CN101695567A

CN101695567A - 一种油包水型纳米乳疫苗制剂

Info

Publication number: CN101695567A
Application number: CN200910218608A
Authority: CN
Inventors: 欧阳五庆; 陈建明; 李雅
Original assignee: Northwest A&F University
Current assignee: Northwest A&F University
Priority date: 2009-10-27
Filing date: 2009-10-27
Publication date: 2010-04-21

Abstract

本发明公开了一种油包水型纳米乳疫苗制剂，由下述重量百分比的原料制成：油10％～70％、表面活性剂20％～60％、助表面活性剂5％～30％、抗原1～40％、免疫增强剂0.01％～40％组成，上述原料的总重量百分比为100％。本发明的纳米乳剂型不尽能够提高疫苗的稳定性、安全性及减低疫苗副反应，而且能显著提高抗原的体液应答、细胞应答以及增强机体黏膜免疫作用。

Description

一种油包水型纳米乳疫苗制剂

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种油包水型纳米乳疫苗制剂。

技术背景

目前，国内外常用疫苗类型分为活疫苗和灭活疫苗，但二者在实际应用中均存在一定的局限性。灭活疫苗刺激机体产生细胞免疫和粘膜免疫作用较弱；弱毒活疫苗储存不方便、安全性较低、伴有接种反应等。因此，研制出既能产生较强的体液免疫抗体又能产生高效的局部黏膜免疫的新型疫苗已成为疫苗研究的焦点。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种储存方便、安全的纳米乳疫苗制剂的制备。

实现上述发明目的的技术方案是：一种纳米乳疫苗制剂的制备，由下述重量百分比的原料制成：油10％～70％、表面活性剂20％～60％、助表面活性剂5％～30％、抗原1～40％、免疫增强剂0.01％～40％组成，上述原料的总重量百分比为100％。

本发明制备的纳米乳疫苗为水包油型纳米乳，外观澄清、透明，并且在透射电镜下观察，纳米乳颗粒呈球形，分布均匀，无粘连。

本发明纳米乳中的油类包括大豆油、麦芽油、角鲨烯等动植物油和轻质液体石蜡、乙酸乙酯、IPM(肉豆蔻酸异丙酯)等矿物质油，可减少动物机体的疫苗副反应；表面活性剂包括斯盘80、吐温80、斯盘85等非离子表面活性剂；助表面活性剂包括乙醇、丙二醇、丁二醇等小分子醇类。

另一方面，本发明的纳米乳疫苗中可添加免疫增强剂，包括板蓝根多糖、海藻多糖等植物，真菌多糖类中的一种或几种；其若是水溶性的，溶于水中作为水相的一部分；若溶于有机溶剂，则可溶于油相或助表面活性剂中。

再一方面，本发明涉及本发明制备的纳米乳疫苗制剂在制备免疫疫苗中的用途，其中涉及的抗原包括新城疫灭活抗原、禽流感灭活抗原、蓝耳病灭活抗原等灭活病原体，新城疫弱毒病毒等活病原体及类毒素或其它蛋白质抗原。

本发明的疫苗制剂与现有的商品化的疫苗有以下优点和效果：

1)具有独特的稳定性，40℃放置40天无分层或破乳现象；

2)黏度低，便于注射；

3)采用黏膜接种，无疫苗副反应；

4)免疫效果理想，可同时诱导体液免疫和细胞免疫；

5)疫苗的免疫保护期长；

6)制备成本低，具有广阔的市场前景。

附图说明

图1新城疫多糖纳米乳疫苗透射电镜图。

图2新城疫多糖纳米乳疫苗粒径分布直方图。

图3新城疫多糖纳米乳疫苗粒径分布曲线图。

具体实施方式

结合实施对本发明做进一步描述和论证，但本发明之内容并不局限于此。

实施例1：新城疫多糖纳乳疫苗的制备

1.油相的制备：按照液体石蜡∶斯盘80∶吐温80∶乙醇＝2∶1.9∶0.9∶0.9的质量比，称取油相并搅拌混合均匀；

2.水相：将板蓝根、黄芪多糖溶解于新城疫灭活病毒(Lasota株)溶液中制成混合溶液(板蓝根多糖、黄芪多糖均占1％)，作为水相，其灭活前EID₅₀＝10^-8.83/0.1ml；

3.油相和水相按照质量3∶1比例进行乳化混合；

4.采用高压均质机进行纳米处理，即得新城疫板蓝根、黄芪多糖纳米乳疫苗。

实施例2：禽流感海藻、淫羊藿多糖纳米乳疫苗的制备

1.纳米乳油相的制备：乙酸乙酯∶斯盘80∶吐温80∶丙二醇＝2∶1.9∶0.9∶0.95质量比，称取油相并搅拌混合均匀；

2.纳米乳水相：将海藻多糖、淫羊藿多糖加入禽流感灭活病毒(H9亚型)抗原溶液中制成混合溶液(海藻多糖、淫羊藿多糖均占1％)，作为水相，禽流感病毒灭活前EID₅₀＝10^-8.38/0.1ml；

3.将水相和油相按照质量3∶1比例进行乳化混合；

4.将乳液采用高压均质机进行纳米处理，即得禽流感海藻、淫羊藿多糖纳米乳疫苗。

实施例3：蓝耳病香菇、柴胡多糖纳米乳疫苗的制备

1.纳米乳油相的制备：按照棕榈酸异丙酯∶斯盘80∶吐温80∶无水乙醇＝2∶1.9∶0.9∶0.95质量比，称取油相并搅拌混合均匀；

2.纳米乳水相：将香菇多糖、柴胡多糖加入蓝耳病灭活抗原(NVDC-JXA株)制成混合溶液，作为水相，其灭活前TCD₅₀＝10^-5.00/0.1ml；

3.将水相和油相按照质量7∶3比例进行乳化混合；

4.将乳液采用高压均质机进行纳米处理，即得蓝耳病香菇、柴胡多糖纳米乳疫苗。

试验例1新城疫多糖纳米乳疫苗的质量评价

材料与方法

1)实验材料：按照实施事例1中的制备的新城疫多糖纳米乳疫苗

2)实验方法：

a.新城疫多糖纳米乳疫苗的鉴别及其结构类型的鉴别分别采用离心法和染色法鉴别所制备的液体是否为纳米乳及其结构类型。

b.新城疫多糖纳米乳疫苗形态观察及其粒径测定采用透射电镜下观察纳米乳的形态，用激光粒度分析仪测定其平均粒径、多分散系数(Polydispersity index，PDI)和强度粒径分布。

c.黏度的测定在室温25℃，用1ml吸管(下口内径为1.2mm，上口内径为2.7mm)吸取疫苗1ml，令其垂直自然流出，记录流出0.4ml所需的时间。

结果与分析

1)新城疫多糖纳米乳疫苗的鉴别及其结构类型的鉴别：将制备的新城疫多糖纳米乳疫苗4000rpm离心20分钟无分层现象；染色法观察，苏丹红(红色)在纳米乳中的扩散速度大于亚甲基蓝(蓝色)，表明本发明制备的疫苗为油包水型纳米乳。

2)新城疫多糖纳米乳疫苗形态观察及其粒径测定

透射电镜下观察结果显示，新城疫多糖纳米乳疫苗呈球形，分布均匀，无粘连，见图1。

3)粒度分析仪测定结果表明，新城疫多糖纳米乳疫苗的平均粒径为364nm；液滴大小均匀；粒径分布范围在90nm～700nm之间，基本呈正态分布，见图2，图3。

4)黏度的测定：新城疫黏度测定为4s左右，表明本发明疫苗的黏度低。

试验例2 纳米乳疫苗的稳定性、安全性评价

1.材料与方法

1)实验材料按照实施事例1中的制备的新城疫多糖纳米乳疫苗

2)试验方法

a.稳定性评价

将纳米乳疫苗放置在温度在40℃，相对湿度在60±5％的条件下，时间为40天，观察纳米乳有无絮凝、分层现象。

b.安全性评价

接种10只21日龄的SPF鸡，每只鸡以1ml接种新城疫多糖纳米乳疫苗，观察两周，有无临床症状和局部病变。

2.结果与分析

1)稳定性实验结果显示，新城疫多糖纳米乳疫苗在40℃下放置40天，其外观均匀、透明，未发生絮凝、分层现象，实验表明本发明制备的纳米乳疫苗具有很好的稳定性。

2)接种SPF鸡观察两周，无死亡或明显不良的局部或全身反应，表明疫苗对鸡安全。

试验例3 纳米乳疫苗免疫效果的研究

1.材料与方法

1)实验材料按照实施事例1中的制备的新城疫多糖纳米乳疫苗

2)试验方法

为了检验疫苗免疫后所产生的免疫作用对机体的保护力，用28日龄SPF鸡分3组，每组10只，第一组皮下注射0.5ml新城疫多糖纳米乳疫苗，第二组口服0.6ml纳米乳疫苗，最后一组10只为对照组(口服、注射生理盐水各半)。接种28天后，每只鸡口服F₄₈E₈毒株10⁸EID₅₀/0.1mL，各0.2mL，观察14天，并记录体重。

2.结果与分析

表1新城疫多糖纳米乳疫苗攻毒试验结果

攻毒结果(见表1)显示，接种新城疫多糖纳米乳疫苗组全部存活，而对照组全部死亡。结果表明，新城疫多糖纳米乳疫苗具有良好的保护力。

Claims

1.一种油包水型纳米乳疫苗制剂，其特征在于，由下述重量百分比的原料制成：

油10％～70％、表面活性剂20％～60％、助表面活性剂5％～30％、抗原1～40％、免疫增强剂0.01％～40％组成，上述原料的总重量百分比为100％；

所述的油是白油、轻质石蜡油、肉豆蔻酸异丙酯、大豆油、橄榄油中的一种或几种；

所述的表面活性剂为非离子表面剂斯盘80、吐温80或斯盘85；

所述的助表面活性剂是乙醇、丙二醇、正丁醇中的任一种；

所述的抗原是活病原体、灭活病原体、类毒素抗原中的任一种；

所述的免疫增强剂是板蓝根多糖、海藻多糖等植物，真菌多糖类中的一种或几种。