CN101618032B - 鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大和/或心室肥厚药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了鱼腥草素钠在制药中的新用途，具体涉及鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大和/或心室肥厚药物中的用途。本发明采用异丙肾上腺素、L-甲状腺素和腹主动脉不完全结扎三种制备心肌肥大、心室肥厚整体动物模型和体外培养心肌细胞、肾上腺素诱导的方法制备离体心肌细胞肥大模型。本发明实验结果表明鱼腥草素钠可降低模型动物左心指数和全心指数的增大，抑制体外心肌细胞的肥大，能降低血浆cAMP浓度、心肌组织Ang II和ET-1含量、血清TNF-α和ALD含量，还可降低血压和减慢心率。本发明实验结果提示鱼腥草素钠有抗心肌肥大、心室肥厚作用，其机制可能与抑制交感神经兴奋性、阻断肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性、影响内分泌因子有关。

Description

鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大和/或心室肥厚药物中的用途

技术领域

本发明属制药领域，涉及中药有效成分鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大(myocardial hypertrophy)和/或心室肥厚(ventricular hypertrophy)药物中的用途。

背景技术

慢性心功能不全又称充血性心力衰竭(Congestive heart failure，CHF)，是多种病因所致心脏泵血功能降低，不能排出足够的血液以满足全身组织器官代谢需要的一种临床综合症，临床病死率很高。

以往临床对CHF的治疗重点是使用强心苷类正性肌力作用药物和利尿药。大量临床资料表明，所有加强心肌收缩力、改善血流动力学类药物虽然可短期达到一定改善症状的效果，但不能防治心室肥厚，也不能降低患者病死率，甚至有的正性肌力药物如磷酸二酯酶抑制剂和β-受体激动剂长期使用反而能增加心衰患者心律失常的发生率、猝死率及远期死亡率。目前强心苷类药物仍用于治疗心衰，因其可改善患者的血流动力学症状，众多文献报道此类药物对生命的影响是中性，即不缩短患者生命，但也不延长患者生命，同时对心室肥厚的防治也无益处。

80年代以后，人们逐渐认识到心肌肥大、心室肥厚是心力衰竭的特征，同时也是决定心力衰竭发病率、病程进展和死亡率的重要因素。心室肥厚通常涉及心室结构的改变，即发生心室重构(remodeling)。心室重构包括心肌细胞肥大、间质细胞如成纤维细胞增殖、胶原增生；同时心室肥厚也影响心脏的功能，其顺应性降低，射血功能受到明显影响。随着心肌肥大、心室肥厚的发生和发展，心律失常、心衰、猝死的发生率提高。因此，心肌细胞肥大、心室肥厚是CHF的病理核心，使用药物干预和逆转心肌肥大、心室肥厚是防治CHF的有效手段。

近年对CHF的治疗策略已发生改变，从短期的改善血流动力学措施转为长期的修复性防治。目的是通过抑制与心肌肥大、心室肥厚的相关刺激和介导因素，从而改善心肌的生物学功能。目前大量研究表明心肌肥大、心室肥厚与肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性增强、神经内分泌因子的持续激活、交感神经系统持续兴奋有关。有临床研究表明，采用血管紧张素转换酶抑制剂或β-受体阻滞剂类药物防治CHF，可防止或延缓心肌肥大、心室肥厚的发展，即使在治疗的早期，有些药物对血流动力学的改变不明显，但对心肌仍有长期的生物学效应。例如交感神经抑制药β受体阻滞剂能防止心肌肥大、心室肥厚的发展并降低心律失常、心衰、猝死的发生率，从80年代的禁用到现在的建议早用。美国和欧洲心衰治疗指南认为：所有病情稳定的CHF患者均需应用β受体阻滞剂，除非有禁忌症，而且要尽早应用，不要等到其它疗法无效时再用。同样，CHF患者除非有禁忌症或不能耐受，也需长期使用血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂。

受早期西医理论的影响，上世纪五、六十年代，我国防治CHF的中药研究着力于发掘具有强心苷类正性肌力作用的药物和有效成分。近年，随着神经内分泌因素可能较血流动力学因素对心衰的恶化起更大作用理论的形成以及人们对于心肌肥厚危害性的认识，对于具有调节神经内分泌因素作用以及具有对抗心肌肥厚作用的中药及活性成分的研究更显重要。

鱼腥草为三白草科植物蕺菜(Houttuynia cordata Thunb.)的干燥地上部分。鱼腥草的主要化学成分为挥发油和黄酮，挥发油成分含鱼腥草素和月桂醛等。鱼腥草素钠(sodium houttuyfonate)自1971年确定其化学成分以后即可人工合成，价格便宜。现代研究证实鱼腥草及鱼腥草素钠主要药理作用为抗病原微生物、抗炎、提高免疫力等，而用于心血管疾病的相关报道较少，仅见鱼腥草注射液在临床上用于治疗冠心病的报道，因其具有扩张冠状动脉血管，从而对于冠心病心绞痛具有一定效果；有报道鱼腥草注射液具有治疗肺心病的作用；鱼腥草提取物灌注蟾蜍或蛙蹼可以使毛细血管扩张，增加肾血流量和尿液分泌，利尿作用较强，临床上可以用于肾病性水肿的治疗；另外本药还具有降低血脂、抑制血小板聚集、预防血栓形成、促进血液循环等作用。但未见鱼腥草以及鱼腥草素钠具有防治心肌肥大、心室肥厚作用的报道和应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供中药有效成分鱼腥草素钠在制药中的新用途，具体涉及鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大和/或心室肥厚药物中的用途。

本发明涉及的鱼腥草素钠是中药鱼腥草的挥发油成分鱼腥草素(又称癸酰乙醛)的人工合成品(癸酰乙醛亚硫酸氢钠，CH₃(CH₂)₈COCH₂CHOHSO₃Na)。

本发明采用国内外学术界已广泛应用的异丙肾上腺素、L-甲状腺素钠和腹主动脉不完全结扎三种方法制备整体动物的心肌肥大、心室肥厚模型；采用乳鼠心肌细胞体外培养，肾上腺素诱导制备体外心肌细胞肥大模型。实验结果揭示三种模型动物都出现全心指数和左心指数增加等心肌肥大、心室肥厚的特征，进行鱼腥草素钠干预实验，结果证实鱼腥草素钠可明显抑制三种模型动物心肌肥大、心室肥厚；体外实验显示肾上腺素可以诱导心肌细胞肥大，鱼腥草素钠可以抑制心肌细胞的肥大。

本发明通过下述技术方案施行：按本领域公知技术，小鼠每天皮下注射异丙肾上腺素2mg/kg，连续7天，制备小鼠心肌肥大、心室肥厚模型；SD大鼠每天腹腔注射L-甲状腺素钠0.3mg/kg，连续7天，制备大鼠心肌肥大、心室肥厚模型；SD大鼠腹主动脉不完全结扎手术制备压力超负荷型大鼠心肌肥大、心室肥厚模型。模型动物分别灌服受试药鱼腥草素钠溶液、阳性药美托洛尔(或卡托普利)或饮用水，观察大鼠血压和心率的变化，测定动物心脏指数的变化，用放射免疫分析法测定左心室心肌组织的血管紧张素II(Ang II)和内皮素-1(ET-1)含量、血浆中的环磷酸腺苷(cAMP)含量、血清中醛固酮(ALD)以及肿瘤坏死因子(TNF-α)含量的变化，用消化法测定心肌组织中羟脯氨酸含量的变化。乳鼠心肌细胞培养采用出生48小时内的乳鼠心室细胞，体外细胞培养3天后开始用肾上腺素刺激并同时给予药物干预，测定干预2天后心肌细胞的表面积以及细胞液中总蛋白含量。

本发明实验结果显示：与正常对照组比较，模型对照组动物左心指数和全心指数、心肌Ang II、羟脯氨酸和ET1含量、血浆cAMP含量、血清ALD和TNF-α含量明显升高；灌胃给予鱼腥草素钠(50～180mg/kg.d)可使心室肥厚模型动物的心脏指数、心肌Ang II、羟脯氨酸和ET1含量、血浆cAMP含量、血清ALD和TNF-α浓度显著降低，在较大剂量时还具有降低血压和减慢心率的作用。体外心肌细胞在肾上腺素刺激下表面积增大，细胞中总蛋白含量升高；鱼腥草素钠(3×10^-5和10^-4mol/L)能够抑制肾上腺素引起的细胞表面积的增大并降低心肌细胞中总蛋白含量。另外，采用最大给药量法观察鱼腥草素钠的安全性，小鼠一次性口服鱼腥草素钠2g/kg(此剂量约为动物实验最小有效量的40倍)，观察14天，未见动物死亡和明显的中毒反应。

本发明实验表明：鱼腥草素钠可降低左心指数和全心指数，降低心肌中羟脯氨酸含量，体外可减小心肌细胞的表面积和总蛋白含量，提示鱼腥草素钠具有抗心肌肥大、心室肥厚以及心肌纤维化作用；可降低血浆cAMP浓度，提示其具有抑制交感神经兴奋性作用；又可降低心肌组织Ang II和血浆ALD浓度，说明鱼腥草素钠具有阻断肾素-血管紧张素-醛固酮系统活化的作用；鱼腥草素钠还具有降低ET-1、TNF-α等内分泌因子以及降低血压和减慢心率等作用。且鱼腥草素钠毒性小，在有效剂量范围内使用安全。经药效学实验剂量换算，所述的鱼腥草素钠临床成人安全、有效的口服剂量范围约为0.5～1g/天.人。

本发明经实验证实，鱼腥草素钠具有防治心肌肥大、心室肥厚作用，可制备防治心肌肥大和/或心室肥厚的药物，进而可预防或延缓心衰的发生、发展，减少心肌肥大、心室肥厚患者心律失常、心衰、猝死的发生率。其作用机制与抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性，抑制神经内分泌因子激活，抑制交感神经的持续兴奋有关。鱼腥草素钠可抑制导致心肌肥大、心室肥厚的有关刺激、介导因素，从而改善患者心肌肥大、心室肥厚的症状和心肌的生物学功能。动物实验证明鱼腥草素钠安全范围大，最大给药量高于药物有效量数十倍。

本发明的有益效果突出体现在：鱼腥草素钠可以人工合成，合成方法成本低廉，反应条件温和，非常适于工业化生产。鱼腥草素钠具有抗心肌肥大、心室肥厚作用，未见明显急性毒性，将其进一步开发应用于防治CHF，对于改善心衰患者的生活质量，降低心律失常的发生率、猝死率及远期死亡率具有重要意义。

据统计，CHF发病率约为1.0％-1.5％。65岁以上人口的年平均发病率达10％左右。尽管在过去10～20年中，对CHF的治疗取得了很大进步，但CHF患者的5年病死率仍高达50％。有研究分析认为，CHF的预后与恶性肿瘤一样，甚至比恶性肿瘤更差。因此，CHF一旦发展到血流动力学变化明显之时，靠强心苷类药物治疗绝非上策。尽早使用具有抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性，抑制神经内分泌激活及抑制交感神经持续兴奋的药物，从而防治心肌肥大、心室肥厚的症状，改善心肌的生物学功能，具有更大价值。本发明提供的鱼腥草素钠具有上述防治心肌肥大、心室肥厚的新的药用作用，可使其临床用途得以推广。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求书所限定的范围。

实施例1：鱼腥草素钠抗异丙肾上腺素致小鼠心室肥厚实验

1.1实验动物：昆明种小鼠，体重20～22g；购于中科院上海实验动物中心，饲养于上海中医药大学实验动物中心SPF级实验室。

1.2药品和试剂：鱼腥草素钠(批号：070103)，上海青平药业有限公司产品；盐酸异丙肾上腺素注射液(批号：5E20010)，上海禾丰制药有限公司产品；酒石酸美托洛尔片(批号：0605002)，阿斯利康制药有限公司产品。

1.3鱼腥草素钠受试液的制备：称取鱼腥草素钠适量，临用前加温水超声溶解，配成浓度为4.5、9mg/ml的溶液。

1.4实验方法：选用雄性健康小鼠，随机分为5组(每组11只)：正常对照组，模型对照组，鱼腥草素钠小、大剂量组(90、180mg/kg)和美托洛尔阳性对照组(60mg/kg)。除正常对照组外，其他各组小鼠每天皮下注射异丙肾上腺素2mg/kg，每天一次，连续7天，造成心肌肥厚模型。正常对照组小鼠每天皮下注射等容量的生理盐水，每天一次，连续7天。治疗组在给予异丙肾上腺素后，灌胃给予鱼腥草素钠或美托洛尔，正常对照组、模型对照组灌胃给予等容量的饮用水，连续7天。禁食不禁水14h后，取血和心肌进行如下各项测定。

1.4.1小鼠心脏指数的测定：小鼠称重，摘眼球取血备用，脱颈椎处死，快速打开胸腔取心脏，用滤纸吸干水分，去除心房组织，沿室壁剪开，分离左、右心室，电子天平准确称取左心室重量和全心重量。计算全心重量/体重(HW/BW)比，左心室重量/体重(LVW/BW)比，分别记为全心指数，左心室指数。

1.4.2血浆cAMP含量测定：取血，加EDTA溶液50μL抗凝，血液低温离心机4000rpm低温离心10min，取上清液供测定cAMP含量。

1.4.3心肌组织中Ang II含量的测定：取心室组织准确称重后迅速剪碎，加入预冷的生理盐水进行匀浆，制成2％组织匀浆液，3500r/min低温离心15min，取上清液，用于Ang II含量的测定。

1.5实验结果：

小鼠皮下注射异丙肾上腺素7天后，模型对照组与正常对照组比，左心指数和全心指数均有明显升高(p＜0.01)；鱼腥草素钠90、180mg/kg和美托洛尔60mg/kg灌胃给药7天后，左心指数和全心指数均比模型对照组显著降低(p＜0.05，p＜0.01)，结果见表1。

表1.对异丙肾上腺素致心肌肥厚模型小鼠心脏指数的影响(x±s，n＝11)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

与正常对照组比较，模型对照组小鼠血浆cAMP含量明显升高(p＜0.01)；鱼腥草素钠90、180mg/kg和美托洛尔60mg/kg灌胃给药7天后，血浆cAMP含量比模型对照组显著降低(p＜0.01)，结果见表2。

表2.对异丙肾上腺素致心肌肥厚模型小鼠血浆cAMP的影响(x±s)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

与正常对照组比较，模型对照组小鼠心肌组织Ang II含量明显升高(p＜0.01)。鱼腥草素钠90、180mg/kg和美托洛尔60mg/kg灌胃给药7天后，心肌组织Ang II含量比模型对照组显著降低(p＜0.01)，结果见表3。

表3.对异丙肾上腺素致心肌肥厚模型小鼠心肌组织Ang II含量的影响(x±s，n＝11)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

实施例2：鱼腥草素钠抗L-甲状腺素钠致大鼠心室肥厚实验

2.1实验动物：SD种大鼠，雄性，体重150～170g，购于中科院上海实验动物中心，饲养于上海中医药大学实验动物中心SPF级动物实验室。

2.2药品和试剂：鱼腥草素钠(批号：070103)上海青平药业有限公司产品；L-甲状腺素钠(L-Thy，批号：WA1331)，Sigma公司产品；卡托普利(Captopril，批号：061005)，上海衡山药业有限公司产品；内皮素(FT-1)试剂盒(批号：070620)，购于北京北方生物技术研究所；羟脯氨酸试剂盒(批号：20070623)，考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(批号：20070515)，购自南京建成试剂公司。

2.3鱼腥草素钠受试液的制备：称取鱼腥草素钠适量，临用前加温水超声溶解，配成浓度为2.5、5mg/ml的溶液。

2.4 L-甲状腺素钠溶液的制备：精密称取L-甲状腺素钠，临用前用生理盐水配成浓度为250mg/L的混悬液备用。

2.5实验方法：选用健康SD大鼠，随机分为5组(每组10只)：正常对照组，模型对照组，鱼腥草素钠小、大剂量组(50、100mg/kg)，卡托普利阳性对照组(40mg/kg)。除正常对照组外，其余各组动物每天腹腔注射L-甲状腺素钠0.25mg/kg，每天一次，连续7天，造成心肌肥厚模型；正常对照组腹腔注射等容量的生理盐水，每天一次，连续7天。造模第一天开始各组动物每天灌胃给药或等容量饮用水，每天一次，连续9天。禁食不禁水14h后，进行如下各项分析。

2.5.1大鼠心脏指数的测定：大鼠称体重(BW)后麻醉，取血，打开胸腔取心脏，用滤纸吸干水分，冰上操作，去除心房组织，沿室壁剪开，分离左、右心室，电子天平准确称量左心室重量(LVW)和全心重量(HW)。计算全心重量/体重(HW/BW)比，左心室重量/体重(LVW/BW)比，分别记为全心指数(HW/BW)，左心指数(LVW/BW)。

2.5.2心肌组织中羟脯氨酸含量以及ET-1含量测定：取心室组织准确称重后迅速剪碎，加入预冷的生理盐水进行匀浆，制备成10％的组织匀浆液，3500r/min低温离心15min，取上清液进行羟脯氨酸含量以及ET-1含量测定。

2.6实验结果：

与正常对照组比，模型对照组大鼠左心指数和全心指数均有明显升高(p＜0.01)；鱼腥草素钠50、100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药9天后，左心指数和全心指数均比模型对照组显著降低(p＜0.05，p＜0.01)，结果见表4。

表4.对L-甲状腺素致心肌肥厚模型大鼠心脏指数的影响(x±s)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

与正常对照组比，模型对照组大鼠心肌组织羟脯氨酸含量有明显升高(p＜0.01)；鱼腥草素钠50mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药9天后，心肌组织羟脯氨酸含量均比模型对照组显著降低(p＜0.01，p＜0.05)，鱼腥草素钠100mg/kg可降低心肌组织羟脯氨酸含量，但与模型对照组比未见统计学意义，结果见表5。

表5.对L-甲状腺素致心肌肥厚模型大鼠心肌组织羟脯氨酸含量的影响(x±s)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

与正常对照组比，模型对照组大鼠心肌组织ET-1含量有明显升高(p＜0.01)；鱼腥草素钠50、100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药9天后，心肌组织ET-1含量均比模型对照组显著降低(p＜0.01)，结果见表6。

表6.对L-甲状腺素致心肌肥厚模型大鼠心肌组织ET-1含量的影响(x±s)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

实施例3：鱼腥草素钠抗腹主动脉不完全结扎大鼠心肌肥厚作用

3.1实验动物：SD种大鼠，雄性，体重220～250g，购于中科院上海实验动物中心，饲养于上海中医药大学实验动物中心SPF级动物实验室。

3.2药品和试剂：鱼腥草素钠(批号：0711-3)，上海青平药业有限公司产品；卡托普利(Captopril，批号：070704)，上海衡山药业有限公司产品；血管紧张素II试剂盒(批号：20080420)，醛固酮测试试剂盒(批号：20080420)，肿瘤坏死因子测试试剂盒(批号：20080530)，均购于北京北方生物技术研究所；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(批号：20070515)，购自南京建成试剂公司。

3.3鱼腥草素钠受试液的制备：称取鱼腥草素钠适量，临用前加温水超声溶解，配成浓度为2.5、5mg/ml的溶液。

3.4实验方法：大鼠用3％戊巴比妥钠0.1ml/100g腹腔注射麻醉，仰位固定，打开腹腔，钝性分离腹主动脉，用内径为0.6mm的银夹不完全结扎左右肾动脉之间的腹主动脉，使之外径狭窄至0.6mm，制备压力超负荷性心肌肥厚模型。假手术组动物仅分离腹主动脉后不做结扎。术后每天肌内注射青霉素1×10⁴U/kg，共3天，预防感染。造模3天后除假手术组动物外其他动物随机分组，开始灌胃给药。分组及给药情况如下：假手术组(正常对照组)和模型对照组大鼠灌胃给予饮用水；鱼腥草素钠小、大剂量组(50、100mg/kg)和卡托普利阳性对照组(40mg/kg)灌胃给予鱼腥草素钠溶液或卡托普利药液。每天给药一次，连续一个月。一个月后，禁食不禁水14小时后测定如下各项指标。

3.4.1血压和心率的测定：经右颈总动脉插管，测收缩压、舒张压和平均动脉压；测定心率。

3.4.2大鼠心脏指数的测定：取血，打开胸腔取心脏，用滤纸吸干水分，冰上操作，去除心房组织，沿室壁剪开，分离左、右心室，电子天平准确称量左心室重量(LVW)和全心重量(HW)。计算全心重量/体重(HW/BW)比，左心室重量/体重(LVW/BW)比，分别记为全心指数(HW/BW)，左心指数(LVW/BW)。

3.4.3心肌组织中Ang II含量测定：取心室组织准确称重后迅速剪碎，加入预冷的生理盐水进行匀浆，制备成2％的组织匀浆液，3500r/min低温离心15min，取上清液进行Ang II含量测定。

3.4.4血清中醛固酮(ALD)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量的测定：取血，4000rpm低温离心10min，取上清液供测定ALD和TNF-α含量。

3.5实验结果：

与正常对照组比，模型对照组大鼠收缩压、舒张压以及平均压均有明显升高(p＜0.01，p＜0.05)。鱼腥草素钠100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药1个月后，收缩压、舒张压和平均压比模型对照组显著降低(p＜0.05，p＜0.01)，鱼腥草素钠100mg/kg可以减慢大鼠心率(p＜0.05)，鱼腥草素钠50mg/kg有降低收缩压、舒张压和平均压的趋势。结果见表7。

表7.对腹主动脉结扎致心肌肥厚模型大鼠血流动力学的影响(x±s，n＝10)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

大鼠腹主动脉结扎1个月后，与正常对照组比，模型对照组大鼠左心指数和全心指数均有明显升高(p＜0.01)；鱼腥草素钠50、100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药1个月后，左心指数和全心指数比模型对照组显著降低(p＜0.05，p＜0.01)，结果见表8。

表8.对腹主动脉结扎致心肌肥厚模型大鼠心脏指数的影响(x±s，n＝10)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

与正常对照组比，模型对照组大鼠心肌组织Ang II含量有所升高。鱼腥草素钠50、100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药1个月后，心肌组织AngII含量比模型对照组显著降低(p＜0.01，p＜0.05)，结果见表9。

表9.对腹主动脉结扎致心肌肥厚模型大鼠心肌组织Ang II的影响(x±s)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

与正常对照组比，模型对照组大鼠血浆中ALD含量明显升高(p＜0.01)。鱼腥草素钠50、100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药1个月后，血浆中ALD含量比模型对照组显著降低(p＜0.01，p＜0.05)；与正常对照组比，模型对照组大鼠血浆中TNF-α含量明显升高(p＜0.05)。鱼腥草素钠50、100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药1个月后，血浆中TNF-α含量比模型对照组显著降低(p＜0.05)，结果见表10。

表10.对腹主动脉结扎致心肌肥厚模型大鼠血浆ALD、TNF-α的影响(x±s，n＝10)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

实施例4：鱼腥草素钠对体外肾上腺素诱导的心肌细胞肥大模型的影响

4.1实验动物：SD大鼠乳鼠，出生48小时内，购于中科院上海实验动物中心。

4.2药品和试剂：鱼腥草素钠(批号：0711-3)，上海青平药业有限公司产品；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(批号：20070515)，购自南京建成试剂公司。

4.3鱼腥草素钠受试液的制备：称取鱼腥草素钠适量，临用前加培养液超声溶解过滤，配成浓度为3×10^-5和10^-4mol/L的溶液。

4.4实验方法：取新生48小时内SD乳鼠左心室，消化分离心肌细胞进行培养。在培养成功的心肌细胞培养液中加入肾上腺素或者肾上腺素加不同受试药物共同孵育培养2天。然后测定心肌细胞表面积以及心肌细胞蛋白含量。

4.5.实验结果：

4.5.1对心肌细胞表面积的影响：与正常对照组比较，模型对照组细胞表面积明显增大(p＜0.05)，鱼腥草素钠浓度为3×10^-5和10^-4mol/L能够抑制肾上腺素引起的细胞表面积的增大(p＜0.05)。结果见表11。

表11.鱼腥草素钠对心肌细胞表面积的影响(x±s)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

4.5.2对心肌细胞总蛋白含量的影响：与正常对照组比较，模型对照组细胞总蛋白含量明显增多，鱼腥草素钠浓度为3×10^-5和10^-4mol/L能够降低心肌细胞中总蛋白含量(p＜0.05)。结果见表12。

表12.鱼腥草素钠对心肌细胞总蛋白含量的影响(x±s)

注：与模型对照组比*p＜0.05；**p＜0.01

实施例5：急性毒性实验

5.1目的：探索鱼腥草素钠一次性大剂量给药对机体可能产生的毒性反应及其严重程度，以便对该药的安全性作出合理的评价。

5.2动物：昆明种小鼠20只，体重18～22g只，雌雄各半，购于中科院上海实验动物中心。

5.3受试药物及制备：鱼腥草素钠(批号：0711-3)，上海青平药业有限公司产品；取鱼腥草素钠用热水超声溶解，配成最大浓度的混悬液。

5.4方法及结果：取健康小鼠20只，雌雄各半，禁食不禁水16小时后，灌胃给予0.4ml/10g体重的上述鱼腥草素钠混悬液。给药后，以正常饮食、饮水饲养，连续观察14天。给药后至14天，动物体重、活动、毛色、饮食、精神状态良好，未见死亡，14天后解剖未见脏器异常。实验结果显示鱼腥草素钠毒性很小，无法求出LD₅₀。一次性最大安全给药量为2g/kg，是实验有效量的40倍。因此认为该药临床应用安全。

由药效实验结果推算出鱼腥草素钠临床成人口服安全、有效剂量范围0.5～1g/人.天。

现代医学认为心肌肥大、心室肥厚是由于血流动力学异常和神经内分泌紊乱相互作用的结果。心脏在应对多种原因引起的血流动力学异常时，自主神经发生了一系列的变化。在心室肥厚的发病机制中神经内分泌因素较血流动力学因素可能更为重要。现代医学发现参与心肌肥大心室肥厚的神经内分泌因子和自分泌/旁分泌因子主要有：儿茶酚胺、Ang II、血管ET-1、TNF-α等。已发现，心脏超负荷时，局部交感神经活性提高，循环中儿茶酚胺含量明显增加。血浆肾上腺素浓度与心室肥厚程度呈正相关。持久的交感神经兴奋增强，除通过影响血流动力学和直接对心脏作用而诱发或加重心室肥厚外，还引起肾素分泌过多，导致全身及心脏局部组织的肾素-血管紧张素-醛固酮系统活化，并进一步使交感神经兴奋性增强、神经内分泌过度激活，形成恶性循环。采用血管紧张素转化酶抑制剂和β受体阻滞剂具有阻断交感神经兴奋性增强、神经内分泌过度激活所形成的恶性循环作用，其疗效已被近年的临床实践所肯定。

本发明上述实施例的实验结果显示，鱼腥草素钠具有抗心肌肥大、心室肥厚作用；可降低血浆cAMP浓度，提示其具有抑制交感神经兴奋性作用；鱼腥草素钠可降低心肌组织Ang II和血浆ALD浓度，说明鱼腥草素钠具有阻断肾素-血管紧张素-醛固酮系统活化的作用；鱼腥草素钠还具有降低ET-1、TNF-α等因子以及降低血压和减慢心率的作用；这些可能是其抑制心肌肥大、心室肥厚的作用机制。

本发明上述实施例的实验结果显示，鱼腥草素钠口服未见明显急性毒性。

Claims (3)

1.鱼腥草素钠在制备防治心室重构药物中的用途。

2.鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大和肥厚性心肌病药物中的用途。

3.鱼腥草素钠在制备防治与心肌肥大相关的心律失常或猝死的药物中的用途。