CN101627968A - 一种前列地尔注射液的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种前列地尔注射液的制备方法。前列地尔注射液由前列地尔，注射用油，乳化剂，稳定剂等张剂，pH调节剂和注射用水制成。所制得的产品比市售品质量标准有显著的提高，增加了临床用药的安全性。

Description

一种前列地尔注射液的制备方法

技术领域

本发明涉及一种前列地尔注射液的制备方法。

背景技术

前列地尔，又称前列腺素E₁(PGE₁)，是一种活性极强的生理活性物质，具有抑制血小板聚集、血栓素A₂生成、动脉粥样脂质斑块形成及免疫复合物的作用，并能扩张外周和冠脉血管的药理作用，主要用于治疗慢性动脉闭塞症(血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化症等)引起的四肢溃疡及微小血管循环障碍引起的四肢静息疼痛，改善心脑血管微循环障碍以及慢性肝炎的辅助治疗。目前上市的品种为前列地尔注射液，其性状为一种白色乳状液体。已上市的前列地尔注射液中降解产物前列腺素A₁的含量限度为3μg/ml，占主药含量的60％。

前列腺素A₁的含量，溶血磷脂的含量与处方和制备工艺都有很大关系，现有技术中，主要通过改变产品的剂型或增加辅料种类(如助乳化剂、增溶剂、抗氧化剂)来改善产品的质量，如专利申请200910058187.x公开了一种稳定的前列地尔注射液及其制备方法，处方中含有前列地尔，注射用油，卵磷脂，泊洛沙姆(助乳化剂)，甘油等。专利申请200310102253.1公开了一种含有前列地尔的注射剂及生产工艺，处方包括前列地尔，无水乙醇，聚乙二醇，二甲基甲酰胺，2-羟丙基-β-环糊精(增溶剂)、半胱氨酸。专利申请200610067746.x公开了一种前列地尔小输液及其制备方法，处方含有前列地尔，乳化剂，甘油三酯类化合物，渗透压调节剂，稳定剂，抗氧剂，pH调节剂。专利申请200710011921.8公开了一种静脉输液用前列地尔乳剂及制备方法，其处方含有前列地尔，注射用油，乳化剂，稳定剂，等张剂，抗氧剂，pH调节剂。专利申请200610034259.3公开了一种前列地尔纳米乳注射剂及其制备方法，其辅料包括注射用油，亲水性乳化剂，亲油性乳化剂，等张剂，稳定剂，属于四元体系，属于热力学稳定体系，已本质上不同于乳剂。专利申请200910010165.6公开了一种荷电性的前列腺素E₁脂微球注射液及其制备方法，其所用辅料为注射用油，乳化剂，助乳化剂，等渗调节剂，抗氧剂，和pH调节剂，其制备的脂微球注射液与上市的前列地尔注射液具有本质的不同，具体主要在于两者载药方式完全不一致，已上市的前列地尔注射液中的药物主要包封于油性基质中，该发明的脂微球中的药物主要分布于油水界面中。因此，上述专利公开的处方与本发明的剂型有着本质上的不同，上述现有技术主要是通过调整处方来提高产品的质量，而且并未给出如下的技术启示：将其制备方法用于现有上市产品前列地尔注射液可以提高现有产品的质量。从注射剂安全性角度考虑，增加辅料的种类在提高制剂外在质量的同时，也增加了体内的安全性隐患。最好的方式，是在现有的剂型处方条件下，通过优化工艺参数来提高产品的质量。

注射剂的无菌工艺可分为两种：一种是采用终端灭菌的生产工艺流程，全过程可在万级生产条件下制备前列地尔注射液，经微孔滤膜过滤后，灌封，采用过度杀灭法或残存概率法灭菌，即得；另一种是采用非终端灭菌注射剂生产方法，包括过滤除菌和无菌操作。常规的过滤除菌是全过程可在有菌万级和局部百级生产条件下进行，产品的无菌度主要靠过滤及后续的无菌灌封控制步骤控制。为了更好的控制无菌条件，可将整个生产过程控制在无菌万级和局部百级生产条件下，通过多个点来控制产品的无菌度。

常规的过滤除菌过程中，不能通过的物质沉积后留在了滤材上，随着过滤的继续进行，压差会逐渐增大，通量明显降低，即大家俗称的“死端过滤”。而陶瓷膜则不同，陶瓷膜是错流过滤，又称切向流方式过滤。料液在压力驱动下进入系统，并在膜管内高速流动，方向不是压向膜的表面，而是切向流过膜面形成所谓的切向流。小分子小粒径物质透过膜，大分子物质或大颗粒被膜截留，从而达到分离、浓缩、纯化的目的。其与传统工艺相比，可提高产品收率，缩短工时。近年来多用于中药口服液注射液的除杂，除菌以及热源的去除。尚未见将其应用于乳剂、亚微乳，微乳等特殊剂型的过滤。

本发明中的前列地尔注射液剂型为亚微乳，常规注射剂采用的无菌过滤器较难完成前列地尔注射液的除菌过滤，因为滤器表面会粘附一层极稠的粘液(乳剂的局部浓缩液)，导致未滤乳剂无法到达滤膜表面，从而是除菌过滤无法完成。

发明内容

本发明提供一种前列地尔注射液的制备方法，由前列地尔，注射用油，乳化剂，稳定剂，等张剂，pH调节剂和注射用水制成，其特征在于，包括以下步骤：

(1)水相的制备：将等张剂加入水中溶解，加热至55～70℃，备用；

(2)油相的制备：将注射用油加热至55～70℃，分别加入乳化剂，稳定剂溶解，加入前列地尔，搅拌使其溶解；

(3)初乳的制备：将步骤(2)油相加入步骤(1)水相中，温度55～70℃，高速剪切分散，形成初乳；

(4)pH值调节：将步骤(3)初乳快速降温至15～30℃，调节pH值4.0～6.0；

(5)高压匀化：将步骤(4)初乳经微射流仪高压匀化，温度控制15～30℃；

(6)无菌过滤：将步骤(5)制得乳剂经0.45μm无机陶瓷膜初滤，然后经0.22μm囊式过滤器过滤除菌，无菌灌封，即得前列地尔注射液；

(7)步骤(1)至(6)均在氮气保护下操作，全过程采用无菌万级和局部百级非终端灭菌注射剂的生产工艺流程。

步骤(3)所述的高速剪切分散时间为15～60分钟，剪切速度为3000～10000rpm。

步骤(5)所述的高压匀化方法为，压力600～2000bar，高压匀化3～6次。

本发明所述的注射用油为精制大豆油、花生油、红花油、中链甘油单酯、中链甘油双酯、中链甘油三酯、棉籽油、橄榄油、椰子油、油酸乙酯、乙酰化单甘油酯、丙二醇双酯、亚油酸甘油酯、麻油聚乙二醇月桂酸甘油酯中的一种或一种以上。

本发明所述的乳化剂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂，其中磷脂酰胆碱的含量为85％以上。

本发明所述的稳定剂为油酸、胆酸、脱氧胆酸中的一种或一种以上。

本发明所述的等张剂为甘油、甘露醇、山梨醇、葡萄糖中的一种或一种以上。

本发明所述的pH调节剂为氢氧化钠，盐酸，柠檬酸，柠檬酸钠，醋酸，醋酸钠中的一种。

所述的囊式过滤器材质为亲水性微孔滤膜。所述的亲水性微孔滤膜为聚四氟乙烯，醋酸纤维素，硝酸纤维素，混合纤维素，活性炭纤维素，玻璃纤维素，聚偏氟乙烯膜、聚丙烯膜，聚醚砜膜中的一种。

本发明首次将陶瓷膜过滤技术应用于前列地尔注射液的初滤，惊奇的发现，与常规的微孔滤膜的初滤方式相比，经陶瓷膜过滤，不仅使得药液的外观得以很大的改善，而且也加快了后续过滤除菌的速度，缩短了整个工序的操作时间，提高了产品的收率，更重要的是对降低降解产物的含量也有明显的效果，可以更好的保证产品的质量均一稳定。

本发明的生产条件是在全程无菌万级和局部百级的条件下，全过程控制产品的无菌度，更好的保证产品的质量。

综上所述，本发明通过优化工艺参数，采用陶瓷膜过滤技术以及全过程控制产品的无菌度，取得了预料不到的技术效果，其不仅改善了产品的外观，缩短了过滤工序的时间，而且显著降低了降解杂质和溶血磷脂含量，提高了产品的质量标准，同时产品的稳定性也由现在的12个月延长到18个月，临床验证结果表明，本发明的产品在保证疗效的基础上，明显降低了不良反应的发生率，提高了临床用药的安全性。

具体实施例

实施例1：

为方便考察工艺，本发明拟定处方如下，但本发明的工艺不仅限于适应该具体处方。

前列地尔注射液处方

前列地尔(PGE₁)                    5mg

精制大豆油                        100g

蛋黄卵磷脂                      12g

油酸                            1.8g

甘油                            22.5g

氢氧化钠                        适量

                                          

注射用水加至                    1000ml

工艺过程：(1)水相的制备：将甘油加入水中溶解，加热至55～70℃，备用；

(2)油相的制备：将精制大豆油加热至55～70℃，分别加入蛋黄卵磷脂，油酸溶解，加入前列地尔，搅拌使其溶解；

(3)初乳的制备：将步骤(2)油相加入步骤(1)水相中，温度55～70℃，高速剪切分散，剪切速度8000rpm，时间15分钟，形成初乳；

(4)pH值调节：将步骤(3)初乳快速降温至15～30℃，用氢氧化钠调节pH值4.0～6.0；

(5)高压匀化：将步骤(4)初乳经微射流仪高压匀化3～6次，压力600～2000bar，温度控制15～30℃；

(6)无菌过滤：将步骤(5)制得乳剂经0.45μm无机陶瓷膜初滤，然后经0.22μm囊式过滤器过滤除菌，无菌灌封，即得前列地尔注射液；

(7)步骤(1)至(6)均在氮气保护下操作，全过程采用无菌万级和局部百级非终端灭菌注射剂的生产工艺流程。

实施例2：初乳的制备温度

分别设置三个温度考察点，在其他工艺条件相同的情况下，以乳化效果、前列腺素E₁(PGE₁)和降解产物前列腺素A₁(PGA₁)的含量为指标，分别在50、55、70、90℃进行考察，结果见表1。

表1乳化剂分散温度的考察(制成100mL)

试验结果表明，50℃的乳化效果较差，有明显的油滴，不适合进行下一步的高压匀化；含量测定结果表明，过高的分散温度不利于药物的稳定性，综合考虑，选择初乳化温度55～70℃可以满足产品的质量要求。

实施例3：高压乳匀温度的选择

取实施例2中55℃条件下制备的初乳，考察了在两种温度范围值高压匀化后的成品，以平均粒径、前列腺素E₁和降解产物前列腺素A₁的含量为指标。结果见下表2。

粒径分布测定方法：取样品，用纯化水(经0.22μm微孔滤膜滤过)，分别稀释至5000倍，混匀，作为供试品溶液，用动态激光散射粒径仪测定。

表2高压乳匀分散温度的考察(制成100mL)

结果表明，与25℃条件相比，高压匀化温度在65℃能得到粒径更小且分布均匀的脂肪乳液，但同时造成药物含量的下降和降解产物A₁的升高。因此，本发明最终选择较低温条件下(15～30℃)进行高压匀化。温度低于15℃时，对药物含量和讲解产物没有进一步明显的改善，而且使得药液粘度增加，粒径分布不均匀性增加，同时增加了仪器设备的负荷。

实施例4：乳化工艺时的压力与匀化次数的关系

用纳米超高压匀质机将粗乳液在一定压力、匀化次数条件下进行精乳化时，压力大，匀化次数就少，但压力超过一定值时，就可能发生破乳。因此在保证乳剂稳定的前提下，选择一定的工作压力和匀化次数，可以提高工作效率和降低仪器损耗和成本。制备本品所用的纳米超高压匀质机最大工作压力可达2000bar，试验考察过程中，发现工作压力约为1000bar时，仅匀化3次就可达到所需的粒径大小，且工艺重现性良好，质量稳定。先低压600～800bar匀化2次；然后高压1200～1400bar匀化2次。或者先低压800～1000bar匀化1次；然后高压1300～1500bar匀化2次。都可以制备质量稳定的产品。

实施例5：pH值的选择

脂质纳米球稳定性下降的主要表现有可逆性絮凝和不可逆性合并。当脂质纳米球表面荷负电时，酸性药物能增大表面电荷，有助于提高稳定性。本品使用的磷脂为表面荷负电的磷脂酰胆碱，前列腺素E₁为氧代环戊烷庚酸，是弱酸性药物，其降解受酸催化；当本品的脂质纳米球液滴带负性荷电时，在pH较低的介质中，H⁺富集于油/水界面，不利于前列腺素E₁的稳定。因此，用氢氧化钠调节pH值为4.0～6.0之间。经稳定性考察，本品的各项指标均符合规定。

实施例6：本发明产品与市售品的质量比较

以产品外观、pH值、乳粒、溶血磷脂、PGA₁、PGE₁含量测定等项目为指标，与市售的前列地尔注射液进行比较，结果见表3

表3产品质量比较

产品比较结果表明，本发明产品降解产物PGA₁低于市售品的三分之一，本发明产品的质量标准制定降解产物的限度为30％，仅为为市售产品质量标准限度的一半。溶血磷脂的含量测定结果表明，本发明产品溶血磷脂含量限度制定为5％，市售品溶血磷脂含量限度为7.5％。并经稳定性试验考察结果表明，本品在与市售品在同样的条件下放置，本品放置18个月各项指标均符合要求，本品有效期可达18个月，市售品的有效期仅为12个月。

实施例7产品的初滤方式比较

取本发明的高压乳匀后乳液，分别采用传统微孔滤膜过滤(混合纤维素材质，孔径0.45μm)和无机陶瓷膜过滤(孔径0.45μm)，结果，后者的过滤时间仅是前者的1/2，产品收率比前者提高了近10％，后者所得滤液的外观明显优于前者。传统微孔滤膜过滤后，降解产物与过滤前相比，增加了32.2％，而无机陶瓷滤膜过滤后降解产物与过滤前相比增加了仅7.1％，具有明显差异。

实施例8产品的无菌度比较

其他条件不变，分别按终端灭菌、有菌万级和局部百级、无菌万级和局部百级制备前列地尔注射液，进行无菌度检测。三者无菌度均合格，但采用终端灭菌的前列地尔注射液导致药物的含量下降，降解产物升高超出标准限度。无菌万级和局部百级生产方式，采用的是全过程的无菌控制(多点控制)，与有菌万级和局部百级方式(单点控制)相比，安全性保证更高。

实施例9

前列地尔                                  5mg

精制大豆油                                50g

中链甘油三酯                            50g

蛋黄卵磷脂                              12g

油酸                                    1.8g

甘油                                    22.5g

氢氧化钠                                适量

                                                 

注射用水加至                            1000ml

工艺过程：(1)水相的制备：将甘油加入水中溶解，加热至60℃，备用；

(2)油相的制备：将精制大豆油，中链甘油三酯混合后，加热至60℃，分别加入蛋黄卵磷脂(磷脂酰胆碱含量98％以上)，油酸溶解，加入前列地尔，搅拌使其溶解；

(3)初乳的制备：将步骤(2)油相加入步骤(1)水相中，温度60℃，高速剪切分散，剪切速度3500rpm，时间60分钟，形成初乳；

(4)pH值调节：将步骤(3)初乳快速降温至20℃，用氢氧化钠调节pH值4.2；

(5)高压匀化：将步骤(4)初乳经微射流仪高压匀化3次，压力1000～1500bar，温度控制20～25℃；

(6)无菌过滤：将步骤(5)制得乳剂经0.45μm无机陶瓷膜初滤，然后经0.22μm囊式过滤器(聚四氟乙烯材质)过滤除菌，无菌灌封，即得前列地尔注射液；

(7)步骤(1)至(6)均在氮气保护下操作，全过程采用无菌万级和局部百级非终端灭菌注射剂的生产工艺流程。

结果，所制备的乳剂各项指标均符合规定。

实施例10

前列地尔                                5mg

棉籽油                                  100g

大豆卵磷脂                              15g

油酸                                    1.8g

甘油                                    22.5g

氢氧化钠                                适量

                                                 

注射用水加至                            1000ml

工艺过程：(1)水相的制备：将甘油加入水中溶解，加热至65℃，备用；

(2)油相的制备：将棉籽油加热至65℃，分别加入大豆卵磷脂(磷脂酰胆碱含量85％以上)，油酸溶解，加入前列地尔，搅拌使其溶解；

(3)初乳的制备：将步骤(2)油相加入步骤(1)水相中，温度65℃，高速剪切分散，剪切速度6000rpm，时间30分钟，形成初乳；

(4)pH值调节：将步骤(3)初乳快速降温至15℃，用氢氧化钠调节pH值5.8；

(5)高压匀化：将步骤(4)初乳经微射流仪高压匀化，低压600～1000bar2次，高压1200～1500bar2次，温度控制15～20℃；

(6)无菌过滤：将步骤(5)制得乳剂经0.45μm无机陶瓷膜初滤，然后经0.22μm囊式过滤器(醋酸纤维素材质)过滤除菌，无菌灌封，即得前列地尔注射液；

(7)步骤(1)至(6)均在氮气保护下操作，全过程采用无菌万级和局部百级非终端灭菌注射剂的生产工艺流程。

结果，所制备的乳剂各项指标均符合规定。

实施例11产品的临床评价

以下肢慢性动脉闭塞症为适应症，以市售的前列地尔注射液为阳性平行对照，将本发明的制备的产品进行了的随机双盲、多中心临床有效性及安全性观察，217例患者入组，本发明产品组108例，市售品对照组109例。给药方法为前列地尔注射液2ml(10μg)缓慢静脉推注10～20分钟，每日一次，连续给药2周。主要评价指标为踝肱比(ABI)，间歇性跛行，疼痛，麻木感，缺血性溃疡和溃疡面积。结果表明，市售品和本发明制备的产品总体疗效临床有效率分别为62.55％(其中显效38.42％，良好24.13％)和60.95％(其中显效37.14％，良好23.81％)，经CMH-x2检验差别亦无统计学意义(P＞0.5)，两组疗效等同。市售品和本发明制备的产品患者不良事件发生率分别为11.11％和7.34％。

Claims (10)

1、一种前列地尔注射液的制备方法，由前列地尔，注射用油，乳化剂，稳定剂，等张剂，pH调节剂和注射用水制成，其特征在于，包括以下步骤：

(1)水相的制备：将等张剂加入水中溶解，加热至55～70℃，备用；

(2)油相的制备：将注射用油加热至55～70℃，分别加入乳化剂，稳定剂溶解，加入前列地尔，搅拌使其溶解；

(3)初乳的制备：将步骤(2)油相加入步骤(1)水相中，温度55～70℃，高速剪切分散，形成初乳；

(4)pH值调节：将步骤(3)初乳快速降温至15～30℃，调节pH值4.0～6.0；

(5)高压匀化：将步骤(4)初乳经微射流仪高压匀化，温度控制15～30℃；

(6)无菌过滤：将步骤(5)制得乳剂经0.45μm无机陶瓷膜初滤，然后经0.22μm囊式过滤器过滤除菌，无菌灌封，即得前列地尔注射液；

(7)步骤(1)至(6)均在氮气保护下操作，全过程采用无菌万级和局部百级非终端灭菌注射剂的生产工艺流程。

2、根据权利要求1所述的前列地尔注射液的制备方法，其特征在于，所述的高速剪切分散时间为15～60分钟，剪切速度为3000～10000rpm。

3、根据权利要求1所述的前列地尔注射液的制备方法，其特征在于，所述的高压匀化压力为600～2000bar，匀化次数3～6次。

4、根据权利要求1～3任一所述的前列地尔注射液的制备方法，其特征在于，所述的注射用油为精制大豆油、花生油、红花油、中链甘油单酯、中链甘油双酯、中链甘油三酯、棉籽油、橄榄油、椰子油、油酸乙酯、乙酰化单甘油酯、丙二醇双酯、亚油酸甘油酯、麻油聚乙二醇月桂酸甘油酯中的一种或一种以上。

5、根据权利要求1～3任一所述的前列地尔注射液的制备方法，其特征在于，所述的乳化剂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂，其中磷脂酰胆碱的含量为85％以上。

6、根据权利要求1～3任一所述的前列地尔注射液的制备方法，其特征在于，所述的稳定剂为油酸、胆酸、脱氧胆酸中的一种或一种以上。

7、根据权利要求1～3任一所述的前列地尔注射液的制备方法，其特征在于，所述的等张剂为甘油、甘露醇、山梨醇、葡萄糖中的一种或一种以上。

8、根据权利要求1～3任一所述的前列地尔注射液的制备方法，其特征在于，所述的pH调节剂为氢氧化钠，盐酸，柠檬酸，柠檬酸钠，醋酸，醋酸钠中的一种。

9、根据权利要求1～3任一所述的前列地尔注射液的制备方法，其特征在于，所述的囊式过滤器材质为亲水性微孔滤膜。

10、根据权利要求9所述的前列地尔注射液的制备方法，其特征在于，所述的亲水性微孔滤膜为聚四氟乙烯，醋酸纤维素，硝酸纤维素，混合纤维素，活性炭纤维素，玻璃纤维素，聚偏氟乙烯膜、聚丙烯膜，聚醚砜膜中的一种。