CN101718787A - 食品、药品或保健品中苯二氮卓类化合物掺杂的快速检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种食品、药品或保健品中苯二氮卓类化合物掺杂的快速检测方法，该方法是先对待测样品进行预处理，提取富集违法添加的苯二氮卓类化合物，再结合胶体金免疫层析法，从而实现对食品、药品或保健品中添加苯二氮卓类化合物的快速检测。本发明测定目标覆盖面广，操作简单、检测速度快，检测结果易观察，可实现对大批量样品的快速筛查，从大批量样品中将违法添加苯二氮卓类化合物的样品挑选出来，大大降低了成本，减少了工作量。本发明的预处理方法可有效富集待测物的浓度，使检测结果更加灵敏和准确。本发明适用于食品、药品或保健品中各种常见剂型，可填补行内缺乏系统筛查方法，有效施行食品药品市场监管，保障人民饮食和用药安全。

Description

食品、药品或保健品中苯二氮卓类化合物掺杂的快速检测方法

技术领域

本发明涉及食品、药品或保健品的检测领域，具体涉及食品、药品或保健品中苯二氮卓类化合物掺杂的快速检测方法。

背景技术

随着现代社会竞争的日渐激烈，压力越来越大，许多人患了焦虑症和抑郁症，从而诱发睡眠障碍症和失眠。患者需要依靠药物来缓解这些症状，常用的药物有地西泮(安定)、阿普唑仑(佳静安定)、艾司唑仑等等，属于二类精神药物，其使用受到严格限制，因此对于长期需服药的患者来说，具有镇静催眠功效的食品、中成药或保健食品可能成为他们的首选。

苯二氮卓类药物(BZ)是目前临床常用的镇静催眠药物，它克服了巴比妥类引起的多种缺点，在国外已为社会化的OTC药物，减轻了许多患者的症状。不法商人正是利用了苯二氮卓类药物的特点，擅自在食品、中成药及保健食品中非法添加苯二氮卓类化合物的方式从而达到快速起效的目的，再利用其长期服用副作用小的卖点，谎称“纯中药制剂”，吹嘘和夸大疗效，使得消费者认为服用后真的“有效”，以为觅得良药，服用者在毫无知情的情况下服用会对健康带来很大的风险，尤其会对这类药物产生躯体上和精神上的依赖，不仅如此，在服用时无意中还充当假劣商品的宣传者。

苯二氮卓类药物大多数属于1，4-苯骈二氮卓类衍生物，在化学结构上具有共同的母核，由于侧链取代基团的不同而产生了一系列的苯二氮卓类药物，其不同的衍生物具有不同的药理特性。临床常用的有地西泮、氯氮卓、硝西泮、氯硝西泮、劳拉西泮、艾司唑仑等20余种。该类药物易溶于丙酮、氯仿，在乙醇、甲醇中溶解，几乎不溶于水。

目前对苯二氮卓类药物非法添加的检测，主要是采用高效液相色谱-质谱/质谱联用技术，这种技术需要昂贵的检测仪器，检测条件也较复杂，还会遇到对操作人员的培训、仪器的维护保养等等的问题，因此非常不利于日常食品药品的监管。

此外，文献记载的还有采用高效液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法、薄层扫描法等对苯二氮卓类药物进行测定，但是这些方法均需对样品进行复杂的前处理过程，同时需要色谱柱、薄层板等各种耗材，检验所需的时间也较长，同样不适用现场监管。

胶体金免疫层析法，是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，利用待检物与金标试剂的特异性结合，从而可通过肉眼观察到显色结果。利用这种方法制备检测试纸条，具有体积小、携带方便、不需要仪器设备、操作简单、可现场检测、3～5min出结果以及结果肉眼可辨等诸多优点，非常适合对大批量样品进行现场初筛。

中国实用新型专利CN2938101Y给出一种快速检测苯二氮卓类药的胶体金试纸，可基于胶体金免疫层析法对苯二氮卓类药进行检测。

然而食品、药品或保健品的组方成分非常复杂，苯二氮卓类化合物的非法掺杂的量未知，且具有镇静催眠功效的食品、药品或保健品大多为固体制剂，无法实现金标试剂与待检物特异性的结合，从而无法充分发挥胶体金免疫层析法的检测优势。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种成本低、操作简单，能有效富集待测成分，检测结果易观察且准确率高的，基于胶体金免疫层析技术对食品、药品或保健品中苯二氮卓类化合物掺杂进行快速检测的方法。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

一种食品、药品或保健品中苯二氮卓类化合物掺杂的快速检测方法，该方法是基于胶体金免疫层析技术，在对食品、药品或保健品先进行预处理，富集待测苯二氮卓类化合物，再结合胶体金免疫层析法，从而实现对苯二氮卓类化合物的快速检测。

因为食品、药品或保健品，通常都是胶囊剂、片剂或丸剂等固体制剂，其组方成分复杂，对检测结果影响很大，因此为提高检测的灵敏度和准确性，本发明结合胶体金免疫层析技术以及待测样品的特点，对预处理方法进行了试验摸索，最后发现一种能覆盖目前的主流的苯二氮卓类化合物的提取方法，可有效富集待测物(苯二氮卓类化合物)浓度的预处理方法，其步骤如下：

采用有机溶剂作为提取试剂，取待测样品适量，加入有机溶剂，振摇后，加水稀释，过滤后收集滤液，收集的滤液用于后续胶体金免疫检测。

上述预处理过程中，有机溶剂可以是氯仿、甲醇或乙醇等本领域技术人员常用有机溶剂。考虑到本发明的快速检测方法要在食品药品安全监督现场进行，为了保障操作者安全及对环境无污染，本发明优选无水乙醇作为提取溶剂。

上述预处理过程中，有机溶剂的使用量以可以浸没待测样品为宜，实际操作时可选择1～2ml的使用量，基本可覆盖不同剂型的不同重量的需要。

上述预处理过程中，为了保证提取完全，振摇时间需不少于10秒，以适应各种剂型的需要。

上述预处理过程中，振摇后加水稀释，此时的加水量需考虑试纸的耐受程度、提取液的过滤以及尽可能减少用量，方便操作和节约成本等条件，因此本发明人对振摇后加水稀释的加水量进行试验研究。

通过试验发现，用于后续加样的滤液中，若有机溶剂的浓度大于50％(有机溶剂占滤液总体积的百分比)，则苯二氮卓类胶体金标记试纸不能正常使用，因而使用前需加入1ml以上的水进行稀释。同时，考虑到提取液在过滤时要消耗一些溶液，因此在实际操作时，振摇后加水稀释至总体积为10ml，既确保试纸的灵敏度，又保证有足够的提取液进行滤过，以备后续的操作，并且用于承载10ml容量的容器，体积小，便于携带、方便大批量样品进行快筛试验。

待测样品经过上述预处理操作后，其所得滤液中待测物质(苯二氮卓类化合物)的纯度和含量都满足胶体金检测试纸的使用要求，此时的溶液采用胶体金免疫层析试纸对其进行检测，则检测结果清晰，灵敏度高，准确度高。

可用于检测苯二氮卓类化合物的胶体金免疫层析试纸已经为市售产品，但该试纸目前只能用于检测液体样品中是否含有苯二氮卓类化合物，而无法对固体、膏体类样品进行检测，本发明通过一步预处理步骤，从而可以将这类试纸用于固体或膏体类样品中苯二氮卓类化合物的检测。

检测方法以及结果判断均为本领域技术人员所公知的常识。

将经过预处理的待测样品的滤液滴加到样品垫上，几分钟后观察显色结果，如果胶体金检测试纸上的控制线(C)和反应线(T)均为紫红色，也就是胶体金检测试纸上出现两条紫红色条带，则判定为阴性，待测样品中未添加苯二氮卓类药物；胶体金检测试纸上的控制线(C)有一条色带，而反应线(T)无色带出现，则判定为阳性，待测样品中添加有苯二氮卓类药物；如果胶体金检测试纸上的控制线(C)和反应线(T)均无色带出现，或只出现反应线(T)一条色带，说明实验无效，应用新的胶体金检测试纸重新测试。

本发明的快速检测方法中，测试试纸可制备成条形或者板形。

本发明人对66批测试样品，分别采用本发明的快速检测方法进行检测，同时采用高效液相色谱法(二极管阵列检测器)验证，对13批阳性样品采用液质联用技术进行确证，结果发现，本发明的快速检测方法其结果正确率为100％，假阳性、假阴性率为0，完全可胜任现场的监督检查。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1.本发明的检测方法的测定目标覆盖面广：本发明检测方法其测定目标覆盖目前主流的苯二氮卓类药物品种，包括艾司唑仑(舒乐安定)、三唑仑(三唑安定)、奥沙西泮(舒宁)、地西泮(安定)、阿普唑仑(佳静安定)、硝西泮(硝基安定)、氯氮卓、氯硝西泮和劳拉西泮等等，而现有法定检测方法仅对苯二氮卓类药物中的艾司唑仑、地西泮和氯硝西泮三种进行测定，不能形成一套完整的系统筛查程序进行全方位覆盖，因而并不符合通用于食品、药品和保健食品中是否含有各种可能被非法添加的苯二氮卓类药物主流品种的监管应用需求；本发明的检测方法可形成一套完整的系统筛查程序进行全方位覆盖，符合监管应用的需要；

2.本发明的检测方法，操作简单、检测速度快，检测结果易观察，可实现对大批量样品的快速筛查，从大批量样品中将阳性样品挑选出来，后续可再对这些阳性样品进行进一步地细致确证，大大降低了成本，减少了工作量，在食品药品监管断案中具有实际意义；

3.本发明针对待测样品成分复杂的问题，对样品预处理方法进行了摸索和优化，最后得到的预处理方法，不但操作简单，成本低，而且可有效去除待测样品中的干扰物，提高了待测物的纯度和浓度，保证了后期检测的高灵敏度和准确度；

4.用量少：本发明的快速检测方法只需1粒(片)或数丸，即可实现样品的检测，尽可能地减少了对样品的破坏；

5.提取简单、快，时间短：本发明的快速检测方法，其整个操作过称可以在5分钟内完成，若制成试剂盒，还可缩短时间，这是现有法定方法无法实现的；

6.结果容易判别：本发明的检测方法中，苯二氮卓类胶体金标记试纸，使用后形成紫红色带，非常易观察；

7.现有检测技术对操作者要求甚高，需要有一定的专业知识，需经较长时间的培训，而本发明的快速检测方法无需专业技术人员，只要进行简单讲解即可明白，进行操作；

8.成本低：本发明的快速检测方法只需用到少量的无水乙醇、水，此方法的费用主要集中在苯二氮卓类胶体金标记试纸，目前试纸的市场零售价格在10～20元之间，随着试纸制备的日益完善，本快筛方法的成本也随之减低；

9.对操作者无伤害，对环境无污染：与现有技术相比，本发明的快速检测方法，所用溶剂少，且无毒无害，试验产生的废弃液可直接倒入下水道，而现有技术需用大量有毒有害溶剂，产生的废液对环境会造成污染，需要专门部门进行回收处理；

10.本发明的快速检测方法可适用于片剂、胶囊剂和丸剂等各种常见剂型，而且本发明还对待测样品进行了预处理的研究，从而使得后续的检测灵敏度更高；

11.本发明的快速检测方法主要是针对食品药品监管工作实际而设计，可填补行内缺乏系统筛查程序，有效施行食品药品市场监管，保障人民饮食用药安全；

12.从市场购买的测试样品中，违法添加的苯二氮卓类化合物的样品占20％，严重危害人民饮食用药安全，有必要采用本发明对食品药品市场进行监督。

附图说明

图1为实施例1的胶体金免疫层析检测结果图；

图2为实施例2的胶体金免疫层析检测结果图；

图3为实施例3的胶体金免疫层析检测结果图；

其中，C为控制线，T为反应线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步地描述，但具体实施例并不对本发明做任何限定。

实施例1怡梦香褪黑素胶囊

本实施例的怡梦香褪黑素胶囊为保健食品，剂型为胶囊剂，首先准备试验器具：

具塞容器(10ml)、一次性滤器、小玻璃瓶、苯二氮卓类胶体金检测试纸。

本实施例的检测方法，其具体步骤如下：

(1)取怡梦香褪黑素胶囊1粒，打开胶囊，将内容物倾如具塞容器中，加无水乙醇1ml，振摇10秒，加水将总体积补足至10ml，将具塞容器中的液体过滤后，收集滤液；

(2)将上述收集的滤液置小玻璃瓶中，将苯二氮卓类胶体金检测试纸插入其中，2分钟后取出试纸，平置，观察反应线和控制线的颜色变化。

观察结果如图1所示，在反应区只出现控制线(C)一条色带，而无反应线(T)色带出现，则判定为阳性，说明本实施例的怡梦香褪黑素胶囊中可能添加苯二氮卓类化合物。

采用高效液相色谱法及液质联用技术对本实施例的怡梦香褪黑素胶囊进行验证检测，结果发现该怡梦香褪黑素胶囊中含有艾司唑仑(舒乐安定)，与本发明的检测方法结果一致。

实施例2七叶神安片

本实施例的七叶神安片为中成药，剂型为片剂，首先准备试验器具：

具塞容器(10ml)、一次性滤器、小玻璃瓶、苯二氮卓类胶体金检测试纸、纸片、研棒。

本实施例的检测方法，其具体步骤如下：

(1)取七叶神安片1片，放在纸片上，用研棒研细，倒入具塞容器中，加无水乙醇1ml，振摇10秒，加水将总体积补足至10ml，将具塞容器中的液体过滤后，收集滤液；

(2)将上述收集的滤液置小玻璃瓶中，将苯二氮卓类胶体金检测试纸插入其中，2分钟后取出试纸，平置，观察反应线和控制线的颜色变化。

观察结果如图2所示，在反应区出现控制线(C)和反应线(T)两条红色条带，判为阴性，说明该七叶神安片中未添加苯二氮卓类化合物。

采用高效液相色谱法对本实施例的七叶神安片进行验证检测，结果发现该七叶神安片中不含有任何一种苯二氮卓类化合物，与本发明的检测方法结果一致。

实施例3三圣宝睡而安(安睡片)

本实施例的三圣宝睡而安(安睡片)为保健食品，剂型为片剂，首先准备试验器具：

具塞容器(10ml)、一次性滤器、小玻璃瓶、苯二氮卓类胶体金检测试纸、纸片、研棒。

本实施例的检测方法，其具体步骤如下：

(1)取三圣宝睡而安1片，放在纸片上，用研棒研细，倒入具塞容器中，加无水乙醇1ml，振摇10秒，加水将总体积补足至10ml，将具塞容器中的液体过滤后，收集滤液；

(2)将上述收集的滤液置小玻璃瓶中，滤液置小玻璃瓶中，将苯二氮卓类胶体金检测试纸插入其中，2分钟后取出试纸，平置，观察反应线和控制线的颜色变化。

观察结果如图4所示，在反应区只出现控制线(C)一条色带，而无反应线(T)色带出现，判为阳性，说明该三圣宝睡而安(安睡片)中可能添加苯二氮卓类化合物。

采用高效液相色谱法及液质联用技术对本实施例的三圣宝睡而安进行验证检测，结果发现该三圣宝睡而安中含有氯氮唑，与本发明的检测方法结果一致。

Claims (7)

1.一种食品、药品或保健品中苯二氮卓类化合物掺杂的快速检测方法，其特征在于该方法是先采用有机溶剂对待测样品进行预处理，再采用胶体金免疫层析技术，对食品、药品或保健品中苯二氮卓类化合物掺杂进行快速检测。

2.根据权利要求1所述快速检测方法，其特征在于所述有机溶剂为氯仿、甲醇或无水乙醇。

3.根据权利要求2所述快速检测方法，其特征在于所述有机溶剂为无水乙醇。

4.根据权利要求1所述快速检测方法，其特征在于所述预处理的过程为：将待测样品中加入有机溶剂，振摇后，加水稀释，过滤后收集滤液，滤液用于后续胶体金免疫检测。

5.根据权利要求4所述快速检测方法，其特征在于所述有机溶剂的加入量为1～2ml。

6.根据权利要求4所述快速检测方法，其特征在于所述振摇时间需不少于10秒。

7.根据权利要求4所述快速检测方法，其特征在于所述加水稀释是加水至总体积为10ml。

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