直线通过原点。即对应盐酸巴马汀浓度为5.16μg/ml～51.6μg/ml，盐酸小檗碱浓度为5.02μg/ml～50.2μg/ml。精密度试验：盐酸巴马汀RSD为0.63％，盐酸小檗碱RSD为1.16％，表明精密度较好。稳定性试验：盐酸巴马汀72小时内峰面积平均为1881752，RSD为1.06％；盐酸小檗碱72小时内峰面积平均为1338382，RSD为1.17％，表明供试品溶液在72h内稳定性较好。重复性试验：盐酸巴马汀含量平均值为4.10mg/粒，RSD为0.88％，盐酸小檗碱含量平均值为2.62mg/粒，RSD为0.80％，表明方法重复性较好。加样回收率试验：盐酸巴马汀平均回收率为96.86％，RSD为1.51％，盐酸小檗碱平均回收率为97.38％，RSD为1.86％，表明方法回收率较好。
实验例2：金鸡胶囊中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定
1仪器、试药与样品
仪器：日本岛津LC-2010A高效液相色谱仪，岛津SPD-M10Avp二极管阵列检测器，日本岛津SPD-10Avp紫外检测器，岛津LCSolution色谱工作站；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Agilent TC-C18，4.6×150mm)，菲罗门C184×3.0mm保护柱；梅特勒-托利多AB265-S电子天平；HS-10260D超声波清洗仪，天津市恒奥科技发展有限公司。
试药：穿心莲内酯化学对照品(含量测定用，批号：110797-200307，中国药品生物制品检定所提供)，脱水穿心莲内酯化学对照品(含量测定用，批号：110854-200306，中国药品生物制品检定所提供)；中性氧化铝(200~300目，国药集团化学试剂有限公司)；甲醇(色谱纯)，水(自制双蒸水)。
样品：金鸡胶囊
2方法与结果
2.1测定波长的选择
根据二极管阵列检测器测定结果，穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品溶液在约225nm和254nm附近有最大吸收，穿心莲内酯在220nm～230nm，脱水穿心莲内酯在220nm～230nm及250nm～260nm均有较大吸收，均可作为测定波长。最佳测定波长为：穿心莲内酯为225nm， 脱水穿心莲内酯为254nm。
2.2对照品及供试品溶液的制备
对照品溶液的制备精密称取穿心莲内酯对照品25.26mg，脱水穿心莲内酯对照品51.29mg，分别置25ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取穿心莲内酯对照品溶液、脱水穿心莲内酯对照品溶液各3ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含穿心莲内酯30.312μg，含脱水穿心莲内酯61.548μg)。
供试品溶液的制备取金鸡胶囊内容物约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理(功率260W，频率40kHz)40分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(200～300目，5g，内径1cm)上，用甲醇25ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
阴性样品溶液的制备阴性样品溶液是按处方比例称取除穿心莲外其余药味，按制法制成穿心莲阴性样品，再取此阴性样品按上述“供试品溶液的制备”方法制备不含穿心莲的阴性样品溶液。
供试品溶液制备中，分别对浸泡时间、超声时间及溶剂量进行考察。①浸泡时间的考察中，考察了浸泡0小时、1小时、2小时和3小时，结果表明浸泡2小时即可；②超声时间考察了超声20分钟、30分钟、40分钟和60分钟，结果表明超声处理40分钟已经可以提取完全；③溶剂量的考察中，分别考察了加入甲醇25ml、50ml、100ml进行提取，结果所得含量无明显差异。
2.3色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Agilent TC-C18，4.6×150mm)；保护柱：菲罗门C184×3.0mm；流动相：甲醇-水(50∶50)；流速：1ml/min；检测波长：穿心莲内酯为225nm、脱水穿心莲内酯254nm。
分别吸取对照品溶液、供试品溶液和不含穿心莲的阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。此条件下穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯与其它组分达到基线分离，分离度R＞1.5，理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均大于3000，穿心莲内酯保留时间约为7分钟，脱水穿心莲内酯保留时间约为20分钟。阴性样品溶液在色谱的相应位置无吸收峰，可见阴性无干扰。
考察了不同比例的甲醇-水流动相，结果表明甲醇-水比例为45～55∶55～45时目标成分均可有效分离。
2.4方法学验证结果
线性关系考察：以脱水穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯进样量C为横坐标，以峰面积积分A为纵坐标进行线性回归分析，得穿心莲内酯回归方程为：A＝2.07×106C+1.97×104，r＝0.9999；脱水穿心莲内酯回归方程为：A＝1.48×106C+4.81×104，r＝0.9999。表明脱水穿心莲内酯进样量在0.101～0.808μg，脱水穿心莲内酯进样量在0.205～1.641μg范围内线性关系良好，且直线通过原点。即对应穿心莲内酯浓度为10.1μg/ml～80.8μg/ml，脱水穿心莲内酯浓度为20.5μg/ml～164.1μg/ml。精密度试验：穿心莲内酯峰面积平均为646253，RSD为0.07％，脱水穿心莲内酯峰面积平均为960487，RSD为0.10％，表明精密度较好。稳定性试验：穿心莲内酯48小时峰面积平均为808383，RSD为0.60％；脱水穿心莲内酯48小时峰面积平均为1008845，RSD为1.76％，表明供试品溶液在48h内稳定性较好。重复性试验：穿心莲内酯含量平均值为1.16mg/粒，RSD为1.4％，脱水穿心莲内酯含量平均值为1.95mg/粒，RSD为2.2％，表明方法重复性较好。加样回收率试验：穿心莲内酯平均回收率为101.29％，RSD为2.7％，脱水穿心莲内酯平均回收率为99.36％，RSD为2.21％，表明方法回收率较好。
具体实施例如下：
实施例1金鸡胶囊中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调pH值至3.0)(30∶70)为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸巴马汀和盐酸小檗碱计算均大于2000。
对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品、盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙腈-水(30∶70)的混合溶液制成每1ml含盐酸巴马汀20μg，含盐酸小檗碱15μg的混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡胶囊内容物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液50ml，称定重量，冷浸30分钟，超声处理30分钟(功率260W，频率50kHz)，放冷至室温，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈-水(30∶70)混合溶液使溶解，转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例2金鸡胶囊中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(50∶50)为流动相；穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm；理论板数按 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯计算均大于3000。
对照品溶液的制备精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯30μg，含脱水穿心莲内酯60μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡胶囊内容物约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡2小时，超声处理(功率260W，频率40kHz)40分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(200～300目，5g，内径1cm)上，用甲醇25ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例3金鸡胶囊中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用磷酸调pH值至3.0)(25∶75)为流动相；检测波长为260nm；理论板数按盐酸巴马汀和盐酸小檗碱计算均大于2000。
对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品、盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙腈-水(25∶75)的混合溶液制成每1ml含盐酸巴马汀10μg，含盐酸小檗碱10μg的混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡胶囊内容物0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液25ml，称定重量，冷浸30分钟，超声处理40分钟，放冷至室温，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈-水(25∶75)混合溶液使溶解，转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例4金鸡胶囊中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(45∶55)为流动相；穿心莲内酯检测波长为220nm，脱水穿心莲内酯检测波长为250nm；理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯计算均大于3000。
对照品溶液的制备精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯№对照品适量，加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯10μg，含脱水穿心莲内酯20μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡胶囊内容物约8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲 醇25ml，称定重量，浸泡过夜，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置中性氧化铝柱(200～300目，8g，内径1cm)上，用甲醇40ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例5金鸡胶囊中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.08mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调pH值至3.0)(35∶65)为流动相；检测波长为255nm；理论板数按盐酸巴马汀和盐酸小檗碱计算均大于2000。
对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品、盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙腈-水(35∶65)的混合溶液制成每1ml含盐酸巴马汀50μg，含盐酸小檗碱50μg的混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡胶囊内容物8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶200)混合溶液25ml，称定重量，冷浸2小时，超声处理60分钟，放冷至室温，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶200)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈-水(35∶65)混合溶液使溶解，转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例6金鸡胶囊中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(55∶45)为流动相；检测波长为230nm；理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯计算均大于3000。
对照品溶液的制备精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯80μg，含脱水穿心莲内酯160μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡胶囊内容物约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，称定重量，浸泡4小时，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，置中性氧化铝柱(200～300目，8g，内径1cm)上，用甲醇40ml洗脱，收集洗脱液，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例7金鸡片中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L 磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调pH值至3.1)(32∶68)为流动相；检测波长为258nm；理论板数按盐酸巴马汀和盐酸小檗碱计算均大于2000。
对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品、盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙腈-水(32∶68)的混合溶液制成每1ml含盐酸巴马汀30μg，含盐酸小檗碱30μg的混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡片除去包衣，研细，取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶25)混合溶液40ml，称定重量，冷浸1小时，超声处理50分钟，放冷至室温，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶25)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈-水(32∶68)混合溶液使溶解，转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例8金鸡片中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(54∶46)为流动相；检测波长为222nm；理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯计算均大于3000。
对照品溶液的制备精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯20μg，含脱水穿心莲内酯40μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡片除去包衣，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇80ml，称定重量，浸泡3小时，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液40ml，置中性氧化铝柱(100～200目，6g，内径1cm)上，用甲醇40ml洗脱，收集洗脱液，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例9金鸡颗粒中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.06mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调pH值至2.9)(28∶72)为流动相；检测波长为350nm；理论板数按盐酸巴马汀和盐酸小檗碱计算均大于2000。
对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品、盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙腈-水(28∶72)的混合溶液制成每1ml含盐酸巴马汀20μg，含盐酸小檗碱10μg的混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡颗粒研细，取5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液50ml，称定重量，冷浸2.5小时，超声处理35分钟，放冷至室温，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈-水(28∶72)混合溶液使溶解，转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例10金鸡颗粒中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(53∶47)为流动相；穿心莲内酯检测波长为223nm，脱水穿心莲内酯检测波长为257nm；理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯计算均大于3000。
对照品溶液的制备精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯60μg，含脱水穿心莲内酯120μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡颗粒研细，取4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡1.5小时，超声处理35分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(100～200目，4g，内径1cm)上，用甲醇20ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例11金鸡含片中盐酸巴马汀与盐酸小檗碱的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.07mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调pH值至3.2)(29∶71)为流动相；检测波长为330nm；理论板数按盐酸巴马汀和盐酸小檗碱计算均大于2000。
对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品、盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加乙腈-水(29∶71)的混合溶液制成每1ml含盐酸巴马汀20μg，含盐酸小檗碱10μg的混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡含片研细，取5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液50ml，称定重量，冷浸2小时，超声处理20分钟，放冷至室温，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈-水(29∶71)混合溶液使溶解，转移至10ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例12金鸡含片中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(47∶53)为流动相；检测波长为228nm；理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯计算均大于3000。
对照品溶液的制备精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯30μg，含脱水穿心莲内酯20μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备取金鸡含片研细，取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸泡3小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，置中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)上，用甲醇25ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
Claims (3)
1.一种金鸡制剂的检测方法，该检测方法为用液相色谱法测定穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以45～55∶55～45的甲醇-水为流动相；紫外检测器；
对照品溶液的制备 精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，加100～50∶0～50的甲醇-水制成穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的对照品溶液，即得；
供试品溶液的制备 取金鸡制剂药物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入100～50∶0～50的甲醇-水，称定重量，浸泡，超声处理，放冷，再称定重量，加100～50∶0～50的甲醇-水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取一定体积的续滤液，置中性氧化铝柱上，用甲醇洗脱，收集洗脱液，置量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.如权利要求1所述的金鸡制剂的检测方法，其特征在于该方法中紫外检测器的检测波长范围是：穿心莲内酯220nm～230nm，脱水穿心莲内酯220nm～230nm或250nm～260nm。
3.如权利要求1所述的金鸡制剂的检测方法，其特征在于该方法中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的对照品溶液，穿心莲内酯对照液的浓度范围是10μg/ml～80μg/ml，脱水穿心莲内酯对照液的浓度范围是20μg/ml～160μg/ml。
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