CN104825404B

CN104825404B - 一种灯盏花素长效冻干微乳及其制备方法

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Publication number: CN104825404B
Application number: CN201510223077.XA
Authority: CN
Inventors: 李海刚
Original assignee: Linyi University
Current assignee: Linyi University
Priority date: 2015-05-05
Filing date: 2015-05-05
Publication date: 2017-08-22
Anticipated expiration: 2035-05-05
Also published as: CN104825404A

Abstract

本发明是灯盏花素的长效冻干微乳及其制备方法。其成分包括灯盏花素、磷脂、聚乙二醇‑二硬脂酰乙醇胺（PEG2000‑DSPE）、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯(HS15)、聚乙二醇400、维生素E、中链脂肪酸甘油酯和支持剂。在所述的灯盏花素长效冻干微乳成分中，HS15与PEG400的重量比为1:2～2:1，优选为2:1；磷脂与中链脂肪酸甘油酯的重量比为0.7:10～2:10，优选为1:10；支持剂与中链脂肪酸甘油酯的比例为2:1～6.06:1；PEG2000‑DSPE与中链脂肪酸甘油酯的重量比为0.03:1～0.1:1，优选为0.05:1。

Description

一种灯盏花素长效冻干微乳及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，确切地说它是一种灯盏花素长效冻干微乳及其制备方法。

背景技术

心血管疾病是目前发病率和死亡率较高疾病之一，严重威胁着人类的健康，对治疗心血管疾病的药物研究开发成为了药学工作者关注的热点之一。灯盏花是菊科飞蓬属(ErigeronL.)植物短葶飞蓬 Erigeron breviscapus (Vant.)Hand.-Mazz.的干燥全草，为云南民间常用草药。据《滇南本草》记载，灯盏花具有散寒解表，驱风除湿，活络止痛之功效。灯盏花素是从灯盏花中提取的黄酮类有效成分，主要成分为灯盏乙素、少量灯盏甲素及其它黄酮苷类成分，系治疗心脑血管、心绞痛等系列疾病的有效药物，在临床上主要治疗脑血栓、脑梗塞、中风后瘫痪、冠心病、心绞痛等疾病，疗效确切。

灯盏花素口服生物利用度较低，据报道，Beagle 犬随机口服灯盏乙素，口服绝对生物利用度仅( 0.40±0.19) %，几乎不吸收。灯盏花素中主要成分灯盏乙素水溶性差，分子中具有酚羟基，显酸性，目前灯盏花素注射液一般是在偏碱性条件下配制而成，经高压灭菌时，药物极易被氧化破坏，临床用药时，将灯盏花素注射液（相当于灯盏花素10～20mg）与100ml 5%葡萄糖注射液混合均匀后静脉滴注给药，然而在此过程中容易产生沉淀等问题给临床用药带来了不安全因素，而且，灯盏花素静注半衰期短，为( 52 ±29) min，灯盏花素主要用于心脑血管领域慢性病的治疗，需要长期用药，长期频繁给药都会带来病人依从性差的问题。因此，寻找合适的制剂载体，增加药物溶解度，延长药物体内循环时间，减少给药次数，意义重大。

发明内容

本发明的目的是提供一种灯盏花素长效冻干微乳及其制备方法，以改善灯盏花素注射液临床用药时易产生沉淀、变色等问题，同时延长药物在体内的循环时间，减少给药次数，提高患者顺应性及用药安全性。

为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：一种灯盏花素长效冻干微乳，其成分包括灯盏花素、磷脂、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺（PEG2000-DSPE）、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯(HS15)、聚乙二醇400、维生素E、中链脂肪酸甘油酯和支持剂。

在所述灯盏花素长效冻干微乳的成分中，HS15与PEG400的重量比为1:2～2:1，优选为2:1；磷脂与中链脂肪酸甘油酯的重量比为0.7:10～2:10，优选为1:10；支持剂与中链脂肪酸甘油酯的比例为2:1～6.06:1；PEG2000-DSPE与中链脂肪酸甘油酯的重量比为0.03:1～0.1:1，优选为0.05:1。

所述磷脂可以采用天然磷脂，也可由采用氢化大豆磷脂和合成磷脂。

所述支持剂可以为山梨醇、甘露醇、蔗糖、氯化钠、水溶性淀粉、右旋糖苷、甜菊糖、葡萄糖、乳糖中的一种或几种的混合物。

一种灯盏花素长效冻干微乳的制备方法，包括下述步骤：（1）将灯盏花素、大豆磷脂及聚聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺加少量乙醇溶解，与中链脂肪酸甘油酯混合均匀，40℃旋转蒸发除去乙醇作为油相Ⅰ。（2）将乙二醇十二羟基硬脂酸酯、聚乙二醇400于40℃水浴混合均匀，作为油相Ⅱ。（3）油相Ⅰ与油相Ⅱ在40℃水浴条件下混合均匀，在搅拌条件下加预热至40℃的注射用水使形成灯盏花素长效乳液，破碎、分散，加支持剂使溶解，注射用水定容，0.22µm滤膜除菌过滤，灌装，冷冻干燥。

在一种灯盏花素长效冻干微乳的制备方法中，HS15与PEG400的重量比为1:2～2:1，优选为2:1；磷脂与中链脂肪酸甘油酯的重量比为0.7:10～2:10，优选为1:10；支持剂与中链脂肪酸甘油酯的比例为2:1～6.06:1；PEG2000-DSPE与中链脂肪酸甘油酯的重量比为0.03:1～0.1:1，优选为0.05:1。

所述破碎分散方法可以通过机械搅拌、均质机、探头式超声波破碎仪、乳匀机、挤出仪、纳米机、匀浆机、高压微射流等机械设备来实现。

对本发明灯盏花素长效冻干微乳质量进行监测，结果表明，对本发明灯盏花素长效冻干微乳经水化形成微乳混悬液后，粒径分布均一，包封率高，药物体外释放缓慢，大鼠体内经时过程研究表明，与灯盏花素普通注射液相比，本发明灯盏花素长效冻干微乳体内循环时间明显延长。

本发明由于采取以上技术方案，其具有以下优点：（1）安全性好。处方中所用辅料均具有良好的生物相容性：磷脂属于生物膜组成成分，聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯（Solutol®HS15）生物相容性好，已被德国药典收载用于注射用乳化剂，中链脂肪酸甘油酯用于注射给药已有文献报道，安全性高，PEG400属于注射用溶剂。本项目临床使用前遇到氯化钠注射液可自发形成灯盏花素缓释微乳，药物被溶解于中链脂肪酸甘油酯中，通过乳化剂的乳化作用分散在水相中，避免了灯盏花素普通注射液临床用药时析出沉淀等安全性问题；（2）药物释放缓慢、体内循环时间延长。本发明灯盏花素长效冻干微乳经水化形成微乳混悬液后，磷脂与灯盏花素相互结合，共同溶解于油相中，磷脂与药物的亲和力预计可以减慢药物从微乳中的释放；本项目中采用聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺（PEG2000-DSPE）作为修饰材料，在灯盏花素微乳表面形成一包衣层（如图1所示），避免网状内皮细胞对微乳的摄取，延长其在体内循环的时间；（3）稳定性好。本发明灯盏花素长效冻干微乳是将灯盏花素长效微乳混悬液冷冻干燥而得，避免了微乳混悬液长期贮存易发生的微生物污染、辅料的氧化水解等问题。

附图说明

图1 是灯盏花素长效微乳结构示意图。

图2 是实施例1灯盏花素长效微乳粒径分布图。

图3 是实施例1灯盏花素长效微乳在磷酸盐缓冲液中的累积释药曲线（n=3）。

图4 是实施例1灯盏花素长效微乳及灯盏花素普通注射液在大鼠体内的经时曲线（n=6）。

图1 中“1”代表PEG2000-DSPE，“2”代表乳化剂，“3”代表药物分子，“4”代表油相。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

实施例1 一种灯盏花素长效冻干微乳的制备

（1）将灯盏花素2.0g、大豆磷脂1.65g、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺0.825g、加少量乙醇溶解，与中链脂肪酸甘油酯16.5g混合均匀，维生素E0.2g，40℃旋转蒸发除去乙醇作为油相Ⅰ。（2）将聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯6.0g、聚乙二醇400 3.0g于40℃水浴混合均匀，作为油相Ⅱ。（3）油相Ⅰ与油相Ⅱ在40℃水浴条件下高速搅拌混合均匀，在搅拌条件下加预热至40℃的注射用水500ml使形成灯盏花素长效乳液，高压均质机均质，加甘露醇60g使溶解，注射用水定容至1000ml，0.22µm滤膜除菌过滤，灌装，冷冻干燥。

对本实施例制备的灯盏花素长效冻干微乳剂注射液按照以下方法进行质量检测。

（1）色谱条件

色谱柱：kromasil C18柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇﹕乙腈﹕水﹕磷酸（40﹕10﹕50﹕0.1）；检测器：紫外检测器；检测波长：335nm；柱温：室温；流速：1ml/min；进样量：20μL。

（2）包封率测定

将灯盏花素长效冻干微乳加适量注射用水复溶得灯盏花素长效微乳混悬液，取等量的灯盏花素长效微乳混悬液两份，一份混悬液置于离心超滤管中（截留分子量10000）于3000r/min离心，收集离心滤出液，高效液相色谱法测定药物浓度C1，另一份用流动相溶解破乳，高效液相色谱法测定药物浓度C2，包封率按下式计算：包封率=1-（C1/C2）×100%。本实施例灯盏花素长效微乳包封率为95.3%。

（3）粒径分布

将灯盏花素长效冻干微乳加适量注射用水复溶得灯盏花素长效微乳混悬液，取混悬液适量用马尔文激光粒度仪测定粒度分布。结果表明：本实施例灯盏花素长效微乳平均粒径为72.3nm，粒径分布均一（如图2所示）。

（4）灯盏花素长效微乳体外释放度测定

将灯盏花素长效冻干微乳加适量注射用水复溶得灯盏花素长效微乳混悬液，取等量的灯盏花素长效微乳混悬液两份，一份混悬液适量置于透析袋中（截留分子量100000），透析袋两端扎紧置于释放介质中（Ph7.2磷酸盐缓冲液，含0.5%Vc及0.01%叠氮钠），37℃水浴条件下搅拌。分别于预定的时间取适量释放介质（同时补加等量的释放介质），高效液相色谱法测定不同时间释放介质中药物含量A1。另一份混悬液用流动相溶解破乳，测定总体药物含量A2。以下式计算不同时间药物释放度，绘制释放曲线（如图3所示），释放度%=(不同时间释放介质中药物含量A1/药物总体含量A2)×100%。

本实施例灯盏花素长效微乳缓慢、持续释药可达72h。

实施例2 一种灯盏花素长效冻干微乳的制备

（1）将灯盏花素2.0g、大豆磷脂3.3g、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺1.65g、加少量乙醇溶解，与中链脂肪酸甘油酯16.5g混合均匀，维生素E0.2g ，40℃旋转蒸发除去乙醇作为油相Ⅰ。（2）将聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯3.0g、聚乙二醇400 6.0g于40℃水浴混合均匀，作为油相Ⅱ。（3）油相Ⅰ与油相Ⅱ在40℃水浴条件下高速搅拌混合均匀，在搅拌条件下加预热至40℃的注射用水500ml使形成灯盏花素长效乳液，高压均质机均质，加乳糖100g使溶解，注射用水定容至1000ml，0.22µm滤膜除菌过滤，灌装，冷冻干燥。

按实施例1质量检测方法进行检测，本实施例灯盏花素长效微乳平均粒径82.5nm，包封率94.2%，药物可达72h缓慢释放。

实施例3 一种灯盏花素长效冻干微乳的制备

（1）将灯盏花素2.0g、大豆磷脂1.65g、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺0.825g、加少量乙醇溶解，与中链脂肪酸甘油酯16.5g混合均匀，维生素E0.2g，40℃旋转蒸发除去乙醇作为油相Ⅰ。（2）将聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯6.0g、聚乙二醇400 3.0g于40℃水浴混合均匀，作为油相Ⅱ。（3）油相Ⅰ与油相Ⅱ在40℃水浴条件下高速搅拌混合均匀，在搅拌条件下加预热至40℃的注射用水500ml使形成灯盏花素长效乳液，高压均质机均质，加乳糖20g及甘露醇20g使溶解，注射用水定容至1000ml，0.22µm滤膜除菌过滤，灌装，冷冻干燥。

按实施例1质量检测方法进行检测，本实施例灯盏花素长效微乳平均粒径85.3nm，包封率93.2%，药物可达72h缓慢释放。

实施例4 一种灯盏花素长效冻干微乳的制备

（1）将灯盏花素2.0g、蛋黄磷脂1.16g、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺0.495g、加少量乙醇溶解，与中链脂肪酸甘油酯16.5g混合均匀，维生素E0.2g ，40℃旋转蒸发除去乙醇作为油相Ⅰ。（2）将聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯6.0g、聚乙二醇400 3.0g于40℃水浴混合均匀，作为油相Ⅱ。（3）油相Ⅰ与油相Ⅱ在40℃水浴条件下高速搅拌混合均匀，在搅拌条件下加预热至40℃的注射用水500ml使形成灯盏花素长效乳液，探头超声波破碎，加甘露醇33g使溶解，注射用水定容至1000ml，0.22µm滤膜除菌过滤，灌装，冷冻干燥。

按实施例1质量检测方法进行检测，本实施例灯盏花素长效微乳平均粒径78.6nm，包封率96.2%，药物可达72h缓慢释放。

实施例5 灯盏花素长效冻干微乳大鼠体内的经时曲线

（1）灯盏花素普通注射液的配制

取灯盏花素原料，用pH6.8PBS缓冲液溶解（葡萄糖调节等渗）制得灯盏花素注射液，临用前0.22µm滤膜滤过。

（2）实验方法

将灯盏花素长效冻干微乳加适量生理盐水复溶得灯盏花素长效微乳混悬液，以灯盏花素普通注射液为对照，分别尾静脉注射灯盏花素普通注射液及灯盏花素长效微乳混悬液，给药剂量均为20mg/kg,于不同时间大鼠眼角静脉丛采血处理后测定药物浓度，绘制两组药物大鼠体内的经时曲线图。

实验结果表明，与灯盏花素普通注射液相比，灯盏花素长效微乳在大鼠体内的循环时间明显延长（如图4所示）。灯盏花素普通注射液在10h时，大鼠血液中的药物浓度已经几乎代谢完全，而灯盏花素长效微乳在60h时血液中仍有较高浓度的药物残留。

Claims

1.一种灯盏花素长效冻干微乳，其特征在于由以下步骤制备：

(1)将灯盏花素2.0g、大豆磷脂1.65g、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺0.825g、加少量乙醇溶解，与中链脂肪酸甘油酯16.5g混合均匀，维生素E0.2g，40℃旋转蒸发除去乙醇作为油相Ⅰ；

(2)将聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯6.0g、聚乙二醇4003.0g于40℃水浴混合均匀，作为油相Ⅱ；

(3)油相Ⅰ与油相Ⅱ在40℃水浴条件下高速搅拌混合均匀，在搅拌条件下加预热至40℃的注射用水500ml使形成灯盏花素长效乳液，高压均质机均质，加甘露醇60g使溶解，注射用水定容至1000ml，0.22μm滤膜除菌过滤，灌装，冷冻干燥。