CN101474249B - 益母草及其制剂的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种益母草及其制剂的质量控制方法，是采用高效液相色谱-蒸发光散射测定法，此方法精密度、稳定性、重现性良好，能够有效地控制益母草及其制剂的产品质量。
Description
发明领域
本发明涉及益母草及其制剂的质量控制方法，特别涉及益母草及其制剂的含量测定方法。
背景技术
益母草，别名茺蔚、坤草，是一种草本植物。性微寒，味苦辛，可去瘀生新，活血调经，利尿消肿，是历代医家用来治疗妇科疾病之要药。现代医学研究证明，益母草含益母草碱、盐酸水苏碱、益母草定、益母草宁等多种生物碱及苯甲酸、氯化钾等。据现代临床及动物实施证明，益母草浸膏及煎剂对子宫有强而持久的兴奋作用，不但能增强其收缩力，同时能提高其紧张度和收缩率。
关于益母草的质量控制方法，在现有技术中也公开很多，中国药典2005年版一部中的益母草及益母草膏标准均采用薄层扫描法测定盐酸水苏碱的含量，但该方法操作烦琐、检测灵敏度低、重复性不好，误差较大；有报道采用高效液相色谱法测定药材或制剂中盐酸水苏碱的含量，采用了磺酸基键合硅胶柱、阳离子交换树脂柱、氨基键合硅胶柱等色谱柱及紫外检测的方法法进行测定，这些方法中所使用的柱子稳定性较差，紫外波长选择末端吸收作为测定波长，噪音大，干扰较严重，从而使整个方法重现性不好。本发明突破原有文献公开的质量控制方法，含量测定方法依据试验结果表明其精密度、稳定性、重现性良好，能够更有效地控制益母草及其制剂的产品质量。
发明内容
本发明目的在于提供一种益母草含量测定方法。本发明另一目的在于提供一种益母草制剂含量测定方法。
益母草的含量测定方法如下：
益母草的含量测定方法应用高效液相色谱-蒸发光散射测定法(HPLC-ELSD)。
高效液相色谱-蒸发光散射测定法包括色谱条件与系统适用性试验，对照品溶液的制备，供试品溶液的制备和盐酸水苏碱的含量测定步骤。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基或辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以1-10∶99-90的乙腈-水或2-12∶98-88的甲醇-水为流动相；蒸发光散射检测器检测。
对照品溶液的制备取干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，加流动相制成每1ml分别含0.05mg、0.15mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草粉末0.2-1g，置具塞锥形瓶中，加入乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流0.5-3小时，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至10ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
流动相的流速为每分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测的漂移管温度：60-130℃，空气流速：1.5-3.2L/min。
益母草制剂的含量测定方法如下：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基或辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以1-10∶99-90的乙腈-水或2-12∶98-88的甲醇-水为流动相；蒸发光散射检测器检测。
对照品溶液的制备取干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml分别含0.05mg、0.15mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草制剂内容物，研细，混匀，精密称取或量取适量，置100ml烧杯中，加热水10-50ml使溶解，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱，用水50～400ml洗脱，弃去水液，再用70∶30的甲醇-氨水50～400ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
流动相的流速为每分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测的漂移管温度：60-130℃，空气流速：1.5-3.2L/min。
强酸性阳离子交换树脂柱的内径1～2cm，柱高5～10cm。
制剂的取样量为：益母草颗粒取0.1-2g，益母草片及胶囊取0.05-0.5g，益母草流浸膏取2-10g，益母草膏取0.2-1.5g，益母草口服液量取0.5-5ml，益母草注射液量取0.1-1ml，其他益母草制剂取样量按含益母草生药量0.1-4g而定取样量。
本发明中所述的益母草制剂是指益母草作为原料药或原料药之一，按照现有的制备方法制成的制剂，包括片剂，胶囊剂，颗粒剂，滴丸剂，口服液，煎膏剂、口含片、丸剂、散剂、栓剂、喷雾剂、滴剂、贴剂、注射液等临床或药学上可接受的常用剂型。
树脂预处理方法：将树脂浸泡在水中1～2天，使充分膨胀，装入层析柱，先用树脂柱体积10倍量的2mol/L盐酸以3ml/min流速进行交换，使其变为氢型，再用水洗至流出液呈中性，接着用树脂柱体积10倍量的1mol/L氢氧化钠溶液进行交换，使其恢复钠型，然后再用水洗至流出液呈中性，接着再用树脂柱体积10倍量的1mol/L盐酸进行交换，使其变为氢型，最后用水洗至流出液呈中性。
本发明与公开的方法进行了对比：对比方法1)用高效液相色谱法测定益母草颗粒中的盐酸水苏碱含量，采用氨基柱或磺基柱、紫外检测器检测，选用的波长为紫外末端吸收，基线不稳定，干扰严重，且氨基柱或磺基柱易水解，使柱效降低，影响分离效果，见附图1；对比方法2)用氨基柱、蒸发光散射检测器对盐酸水苏碱含量进行测定，但氨基柱易水解，导致实验过程中基线难以平稳，见附图2。本发明的方法选用稳定性好的十八烷基硅烷键合硅胶反相色谱柱，采用HPLC-ELSD法对益母草及其制剂中的盐酸水苏碱进行含量测定研究，结果基线稳定，分离度好，见附图3。方法学验证表明，该法分离效果良好，方法线性、稳定性、重复性、加样回收率等方法学考察均符合定量测定的要求。
附图说明
附图1氨基柱，紫外检测器测定图谱
附图2氨基柱，蒸发光散射检测器测定图谱
附图3十八烷基硅烷键合硅胶柱，蒸发光散射检测器测定图谱
下面实施例用于进一步说明本发明的技术方案和技术效果。
实施例1：益母草药材含量测定
仪器：日本岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪，威玛龙色谱工作站；美国奥泰ELSD2000ES蒸发光散射检测器；梅特勒-托利多AB265-S电子天平。
试药：盐酸水苏碱化学对照品(含量测定用，批号：110716-200306，中国药品生物制品检定所)，纯度经检查符合含量测定用化学对照品的技术要求，含量为99.15％；乙腈(色谱纯)，水(自制双蒸水)，乙醇(分析纯)。
样品：益母草(批号：080701)。
对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品19.85mg，置10ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀(1.985mg/ml)；精密量取0.6ml、2ml分别置25ml量瓶，加流动相至刻度，摇匀，即得(47.64μg/ml、158.8μg/ml)。
供试品溶液的制备取益母草粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至10ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
试验条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱Agilent ZORBAX SB-Aq 5μm4.6×250mm；流动相：乙腈-水(5∶95)，流速：0.3ml/min；漂移管温度：75℃，空气流速：2.2L/min；柱温：室温。
分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪。此条件下盐酸水苏碱与其它组分达到基线分离，分离度R＞1.5，理论塔板数按盐酸水苏碱计算大于10000，盐酸水苏碱保留时间约为10分钟，见表1。
表1理论塔板数、分离度、保留时间数据
考察了甲醇-水和乙腈-水等不同的流动相比例及不同的流动相流速，结果流动相为乙腈-水(1-10∶99-90)或甲醇-水(2-12∶98-88)，流速为每1分钟0.1ml至1ml，盐酸水苏碱均能分离；以流动相为乙腈-水(2-8∶98-92)或甲醇-水(4-8∶96-92)，流速为每1分钟0.2ml至0.8ml，效果更优。
线性关系考察：得回归方程为：LnA＝1.58LnC+13.84，r＝0.9992。表明盐酸水苏碱进样量在0.4004～4.004μg范围内线性关系良好，可用外标两点法对数方程进行测定和计算。精密度试验：重复进样5次，盐酸水苏碱峰面积的相对标准偏差为0.52％，表明精密度较好。稳定性试验：对照品溶液计算相对标准偏差，平均值为899675，RSD为1.69％，表明对照品溶液在71h内稳定性较好；供试品溶液计算相对标准偏差，日内差平均值为260766，RSD为1.18％，日间差平均值为2590279，RSD为1.22％，表明供试品溶液在95h内稳定性较好。重复性试验：计算盐酸水苏碱的含量平均值为0.978％，相对标准偏差RSD为1.56％，表明方法重复性较好。加样回收率试验：平均回收率为103.67％，RSD为1.68％。
实施例2：益母草颗粒含量测定
仪器：日本岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪，威玛龙色谱工作站；美国奥泰ELSD2000ES蒸发光散射检测器；梅特勒-托利多AB265-S电子天平。
试药：盐酸水苏碱化学对照品(含量测定用，批号：110716-200306，中国药品生物制品检定所)，纯度经检查符合含量测定用化学对照品的技术要求，含量为99.07％；甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，水(自制双蒸水)，氨水(分析纯)，732型强酸性阳离子交换树脂(国药集团化学试剂有限公司)。
样品：益母草颗粒(批号：1508001)及缺益母草药材的阴性对照样品，广西灵峰药业有限公司。
对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品10.01mg，置10ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀(1.001mg/ml)；精密量取0.5ml、1.5ml分别置10ml量瓶，加流动相至刻度，摇匀，即得(50.05μg/ml、150.15μg/ml)。
供试品溶液的制备取益母草颗粒，混匀，研细，取约0.7g，精密称定，置100ml烧杯中，加热水15ml使溶解，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱(内径1.5cm，柱高5cm)，用水200ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30)100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
阴性样品溶液的制备阴性样品溶液是按处方比例称取除益母草外其余辅料，按制法制成益母草阴性样品，再取此阴性样品按上述“供试品溶液的制备”方法制备不含益母草的阴性样品溶液。
试验条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱Agilent ZORBAX SB-Aq5μm 4.6×250mm色谱柱；流动相：乙腈-水(5∶95)，流速：0.3ml/min；漂移管温度：75℃，空气流速：2.2L/min；柱温：室温。
分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液及不含益母草的阴性样品溶液各20μl，注入液相色谱仪。此条件下盐酸水苏碱与其它组分达到基线分离，分离度R＞1.5，理论塔板数按盐酸水苏碱计算大于10000，盐酸水苏碱保留时间约为10分钟，见表2。阴性样品溶液在色谱在相应位置无吸收峰，可见阴性无干扰。
表2理论塔板数、分离度、保留时间数据
考察了甲醇-水和乙腈-水等不同的流动相比例及不同的流动相流速，结果流动相为乙腈-水(1-10∶99-90)或甲醇-水(2-12∶98-88)，流速为每1分钟0.1ml至1ml，盐酸水苏碱均能分离；以流动相为乙腈-水(2-8∶98-92)或甲醇-水(4-8∶96-92)，流速为每1分钟0.2ml至0.8ml，效果更优。
对照品纯度检查：含量为99.07％，符合含量测定要求，计算时按100％计算。线性关系考察：回归方程为：LnA＝1.58LnC+13.84，r＝0.9992。表明盐酸水苏碱进样量在0.4004～4.004μg范围内线性关系良好。精密度试验：平均值为3245634，RSD为0.52％，表明精密度较好。稳定性试验：表明供试品溶液在72h内稳定性较好。重复性试验：平均值为19.58mg/袋，RSD为0.97％，表明方法重复性较好。加样回收率试验：平均回收率为99.82％，RSD为1.00％，表明方法回收率较好。
实施例3：益母草制剂含量测定
按技术方案中益母草制剂的含量测定项下依法测定各制剂样品，以外标两点法对数方程计算样品中盐酸水苏碱的含量，结果见表3。
表3样品测定结果
说明本发明的方法适合于各种益母草制剂的含量测定。
具体实施例如下：
实施例1益母草药材含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(4∶96)为流动相；流速为每分钟0.4ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：80℃，空气流速：2.4L/min)。
对照品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，加流动相制成每1ml分别含0.05mg、0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草粉末0.2g，置具塞锥形瓶中，加入乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流0.5小时，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至10ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
实施例2益母草颗粒含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(6∶94)为流动相；流速为每分钟0.5ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：90℃，空气流速：2.8L/min)。
对照品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml分别含0.05mg、0.15mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草颗粒，研匀，取0.8g，精密称定，置100ml烧杯中，加热水20ml使溶解，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水200ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30)200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
实施例3益母草片含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(8∶92)为流动相；流速为每分钟0.1ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：70℃，空气流速：1.8L/min。
对照品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml分别含0.1mg、0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草片，除去包衣，研细，混匀，取0.2g，精密称定，置100ml烧杯中，加热水10ml使溶解，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30)50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
实施例4益母草胶囊含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(2∶98)为流动相；流速为每分钟0.2ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：95℃，空气流速：1.9L/min)。
对照品溶液的制备取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml分别含0.03mg、0.15mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草胶囊内容物，研细，混匀，取0.2g，精密称定，置100ml烧杯中，加热水10ml使溶解，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30)80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
实施例5益母草流浸膏含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(7∶93)为流动相；流速为每分钟0.2ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：90℃，空气流速：2.8L/min)。
对照品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml分别含0.08mg、0.16mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草流浸膏，混匀，取5g，精密称定，置100ml烧杯中，加热水50ml使溶解，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱(内径2cm，柱高10cm)，用水400ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30)400ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
实施例6益母草膏含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(10∶90)为流动相；流速为每分钟0.2ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：110℃，空气流速：3.0L/min)。
对照品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml分别含0.03mg、0.18mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草膏，混匀，取1.5g，精密称定，置100ml烧杯中，加热水30ml使溶解，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱(内径1.5cm，柱高6cm)，用水150ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30)100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
实施例7益母草滴丸含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(4∶96)为流动相；流速为每分钟0.8ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：110℃，空气流速：2.9L/min)。
对照品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml分别含0.04mg、0.08mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草滴丸内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置100ml烧杯中，加热水20ml使溶解，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30)150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
实施例8益母草口服液含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(6∶94)为流动相；流速为每分钟0.3ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：95℃，空气流速：2.6L/min)。
对照品溶液的制备取105℃干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml分别含0.7mg、0.14mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草口服液，混匀，精密量取2ml，置100ml烧杯中，加热水15ml稀释，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水50ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30)50～200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
实施例9益母草注射液含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(3∶97)为流动相；流速为每分钟0.8ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：120℃，空气流速：3L/min)。
对照品溶液的制备取105℃干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml分别含0.05mg、0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草注射液，混匀，精密量取0.5ml，置100ml烧杯中，加水10ml稀释，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水50ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30)50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
实施例10益母草药材含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(1∶99)为流动相；流速为每分钟1ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：130℃，空气流速：3.2L/min)。
对照品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，加流动相制成每1ml分别含0.05mg、0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取益母草粉末1g，置具塞锥形瓶中，加入乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至10ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
Claims (1)
1.一种益母草及含益母草制剂的含量测定方法，其特征在于，含量测定的步骤包括如下：益母草的含量测定方法：
色谱条件与系统适用性试验：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以2-12∶98-88的甲醇-水为流动相；流速为每分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测，漂移管温度：60-130℃，空气流速：1.5-3.2L/min；
对照品溶液的制备 取干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，加流动相制成每1ml分别含0.05mg、0.15mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取益母草粉末0.2-1g，置具塞锥形瓶中，加入乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流0.5-3小时，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至10ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得；
测定法 分别吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；
益母草制剂的含量测定方法：
色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以2-12∶98-88的甲醇-水为流动相；流速为每分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测，漂移管温度：60-130℃，空气流速：1.5-3.2L/min；
对照品溶液的制备 取干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml分别含0.05mg、0.15mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取益母草制剂内容物，研细，混匀，精密称取或量取适量，置100ml烧杯中，加热水10-50ml使溶解，用稀盐酸调pH值至1～3，通过已处理好内径1～2cm，柱高5～10cm的强酸性阳离子交换树脂柱，用水50～400ml洗脱，弃去水液，再用70∶30的甲醇-氨水50～400ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；
测定法 分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: LINGFENG PHARMACEUTICAL CO., LTD., GUANGXI Free format text: FORMER OWNER: GUANGDONG HUIKE PHARMACEUTICAL RESEARCH COMPANY LIMITED Effective date: 20130930 |
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| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Huang Yuan Inventor after: Rong Yanli Inventor after: Chen Xiaojun Inventor after: Mo Shaohong Inventor after: Liao Zhanwei Inventor before: Huang Yuan Inventor before: Liang Yuezhao Inventor before: Chen Xiaojun Inventor before: Mo Shaohong |
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| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: HUANG YUAN LIANG YUEZHAO CHEN XIAOJUN MO SHAOHONG TO: HUANG YUAN RONG YANLI CHEN XIAOJUN MO SHAOHONG LIAO ZHANWEI Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 530003 NANNING, GUANGXI ZHUANG AUTONOMOUS REGION TO: 542899 HEZHOU, GUANGXI ZHUANG AUTONOMOUS REGION |
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| CP03 | Change of name, title or address | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200108 Address after: 535416, Lingshan Qinzhou land Industrial Park, the Guangxi Zhuang Autonomous Region Patentee after: GUANGXI GEHONGTANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: No. 68, Anshan West Road, Babu District, Hezhou City, Guangxi Zhuang Autonomous Region Patentee before: Jinji Pharmaceutical Co.,Ltd. |