CN114894922A - 一种绞股蓝水提物的检测及其质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种绞股蓝水提物的检测及其质量控制方法，其中，一种绞股蓝水提物的检测方法，采用高效液相色谱法对待测物进行检测，所述的高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：245nm～265nm或350nm～370nm；以乙腈或甲醇为流动相A，以水或0.08％～0.12％体积浓度的磷酸溶液为流动相B，按照梯度洗脱程序进行洗脱。本发明既能有效实现更多特征峰显示且还能同时实现芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素指标成分含量准确测定，有效适用于绞股蓝水提物的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及中药检测和质量控制领域，具体涉及一种绞股蓝水提物的检测及其质量控制方法。
背景技术
绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino的全草，始载于《救荒本草》，又名七叶胆、福音草、遍地生根、天堂草、五叶参、七叶参、超人参等，含有皂苷、黄酮类、糖类、萜类等多种化学成分具有神经保护、抗缺血再灌注损伤、抗肿瘤、免疫调节、降血糖、调脂等广泛药理活性。绞股蓝资源丰富，容易生长，有着广阔的市场开发前景。
中药配方颗粒，是在传统中医药理论指导下，由单味中药饮片经水提、浓缩、干燥、制粒而成，在中医临床配方后，供患者冲服使用。它继承了传统煎剂的特点，同时克服了煎剂服药量大、不能长时间保存等缺陷；具有服药量小、药效明显、易于携带等特点。但工业化生产的配方颗粒与标汤煎煮存在着较大差异且不同生产单位生产设备和生产工艺不同，导致产品质量不一致，因此形成绞股蓝配方颗粒质量标准尤为重要。
配方颗粒质量标准包括有效成分组成的检测，以及有效成分的含量检测。现有技术中，对于有效成分的组成而言，需要能够检测到更多的指标成分，即需要尽可能多的保留色谱峰数量；而对于有效成分的含量而言，需要更加准确的检测出指标成分的含量。由于成分和含量检测所侧重的方向不同，因此，现有技术中通常是分别采用不同的高效液相色谱条件进行检测。
具体到绞股蓝配方颗粒，现有技术中公开的指标成分包括有芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素等有效成分。现有公开的运用于绞股蓝配方颗粒的高效液相色谱条件，在满足具有更多指标要求进而更好的检测指标成分种类时，其仅仅只能适用于同时实现其中1-2种指标成分含量的准确检测，并无法同时实现芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素等指标成分的含量准确测定，导致绞股蓝配方颗粒的质控相对复杂。
例如：在公开的绞股蓝配方颗粒及其质量标准的研究.曲乐婧.西北大学的文献中，提供了绞股蓝配方颗粒指纹图谱检测方法，该检测方法存在共有峰数目少、检测时间长、未达到基线分离的缺陷，因此，并不适用于同时对芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素指标的含量测定。又如：在上海市公示的绞股蓝配方颗粒的质量标准中，其采用的高效液相色谱法虽然实现了更多特征峰的检测，但是检测得到的特征图谱中商陆苷所对应的特征峰分离效果差，槲皮素所对应的特征峰存在拖尾现象，如图1所示，因而并不适合作为商陆苷和槲皮素的含量测定的指标成分；因此，该公示中的高效液相色谱条件也并不适用于同时对芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素指标成分的含量进行测定。
发明内容
因此，本发明要解决的问题是，现有技术中并没有能够既能有效实现更多特征峰显示且还能同时实现芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素指标成分含量准确测定的高效液相色谱方法；本发明提供了解决上述问题的一种绞股蓝水提物的检测及其质量控制方法。
一种绞股蓝水提物的检测方法，采用高效液相色谱法对待测物进行检测，所述的高效液相色谱法的色谱条件为：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：245nm～265nm或350nm～370nm；以乙腈或甲醇为流动相A，以水或0.08％～0.12％体积浓度的磷酸溶液为流动相B，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：
其中，35≤T1≤50；A11为10％±5％，A12为20％±5％，A13为70％±5％，且A11＜A12＜A13。
当流动相A为甲醇时，所述梯度洗脱程序还包括：
T2比T1至少大4min。
所述高效液相色谱法中色谱柱的柱温为33℃～37℃，流速为0.9ml/min～1.1ml/min。
所述的待测物为绞股蓝水提取物，所述绞股蓝水提取物为绞股蓝水提液、绞股蓝水提浓缩液、绞股蓝水提干燥粉或绞股蓝配方颗粒。
所述的待测物制备成供试品溶液的制备过程为：取待测物0.4g～0.6g，加入70％～100％甲醇10ml～50ml，密塞，称定重量，预处理，冷却后，摇匀，过滤后获得滤液，滤液即为供试品溶液。
所述预处理的方式为超声处理；所述超声处理的时间为20～60min。
一种绞股蓝配方颗粒的质量控制方法，采用上述的一种绞股蓝水提物的检测方法获取绞股蓝配方颗粒的特征图谱，所述特征图谱中至少包括含有芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素所对应的特征峰。
所述特征图谱中至少包括编号为1-12的特征峰，以芦丁所在的特征峰为参照峰S，各个特征峰与参照峰S的相对保留时间在规定值±10％以内，相对保留时间的规定值为：峰1：0.317、峰2：0.392、峰3：0.494、峰4：0.583、峰5：0.673、峰6：0.718、峰7：1.000、峰8：1.280、峰9：1.352、峰10：1.420、峰11：1.717、峰12：1.916；
其中，峰7为芦丁所在特征峰，峰9为商陆苷所在特征峰，峰10为槲皮素所在特征峰，峰12为商陆素所在特征峰。
本发明的质量控制方法还包括采用近红外光扫描获取绞股蓝配方颗粒的近红外光谱，所述近红外光谱中在1026cm-1-1203cm-1呈阶梯峰形状，且至少在576cm-1、611cm-1、763cm-1、829cm-1、2929cm-1处有特征吸收峰。
所述近红外光扫描的条件为：扫描范围4000-12000cm-1，扫描次数不低于16次，分辨率8cm-1。
本发明技术方案，具有如下优点：
本发明的检测方法可以获得基线分离效果佳、各特征峰之间分离较好的特征图谱，该检测得到的特征图谱不仅仅具有更多的特征峰，有效解决现有检测方法检测得到的指纹图谱中共有峰数目少的问题；并且，还可以利用该检测得到的指纹图谱同时获取十分准确的芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素的含量检测结果。具体的，本发明仅仅只需对待测物进行一次高效液相色谱检测，即可同时获得具有更多色谱峰的特征图谱以及芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素等有效成分的准确含量，极大地方便了绞股蓝水提物的质量控制。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明背景技术部分绞股蓝配方颗粒的质量标准中的特征图谱。
图2是本发明实施例1中供试品溶液的特征图谱。
图3是图1中芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素所对应的特征峰的放大示意图。
图4是本发明实施例2中不同柱温下供试品溶液的特征图谱。
图5是本发明实施例2中不同流速下供试品溶液的特征图谱。
图6是本发明实施例2中不同流动相种类下供试品溶液的特征图谱。
图7是本发明实施例2中表16所示梯度洗脱程序下供试品溶液的特征图谱。
图8是本发明实施例2中表17所示梯度洗脱程序下供试品溶液的特征图谱。
图9是本发明实施例2中表18所示梯度洗脱程序下供试品溶液的特征图谱。
图10是本发明实施例2中表19所示梯度洗脱程序下供试品溶液的特征图谱。
图11是本发明实施例2中不同波长下供试品溶液的特征图谱。
图12是本发明实施例2中芦丁的光谱图。
图13是本发明实施例2中商陆苷的光谱图。
图14是本发明实施例2中槲皮素的光谱图。
图15是本发明实施例2中商陆素的光谱图。
图16是本发明实施例3中不同提取溶剂下供试品溶液的特征图谱。
图17是本发明实施例3中不同浓度的供试品溶液的特征图谱。
图18是本发明实施例3中绞股蓝配方颗粒的近红外原始吸收光谱图。
具体实施方式
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
仪器：Waters Accquity Arc高效液相色谱仪；UV紫外检测器；Waters AccquityArc高效液相色谱仪；PDA紫外检测器；ML204T电子天平(梅特勒·托利多)，JJ500电子天平(常熟市双杰)，KQ-300DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
试药：芦丁对照品(批号：100080-202012，中国食品药品检定研究院)，
商陆苷对照品(批号：AF21030707，成都埃法生物科技有限公司)，
槲皮素对照品(批号：100081-201610，中国食品药品检定研究院)，
商陆素对照品(批号：AF21030708，成都埃法生物科技有限公司)，
绞股蓝配方颗粒：取批号为21040208的绞股蓝饮片经过配方颗粒的制备工艺制备得到的绞股蓝配方颗粒。
实施例1
一种绞股蓝水提物的检测方法，采用高效液相色谱法对待测物进行检测，所述的高效液相色谱法的色谱条件为：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，具体采用Welch UltimateLP-C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表1中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为35℃；检测波长为256nm；理论板数按芦丁峰计算应不低于10000。
表1
参照物溶液的制备：取芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含10μg、10μg、10μg、20μg的对照品参照物溶液。
供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25ml，称定重量，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。本实施例中的本品为绞股蓝配方颗粒。
测定法：分别精密吸取80％甲醇作为阴性溶液、对照品参照物溶液以及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本实施例中检测得到的特征图谱如图2所示，该图2中，由下至上依次为阴性溶液、芦丁对照品参照物溶液、商陆苷对照品参照物溶液、槲皮素对照品参照物溶液、商陆素对照品参照物溶液、供试品溶液。该图2中供试品溶液所对应的特征图谱中，芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素所对应的特征峰的放大示意图如图3所示。
通过图2可知，供试品溶液呈现12个特征峰，其中峰7、峰9、峰10、峰12分别与芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素对照品参照物色谱峰保留时间相对应。与芦丁为S峰，计算1～10与S峰的相对保留时间，其相对时间应在规定值的±10％范围之内；规定值为：0.317(峰1)、0.392(峰2)、0.494(峰3)、0.583(峰4)、0.673(峰5)、0.718(峰6)、1.000[峰7(S)]、1.280(峰8)、1.352(峰9)、1.420(峰10)1.717(峰11)、1.916(峰12)。
通过图2和图3可知，本发明的检测方法不仅仅可以有效获得具有更多的特征峰的特征图谱，并且，该特征图谱的基线平稳，其中芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素所对应的特征峰与相邻特征峰之间的分离效果好，峰形好，不存在明显拖尾现象，能够有效适用于芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素等有效成分的含量检测，含量检测结果准确。
为了进一步证明本发明方法能有效达到检测结果准确的目的，对检测的线性、准确度和精密度进行了验证，验证过程如下：
(1)线性验证
取芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成浓度分别为0.1000mg/ml、0.1030mg/ml、0.03306mg/ml、0.04277mg/ml的混合对照品溶液作为母液(线性5溶液)；分别精密吸取0.5ml、1ml、2ml、5ml的母液，加80％甲醇定容至10ml容量瓶中，摇匀，作为线性1～4溶液。精密吸取上述线性1～5溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定各成分色谱峰峰面积，以各成分色谱峰的峰面积为纵坐标，各成分的浓度为横坐标，绘制标准曲线，求得各成分回归方程的结果如下表2和表3所示。
表2
表3
(2)准确度验证
取绞股蓝配方颗粒约0.25g，精密称定9份，分为3组，每组分别按50％(芦丁、商陆苷、槲皮素、商路素对照品的浓度分别为：0.00515mg/ml、0.00440mg/ml、0.00232mg/ml、0.0129mg/ml)、100％(芦丁、商陆苷、槲皮素、商路素对照品的浓度分别为：0.0103mg/ml、0.00880mg/ml、0.00464mg/ml、0.0257mg/ml)和150％(芦丁、商陆苷、槲皮素、商路素对照品的浓度分别为：0.0155mg/ml、0.0132mg/ml、0.00696mg/ml、0.0386mg/ml)三个水平精密加入25ml芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素混合对照品溶液按照上述色谱条件测定峰面积，计算平均加样回收率和RSD值，计算结果如下表4所示：
表4
由上述检测结果可知，待测成分的加样回收率范围在规定的85％～115％之间，因此，各成分回收率结果均符合方法学验证回收率要求，表明利用该方法测得的结果准确。
(3)精密度验证
3.1重复性
取绞股蓝配方颗粒6份，按上述高效液相色谱方法测定，获得其特征图谱，以7号峰为参照峰S，计算1～12号特征峰的相对保留时间，并计算RSD，结果如表5所示。同时根据检测得到的特征图谱中4种指标性成分的峰面积采用上述线性公式计算出4种指标性成分的含量，计算结果如下表6所示：
表5
表6
由以上结果可知，各特征峰的相对保留时间RSD在0.00％～0.07％范围内，各成分重复性结果RSD均小于2％，符合方法学要求。
3.2中间精密度
取绞股蓝配方颗粒6份，不同分析人员不同时间不同仪器进行中间精密度试验，按上述高效液相色谱方法测定，获得其特征图谱，以7号峰为参照峰S，计算1～12号特征峰的相对保留时间，并计算RSD，结果如表7所示，同时根据检测得到的特征图谱中4种指标性成分的峰面积采用上述线性公式计算出4种指标性成分的含量，计算结果如下表8所示：
表7
表8
由以上结果可知，各特征峰的相对保留时间RSD6在0.00％～0.05％范围内，与重复性的RSD12在0.00％～1.95％范围内，表明该分析方法实验结果比较稳定。且各成分含量的中间精密度结果RSD、重复性与中间精密度的RSD均小于2％，符合方法学要求。
(4)稳定性验证
取绞股蓝配方颗粒，按上述方法制备供试品溶液，分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h按上述高效液相色谱方法进行测定，获得其特征图谱，以7号峰为参照峰S，计算1～12号特征峰的相对保留时间，并计算RSD，结果如表9所示。同时根据检测得到的特征图谱中4种指标性成分的峰面积采用上述线性公式计算出4种指标性成分的含量，计算结果如下表10所示。
表9
表10
由以上数据可知，24小时内各成分的相对保留时间和含量的RSD值均小于2％，符合分析要求。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，具体如下：
1、柱温
取绞股蓝配方颗粒，按实施例1中供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别于不同柱温(33℃、35℃、37℃)按实施例1中规定的其他色谱条件进行测定，获得不同温度下的特征图谱，如图4所示；并以7号峰为参照峰S，计算1～12号特征峰的相对保留时间，并计算RSD结果，如表11所示。同时，根据检测得到的特征图谱中4种指标性成分的峰面积采用上述线性公式计算出4种指标性成分的含量，计算结果如下表12所示。
表11
表12
由上述结果可知：33-37℃的不同柱温下，特征峰的相对保留时间RSD在0.0％～1.44％范围内，获得芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆苷峰的理论板数、拖尾因子、分离度均符合系统适用性要求，测得各成分的含量RSD值均小于2％，表明本发明方法对柱温耐用性较好。
2、流速
取绞股蓝配方颗粒，按实施例1中供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别于不同流速(0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min)按实施例1中规定的其他色谱条件进行测定，获得不同流速下的特征图谱，如图5所示；并以7号峰为参照峰S，计算1～12号特征峰的相对保留时间，并计算RSD结果，如表13所示。同时，根据检测得到的特征图谱中4种指标性成分的峰面积采用上述线性公式计算出4种指标性成分的含量，计算结果如下表14所示。
表13
表14
由上述结果可知：不同流速下(0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min)，特征峰的相对保留时间RSD在0.00％～4.66％范围内，且获得芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆苷峰的理论板数、拖尾因子、分离度均符合系统适用性要求，测得各成分的含量RSD值均小于2％，表明该方法对柱温耐用性较好。
3、流动相种类
取绞股蓝配方颗粒，按实施例1中供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别采用不同的流动相种类(乙腈-0.1％磷酸水、乙腈-水、甲醇-0.1％磷酸水、甲醇-水)按下表15所示的梯度洗脱程序(A相为有机相，B相为水相)按下表进行梯度洗脱(当流动相为甲醇时，对于槲皮素、商路素成分来说40分钟内不能出峰，因此在实施例1规定的色谱条件中增加一段回归初始梯度的洗脱程序)，获得不同流动相种类下的特征图谱，如图6所示。
表15
从色谱对比图看，虽然出峰时间有所不同，但是在不同流动相中，4种重指标性成分均能达到良好的分离，其对应的特征峰分离度好、不拖尾，能够有效用于含量测定；但在特征图谱方面，由色谱图可知，当流动相为甲醇时，对20min之前色谱峰分离较差，不能与流动相为乙腈获得的色谱图保持一致。因此，在进行芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆苷峰4种重指标性成分含量测定时，A相为乙腈或甲醇均可；但要进行质量控制时，流动相选择为乙腈-水或乙腈-0.1％磷酸溶液。
4、流动相梯度
取绞股蓝配方颗粒，按实施例1中供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别采用下表16-19所示的梯度洗脱程序以及实施例1中规定的其他色谱条件进行测定，获得不同流动相梯度下的特征图谱，如图7-10所示。
表16
表17
表18
表19
从图7-10所示的色谱图看，供试品色谱图中峰形和分离效果均良好，可作为绞股蓝颗粒特征图谱的梯度洗脱方法，其中，芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆苷峰4种重指标性成分均能达到良好的分离，其对应的特征峰分离度好、不拖尾，能够有效用于含量测定。
5、波长
取绞股蓝配方颗粒，按实施例1中供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别采用不同的波长(235～275nm)以及实施例1中规定的其他色谱条件进行测定，获得不同波长下的特征图谱，如图11所示。
从色谱对比图看，在245nm～265nm下12个特征峰均出现，在235nm和275nm波长下峰1、峰3消失，因此特征图谱检测波选择245nm～265nm，优选256nm。
分别获取指标性成分芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素的光谱图，如图12-15所示，该4种成分均在256nm左右、360nm左右有最大吸收，由此推断，可将245nm～265nm、350nm～370nm作为绞股蓝配方颗粒含量测定的检测波长。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于，供试品溶液的制备参数不同，具体如下：
1、供试品溶液的提取溶剂
平行称取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入适当溶剂(甲醇、95％乙醇、水、90％甲醇、80％甲醇、70％甲醇、50％甲醇、30％甲醇)25ml，密塞，超声处理(功率500W，频率40kHz)30分钟，取出摇匀，滤过取续滤液作为供试品溶液。精密吸取各供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按实施例1中规定的色谱条件进行测定，获得不同溶剂提取下的特征图谱，如图16所示；图16中由下往上提取溶剂分别是：水、乙醇、甲醇、30％甲醇、50％甲醇、70％甲醇、80％甲醇、90％甲醇。并根据检测得到的特征图谱中4种指标性成分的峰面积采用上述线性公式计算出4种指标性成分的含量，计算结果如下表20所示。
表20
由上述结果可知，对于特征图谱而言，当提取溶剂为水时，峰11丢失，峰10(槲皮素)、峰12(商陆素)峰面积较提取溶剂为80％甲醇时减小；当提取溶剂为乙醇时，峰2分离较差，峰形较差；当提取溶剂为30％甲醇时，峰10(槲皮素)、峰11、峰12(商陆素)峰丢失；当提取溶剂为50％甲醇时，峰10(槲皮素)、峰11、峰12(商陆素)峰面积较提取溶剂为80％甲醇时减小。对于含量测定而言，不同提取溶剂和方法对各成分提取的能力不同，大比例的甲醇溶液作提取溶剂时，各成分含量普遍偏高，其中采用70％～100％甲醇为提取溶剂时，各含量RSD分别为：2.29％、1.85％、1.59％、1.88％，差异不大，因此可其中采用70％～100％甲醇为提取溶剂，优选80％甲醇。
2、供试品溶液的超声时间
平行称取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入80％甲醇25ml，密塞，超声处理(功率500W，频率40kHz)一定时间(20、40、60分钟)，取出摇匀，滤过取续滤液作为供试品溶液。精密吸取各供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按实施例1中规定的色谱条件进行测定，获得不同超声时间下的特征图谱，获取特征图谱的相对峰面积；为了避免供试品量对峰面积的影响，将各峰面积与供试品浓度做比值进行校正，如表21所示。并根据检测得到的特征图谱中4种指标性成分的峰面积采用上述线性公式计算出4种指标性成分的含量，计算结果如下表22所示。
表21
表22
根据以上结果，不同超声时间下供试品中各峰面积与供试品浓度的比值的RSD均小于2％，认为超声时间对绞股蓝配方颗粒特征图谱供试品制备方法无显著差别，因此20～60分钟均可，当提取之间为60分钟时，提取最为充分，因此优选60分钟。
3、供试品溶液的浓度
平行称取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入80％甲醇10ml、25ml、50ml，密塞，超声处理(功率500W，频率40kHz)60分钟，取出摇匀，滤过取续滤液作为供试品溶液。精密吸取各供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按实施例1中规定的色谱条件进行测定，获得不同浓度下供试品溶液的特征图谱，如图17所示，并获取特征图谱的相对峰面积，为了避免供试品量对峰面积的影响，将各峰面积与供试品浓度做比值进行校正，如表23所示。并根据检测得到的特征图谱中4种指标性成分的峰面积采用上述线性公式计算出4种指标性成分的含量，计算结果如下表24所示。
表23
表24
根据以上结果可知，当称取供试品为0.5g，加入溶剂量为10ml、25ml、50ml时，供试品中各峰面积与供试品浓度的比值的RSD均小于5％，根据对比色谱图看，各特征峰均存在，因此可以加入10ml～50ml的溶剂，优选25ml为加入溶剂的量。
实施例4
本实施例是采用实施例1的方法进行绞股蓝配方颗粒的质量控制方法，具体如下：
所述绞股蓝配方颗粒的特征图谱中至少包括含有芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素所对应的特征峰，并且优选的至少包括编号为1-12的特征峰，以芦丁所在的特征峰为参照峰S，各个特征峰与参照峰S的相对保留时间在规定值±10％以内，相对保留时间的规定值为：峰1：0.317、峰2：0.392、峰3：0.494、峰4：0.583、峰5：0.673、峰6：0.718、峰7：1.000、峰8：1.280、峰9：1.352、峰10：1.420、峰11：1.717、峰12：1.916；
其中，峰7为芦丁所在特征峰，峰9为商陆苷所在特征峰，峰10为槲皮素所在特征峰，峰12为商陆素所在特征峰。
本发明对绞股蓝配方颗粒的质量控制除实施例1-3所述的高效液相色谱法以外，还包括对采用近红外光扫描获取绞股蓝配方颗粒的近红外光谱，所述近红外光谱中在1026cm-1-1203cm-1呈阶梯峰形状，且至少在576cm-1、611cm-1、763cm-1、829cm-1、2929cm-1处有特征吸收峰。
具体的，取绞股蓝颗粒样品，共3批，取适量，研成细粉，装入具塞玻璃样品瓶中，置于近红外扫描仪上进行扫描，采集光谱，扫描的条件：扫描范围4000-12000cm-1，扫描次数：16次，分辨率8cm-1，扫描过程中实时扣除背景，每份样品采集3张光谱，得到图18所示的绞股蓝配方颗粒的近红外原始吸收光谱图。
由图可知，1026cm-1有一个最强峰，该吸收峰较宽，在1026cm-1-1203cm-1呈阶梯峰形状，其吸收从高到低为1026cm-1、1079cm-1、1150cm-1、1203cm-1；在576cm-1、611cm-1、763cm-1、829cm-1、2929cm-1处有特征吸收。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种绞股蓝水提物的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法对待测物进行检测，所述的高效液相色谱法的色谱条件为：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：245nm～265nm或350nm～370nm；以乙腈或甲醇为流动相A，以水或0.08％～0.12％体积浓度的磷酸溶液为流动相B，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：
其中，35≤T1≤50；A11为10％±5％，A12为20％±5％，A13为70％±5％，且A11＜A12＜A13。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，当流动相A为甲醇时，所述梯度洗脱程序还包括：
T2比T1至少大4min。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中色谱柱的柱温为33℃～37℃，流速为0.9ml/min～1.1ml/min。
4.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述的待测物为绞股蓝水提取物，所述绞股蓝水提取物为绞股蓝水提液、绞股蓝水提浓缩液、绞股蓝水提干燥粉或绞股蓝配方颗粒。
5.根据权利要求1-4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述的待测物制备成供试品溶液的制备过程为：取待测物，加入70％～100％甲醇，密塞，称定重量，预处理，冷却后摇匀，过滤后获得滤液，滤液即为供试品溶液。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述预处理的方式为超声处理；所述超声处理的时间为20～60min；
所述供试品溶液的制备中，0.4g～0.6g的待测物中加入10ml～50ml的70％～100％甲醇。
7.一种绞股蓝配方颗粒的质量控制方法，其特征在于，采用权利要求1-6任一项所述的一种绞股蓝水提物的检测方法获取绞股蓝配方颗粒的特征图谱，所述特征图谱中至少包括含有芦丁、商陆苷、槲皮素、商陆素所对应的特征峰。
8.根据权利要求7所述的质量控制方法，其特征在于，所述特征图谱中至少包括编号为1-12的特征峰，以芦丁所在的特征峰为参照峰S，各个特征峰与参照峰S的相对保留时间在规定值±10％以内，相对保留时间的规定值为：峰1：0.317、峰2：0.392、峰3：0.494、峰4：0.583、峰5：0.673、峰6：0.718、峰7：1.000、峰8：1.280、峰9：1.352、峰10：1.420、峰11：1.717、峰12：1.916；
其中，峰7为芦丁所在特征峰，峰9为商陆苷所在特征峰，峰10为槲皮素所在特征峰，峰12为商陆素所在特征峰。
9.根据权利要求7或8所述的质量控制方法，其特征在于，还包括采用近红外光扫描获取绞股蓝配方颗粒的近红外光谱，所述近红外光谱中在1026cm-1-1203cm-1呈阶梯峰形状，且至少在576cm-1、611cm-1、763cm-1、829cm-1、2929cm-1处有特征吸收峰。
10.根据权利要求9所述的质量控制方法，其特征在于，所述近红外光扫描的条件为：扫描范围4000-12000cm-1，扫描次数不低于16次，分辨率8cm-1。
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