CN101659698A - 紫色杆菌素合成相关蛋白质系统及其编码基因簇与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种紫色杆菌素合成相关蛋白质系统及其编码基因簇与应用。紫色杆菌素合成相关蛋白质系统，是由如下1)至5)中五种蛋白质组成的：1)其氨基酸序列为序列表中的序列2；2)其氨基酸序列为序列表中的序列3；3)其氨基酸序列为序列表中的序列4；4)其氨基酸序列为序列表中的序列5；5)其氨基酸序列为序列表中的序列6。编码所述蛋白系统的基因簇的核苷酸序列是序列表中序列1。本发明的紫色杆菌素合成相关基因簇为构建高效基因工程菌生产紫色杆菌素奠定了基础。

Description

紫色杆菌素合成相关蛋白质系统及其编码基因簇与应用

技术领域

本发明涉及紫色杆菌素合成相关蛋白质系统及其编码基因簇与应用。

背景技术

紫色杆菌素(violacein)、脱氧紫色杆菌素是微生物的代谢产物，它属于吲哚衍生物，由两个色氨酸分子氧化缩合而成。自从19世纪末紫色杆菌素被发现以来，人们对其生物功能进行了大量的探索，发现它具有很强生物功能，越来越受人们关注。

紫色杆菌素具有广谱抗菌性、抗原生动物活性、抗病毒性、抗肿瘤细胞及其它功能。紫色杆菌素对革兰氏阳性细菌如金黄色葡萄球菌(Staploylococcousaureus)、链球菌(Streptococcus sp)、芽孢杆菌(Bacillus sp)、分枝杆菌(Mycobacterium)、奈瑟球菌(Neisseria)及假单胞菌(Pseudomonas)有显著的抑制作用(de Souza，1999；Lichstein，1945；Nakamura et al.，2002；Nelsonet al.，2001；Yoshitoshi，2003)，而对革兰氏阴性细菌如黄杆菌(F.balustinum)、黏质沙雷菌(S.marcescens)和大肠杆菌(E.coli)等(Nakamura et al.，2002)有较小的抑制性(DeMoss，1967；Lichstein，1945)。紫色杆菌素还具有杀锥虫活性(Caldas，1978；Durán et al.，1994；Haun et al.，1992)、抗利什曼原虫(Leishmania)的活性(Leon et al.，2001)。紫色杆菌素混合物(含有10％脱氧紫色杆菌素)对侵染Hela细胞的单纯性疱疹病毒(Herpes Simplex Virus，HSV)、脊髓灰质炎病毒(Polioviruses)有抵抗活性(Andrighetti-Frohner et al.，2003；Duran et al.，2001；May G.et al.，1991)。紫色杆菌素对白血病细胞(leukemiacells)、淋巴瘤(lymphoma)、肺、结肠(Durán，1997；Melo et al.，2000)以及由艾滋病毒(AIDS)引起的淋巴瘤(Durán，1996)都有很好的细胞毒性作用(Melo et al.，2000)。紫色杆菌素可以抵抗可见光辐射(Antonio et al.，2004)。此外，紫色杆菌素可代替人工色素作为染料，对天然原料(如丝绸、棉、毛)及合成原料(如尼龙)都有很好的着色效果(Shirata，2000)。

目前，已发现可以合成紫色杆菌素的微生物有Chromobacterium violaceum、C.fluviatile(Moss 1978)、Janthinobacterium lividum(Sneath 1956)、Alteromonasluteoviolacea(McCarthy SA 1985)、Pseudoalteromonas tunicata(Egan，James etal.2002)。在已发现的产紫色杆菌素的菌株中，对C.violaceum的研究最为广泛。

2003年，C.violaceum全基因组测序完成，为紫色杆菌素合成途径解析及应用提供了保证。目前，紫色杆菌素的生物合成途径基本清楚。紫色杆菌素的生物合成受一个基因簇的控制，长约7.3kb，包括5个基因如图1所示，分别是VioA、VioB、VioC、VioD和VioE。

目前Genebank已公布4个合成紫色杆菌素的基因序列，主要是来自C.violaceum和Janthinobacterium lividum菌株的。

发明内容

本发明的目的是提供一种紫色杆菌素合成相关蛋白质系统及其编码基因簇与应用。

本发明所提供的紫色杆菌素合成相关蛋白质系统，来源于杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2CGMCC 2056，是由如下1)至5)中五种蛋白质组成的：

1)其氨基酸序列为序列表中的序列2或在序列表中序列2所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与紫色杆菌素合成相关的由序列2限定的蛋白质衍生的蛋白质；

2)其氨基酸序列为序列表中的序列3或在序列表中序列3所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与紫色杆菌素合成相关的由序列3限定的蛋白质衍生的蛋白质；

3)其氨基酸序列为序列表中的序列4或在序列表中序列4所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与紫色杆菌素合成相关的由序列4限定的蛋白质衍生的蛋白质；

4)其氨基酸序列为序列表中的序列5或在序列表中序列5所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与紫色杆菌素合成相关的由序列5限定的蛋白质衍生的蛋白质；

5)其氨基酸序列为序列表中的序列6或在序列表中序列6所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与紫色杆菌素合成相关的由序列6限定的蛋白质衍生的蛋白质。

其中，序列表中序列2由435个氨基酸残基组成。序列表中序列3由1005个氨基酸残基组成。序列表中序列4由429个氨基酸残基组成。序列表中序列5由372个氨基酸残基组成。序列表中序列6由191个氨基酸残基组成。

为了便于所述五种蛋白的纯化，可在由序列表中序列2、3、4、5或6所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1.标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL
MBP	367	序列表中序列7

带有表1所示的标签的蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。如带有表1所示的标签的序列2限定蛋白的编码基因可通过将序列表中序列1自5′末端第1-1308所示的DNA序列5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

编码所述蛋白系统的基因簇也属于本发明的保护范围。

所述基因簇具体可为如下的DNA分子：

1)其核苷酸序列是序列表中序列1；

2)在严格条件下可与序列表中序列1限定的DNA序列杂交且编码紫色杆菌素合成相关蛋白系统的DNA分子；

3)与1)的基因具有90％以上的同源性，且编码紫色杆菌素合成相关蛋白系统的DNA分子。

所述步骤3)中的基因簇，与1)的基因簇最好有95％以上的同源性。

上述严格条件可为在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在68℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

序列表中的序列1由7315个核苷酸组成，序列表中的序列1自5′末端第1-1308位编码序列表中序列2所示的蛋白；序列1自5′末端第1305-4322位编码序列表中序列3所示的蛋白；序列1自5′末端第4323-5612位编码序列表中序列4所示的蛋白；序列1自5′末端第5612-6730位编码序列表中序列5所示的蛋白；序列1自5′末端第6740-7315位编码序列表中序列6所示的蛋白。

扩增上述基因簇全长或任一片段的引物对也属于本发明的保护范围。

含有上述基因簇的重组载体、转基因细胞系和重组菌也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种生产紫色杆菌素的方法。

本发明所提供的生产紫色杆菌素的方法，是将所述的基因簇转入大肠杆菌中获得重组大肠杆菌，培养所述重组大肠杆菌生产紫色杆菌素。

其中，所述大肠杆菌可为BL21-CodonPlus(DE3)-RIL。

杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2CGMCC 2056采集于新疆天山冰川，其合成紫色杆菌素能力较强。本发明从产紫色杆菌素的杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2CGMCC2056中分离了紫色杆菌素合成相关基因簇，该基因簇是一个新的基因资源，将其转入大肠杆菌中可以获得产紫色杆菌素的大肠杆菌。本发明的紫色杆菌素合成相关基因簇为构建高效基因工程菌生产紫色杆菌素奠定了基础。

附图说明

图1为紫色杆菌素基因簇结构示意图。

图2为紫色杆菌素基因簇的PCR克隆示意图及结果。

图3为两段式PCR扩增紫色杆菌素基因簇的结果。

图4为高效液相色谱结果图。

具体实施方式

实施例1、杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2CGMCC 2056紫色杆菌素合成相关基因簇的制备

一、杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2CGMCC 2056紫色杆菌素合成相关基因簇的克隆

将杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2CGMCC 2056转接入液体培养基(淀粉15g/L、硫酸亚铁0.03g/L、硝酸钾1g/L、磷酸氢二钾0.7g/L、硫酸镁0.5g/L、色氨酸0.5g/L，调节pH为7.0)，25℃，200rpm培养36小时，按上海生工基因组DNA提取试剂盒说明书提取杜擀氏菌B2CGMCC 2056基因组DNA。

根据紫色杆菌素合成相关基因簇序列(AF172851、AF367409)，采用Oligo 7.10软件以vioB中较为保守的部分设计引物FB和RB，FB和RB序列见表1，以Duganellasp B2CGMCC 2056基因组DNA为模板，扩增得到长度为0.8kb的vioB基因内部片段，扩增产物的电泳结果如图2A所示，扩增产物测序后与已知vioB基因序列进行分析，然后再以测序结果作为设计引物的模板，根据保守的序列设计引物，引物序列如表1所示。

表1.PCR引物表

引物名称引物序列F-B             5’-CTGTTCAATATGTCGACGCCGC-3’R-B             5’-GATCGCACATCTGCCACATCAG-3’VioA 14-for     5’-GACATTTGCATCGTTGGCGC-3’vioB 780-rev    5’-GTGCTGGTAGAGAAAGGCGT-3’vio-22-for      5’-GTTAAAAAGGAATTTCGTATGA-3’vioA158-rev     5’-GTTGCTCGAAATGCGGATGGAGTTG-3’vioB 484-for    5’-CAGGACTTTCCGCAGACGAT-3’vioC953-rev     5’-GTCTTCCAGCGCCATGTTCAT-3’vioC163-for     5’-CTTCTTCCGCCACGGCTACAA-3’vioD-518-rev    5’-GCGGAACACCAGGTTCATCTG-3’vioD200-for     5’-GGTCGTATTCGGCTTCCAGT-3’Vio+1100-rev    5’-GCCGATGTTGATGACGGA-3’vioA-for        5’-GGATCATTAATGACAAATTATTCTGACATTTGCATAG-3’Vio3054-rev     5’-AAGAGTGGACTTGGCGGCCGCTTCGACCTG-3’Vio3046-for     5’-TACATGACTCAGGTCGAAGCGGCCGCCAAG-3’vioE-rev        5’-GGAATGTCCTCGAGTTCCGACACGAAAACGCTGGC-3’

分别以VioA 14-for和vioB 780-rev、vio-22-for和vioA158-rev、vioB484-for和vioC953-rev、vioC163-for和vioD-518-rev、vioD200-for和Vio+1100-rev为引物对，以Duganella sp B2CGMCC 2056基因组DNA为模板进行PCR扩增，对扩增产物进行测序，将序列拼接得到紫色杆菌素合成相关基因簇。

图2B为紫色杆菌素合成相关基因簇拼接示意图，其中A为引物vio-22-for和vioA158-rev的PCR产物，大小为0.5kb；B为引物VioA 14-for和vioB 780-rev的PCR产物，大小为2.8kb；C为引物vioB 484-for和vioC953-rev的PCR产物，大小为2.8kb；D为引物vioC163-for和vioD-518-rev的PCR产物，大小为1.6kb；E为引物vioD200-for和Vio+1100-rev的PCR产物，大小为2.6kb；F为引物F-B和R-B的PCR产物，大小为0.9kb。

拼接后的片段为8.7Kb，其部分序列为序列表中的序列1，序列表中的序列1为紫色杆菌素合成相关蛋白质系统的编码基因簇，包含5个ORF，整个片段的平均GC含量为62.7％(32.4％G+30.3％C)，与Duganella sp B2CGMCC 2056基因组GC含量(63.6％)相近。序列表中的序列1自5′末端第1-1308位编码序列表中序列2所示的蛋白，命名为VioA；序列1自5′末端第1305-4322位编码序列表中序列3所示的蛋白，命名为VioB；序列1自5′末端第4323-5612位编码序列表中序列4所示的蛋白，命名为VioC；序列1自5′末端第5612-6730位编码序列表中序列5所示的蛋白，命名为VioD；序列1自5′末端第6740-7315位编码序列表中序列6所示的蛋白，命名为VioE。序列表中的序列1即为紫色杆菌素合成相关基因簇，由5个基因构成VioA、VioB、VioC、VioD和VioE，这5个基因编码的蛋白(VioA、VioB、VioC、VioD和VioE)组成了紫色杆菌素合成相关蛋白系统。

将VioA、VioB、VioC、VioD和VioE分别与Genebank数据库中序列比较，比较结果如表2所示。

表2.VioA、VioB、VioC、VioD和VioE与Genebank数据库中序列比较

表2的分析结果表明，本发明的杜擀氏菌株B2CGMCC 2056的VioA、VioB、VioC、VioD和VioE基因和其他物种的同源基因具有一定的同源性，但氨基酸最高为相似性85.31％。

根据序列表中的序列1设计引物vioA-for和vio3054-rev、vio3046-for和vioE-rev，vioA-for和vio3054-rev、vio3046-for和vioE-rev的序列如表1所示。

以Duganella sp B2 CGMCC 2056基因组DNA为模板，利用高保真Pyrobest DNA聚合酶进行PCR扩增，扩增产物的电泳结果如图3。以vioA-for和vio3054-rev为引物PCR扩增片段A，对片段A进行测序，测序结果表明，片段A包括完整的vioA和部分vioB基因，以vio3046-for和vioE-rev为引物PCR扩增片段B，对片段B进行测序，测序结果表明，片段B包括完整的vioC、vioD、vioE和部分vioB基因，片段A和片段B经PCR纯化试剂盒回收，Ase I和NotI双酶切片段A、NotI和XhoI双酶切片段B，凝胶回收试剂盒回收酶切后的片段，与经过NdeI和XhoI双酶切后回收的载体pET30a在16℃过夜连接，得到重组载体pET30aVio，重组载体pET30aVio用热激法转化入E.coli DH5α中，转化产物涂于含卡那霉素(50mg/L)的LB平板上，挑取转化子培养后采用碱裂解法提取重组载体pET30aVio，pET30aVio插入的A和B两个片段分别编码VioA(氨基酸序列为序列表中的序列2)、VioB(氨基酸序列为序列表中的序列3)、VioC(氨基酸序列为序列表中的序列4)、VioD(氨基酸序列为序列表中的序列5)和VioE(氨基酸序列为序列表中的序列6)五个蛋白。

二、杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2CGMCC №₂056紫色杆菌素合成相关基因簇的功能

将重组载体pET30aVio转入E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL构建重组菌株E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL/pET30aVio。将pET30a载体转入E.coliBL21-CodonPlus(DE3)-RIL，获得的重组菌E.coliBL21-CodonPlus(DE3)-RIL-pET30a作为对照。

分别挑取E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL/pET30aVio和E.coliBL21-CodonPlus(DE3)-RIL-pET30a单菌落接种至3mL含有氯霉素30μg/mL、卡那霉素50μg/mL的LB液体培养基，37℃，200rpm振荡培养过夜。次日按1％的接种量，分别接种至新鲜的LB培养基(含有相应的抗生素)中37℃继续培养2-3h，OD₆₀₀为0.5-0.6时加1mmol/L的IPTG进行诱导，20℃诱导培养20h。将50mL上述培养液在7000×g下离心10min，弃上清液，在沉淀物中加入无水乙醇5mL，用漩涡混合器将其混匀，然后在200W超声波清洗器中振荡0.5h，将振荡液9000×g离心5min，保留乙醇溶液。

由E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL/pET30aVio培养液制备的乙醇溶液中含有蓝紫色物质，而由对照菌培养液制备的乙醇溶液不含有蓝紫色物质。

将蓝紫色物质的甲醇溶液进行高效液相色谱分析，使用Agilent-1100高效液相色谱仪，色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18，150mm×4mm，5μm；柱温30℃；洗脱剂为体积比为70％的甲醇水溶液；流速1.0mL/min；检测波长：570nm。

高效液相色谱检测结果如图4所示，表明由重组菌E.coliBL21-CodonPlus(DE3)-RIL/pET30aVio合成的蓝紫色物质包含两种物质，分别与杜擀氏菌属Duganella B2CGMCC 2056合成的紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素洗脱时间时间一致(分别为3.0min和4.9min)。

上述实验结果表明，构建的载体pET30aVio在菌株E.coliBL21-CodonPlus(DE3)-RIL中成功表达紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素合成相关的酶，并在体内催化合成紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素。

图4中，I：杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2 CGMCC 2056所产色素高效液相色谱图，第一峰为紫色杆菌素，第二峰为脱氧紫色杆菌素；

II：BL21-CodonPlus(DE3)-RIL/pET30aVio所产紫色物质的粗提物的高效液相谱图。

序列表

<110>清华大学

<120>紫色杆菌素合成相关蛋白质系统及其编码基因簇与应用

<130>CGGNARW81612

<160>1

<210>1

<211>7315

<212>DNA

<213>杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2 CGMCC 2056

<400>1

atgacaaatt attctgacat ttgcatagtt ggcgcaggca tagggggcct cagttgtgcg    60

acccagttga tcaacgccgc cgccggcaag aatttacgga tcagggtgtt cgacatggat    120

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ggcgccgccc gctactcgcc gcaactccat ccgcatttcg agcaactcat gcaggaatgc    240

gggctggcgc atgcgaccta ccctttcacc caggtggtgt cgctcgatca ggcgcaggag    300

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gaattccggc tggggcatcg cttgctgtcg gttgaaaagt ccggcaccga ccatgtcctc    660

gccttccgcc atatgggcga tactcagatg caccgggcgc gccatgtgat cacgaccctc    720

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atttccagcg gctgcgcgcc ctggccggcc gcttttcggc acgcgaaaaa ccgttcgaac    3840

cggccgtgcc ggcgctgaaa aatccggtac tcgacccacg cgccgactgc accgtggtga    3900

ccgatcccaa ggcccgttcg ctgatgcagc tctaccaggg ctgctatgaa ctgaccttcg    3960

cgctgatggc gcaccacttc gcgcaaaagc cgctgggcag cctgcgccgc tcgcgcctga    4020

tgaatgcctc catcgacatc atgaccggtt tgctgcggcc cttgtcggcc gcgctgatga    4080

acatgccgtc cggcgtaccc gggcgcaacg ccggaccgcc cgtgcccggg ccggccgaca    4140

ccgccatcag cagtgactac agcctgggat gcgagctgct ggcgcagaaa tgcctggccc    4200

tggcgcagta cgcgcgcagc ctggaggccg aggtggccag cacggcgcag atcgacatgt    4260

tggagttctt taatcagcaa ctgaccgatt tatctcgggg aaagatgtca agagaggcct    4320

gaatgcacaa aatcatcatc gtgggcggcg gcctggcggg cagcctgacc gccacttatc    4380

tggcgcagcg cggacatgag gtccacgtta tcgaaaagcg cggcgatccg ctgcgggcgg    4440

agtcagccaa cgccgatccg gtcaactcgc gcgccattgg cgtgagcatg accgtgcgcg    4500

gcatcaaggc agtgctggcg gccggcatca gcaaggagga gctcgatcgg tgcggcgaac    4560

cggtcgtcgg catggcattt tcggtcggcg gcggccacaa ggtgcgcgaa ctgaccccgc    4620

tcgaaggctt gtttcccttg tcgctggacc gcaccgcgtt ccagcgcctg ctgaacaagt    4680

acgccgtcat gcacaaagtg aactattact tcgagcataa atgcctggac ctggacctgg    4740

acaagaaatc cgtgctgatc cagggcccgg acggcgcctt gcggcatctg caaggcgacc    4800

tgatcatcgg ggccgacggc gcccactccg ccgtgcggcg cgccatgcaa gccggcatgc    4860

ggcgcttcca gttcgaacaa tccttcttcc gccacggcta caagaccctg gtactgccga    4920

acgccgcggg actgggcttc cgcaaggatc tgctgtattt cttcggcatg gattccaagg    4980

gccagtttgc cggccgcgca gccaccatcc cggacggcag catcagcttc gccctctgcc    5040

tgccctacac cggcacgccc agcctggcca cgcgcgaccg cgccgccatg ggggagtttt    5100

tcagccgcta cttcggcatc ctgccaccgg ccagccggga agagctggtg aatcagttca    5160

tcgcgctgcc tagcaacgac ctcatcaatg tccgctccag caccttccat tacaagagca    5220

atgtcctgct gatcggcgat gcggcgcatg cgaccgcccc cttcctcggt cagggcatga    5280

acatggcgct ggaagacgtc tacgtcttca tcaccttgct ggaaaagcat cgcgatgacc    5340

tgggcctggt cttgtcggag tttacggggc agcgcaaggt gcaggccgac gccatgcagg    5400

atatggcgat cgccaactac gaaatgctga gcaacccgaa ttttattttc ttcctgcaaa    5460

cccgctacac ccgctacatg cacaagaaat ttcccagtgt ttatccgccc gacatggcgg    5520

agaagctgta cttcacatcg gttccctacg atgtgctgca acaaatccag aagaagcaaa    5580

acgtttggta caaacttgga agggtaaact aatgaaaatc ctcgtcatcg gcgccggacc    5640

agccggactg atctttgcaa gtcaaatgaa gcaagcccaa cccgcttggg atatcagcgt    5700

tgcggaaaaa aatacccagg aagaagtgct gggctggggc gtggtgctgc cgggacgccc  5760

gccgcgccat cccgccaatc cgctgtccta tctggagcag ccggaactgc tcaacccgca  5820

attcctggaa gaattcaagc tggtgcacca cgaccagccg aacctgatga gcaccggcgt  5880

gacgctgtgc ggcgttggtc ggcaagtcct ggtgcaggcg ctgcgcgcca aatgcgtggc  5940

ggccggcatc acggtcagtt acgagacgcc gctggcgagc gtggcgcaac tggaagccga  6000

atacgacctg gtcgtggtgt cgaacggtat caatcacaaa tcgctggaat tgccgccggc  6060

actggccgcg caggttgaat tcggcaagaa caaatacatc tggtacggca ccacccagct  6120

gttcgaccag atgaacctgg tgttccgcga aaacagcaac ggcgtgttcg ccggccatgc  6180

ctacaaatac tcggacacga tgagcacttt catcgtcgag tgcagcgaag agacgtatgc  6240

caaagccgag ctggaattcc gttccgagcg cgacgccgcc gcctatatcg ccaagacgtt  6300

cgcgccagaa ctgggcgaac accgtctggt cagccagccg ggccagggct ggcgcaactt  6360

catgaccctc agccgcgagg tggccagcga cggcaagttc gtgctgatcg gcgatgcgct  6420

gcaatcgggc cacttctcga tcggccatgg caccaccatg gcggtggtgg tggcccagct  6480

gctggtgaaa acgctcagcg ccgaagccgg cacggccgcg gccctggcca gcttcaacgc  6540

ccgcgcgctg ccactggtgc aactgttcaa ggagcatgcc gacgccagcc gcctgtggtt  6600

cgaaaccgtg agcgagcgtg tcgggctggg caacgcggag ctgaccgcca gcttcgatgc  6660

ccgccgcaac catttgccgc cgctgcagga tgcgctgatg gccagcctcg gctacgccct  6720

cggccgctaa ggagacgcca tgccaccgca cgccaccccg ccgctgctgc cgatgcaatg  6780

gagcagcgcc tacatctcgt attggtcgcc gatgcgggaa gacgacgagg tcacttccgg  6840

ctattgctgg ttcgactatg cccgcgacat ttgccgcatc gacggcctgt tcaatccctg  6900

gtcggaaaag gagacgggac accggctctg gatgtcggaa atcggcgacg ccaggcgcgg  6960

acaaagccgc aaacagaaag tcgcttatgc cagggaggcg gagccggccg gcgtgaagct  7020

gtacgagcgg gcgctggccg atgaggtcac gcccttccac gagctgttcc tgccgcaggc  7080

gatcctgatc gacggcgaag cgcgtcatga cggccgccac acggtgctgg gccaggcggc  7140

cgacgcctgg gtggtggagc ggccgggcaa agccgcctcg gtgttctatc tccaggccgg  7200

cggcaatcac ttgctgcgca tggtcaccgg caacgacgcg cagcatcagt cggtacgcga  7260

ctttccgaac ttccttgccg gcgacatcgc ggccagcgtt ttcgtgtcgg aataa       7315

<210>2

<211>435

<212>PRT

<213>杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2 CGMCC 2056

<400>2

Met Thr Asn Tyr Ser Asp Ile Cys Ile Val Gly Ala Gly Ile Gly Gly

1               5                   10                  15

Leu Ser Cys Ala Thr Gln Leu Ile Asn Ala Ala Ala Gly Lys Asn Leu

           20                  25                  30

Arg Ile Arg Val Phe Asp Met Asp Thr Thr Val Gly Gly Arg Ile Gln

        35                  40                  45

Ser His Lys Val Asp Glu Glu Glu Ile Ala Glu Leu Gly Ala Ala Arg

    50                  55                  60

Tyr Ser Pro Gln Leu His Pro His Phe Glu Gln Leu Met Gln Glu Cys

65                  70                  75                  80

Gly Leu Ala His Ala Thr Tyr Pro Phe Thr Gln Val Val Ser Leu Asp

                85                   90                 95

Gln Ala Gln Glu Lys Leu Lys Ala Thr Leu Leu Ser Leu Ser Ala Met

            100                 105                 110

Leu Lys Lys His Pro Asn Asp Ser Phe Leu Glu Phe Val Ser Gln Tyr

        115                 120                 125

Leu Gly Ala Ala Glu Ala Thr Arg Met Ile Lys Ala Thr Gly Tyr Asp

    130                 135                 140

Ala Leu Leu Leu Pro Val Val Ser Ala Ala Met Ala Tyr Asp Ile Ile

145                 150                 155                 160

Lys Lys His Pro Glu Thr Gln Ser Phe Thr Glu Asn Ala Ala Asn Glu

                165                 170                 175

Trp Arg Tyr Ala Thr Asp Gly Tyr Ser Glu Leu Leu Arg Gln Leu Gln

            180                 185                 190

Arg Gln Ala Gln Asp Ala Gly Val Glu Phe Arg Leu Gly His Arg Leu

        195                 200                 205

Leu Ser Val Glu Lys Ser Gly Thr Asp His Val Leu Ala Phe Arg His

    210                 215                 220

Met Gly Asp Thr Gln Met His Arg Ala Arg His Val Ile Thr Thr Leu

225                 230                 235                 240

Pro Pro Thr Ala Met Lys Arg Leu Asn Met Asp Phe Pro Ala Ala Phe

                245                 250                 255

Ser Pro Phe Gln Tyr Asp Ser Leu Pro Leu Phe Lys Gly Phe Leu Thr

            260                 265                 270

Phe Glu Thr Ala Trp Trp Asp Ala Leu Gly Leu Thr Asp Lys Val Leu

        275                 280                 285

Met Ala Asp Asn Pro Leu Arg Lys Ile Tyr Phe Lys Gly Asp Lys Tyr

    290                 295                 300

Leu Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ser Ala Thr Tyr Trp Arg Glu Tyr

305                 310                 315                 320

Leu Glu Gln Gly Glu Asp Val Tyr Leu Asp Arg Val Arg His His Leu

                325                 330                 335

Lys Glu Val Leu Pro Leu Asn Gly Gln Pro Leu Pro Gln Ile Lys Ala

            340                 345                 350

His Phe Tyr Lys His Trp Pro His Gly Val Glu Phe Ser Leu Glu Pro

        355                 360                 365

Glu Ala Glu His Pro Ala Thr Leu Leu His Arg Asp Gly Ile Ile Ser

    370                 375                 380

Cys Ser Asp Ala Tyr Thr Ser His Cys Gly Trp Met Glu Gly Ser Leu

385                 390                 395                 400

Ile Ser Ala Gly His Ala Thr Arg Leu Leu Leu Glu Arg Leu Ser His

                405                 410                 415

Pro Pro Ala Gln Ser Gly His Asp Phe Thr Leu Ala Thr Ser Leu Thr

            420                 425                 430

Glu Arg Ala

        435

<210>3

<211>1005

<212>PRT

<213>杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2CGMCC 2056

<400>3

Met Ser Ile Leu Asp Phe Pro Arg Phe His Phe Arg Gly Phe Ala Arg

1               5                   10                  15

Ala Asn Val Pro Thr Ala Asn Arg Asn Thr His Gly His Ile Asp Ile

            20                  25                  30

Ala Thr Asn Ala Val Ser Ile Ala Gly Glu Pro Phe Asp Leu Ser Arg

        35                  40                  45

Pro Pro Ser Glu Phe His Glu His Met Lys Gln Leu Ala Pro Arg Phe

    50                  55                  60

Asp Ala Ala Gly Lys Pro Asp Pro Glu Gly Ile Phe Ser Glu Ala Ala

65                  70                  75                  80

Gly Tyr Asn Phe Cys Gly Asn Asn His Phe Ser Trp Glu Asn Ala Arg

                85                  90                  95

Ile Thr Gly Val Gln Leu Arg Asp Gly Glu Val Asp Thr Glu Asp Ala

            100                 105                 110

Leu Val Gly Ala Lys Leu Ala Leu Trp Gly His Tyr Asn Asp Tyr Leu

        115                 120                 125

Arg Thr Thr Val Asn Arg Ala Arg Trp Val Asp Asn Asn Pro Ala Glu

    130                 135                 140

Pro Asp Thr Thr Leu Ile Tyr Ala Gly Gln Phe Thr Leu Ser Gly Lys

145                  150                155                 160

Gln Ala Thr Pro Asn Thr Pro Ser Leu Phe Ser Ala Asp Ile Gly Gln

                165                 170                 175

Ala His Ser Val Arg Trp Val Gly Ser Gly His Ile Ser Glu Arg Ser

            180                 185                 190

Gly His Phe Leu Asp Asp Glu Phe Gly Arg Ser Arg Leu Phe Gln Phe

        195                 200                 205

Ser Val Ala Lys Leu Asp Pro His Phe Leu Phe Asn Pro Asp Thr Pro

    210                 215                 220

Leu Pro Ala Ser Met Arg Ala Leu Gln Glu Ala Leu Ala Asp Glu Asp

225                 230                 235                 240

Val Leu Gly Leu Thr Val Gln Tyr Ala Leu Phe Asn Met Ser Thr Pro

                245                 250                 255

Gln Lys Pro Asp Ser Pro Val Phe Tyr Asp Leu Ala Gly Gly Ile Gly

            260                 265                 270

Leu Trp Arg Arg Asp Glu Leu Ala Thr Tyr Pro Ala Gly Arg Leu Leu

        275                 280                 285

Leu Pro Arg Gln Ser Ser Leu Gly Pro Val Leu Val Lys Val His Ala

    290                 295                 300

Asp Arg Val Ser Val Asn Met Pro Thr Ala Ile Pro Phe Thr Thr Arg

305                 310                 315                 320

Glu Ala Gly Ala Val Ser Glu Gln His Pro Thr His Ala Leu Gly Gly

                325                 330                 335

Lys Leu Ala Leu Gly Asp Leu Met Leu His Gly Ala Thr Gly Lys Leu

            340                 345                 350

Ile Ala Arg Ile Pro Gln Gln Leu Tyr Leu Asp Tyr Trp Arg His His

        355                 360                 365

Gly Val Phe Asp Val Pro Leu Leu His Pro Ala Thr Ala Ser Gly Ser

    370                 375                 380

Leu Ser Met Ser Ser Ala Gln Ala Gln Trp Asp Glu Ala Asp Trp Val

385                 390                 395                 400

Leu Gln Ser Asp Ser Asn His Leu Tyr Leu Glu Ala Pro Asn Arg Gln

                405                 410                 415

Arg Gln Gln Asp Phe Pro Gln Thr Ile Thr Val Gln Ser Arg Leu Arg

            420                 425                 430

Gly Glu Leu Ala Ala His Pro Ala Leu Thr Ala Gln Ala Gln Asp Gly

        435                 440                 445

Glu Ile Val Gly Val Arg Val Ala Pro Ser Ala Leu Gly Val Gly Tyr

    450                 455                 460

Ala Asp Leu Thr Leu Thr Gly Arg Arg Ser Gly Ala Thr Arg Ile Met

465                 470                 475                 480

Leu Gly Glu Ala Gln Gly Gln Gln Phe Ile Gly Ala Arg Val Leu Pro

                485                 490                 495

Asp Asp Trp His Leu Asp Asp Ile Pro Ala Glu Gln Val Asp Tyr Ala

            500                 505                 510

Phe Leu Tyr Gln His Val Met Ser Tyr Tyr Glu Leu Val Tyr Pro Phe

        515                 520                 525

Met Ser Asp Lys Val Phe Ser Leu Ala Asp His Cys Lys Cys Glu Thr

    530                 535                 540

Tyr Ser Arg Leu Met Trp Gln Met Cys Asp Pro Gln Asn Arg Asp Lys

545                 550                 555                 560

Ser Tyr Tyr Met Pro Ser Thr Arg Glu Leu Ser Leu Pro Lys Ser Arg

                565                 570                 575

Leu Phe Leu Lys Tyr Leu Thr Gln Val Glu Ala Ala Ala Lys Ser Thr

            580                 585                 590

Leu Pro Gln Ala Val Ala Pro His Val Ile Gly Cys Lys Ala Glu Trp

        595                 600                 605

Ile Ala Glu Leu Lys Lys Ala Ile Asp Leu Glu Leu Ser Leu Met Leu

    610                 615                 620

Gln Tyr Leu Tyr Ala Ala Tyr Ala Ile Pro Asn Tyr Ala Gln Gly Val

625                 630                 635                 640

Lys Leu Val Glu Ala Gly Arg Trp Leu Pro Asp Glu Leu Glu Leu Ala

                645                 650                 655

Cys Gly Thr Glu Asp Arg Arg Arg Asn Ser Gly Ala Arg Gly Ala Leu

            660                 665                 670

Leu Glu Ile Ala His Glu Glu Met Ile His Tyr Leu Met Val Asn Asn

        675                 680                 685

Val Leu Met Ala Leu Gly Glu Pro Phe Tyr Ala Gly Ala Pro Ala Leu

690                 695                 700

Gly Glu Gln Ala Arg Gln Arg Phe Gly Leu Asp Thr Glu Phe Ala Phe

705                 710                 715                 720

Asp Pro Phe Ser Glu His Val Leu Ala Arg Phe Val Arg Phe Glu Trp

                725                 730                 735

Pro Asp Tyr Leu Pro Thr Pro Gly Lys Ser Ile Ala Thr Phe Tyr Ala

            740                 745                 750

Ala Ile Arg Gln Ala Val Ala Asp Leu Pro Asp Leu Phe Asp Ala Asp

        755                 760                 765

Gly Gly Lys Arg Gly Gly Glu His His Leu Phe Leu Lys Glu Leu Thr

    770                 775                 780

Asn Arg Ala Tyr Pro Ala Tyr Gln Leu Glu Val Ser Asp Arg Asp Ser

785                 790                 795                 800

Ala Leu Phe Ala Leu Asp Phe Val Thr Glu Gln Gly Glu Gly Val Ala

                805                 810                 815

Val Glu Ser Pro His Phe Ala Val Ser His Phe Gln Arg Leu Arg Ala

            820                 825                 830

Leu Ala Gly Arg Phe Ser Ala Arg Glu Lys Pro Phe Glu Pro Ala Val

        835                 840                 845

Pro Ala Leu Lys Asn Pro Val Leu Asp Pro Arg Ala Asp Cys Thr Val

    850                 855                 860

Val Thr Asp Pro Lys Ala Arg Ser Leu Met Gln Leu Tyr Gln Gly Cys

865                 8708                 758                 80

Tyr Glu Leu Thr Phe Ala Leu Met Ala His His Phe Ala Gln Lys Pro

                885                 890                 895

Leu Gly Ser Leu Arg Arg Ser Arg Leu Met Asn Ala Ser Ile Asp Ile

            900                 905                 910

Met Thr Gly Leu Leu Arg Pro Leu Ser Ala Ala Leu Met Asn Met Pro

        915                 920                 925

Ser Gly Val Pro Gly Arg Asn Ala Gly Pro Pro Val Pro Gly Pro Ala

    930                 935                 940

Asp Thr Ala Ile Ser Ser Asp Tyr Ser Leu Gly Cys Glu Leu Leu Ala

945                 950                 955                 960

Gln Lys Cys Leu Ala Leu Ala Gln Tyr Ala Arg Ser Leu Glu Ala Glu

                965                 970                 975

Val Ala Ser Thr Ala Gln Ile Asp Met Leu Glu Phe Phe Asn Gln Gln

            980                 985                 990

Leu Thr Asp Leu Ser Arg Gly Lys Met Ser Arg Glu Ala

        995                 1000                 1005

<210>4

<211>429

<212>PRT

<213>杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2 CGMCC 2056

<400>4

Met His Lys Ile Ile Ile Val Gly Gly Gly Leu Ala Gly Ser Leu Thr

1               5                   10                  15

Ala Thr Tyr Leu Ala Gln Arg Gly His Glu Val His Val Ile Glu Lys

            20                  25                  30

Arg Gly Asp Pro Leu Arg Ala Glu Ser Ala Asn Ala Asp Pro Val Asn

        35                  40                  45

Ser Arg Ala Ile Gly Val Ser Met Thr Val Arg Gly Ile Lys Ala Val

    50                  55                  60

Leu Ala Ala Gly Ile Ser Lys Glu Glu Leu Asp Arg Cys Gly Glu Pro

65                  70                  75                  80

Val Val Gly Met Ala Phe Ser Val Gly Gly Gly His Lys Val Arg Glu

                85                  90                  95

Leu Thr Pro Leu Glu Gly Leu Phe Pro Leu Ser Leu Asp Arg Thr Ala

            100                 105                 110

Phe Gln Arg Leu Leu Asn Lys Tyr Ala Val Met His Lys Val Asn Tyr

        115                 120                 125

Tyr Phe Glu His Lys Cys Leu Asp Leu Asp Leu Asp Lys Lys Ser Val

    130                 135                 140

Leu Ile Gln Gly Pro Asp Gly Ala Leu Arg His Leu Gln Gly Asp Leu

145                 150                 155                 160

Ile Ile Gly Ala Asp Gly Ala His Ser Ala Val Arg Arg Ala Met Gln

                165                 170                 175

Ala Gly Met Arg Arg Phe Gln Phe Glu Gln Ser Phe Phe Arg His Gly

            180                 185                 190

Tyr Lys Thr Leu Val Leu Pro Asn Ala Ala Gly Leu Gly Phe Arg Lys

        195                 200                 205

Asp Leu Leu Tyr Phe Phe Gly Met Asp Ser Lys Gly Gln Phe Ala Gly

    210                 215                 220

Arg Ala Ala Thr Ile Pro Asp Gly Ser Ile Ser Phe Ala Leu Cys Leu

225                 230                 235                 240

Pro Tyr Thr Gly Thr Pro Ser Leu Ala Thr Arg Asp Arg Ala Ala Met

                245                 250                 255

Gly Glu Phe Phe Ser Arg Tyr Phe Gly Ile Leu Pro Pro Ala Ser Arg

            260                 265                 270

Glu Glu Leu Val Asn Gln Phe Ile Ala Leu Pro Ser Asn Asp Leu Ile

        275                 280                 285

Asn Val Arg Ser Ser Thr Phe His Tyr Lys Ser Asn Val Leu Leu Ile

    290                 295                 300

Gly Asp Ala Ala His Ala Thr Ala Pro Phe Leu Gly Gln Gly Met Asn

305                 310                 315                 320

Met Ala Leu Glu Asp Val Tyr Val Phe Ile Thr Leu Leu Glu Lys His

                325                 330                 335

Arg Asp Asp Leu Gly Leu Val Leu Ser Glu Phe Thr Gly Gln Arg Lys

            340                 345                 350

Val Gln Ala Asp Ala Met Gln Asp Met Ala Ile Ala Asn Tyr Glu Met

        355                 360                 365

Leu Ser Asn Pro Asn Phe Ile Phe Phe Leu Gln Thr Arg Tyr Thr Arg

    370                 375                 380

Tyr Met His Lys Lys Phe Pro Ser Val Tyr Pro Pro Asp Met Ala Glu

385                 390                 395                 400

Lys Leu Tyr Phe Thr Ser Val Pro Tyr Asp Val Leu Gln Gln Ile Gln

                405                 410                 415

Lys Lys Gln Asn Val Trp Tyr Lys Leu Gly Arg Val Asn

            420                 425

<210>5

<211>372

<212>PRT

<213>杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2 CGMCC 2056

<400>5

Met Lys Ile Leu Val Ile Gly Ala Gly Pro Ala Gly Leu Ile Phe Ala

1               5                   10                  15

Ser Gln Met Lys Gln Ala Gln Pro Ala Trp Asp Ile Ser Val Ala Glu

            20                  25                  30

Lys Asn Thr Gln Glu Glu Val Leu Gly Trp Gly Val Val Leu Pro Gly

        35                  40                  45

Arg Pro Pro Arg His Pro Ala Asn Pro Leu Ser Tyr Leu Glu Gln Pro

    50                  55                  60

Glu Leu Leu Asn Pro Gln Phe Leu Glu Glu Phe Lys Leu Val His His

65                  70                   75                 80

Asp Gln Pro Asn Leu Met Ser Thr Gly Val Thr Leu Cys Gly Val Gly

                85                   90                 95

Arg Gln Val Leu Val Gln Ala Leu Arg Ala Lys Cys Val Ala Ala Gly

            100                 105                 110

Ile Thr Val Ser Tyr Glu Thr Pro Leu Ala Ser Val Ala Gln Leu Glu

        115                 120                 125

Ala Glu Tyr Asp Leu Val Val Val Ser Asn Gly Ile Asn His Lys Ser

    130                 135                 140

Leu Glu Leu Pro Pro Ala Leu Ala Ala Gln Val Glu Phe Gly Lys Asn

145                 150                 155                 160

Lys Tyr Ile Trp Tyr Gly Thr Thr Gln Leu Phe Asp Gln Met Asn Leu

                165                 170                 175

Val Phe Arg Glu Asn Ser Asn Gly Val Phe Ala Gly His Ala Tyr Lys

            180                 185                 190

Tyr Ser Asp Thr Met Ser Thr Phe Ile Val Glu Cys Ser Glu Glu Thr

        195                 200                 205

Tyr Ala Lys Ala Glu Leu Glu Phe Arg Ser Glu Arg Asp Ala Ala Ala

    210                 215                 220

Tyr Ile Ala Lys Thr Phe Ala Pro Glu Leu Gly Glu His Arg Leu Val

225                 230                 235                 240

Ser Gln Pro Gly Gln Gly Trp Arg Asn Phe Met Thr Leu Ser Arg Glu

                245                 250                 255

Val Ala Ser Asp Gly Lys Phe Val Leu Ile Gly Asp Ala Leu Gln Ser

            260                 265                 270

Gly His Phe Ser Ile Gly His Gly Thr Thr Met Ala Val Val Val Ala

        275                 280                 285

Gln Leu Leu Val Lys Thr Leu Ser Ala Glu Ala Gly Thr Ala Ala Ala

    290                 295                 300

Leu Ala Ser Phe Asn Ala Arg Ala Leu Pro Leu Val Gln Leu Phe Lys

305                 310                 315                 320

Glu His Ala Asp Ala Ser Arg Leu Trp Phe Glu Thr Val Ser Glu Arg

                325                 330                335

Val Gly Leu Gly Asn Ala Glu Leu Thr Ala Ser Phe Asp Ala Arg Arg

            340                 345                 350

Asn His Leu Pro Pro Leu Gln Asp Ala Leu Met Ala Ser Leu Gly Tyr

        355                 360                 365

Ala Leu Gly Arg

    370

<210>6

<211>191

<212>PRT

<213>杜擀氏菌属(Duganella sp.)B2 CGMCC 2056

<400>6

Met Pro Pro His Ala Thr Pro Pro Leu Leu Pro Met Gln Trp Ser Ser

1               5                   10                  15

Ala Tyr Ile Ser Tyr Trp Ser Pro Met Arg Glu Asp Asp Glu Val Thr

            20                  25                  30

Ser Gly Tyr Cys Trp Phe Asp Tyr Ala Arg Asp Ile Cys Arg Ile Asp

        35                  40                  45

Gly Leu Phe Asn Pro Trp Ser Glu Lys Glu Thr Gly His Arg Leu Trp

    50                  55                  60

Met Ser Glu Ile Gly Asp Ala Arg Arg Gly Gln Ser Arg Lys Gln Lys

65                  70                  75                  80

Val Ala Tyr Ala Arg Glu Ala Glu Pro Ala Gly Val Lys Leu Tyr Glu

                85                  90                  95

Arg Ala Leu Ala Asp Glu Val Thr Pro Phe His Glu Leu Phe Leu Pro

            100                 105                 110

Gln Ala Ile Leu Ile Asp Gly Glu Ala Arg His Asp Gly Arg His Thr

        115                 120                 125

Val Leu Gly Gln Ala Ala Asp Ala Trp Val Val Glu Arg Pro Gly Lys

    130                 135                 140

Ala Ala Ser Val Phe Tyr Leu Gln Ala Gly Gly Asn His Leu Leu Arg

145                 150                 155                 160

Met Val Thr Gly Asn Asp Ala Gln His Gln Ser Val Arg Asp Phe Pro

                165                 170                 175

Asn Phe Leu Ala Gly Asp Ile Ala Ala Ser Val Phe Val Ser Glu

            180                 185                 190

<210>7

<211>367

<212>PRT

<213>大肠杆菌属大肠杆菌(Escherichia coli)

<400>7

Met Lys Ile Glu Glu Gly Lys Leu Val Ile Trp Ile Asn Gly Asp Lys

1               5                   10                  15

Gly Tyr Asn Gly Leu Ala Glu Val Gly Lys Lys Phe Glu Lys Asp Thr

            20                  25                  30

Gly Ile Lys Val Thr Val Glu His Pro Asp Lys Leu Glu Glu Lys Phe

        35                  40                  45

Pro Gln Val Ala Ala Thr Gly Asp Gly Pro Asp Ile Ile Phe Trp Ala

    50                  55                  60

His Asp Arg Phe Gly Gly Tyr Ala Gln Ser Gly Leu Leu Ala Glu Ile

65                  70                  75                  80

Thr Pro Asp Lys Ala Phe Gln Asp Lys Leu Tyr Pro Phe Thr Trp Asp

                85                  90                  95

Ala Val Arg Tyr Asn Gly Lys Leu Ile Ala Tyr Pro Ile Ala Val Glu

            100                 105                 110

Ala Leu Ser Leu Ile Tyr Asn Lys Asp Leu Leu Pro Asn Pro Pro Lys

        115                 120                 125

Thr Trp Glu Glu Ile Pro Ala Leu Asp Lys Glu Leu Lys Ala Lys Gly

    130                 135                 140

Lys Ser Ala Leu Met Phe Asn Leu Gln Glu Pro Tyr Phe Thr Trp Pro

145                 150                 155                 160

Leu Ile Ala Ala Asp Gly Gly Tyr Ala Phe Lys Tyr Glu Asn Gly Lys

                165                 170                 175

Tyr Asp Ile Lys Asp Val Gly Val Asp Asn Ala Gly Ala Lys Ala Gly

            180                 185                 190

Leu Thr Phe Leu Val Asp Leu Ile Lys Asn Lys His Met Asn Ala Asp

        195                 200                 205

Thr Asp Tyr Ser Ile Ala Glu Ala Ala Phe Asn Lys Gly Glu Thr Ala

    210                 215                 220

Met Thr Ile Asn Gly Pro Trp Ala Trp Ser Asn Ile Asp Thr Ser Lys

225                 230                 235                 240

Val Asn Tyr Gly Val Thr Val Leu Pro Thr Phe Lys Gly Gln Pro Ser

                245                 250                 255

Lys Pro Phe Val Gly Val Leu Ser Ala Gly Ile Asn Ala Ala Ser Pro

            260                 265                 270

Asn Lys Glu Leu Ala Lys Glu Phe Leu Glu Asn Tyr Leu Leu Thr Asp

        275                 280                 285

Glu Gly Leu Glu Ala Val Asn Lys Asp Lys Pro Leu Gly Ala Val Ala

    290                 295                 300

Leu Lys Ser Tyr Glu Glu Glu Leu Ala Lys Asp Pro Arg Ile Ala Ala

305                 310                 315                 320

Thr Met Glu Asn Ala Gln Lys Gly Glu Ile Met Pro Asn Ile Pro Gln

                325                 330                 335

Met Ser Ala Phe Trp Tyr Ala Val Arg Thr Ala Val Ile Asn Ala Ala

            340                 345                 350

Ser Gly Arg Gln Thr Val Asp Glu Ala Leu Lys Asp Ala Gln Thr

        355                 360                 365

Claims (9)

1、一种紫色杆菌素合成相关蛋白质系统，是由如下1)至5)中五种蛋白质组成的：

1)其氨基酸序列为序列表中的序列2或在序列表中序列2所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与紫色杆菌素合成相关的由序列2限定的蛋白质衍生的蛋白质；

2)其氨基酸序列为序列表中的序列3或在序列表中序列3所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与紫色杆菌素合成相关的由序列3限定的蛋白质衍生的蛋白质；

3)其氨基酸序列为序列表中的序列4或在序列表中序列4所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与紫色杆菌素合成相关的由序列4限定的蛋白质衍生的蛋白质；

4)其氨基酸序列为序列表中的序列5或在序列表中序列5所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与紫色杆菌素合成相关的由序列5限定的蛋白质衍生的蛋白质；

5)其氨基酸序列为序列表中的序列6或在序列表中序列6所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与紫色杆菌素合成相关的由序列6限定的蛋白质衍生的蛋白质。

2、编码权利要求1所述蛋白系统的基因簇。

3、根据权利要求2所述的基因簇，其特征在于：所述基因簇为如下1)或2)或3)的DNA分子：

1)其核苷酸序列是序列表中序列1；

2)在严格条件下可与序列表中序列1限定的DNA序列杂交且编码紫色杆菌素合成相关蛋白系统的DNA分子；

3)与1)的基因具有90％以上的同源性，且编码紫色杆菌素合成相关蛋白系统的DNA分子。

4、含有权利要求2或3所述基因簇的重组表达载体。

5、根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体为在表达载体pET30a的多克隆位点插入权利要求2或3所述基因簇得到的重组载体。

6、扩增权利要求2或3所述基因簇全长或任一片段的引物对。

7、含有权利要求2或3所述基因簇的转基因细胞系或重组菌。

8、一种生产紫色杆菌素的方法，是将权利要求2或3所述的基因簇转入大肠杆菌中获得重组大肠杆菌，培养所述重组大肠杆菌生产紫色杆菌素。

9、根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为BL21-CodonPlus(DE3)-RIL。

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