CN101701237A - 发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域，涉及发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法，它包括斜面种子的制备，培养基的选择，培养及反应条件的优化和产物的提取等工艺步骤。本发明通过野油菜黄单胞菌发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚，具有原料及工艺步骤简单，生产过程中不使用有毒有害的有机溶剂，生产操作安全等优点。采用本发明生产α-葡萄糖基化丁香酚产量高，每升发酵液中含有16.5-37g，α-葡萄糖基化丁香酚，丁香酚的转化率可达91％。α-葡萄糖基化丁香酚可作生发剂，也可作为前药靶向释放丁香酚，发挥抗氧化，杀菌及抗肿瘤等功效。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及利用野油菜黄单胞菌(Xanthomonascampestris)CGMCC NO.1243发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法。
背景技术
丁香酚具有抑菌、抗氧化、抗肿瘤、促进头发生长等多种药理活性。然而其难溶于水、易升华、有刺激性气味等性质，限制了它的应用。因此，研究对其进行结构改造设计成前药，从而改变物理性质，使它能够得到广泛应用。
近年来葡萄糖基化被认为是改造酚类化合物结构，保留其生物活性，提高水中的溶解性，增强药理作用，使酚类化合物具有靶向性的一种重要方法。因此，可以将丁香酚改造为α-葡萄糖基化丁香酚。
目前，国内利用生物技术生产α-葡萄糖基化丁香酚的文献尚未见报道；国外生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法主要是提取α-葡萄糖基转移酶，催化麦芽糖和丁香酚合成α-葡萄糖基化丁香酚。由于α-葡萄糖基转移酶的提取过程繁琐，费用昂贵，所以α-葡萄糖基化丁香酚的生产成本很高。而且该法的反应体系小，产率不高，给实际推广带来了很大的困难。因此，有必要发展一种低成本，高产率，利于大规模生产α-葡萄糖基化丁香酚的制备方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种α-葡萄糖基化丁香酚的制备方法，该制备方法利用野油菜黄单胞(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243，选用合适的培养基在最适培养条件下培养一定时间，加入反应物丁香酚和麦芽糖(或蔗糖)，在最佳反应条件下发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚，发酵液经过大孔吸附树脂的分离纯化后，可得到高纯度的α-葡萄糖基化丁香酚。该方法克服了提取酶催化成本高、操作繁琐、反应体系小、产率低的缺点。而且该方法能够利用蔗糖，具有工艺操作简单、反应条件温和、成本低、产率高、操作安全等优点。
本发明的整体技术构思是：
发酵法生产α-葡萄糖基化丁香酚，该方法由下列工艺步骤组成：
(1)将野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243菌种接种到试管中的斜面培养基制成斜面菌种；
(2)将斜面菌种接入摇瓶中进行发酵
(3)加入反应物丁香酚和麦芽糖(或蔗糖)
(4)α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化
本发明的具体工艺步骤及工艺条件是：
步骤(1)中的斜面培养基由下列重量份组分组成：
麦芽糖(或蔗糖)5-50份、蛋白胨1-15份、酵母粉1-12份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份、琼脂10-20份和水1000份；
制备斜面菌种的工艺条件为：pH值为6.0-9.0，温度为15-40℃，培养时间为12-60小时。
步骤(2)中的发酵液由下列重量份组分组成：
麦芽糖(或蔗糖)5-50份、蛋白胨1-15份、酵母粉1-12份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份和水1000份；
发酵的工艺条件为：pH值为6.0-9.0，培养温度为15-40℃，摇床转速为90-230转/分钟，培养时间为18-72小时。
步骤(3)中的反应条件为：反应温度为10-45℃，摇床转速为90-230转/分钟，pH值为4.0-10.0，反应物丁香酚浓度为60-150mmol/L，麦芽糖(或蔗糖)浓度.为100-500mol/L，反应时间为24-120小时。在此反应条件下，丁香酚的转化率为63-91％，每升发酵液中含α-葡萄糖基化丁香酚16.5-37g。
步骤(4)中的α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化包括以下四个步骤：
a.对发酵完成的发酵液进行预处理：发酵液过滤除去沉淀；
b.将经过a步骤的发酵液在6000转/分钟条件下离心20分钟；
c.把经过b步骤的发酵液通过弱极性大孔吸附树脂柱进行分离纯化，弱极性大孔吸附树脂柱为AB-8柱；
d.把经过c步骤的发酵液真空干燥，即可得到纯度为97％以上的α-葡萄糖基化丁香酚，真空干燥的真空度为0.1Mpa，温度为60℃，干燥后的成品为白色粉末。
本发明所用的野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为野油菜黄单胞菌CGMCC NO.1243。
本发明所取得的技术进步在于：
本发明是利用野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚，降低了生产成本，且生产过程中不使用有毒有害的有机溶剂，工艺步骤简单，提高了生产操作安全性。采用本发明生产的α-葡萄糖基化丁香酚产量高，每升发酵液中含α-葡萄糖基化丁香酚16.5-37g，通过大孔吸附树脂分离纯化，纯度可达到97％以上，具有工业化意义。
实施例：以下结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例1
(1)菌种斜面培养
将野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243菌种接种到试管中的斜面培养基制成斜面菌种；
其中菌种斜面培养基由下列重量份组分组成：
麦芽糖5份、蛋白胨8份、酵母粉1份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份、琼脂10份和水1000份；
制备斜面菌种的工艺条件为：pH值为7.5，温度为35℃，培养时间为12小时。
(2)接种发酵
将斜面菌种接种到50ml的液体培养接种进行发酵；
其中发酵液由下列重量份组分组成：
麦芽糖5份、蛋白胨15份、酵母粉8份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份和水1000份；
发酵的工艺条件为：pH值为8.0，培养温度为15℃，摇床转速为170转/分钟，培养时间为18小时。
(3)生产α-葡萄糖基化丁香酚
加入反应物丁香酚物质量浓度为60mmol/L及麦芽糖物质量浓度为100mmol/L；
其中的反应条件为：反应温度为35℃，摇床转速为90转/分钟，pH值为8.0，反应时间为24小时。在此反应条件下，丁香酚转化为α-糖基化丁香酚的转化率为91.2％，每升发酵液中含α-葡萄糖基化丁香酚17g。
(4)α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化，包括以下四个步骤：
a.对发酵完成的发酵液进行预处理：发酵液过滤除去沉淀；
b.将经过a步骤的发酵液在6000转/分钟条件下离心20分钟；
c.把经过b步骤的发酵液通过弱极性大孔吸附树脂柱进行分离纯化，弱极性大孔吸附树脂柱为AB-8柱；
d.把经过c步骤的发酵液真空干燥，真空干燥的真空度为0.1Mpa，温度为60℃，干燥后的成品为白色粉末，纯度为98.0％。
实施例2
(1)菌种斜面培养
将野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243菌种接种到试管中的斜面培养基制成斜面菌种；
其中菌种斜面培养基由下列重量份组分组成：
麦芽糖30份、蛋白胨15份、酵母粉10份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份、琼脂20份和水1000份；
制备斜面菌种的工艺条件为：pH值为9.0，温度为20℃，培养时间为36小时。
(2)接种发酵
将斜面菌种接种到50ml的液体培养接种进行发酵；
其中发酵液由下列重量份组分组成：
麦芽糖20份、蛋白胨1份、酵母粉12份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份和水1000份；
发酵的工艺条件为：pH值为6.0，培养温度为25℃，摇床转速为90转/分钟，培养时间为36小时。
(3)生产α-葡萄糖基化丁香酚
加入反应物丁香酚物质量浓度为100mmol/L及麦芽糖物质量浓度为400mmol/L；
其中的反应条件为：反应温度为10℃，摇床转速为150转/分钟，pH值为6.0，反应时间为72小时。在此反应条件下，丁香酚转化为α-葡萄糖基化丁香酚的转化率为87.3％，每升发酵液中含α-葡萄糖基化丁香酚28g。
(4)α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化，包括以下四个步骤：
a.对发酵完成的发酵液进行预处理：发酵液过滤除去沉淀；
b.将经过a步骤的发酵液在6000转/分钟条件下离心20分钟；
c.把经过b步骤的发酵液通过弱极性大孔吸附树脂柱进行分离纯化，弱极性大孔吸附树脂柱为AB-8柱；
d.把经过c步骤的发酵液真空干燥，真空干燥的真空度为0.1Mpa，温度为60℃，干燥后的成品为白色粉末，纯度为97.8％。
实施例3
(1)菌种斜面培养
将野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243菌种接种到试管中的斜面培养基制成斜面菌种；
其中菌种斜面培养基由下列重量份组分组成：
麦芽糖50份、蛋白胨10份、酵母粉8份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份、琼脂16份和水1000份；
制备斜面菌种的工艺条件为：pH值为8.0，温度为40℃，培养时间为60小时。
(2)接种发酵
将斜面菌种接种到50ml的液体培养接种进行发酵；
其中发酵液由下列重量份组分组成：
麦芽糖30份、蛋白胨8份、酵母粉3份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份和水1000份；
发酵的工艺条件为：pH值为8.5，培养温度为40℃，摇床转速为150转/分钟，培养时间为72小时。
(3)生产α-葡萄糖基化丁香酚
加入反应物丁香酚物质量浓度为150mmol/L及麦芽糖物质量浓度为500mmol/L；
其中的反应条件为：反应温度为25℃，摇床转速为170转/分钟，pH值为10.0，反应时间为120小时。在此反应条件下，丁香酚转化为α-葡萄糖基化丁香酚的转化率为76.9％，每升发酵液中含α-葡萄糖基化丁香酚37g。
(4)α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化，包括以下四个步骤：
a.对发酵完成的发酵液进行预处理：发酵液过滤除去沉淀；
b.将经过a步骤的发酵液在6000转/分钟条件下离心20分钟；
c.把经过b步骤的发酵液通过弱极性大孔吸附树脂柱进行分离纯化，弱极性大孔吸附树脂柱为AB-8柱；
d.把经过c步骤的发酵液真空干燥，真空干燥的真空度为0.1Mpa，温度为60℃，干燥后的成品为白色粉末，纯度为97.3％。
实施例4
(1)菌种斜面培养
将野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243菌种接种到试管中的斜面培养基制成斜面菌种；
其中菌种斜面培养基由下列重量份组分组成：
蔗糖15份、蛋白胨1份、酵母粉3份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份、琼脂12和水1000份；
制备斜面菌种的工艺条件为：pH值为6.0，温度为15℃，培养时间为24小时。
(2)接种发酵
将斜面菌种接种到50ml的液体培养接种进行发酵；
其中发酵液由下列重量份组分组成：
蔗糖15份、蛋白胨6份、酵母粉1份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份和水1000份；
发酵的工艺条件为：pH值为7.5，培养温度为35℃，摇床转速为190转/分钟，培养时间为60小时。
(3)生产α-葡萄糖基化丁香酚
加入反应物丁香酚物质量浓度为120mmol/L及蔗糖物质量浓度为300mmol/L；
其中的反应条件为：反应温度为30℃，摇床转速为230转/分钟，pH值为9.0，反应时间为96小时。在此反应条件下，丁香酚转化为α-葡萄糖基化丁香酚的转化率为67.8％，每升发酵液中含α-葡萄糖基化丁香酚26g。
(4)α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化，包括以下四个步骤：
a.对发酵完成的发酵液进行预处理：发酵液过滤除去沉淀；
b.将经过a步骤的发酵液在6000转/分钟条件下离心20分钟；
c.把经过b步骤的发酵液通过弱极性大孔吸附树脂柱进行分离纯化，弱极性大孔吸附树脂柱为AB-8柱；
d.把经过c步骤的发酵液真空干燥，真空干燥的真空度为0.1Mpa，温度为60℃，干燥后的成品为白色粉末，纯度为97.6％。
实施例5
(1)菌种斜面培养
将野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243菌种接种到试管中的斜面培养基制成斜面菌种；
其中菌种斜面培养基由下列重量份组分组成：
蔗糖40份、蛋白胨6份、酵母粉12份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份、琼脂15份和水1000份；
制备斜面菌种的工艺条件为：pH值为8.5，温度为25℃，培养时间为48小时。
(2)接种发酵
将斜面菌种接种到50ml的液体培养接种进行发酵；
其中发酵液由下列重量份组分组成：
蔗糖50份、蛋白胨10份、酵母粉6份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份和水1000份；
发酵的工艺条件为：pH值为9.0，培养温度为30℃，摇床转速为230转/分钟，培养时间为24小时。
(3)生产α-葡萄糖基化丁香酚
加入反应物丁香酚物质量浓度为60mmol/L及蔗糖物质量浓度为200mmol/L；
其中的反应条件为：反应温度为15℃，摇床转速为130转/分钟，pH值为4.0，反应时间为48小时。在此反应条件下，丁香酚转化为α-葡萄糖基化丁香酚的转化率为87.6％，每升发酵液中含α-葡萄糖基化丁香酚16.5g。
(4)α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化，包括以下四个步骤：
a.对发酵完成的发酵液进行预处理：在发酵液中加入2倍体积的乙醇，过滤除去黄原胶沉淀，旋蒸出乙醇；
b.将经过a步骤的发酵液在6000转/分钟条件下离心20分钟；
c.把经过b步骤的发酵液通过弱极性大孔吸附树脂柱进行分离纯化，弱极性大孔吸附树脂柱为AB-8柱；
d.把经过c步骤的发酵液真空干燥，真空干燥的真空度为0.1Mpa，温度为60℃，干燥后的成品为白色粉末，纯度为98.7％。
实施例6
(1)菌种斜面培养
将野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243菌种接种到试管中的斜面培养基制成斜面菌种；
其中菌种斜面培养基由下列重量份组分组成：
蔗糖20份、蛋白胨4份、酵母粉5份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份、琼脂18份和水1000份；
制备斜面菌种的工艺条件为：pH值为7.0，温度为28℃，培养时间为36小时。
(2)接种发酵
将斜面菌种接种到50ml的液体培养接种进行发酵；
其中发酵液由下列重量份组分组成：
蔗糖35份、蛋白胨12份、酵母粉10份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份和水1000份；
发酵的工艺条件为：pH值为7.0，培养温度为28℃，摇床转速为130转/分钟，培养时间为48小时。
(3)生产α-葡萄糖基化丁香酚
加入反应物丁香酚物质量浓度为150mmol/L及蔗糖物质量浓度为500mmol/L；
其中的反应条件为：反应温度为45℃，摇床转速为190转/分钟，pH值为7.5，反应时间为108小时。在此反应条件下，丁香酚转化为α-葡萄糖基化丁香酚的转化率为63.4％，每升发酵液中含α-葡萄糖基化丁香酚30.5g。
(4)α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化，包括以下四个步骤：
a.对发酵完成的发酵液进行预处理：发酵液过滤除去沉淀；
b.将经过a步骤的发酵液在6000转/分钟条件下离心20分钟；
c.把经过b步骤的发酵液通过弱极性大孔吸附树脂柱进行分离纯化，弱极性大孔吸附树脂柱为AB-8柱；
d.把经过c步骤的发酵液真空干燥，真空干燥的真空度为0.1Mpa，温度为60℃，干燥后的成品为白色粉末，纯度为97.5％。
Claims (9)
1.发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法，其特征在于：用野油菜黄单胞菌生产α-葡萄糖基化丁香酚，生产过程由下列工艺步骤组成：
(1)将野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243菌种接种到试管中的斜面培养基制成斜面菌种；
(2)将斜面菌种接入摇瓶中进行发酵
(3)加入反应物丁香酚和麦芽糖(或蔗糖)
(4)α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化
2.根据权利要求1所述的发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法，其特征在于：所述的(1)步骤中的斜面培养基由下列重量份组分组成：
麦芽糖(或蔗糖)5-50份、蛋白胨1-15份、酵母粉1-12份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份、琼脂10-20份和水1000份。
3.根据权利要求1或2所述的发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法，其特征在于：制备斜面菌种的工艺条件为：pH值为6.0-9.0，温度为15-40℃，培养时间为12-60小时。
4.根据权利要求1所述的发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法，其特征在于：所述的(2)步骤中的发酵液由下列重量份组分组成：
麦芽糖(或蔗糖)5-50份、蛋白胨1-15份、酵母粉1-12份、磷酸氢二钾2.0份、无水硫酸镁0.5份、碳酸氢钙0.05份和水1000份。
5.根据权利要求1或4所述的发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法，其特征在于：发酵的工艺条件为：pH值为6.0-9.0，培养温度为15-40℃，摇床转速为90-230转/分钟，培养时间为18-72小时。
6.根据权利要求1所述的发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法，其特征在于：所述的(3)步骤中的反应条件为：反应温度为10-45℃，摇床转速为90-230转/分钟，pH值为4.0-10.0，反应物丁香酚浓度为60-150mmol/L，麦芽糖(或蔗糖)浓度为100-500mmol/L，反应时间为24-120小时。
7.根据权利要求1所述的发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法，其特征在于：所述的(4)步骤中的α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化包括以下四个步骤：
a.对发酵完成的发酵液进行预处理；
b.将经过a步骤的发酵液在6000转/分钟条件下离心20分钟；
c.把经过b步骤的发酵液通过弱极性大孔吸附树脂柱进行分离纯化；
d.把经过c步骤的发酵液真空干燥，即可得到纯度为97％以上的α-葡萄糖基化丁香酚。
8.根据权利要求7所述的发酵生产α-葡萄糖基化丁香酚的方法，其特征在于：所述的a步骤的预处理方法为：发酵液过滤除去沉淀；b步骤中发酵液在6000转/分钟条件下离心20分钟；c步骤中的弱极性大孔吸附树脂柱为AB-8柱；d步骤中的真空干燥的真空度为0.1Mpa，温度为60℃，干燥后的成品纯度达97％以上。
9.野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC NO.1243
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| CN105385700A (zh) * | 2015-10-20 | 2016-03-09 | 德清爵胜生物科技有限公司 | 一种葡萄糖基转移酶基因及其制备方法和重组工程菌及其构建方法和应用 |
| CN107446844A (zh) * | 2017-08-03 | 2017-12-08 | 浙江工业大学 | 一种野油菜黄单胞菌及其应用 |
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