CN101559214A - 具有增强免疫功能作用的组合物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种具有增强免疫功能作用的组合物,是由海洋蛋白肽和核苷酸按重量比为45∶8的比例配制而成,作为制备增强免疫功能药物、增强免疫功能保健食品或增强免疫功能食品的用途。所得制剂具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点。本发明制剂可明显增强小鼠迟发性变态反应(DTH)能力和ConA刺激的T淋巴细胞增殖;同时可明显增加抗体生成细胞数量。上述结果表明海洋蛋白肽与核苷酸配伍剂对免疫功能具有增强作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有增强免疫功能作用的组合物及用途,具体来说是核苷酸和从海洋鱼类提取的海洋蛋白肽配伍剂,及在制备增强免疫功能药物、增强免疫功能保健食品或增强免疫功能食品中的应用。属食品保健和医药领域。
背景技术
近年来,免疫功能低下,包括原发性及继发性免疫功能缺陷、缺乏或受损,受到国内外医学家们的广泛关注,因为它们本身及所诱发的各种并发症,特别是感染,常使病人的病情严重,难以治疗,并可引起严重的后果,甚至危及生命。如果通过开发保健食品,来改善机体免疫功能,经济实用,将对我国的卫生保健行业带来很大的前景。
生物活性肽(bioactive peptides)是指对生物体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物。相对于蛋白质,活性肽分子小,但生物活性高,少量的肽就能发挥非常重要的作用。近年来研究表明,它们具有免疫调节、抗菌、抗肿瘤、保护心血管、抗氧化、抗衰老等多种生物学功能。许多天然的生物活性肽具有免疫调节作用,又称免疫活性肽,其中不少的化学组成和结构已经确定,它们有特异、安全和较高的免疫学活性,这类生物制剂具有重要的临床应用价值。免疫活性肽分布很广,多来源于动植物体内,包括生物体中天然存在的内源性免疫活性肽,以及天然蛋白经酶解生成的外源性免疫活性肽,即植物和动物蛋白质水解产生的活性肽。例如,Meisel等(1996)证实酪蛋白序列中存在不同的生物活性成份,经酶解后可得到下列四种活性肽:①opioid agonists阿片类激动剂。②opiiod anregonists阿片类拮抗剂。③immunostinulants(immunopeptides)免疫刺激剂。④mineral Carriers(Caseinphosphopeptided)金属载体。β-酪蛋白水解生成的三肽Leu-Leu-Tyr以及α-酪蛋白的N末端Thr-Thy-Met-Pro-Leu-Phe在试验中可以促进人和绵羊腹膜内巨噬细胞的吞噬作用。Berthoa等(1981),Parker等从人乳酪蛋白酶解中分离得到的二种活性肽,Val-Gln-Pro-Ile-Pro-tyr和Gly-Leu-Phe这二种肽浓度在0.1umol/L时就能激活腹膜巨噬细胞对绵羊红细胞的吞噬作用。Cosre等(1992)报道β-酪蛋白胃蛋白酶-糜蛋白酶消化产物中的多肽可促进大鼠成熟的淋巴细胞的未成熟的脾细胞的增殖。Azuma等(1989)从卵清蛋白中提取的肽能促进细胞的生长和DNA的合成。
核苷酸酸(Nucleotides,NT)是一种对细胞内许多生物化学过程起重要作用的化合物,动物机体能够从头合成各种核苷酸,又没有特异性缺乏症,所以人们一直认为核苷酸是一种非必需的营养物质,但近年来许多研究表明机体内从头合成的核苷酸不能满足代谢旺盛的组织和细胞的需要。当动物受到免疫挑战、肝损伤、饥饿及快速生长的时候,膳食中的核苷酸能进入各种组织中并被利用。陈栋梁等学者应用同位素示踪动物实验证实了白蛋白多肽与核酸共同食用,可促进核苷酸的吸收及利用促进免疫器官核酸的分布量,有益于免疫细胞内核酸代谢的补救合成,提高机体的细胞免疫功能。
本发明涉及的海洋蛋白肽是以来源广泛的海洋鱼类(三文鱼、大马哈鱼、罗非鱼等)的鱼肉经为原料,通过水解制造出分子量在100~2000D的寡肽配伍剂,具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点。已有研究表明,海洋蛋白肽单独作用具有增强免疫功能的作用。
本发明涉及的核苷酸是核糖核酸(RNA)为原料经酶法降解生产的,纯度在99%以上的5’AMP∶5’CMP∶5’GMPNa2∶5’UMPNa2按照22.8∶26.6∶30.2∶20.4配比而成的5’核苷酸混合物。之前的研究也发现,单独补充核苷酸能缓解无核酸饲料喂养小鼠引起的免疫功能抑制,起到增强机体的免疫功能的作用。
而迄今为止,还没有关于海洋蛋白肽与核苷酸配伍剂在增强免疫功能药品、增强免疫功能保健食品以及增强免疫功能食品中应用的任何报道。
发明内容
本发明旨在通过进一步研究,提供海洋蛋白肽与核苷酸配伍剂在制备免疫调节药物或食品中的用途,为通过饮食改善机体免疫功能提供一种新途径。
本发明的技术解决方案是:一种具有增强免疫功能的组合物,其特征在于:由海洋蛋白肽和核苷酸按重量比为45∶8的比例配制而成。
一种具有增强免疫功能作用的组合物作为制备增强免疫功能药物、增强免疫功能保健食品或增强免疫功能食品的用途。
其中所述的药物、保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或口服液。
其中所述的食品为淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品。
具体实施方案
以下通过动物实验来阐明本发明所述海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂在增强免疫功能方面的作用效果。
1.材料和方法
1.1受试样品:海洋蛋白肽,由北京中食海氏生物技术有限公司制备。核苷酸(5’AMP∶5’CMP∶5’GMPNa2∶5’UMPNa2=22.8∶25.8∶30.2∶20.4)由大连珍奥公司提供。将海洋蛋白肽和核苷酸按重量比为45∶8的比例配制而成。
1.2实验动物:清洁级雌性Balb/c小鼠160只,6~8周龄,18~22克,由北京大学医学部实验动物中心提供,批准号为SCXK11-00-0004,清洁级动物房饲养,饲养环境温度25℃,湿度60%RH。
1.3检验指标:小鼠脾脏和胸腺重;抗体形成细胞(IgM-PFC/脾)测定,采用Jerne改良玻片法;血清抗体滴度,采用血清半数溶血值HC50;迟发型变态反应(DTH),采用足跖肿胀法测定;ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖功能,采用MTT法;巨噬细胞吞噬功能的检测,采用碳粒廓清法及腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞(半体内法)测定;NK细胞活性测定,采用乳酸脱氢酶(LDH)测定法。
1.4实验方法:动物分成空白对照组,海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂高、中和低剂量组。将海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂配成高、中、低三个浓度,剂量分别为0.795g/kgBW、0.265g/kgBW和0.0883g/kgBW,受试物按不同比例掺于饲料中,空白对照组给予正常饲料。每周称量体重以及进食量。实验期间动物自由进食、饮水。4周后实验结束时按照卫生部《保健食品功能学评价程序和检验方法》进行上述指标检测。
1.5统计方法
所有结果以均数±标准差表示,采用SPSS11.0软件进行单因素方差分析,比较各实验组与对照组的差异。但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值<F0.05,结论:各组均数间差异无显著性;F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计;对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态或方差齐要求后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,改用秩和检验进行统计。
1.6结果判定依据
《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)规定:在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性,可判定该受试样品具有增强免疫功能功能作用。其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或任一个实验的两个剂量组结果阳性,可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或任一个实验的两个剂量组结果阳性,可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或任一个实验的两个剂量组结果阳性,可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果阳性,可判定NK细胞活性结果阳性。
2.结果
2.1海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠免疫器官重量的影响:
由表1可见,小鼠的初始体重各剂量组与对照组比较差异无显著性,经口给予小鼠不同剂量的配伍剂4周后,配伍剂中、低剂量组的脾脏/体重比值明显升高(P<0.05);而各剂量组小鼠的体重、胸腺/体重的比值与对照组比较差异均无显著性,即配伍剂对小鼠体重和胸腺相对重量无影响(P>0.05)。
表1海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠体重及免疫器官相对重量的影响(x±s)
*:与正常对照组比较有显著性差异,P<0.05
2.2海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠细胞免疫功能的影响:
由表2可见,经口给予小鼠不同剂量的配伍剂4周后,与正常组比较,配伍剂低剂量组能显著增强ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力(P<0.05),配伍剂中、低剂量组能显著增强小鼠迟发型变态反应能力(P<0.05)。上述结果表明海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠细胞免疫功能中的迟发性变态反应(DTH)和ConA刺激的T淋巴细胞增殖有明显的增强作用。
表2海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠细胞免疫功能的影响(x±s)
*:与正常对照组比较有显著性差异,P<0.05
2.3海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠体液免疫功能的影响:由表3可见,经口给予小鼠不同剂量的配伍剂4周后,与正常对照组比较,配伍剂中、低剂量组能显著提高小鼠抗体生成细胞数(P<0.05)。各剂量组对小鼠半数溶血值也有所提高,但差异无显著性(P>0.05)。上述结果表明海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂可明显提高小鼠抗体生成细胞的数量,对小鼠血清抗体滴度没有明显影响;结果提示海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠体液免疫功能有增强的作用。
表3海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠体液免疫功能的影响(x±s)
*:与正常对照组比较有显著性差异,P<0.05
2.4海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响:由表4可见,经口给予小鼠不同剂量的配伍剂4周后,与正常组比较,吞噬率和吞噬指数差异无显著性(P>0.05),即对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无影响。小鼠碳粒廓清指数(α)无显著性差异(P>0.05),即对小鼠碳粒廓清能力无影响。
表4海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响(x±s)
2.5海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠自然杀伤(NK)细胞活性的影响:由表5所示,经口给予小鼠不同剂量的配伍剂4周后,与正常组比较,小鼠NK细胞活性有所增强,但差异无显著性(P>0.05),即对小鼠NK细胞活性无影响。
表5海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂对小鼠NK细胞活性的影响(x±s)
3.结论
经口给予小鼠不同剂量的海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂4周后,与正常组比较,配伍剂低剂量组对脾脏体比、ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖能力、迟发型变态反应(DTH)程度、抗体生成细胞功能(IgM-PFC)均有显著提高;配伍剂中剂量组对脾脏体比、迟发型变态反应(DTH)程度、抗体生成细胞功能(IgM-PFC)有显著提高。各剂量组对小鼠体重增长、胸腺脏体比、单核-巨噬细胞吞噬功能以及NK细胞活性均无影响。根据《保健食品检验与评价技术规范》对增强免疫功能保健食品的判定标准可知,海洋蛋白肽和核苷酸配伍剂具有增强免疫功能的功能。
Claims (6)
1.一种具有增强免疫功能作用的组合物,其特征在于:由海洋蛋白肽和核苷酸按重量比为45∶8的比例配制而成。
2.根据权利要求1所述的具有增强免疫功能作用的组合物,其特征在于:所述的海洋蛋白肽是以来源广泛的海洋鱼类(三文鱼、大马哈鱼、罗非鱼等)的鱼肉经为原料,通过水解制造出分子量在100~2000D的寡肽配伍剂。
3.根据权利要求1所述的具有增强免疫功能作用的组合物,其特征在于:所述的核苷酸是核糖核酸(RNA)为原料经酶法降解生产的,纯度在99%以上的5’AMP∶5’CMP∶5’GMPNa2∶5’UMPNa2按照22.8∶26.6∶30.2∶20.4配比而成的5’核苷酸混合物。
4.一种如权利要求1所述的具有增强免疫功能作用的组合物,作为制备增强免疫功能药物、增强免疫功能保健食品或防辐射食品的用途
5.按权利要求4,其中所述的增强免疫功能药物或增强免疫功能保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或口服液。
6.按权利要求4,其中所述的增强免疫功能食品为淀粉制品、乳及乳制品、豆制品或烘焙制品。
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