CN101708233A - 扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝中间体指纹图谱质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝中间体指纹图谱质量检测方法，包括：(1)丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体供试品制备；(2)梯度洗脱流动相；(3)标准指纹图谱的建立：选取10批不同批次的扶正化瘀药物组合物丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体进行高效液相色谱指纹图谱分析，对HPLC指纹图谱中所有峰进行比较，确定了6个共有峰，并按出峰时间先后次序进行编号(图1)；(4)指纹图谱的质量控制：将样品的HPLC指纹图谱与标准指纹图谱进行比较，以6个共有峰计算得到的相似度应不得小于0.8。本发明的检测方法能全面控制扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体的质量，以确保产品的质量稳定。

Description

扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝中间体指纹图谱质量检测方法

技术领域

本发明属药丹参、桃仁及绞股蓝中间体质量检测领域，特别是涉及一种扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝中间体指纹图谱质量检测方法。

背景技术

扶正化瘀药物组合物是由丹参、人工虫草菌粉、桃仁、松花粉、绞股蓝、五味子六味药组成。目前上市有两种剂型：(1)扶正化瘀胶囊：2002年获得中国国家新药证书(国药证字Z20020053)，并批准国家药品标准WS₃-459(Z-79)-2005(Z)；(2)扶正化瘀片：2005年获得国家新药证书(国药证字Z20050564)，并批准国家药品标准YBZ19332005-2009Z。扶正化瘀具有舒肝活血、益精养肝、化瘀解毒、软坚散结、增强机体免疫功能等作用，主治慢性乙型肝炎肝纤维化、早期肝硬化。

考虑到扶正化瘀制剂六味药材的有效成分性质差异较大，因此在生产过程中针对不同药味选用不同的提取方法。其中丹参、桃仁、绞股蓝采用水提工艺，具体如下：以约4g∶1g∶3g比例，取丹参、桃仁、绞股蓝适量，加水煎著提取两次，第一次2h，第二次1.5h，合并提取液，浓缩至相对密度1.1-1.2(50℃-55℃)，即得水提中间体。

近年来，指纹图谱技术已经成为中药复方质量控制与评价的重要手段，查阅国内外发表的文献，到目前为止没有扶正化瘀制剂水提中间体指纹图谱分析的报道。因此本发明将弥补扶正化瘀制剂水提中间体指纹图谱研究的空白。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝中间体指纹图谱质量检测方法，该方法能全面控制扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体的质量，以确保产品的质量稳定。

本发明的一种扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝中间体指纹图谱质量检测方法，包括：

(1)丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体供试品制备

称取丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体1.00克，置10mL容量瓶中，加50％甲醇5～8ml，超声处理20min，加50％甲醇至刻度，摇匀，过0.45um微孔滤膜，取续滤液作为丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体的供试品溶液；

(2)梯度洗脱流动相

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，梯度洗脱条件为：

时间(min)	A相：0.05％磷酸-水(％)	B相：乙腈(％)
			0	95	5
60	60	40
			120	10	90

色谱柱C18柱，流动相A相为0.05％磷酸-水，B相为乙腈；梯度洗脱：A相0-60-120min，95-60-10％、B相5-40-90％，流速0.8-1.2ml/min，检测波长280nm，柱温20-40℃，进样量10-20ul；

(3)标准指纹图谱的建立

选取10批不同批次的扶正化瘀药物组合物丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体，根据上述技术内容进行高效液相色谱指纹图谱分析。对HPLC指纹图谱中所有峰进行比较，确定了6个共有峰，并按出峰时间先后次序进行编号(图1)；

(4)指纹图谱的质量控制

采用中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件(国家药典委员会)，将样品的HPLC指纹图谱与标准指纹图谱(或对照品共有模式指纹图谱)进行比较。以6个共有峰计算得到的相似度应不得小于0.8。

有益效果

1、用色谱的指纹特征，通过指纹图谱得到的量化参数，更有效地控制产品中间体的质量；

2、考察了供试品溶液的稳定性，结果表明，在室温下，24小时之内，扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体供试品溶液保持稳定，精密度和重复性试验，都表明相似度在0.9以上；

3、经过对10批扶正化瘀制剂水提中间体的指纹图谱相似度进行计算，发现水提中间体的相似度在0.8-1.0之间。说明建立的扶正化瘀药物组合物水提中间体指纹图谱质控方法，重复性好，专属性强，操作简便，方法可靠，可以对扶正化瘀水提中间体质量进行科学、有效地评价，并且证实能够运用于实际生产中质量控制，满足企业对产品质量控制的需求。

4、为扶正化瘀制剂进行指纹图谱质量控制提供了条件，同时也保证了扶正化瘀制剂的质量稳定。

附图说明

图1为扶正化瘀制剂水提中间体标准品HPLC指纹图谱；

其中，1号峰：丹参素，2号峰：原儿茶醛，6号峰：丹酚酸B.；

图2为扶正化瘀制剂水提中间体样品HPLC指纹图谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

成品、试剂及仪器的准备：

成品：扶正化瘀水提中间体    来源：上海黄海制药有限责任公司

提取工艺：以约4g∶1g∶3g比例，取丹参、桃仁、绞股蓝适量，加水煎著提取两次，第一次2h，第二次1.5h，合并提取液，浓缩至相对密度1.1-1.2(50℃-55℃)，即得水提中间体。

试剂：甲醇(分析纯)        来源：上海振兴化工一厂；

      磷酸(分析纯)        来源：上海联合化工厂；

      乙腈(色谱纯)        来源：Tedia company Inc；

      水为纯净水。

      标准品：丹参素      来源：中国药品生物制品检定所；

      丹酚酸B             来源：中国药品生物制品检定所；

      原儿茶醛            来源：Sigma

1.2仪器

仪器名称	型号	生产单位
			电子天平	AL104型	METTLER TOLEDO
高效液相色谱仪	HP1100	Agilent
			色谱柱恒温箱	HT-130型	天津市恒奥科技发展有限公司
水系微孔滤膜	0.45um	国产
			超声波清洗器	KQ-50E	昆山超声仪器有限公司

称取丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体1.00克，置10mL容量瓶中，加50％甲醇5～8ml，超声处理20min，加50％甲醇至刻度，摇匀，过0.45um微孔滤膜，取续滤液作为扶正化瘀水提中间体的供试品溶液；

色谱条件：

柱温：30℃，检测波长：280nm，进样量：10μl，色谱柱：Alltima(250mm×4.6mm，5μm)。洗脱条件见表1，

表1洗脱条件

时间(min)	A相：0.05％磷酸-水(％)	B相：乙腈(％)
			0	95	5
60	60	40
			120	10	90

在指纹图谱测定条件确定后，通过对至少三批样品进行测定，计算相关参数，并在此基础上提出高效液相色谱系统的适用参数条件。即丹酚酸B对照品溶液(100μg/ml)的色谱峰面积重现性(RSD)不高于3％，保留时间重现性(RSD)不高于2％；色谱柱柱效以丹酚酸B计不少于15,000块理论塔板数。

扶正化瘀植物水提中间体样品指纹图谱图见图2。

对10个批次的扶正化瘀水提中间体样品进行指纹图谱分析，采用中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件(2004A版，中国药典委员会)对指纹图谱的相似度进行计算。采用共有峰模式，设定时间窗宽度为0.1min，以平均数法生成对照指纹图谱，将样品的HPLC指纹图谱与标准指纹图谱进行比较，结果表明，10批扶正化瘀水提中间体样品的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度均在0.8-1.0之间。说明建立的扶正化瘀水提中间体指纹图谱质控方法，操作简便，方法可靠，证实能够运用于实际生产中质量控制，满足企业对产品质量控制的需求

Claims (1)

1.一种扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝中间体指纹图谱质量检测方法，包括：

(1)丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体供试品制备

称取丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体1.00克，置10mL容量瓶中，加50％甲醇5～8ml，超声处理20min，加50％甲醇至刻度，摇匀，过0.45um微孔滤膜，取续滤液作为丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体的供试品溶液；

(2)梯度洗脱流动相

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，梯度洗脱条件为：流动相A相为0.05％磷酸-水，B相为乙腈；梯度洗脱：A相0-60-120min，95-60-10％、B相5-40-90％，流速0.8-1.2ml/min，检测波长280nm，柱温20-40℃，进样量10-20ul；

(3)标准指纹图谱的建立

选取10批不同批次的扶正化瘀药物组合物丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体进行高效液相色谱指纹图谱分析，对HPLC指纹图谱中所有峰进行比较，确定了6个共有峰，并按出峰时间先后次序进行编号；

(4)指纹图谱的质量控制

将样品的HPLC指纹图谱与标准指纹图谱进行比较，以6个共有峰计算得到的相似度应不得小于0.8。

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