CN100480698C - 一种降压药物的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种降压药物的检测方法，涉及中西药复方制剂中盐酸甲基丙炔苄胺的检测方法。用高效液相色谱方法测定盐酸甲基丙炔苄胺的含量，色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾(10%磷酸调pH＝3)15∶85为流动相；检测波长为217nm；柱温40℃。理论塔板数按盐酸甲基丙炔苄胺峰计算，应不低于5000；不仅化学原料可以使用本方法，在复杂的中药复方制剂中，本方法也能对含量微少的本成分达到快速、准确地检测其含量。

Description

一种降压药物的检测方法

技术领域

本发明涉及药物质量检测的技术领域，具体涉及一种降压药物制剂中盐酸甲基丙炔苄胺的检测方法。

背景技术

目前中药复方制剂中加入西药以加强药品的疗效有很多种，化学纯品的检测方法大多采用滴定法，不能适用于成分复杂的中成药制剂中的微量化学物质的含量测定。治疗高血压药物(盐酸帕吉林)是一种疗效确切的用于中西药复方制剂的化学药品。化学名称：盐酸甲基丙炔苄胺(商品名称：盐酸帕吉林)分子式：C₁₁H₁₃N·HCl；分子量：95.69英文名：PargylineHydrochloride.现行的含量测定标准：

《国家药品标准》(第十一册)化学药品地方标准上升国家标准P₁₈₇

含量测定：取本品约0.3g，精密称定，加水10ml，使溶解，加糊精溶液(1→50)5ml，加溴酚蓝指示液2滴，滴加醋酸使溶液由紫色变为黄绿色，现加溴酚蓝指示液6滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定至沉淀呈灰紫色，即得。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于19.57mg的C₁₁H₁₃N·HCl。本品含C₁₁H₁₃N·HCl不得少于99.0％。

存在的问题：1、现行的含量测定方法为滴定法，原理是化学反应，而化学反应本身是一种平衡，在理论上不能达到100％的反应。

2、反应终点的判断为用肉眼观察沉淀的颜色，这是不准确的，因为每个人对颜色的判断存在差异。

3、操作步骤较多，引入的人为误差大，使数据结果误差增大造成结果不可靠。

4、化学纯品尚可使用本方法进行测定，但在成分复杂的中成药复方制剂中检测千分之几含量的本品，用此种方法无法做到。

HPLC Methodes for Pharmacetical Analysis Vol 4，April，2000(药物分析的高效液相色谱方法；2000年4月第四卷)第34页“Pargyline”(“巴杰灵”一种单胺氧化酶制剂)记载：高效液相方法1：帕吉林，分子式：C₁₁H₁₃N分子量：159.23CAS注册号：555—57—7，306—07—0(HCL)默克索引：7172

样品；基体：溶液；样品液的制备：用甲醇制成10μg/ml的溶液，进样20μl；HPLC条件：色谱柱：125×4.9 Spherisorb S5W硅胶柱流动相：10mM过氯酸铵和100mM氢氧化钠1ml/L的甲醇溶液，PH＝6.7流速：2；进样体积：20；检测器：电导检测器；色谱图；保留时间：1.0高效液相方法2：样品；基体：溶液；HPLC条件：色谱柱：250×4.6 ZorbaxRx流动相：分组A：1000ml水中含10ml磷酸，7ml三乙胺。

分组B：含10ml磷酸和7ml三乙胺的水溶液200ml，加乙腈配成1000ml。A:B从100:0到0:100用时30分钟，在0:100保持5分钟。柱温：30；流速：2；检测器：紫外210

上述现有技术检测化学纯品的高效液相色谱方法对成分复杂的中成药制剂中千分之几含量的本品，此种方法无法做到。

发明内容

为了对中西药复方降压药物制剂中的盐酸甲基丙炔苄胺进行准确定量，我们决定选择一种分离效果好，人为误差小，而且检测结果十分精确的检测方法。

本发明针对中西药复方制剂复杂的环境，通过检测条件的筛选，提供一种降压药物的检测方法，其特征在于检测药物中的盐酸甲基丙炔苄胺的含量，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾(10％磷酸调PH＝3)(15：85)为流动相；检测波长为217nm；柱温40℃。理论塔板数按盐酸甲基丙炔苄胺峰计算，应不低于5000。

对照品溶液的制备精密称取盐酸甲基丙炔苄胺对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取细粉约400mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入氢氧化钾试液5ml，摇匀，密塞，浸渍30分钟，精密加入三氯甲烷30ml，称定重量，密塞，超声处理50分钟，放冷，称定重量，用三氯甲烷补足损失量，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含盐酸甲基丙炔苄胺(C₁₁H₁₃N·HCl)应为标示量的85％～115％。

为了更直观地说明问题，我们分别用文献中的高效液相色谱方法2(以下简称方法2)和发明的方法对样品、化学原料和对照品进行了检测，结果见附图1-图6，对各图的分析评价如下：

图1：对照品出峰时间在1～2分钟之间，与系统死时间几乎相同，容易与溶剂峰混淆，色谱法一般避免出现此种情况。并且与后一峰刚刚达到分离要求，如果有其他杂质出现，很难有满意的分离效果。一般的出峰时间控制在10～20分钟，太长的时间会导致柱效过低。

图2：由色谱图可以明显看出，在与对照品相同位置有色谱峰出现，但由于复方成分较为复杂，未能达到基线分离，有2个肩峰出现。此方法不适于该制剂的含量检测。

图3：化学原料药纯度与对照品相当，色谱图与图1基本相同。

图4：对照品出峰时间为11.577分，柱效为10959，无杂质干扰。出峰时间和柱效均达到满意的效果。

图5：复方制剂中盐酸甲基丙炔苄胺色谱图，出峰时间11.285分钟，柱效为11640，无杂质干扰，达到了满意的检测效果。

图6：化学原料药连续进样2次，间隔为5分钟，出峰时间为11.20分，无杂质干扰，面积重复性好。

本发明的中西药复方制剂中盐酸甲基丙炔苄胺的检测方法具有如下优越性：

1、在整个实验过程中，人为操作少，个体差异引起的误差降到最低，数据的观察和处理全部采用电脑软件，结果准确。

2、本方法检测方便、快捷，仅需十几分钟。

3、不仅化学原料可以使用本方法，在复杂的中药复方制剂中，本方法也能对含量微少的本成分达到快速、准确地检测其含量。

附图说明

图1是用方法2检测盐酸甲基丙炔苄胺对照品的色谱图。

图2是用方法2检测复方中的盐酸甲基丙炔苄胺色谱图。

图3是用方法2检测盐酸甲基丙炔苄胺化学原料药色谱图。

图4是用本发明的方法检测盐酸甲基丙炔苄胺对照品的色谱图。

图5是用本发明的方法检测复方中的盐酸甲基丙炔苄胺色谱图。

图6是用本发明的方法检测盐酸甲基丙炔苄胺化学原料药色谱图。

图7是发明的对照品浓度在0.0201mg/ml～0.201mg/ml范围内标准曲线图。

附图6说明：Channel     A     Results

           Name        Time      Area        Area％

        --------      -------   ---------   --------

           1           11.20     1508030     49.574

           2           15.65     1533975     50.426

        Totals：                 3042005     100.000

具体实施方式

实施例1：检测条件的筛选试验：

方法的选择和确立：高效液相色谱法是药物分析中应用最广泛，检测速度快，使用方便，所得数据精确的一种含量检测方法，而且在整个实验过程中，人为误差降到最低，因此我们把目标定位在开发出一种应用高效液相色谱法检测该成分含量的方法。

首先根据分子结构判断理论上的最大吸收波长，然后应用紫外光谱扫描，找到紫外区的最大吸收波长，结果与理论值相符。参考结构类似物和该化合物的理化性质选择适宜的流动相比例及pH值。经过多次实验摸索，找到了检测该成分的最适宜高效液相色谱检测条件。依据2005版药典的方法学验证指导原则，对摸索出的检测方法进行验证。结果如下：

1.样品、仪器与试剂

高效液相色谱仪：SP8800；数据处理：ANASTAR色谱工作软件；紫外FOCUS检测器。

盐酸甲基丙炔苄胺购自SIGMA-ALDRICH公司；化学原料药由天津新新制药厂提供；样品由天津隆顺榕制药厂提供。甲醇、三氯甲烷、磷酸、磷酸二氢钾为分析纯，水为纯净水。

2.色谱及检测条件

色谱柱：YMC公司ODS-A(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾(10％磷酸调PH＝3)(15：85)；检测波长：217nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃。

3.溶液的制备

3.1 对照品溶液的制备

精密称取盐酸甲基丙炔苄胺对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含0.201mg的溶液作为储备液，摇匀；精密称取盐酸甲基丙炔苄胺对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液。

3.2 供试品溶液的制备

取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取细粉约400mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入氢氧化钾试液5ml，摇匀，密塞，浸渍30分钟，精密加入三氯甲烷30ml，称定重量，密塞，超声处理50分钟，放冷，称定重量，用三氯甲烷补足损失量，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

3.3 空白供试品溶液的制备

取缺盐酸帕吉林的模拟样品同法制成空白供试品溶液。

4.标准曲线及线性范围

取对照品储备液，分别精密吸取上述对照品溶液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10μl，以对照品的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，作标准曲线，得回归方程为Y＝17566.2+11220508.69X(r＝0.9995)

对照品浓度在0.0201mg/ml～0.201mg/ml范围内线性关系良好。

标准曲线如图7所示，标准曲线，峰面积，(浓度mg/ml)

5.重复性试验

取同一份供试品溶液，连续重复进样6次，每次进样10μl。

平均峰面积为872717.5，RSD为0.44％，说明本方法精密度良好。

6.稳定性试验

取供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8h进样，进行稳定性试验，测定结果表明，在8小时之内盐酸甲基丙炔苄胺色谱峰面积无明显改变，稳定性良好。

平均峰面积为878944.7       RSD为0.86％

7.重现性试验

精密称取同一批号样品400mg，取6份，测定，盐酸甲基丙炔苄胺的平均含量为1.51mg/片，RSD为0.78％，说明本方法重现性好，方法稳定。

8.回收率试验

精密称取样品200mg，精密加入对照品约1.3mg，按“3.2”项下的方法制成供试品溶液，每次进样量为10μl.平均回收率为100.65％，RSD为1.25％。说明本方法准确度高。

9、结论

由以上的验证数据可以看出：本检测方法线性关系良好，精密度、稳定性、准确度均达到了要求，重现性良好，可以作为该成分的一种新型、高效的检测手段。

实施例2：用于降压药物片剂中盐酸甲基丙炔苄胺含量检测：

其处方是：黄芩 1130g     盐酸甲基丙炔苄胺 10g     槐角1130g

          氢氯噻嗪15g    落花生枝叶 1130g

盐酸甲基丙炔苄胺含量检测方法：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾(10％磷酸调PH＝3)(15：85)为流动相；检测波长为217nm；柱温40℃。理论塔板数按盐酸甲基丙炔苄胺峰计算，应不低于5000。

对照品溶液的制备精密称取盐酸甲基丙炔苄胺对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取细粉约400mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入氢氧化钾试液5ml，摇匀，密塞，浸渍30分钟，精密加入三氯甲烷30ml，称定重量，密塞，超声处理50分钟，放冷，称定重量，用三氯甲烷补足损失量，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含盐酸甲基丙炔苄胺(C₁₁H₁₃N·HCl)应为标示量的85％～115％。

Claims (1)

1、一种降压药物的检测方法，其特征在于检测药物中的盐酸甲基丙炔苄胺的含量的方法：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为：甲醇：0.05mol/L磷酸二氢钾＝15：85，10％磷酸调PH＝3；检测波长为217nm；柱温40℃；理论塔板数按盐酸甲基丙炔苄胺峰计算，应不低于5000；

对照品溶液的制备：精密称取盐酸甲基丙炔苄胺对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取细粉400mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入氢氧化钾试液5ml，摇匀，密塞，浸渍30分钟，精密加入三氯甲烷30ml，称定重量，密塞，超声处理50分钟，放冷，称定重量，用三氯甲烷补足损失量，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含盐酸甲基丙炔苄胺应为标示量的85％～115％。

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