CN101485630A - 淫羊藿苷元脂质体及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种淫羊藿苷元脂质体，它的质量组成为大豆卵磷脂50％～85％，胆固醇10％～35％，淫羊藿苷元2％～25％，其表面为磷脂双分子层，双分子层外部的亲水基团形成一个亲水的帽冠，双分子层内部的亲水基团构成一内水相，双分子层间的疏水基团构成一疏水区域，淫羊藿苷元包埋于脂质体的磷脂双层间，所述的脂质体水化后Zeta电位的绝对值大于40mV。本发明的淫羊藿苷元脂质体具有以下特点：1.该制备方法简单易行，原材料大豆卵磷脂具有良好的生物相容性，可生物降解，来源广，成本低；2.利用纳米化技术将中药活性成分淫羊藿苷元包裹于脂质体的磷脂双层间，提高其水溶性；3.淫羊藿苷元脂质体的物理稳定性较好，放置较长时间后，未见分层，絮凝。本发明公开了其制法。

Description

淫羊藿苷元脂质体及其制备方法

技术领域：

本发明涉及淫羊藿苷元、脂质体及纳米技术。

背景技术：

骨质疏松症是一个世界范围的疾病，随着社会日趋老龄化，骨质疏松症已列为三大老年性疾病之一。淫羊藿苷元是从中医临床常用药物淫羊藿中提取得到的黄酮单体成分。国内外诸多研究表明：淫羊藿苷元具有明显的抗骨质疏松药理活性[参见：JianHuang，Lan Yuan，Xi Wang，et al.Icaritin and its glycosides enhance osteoblastic，butsuppress osteoclastic，differentiation and activity in vitro[J].Life Sciences，2007，81:832-840.]。但其水溶性很差，影响其口服吸收及药效发挥。临床尚未有淫羊藿苷元制剂。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是提供一种制备工艺简单、药物利用率高、物理性质稳定、并能显著提高淫羊藿苷元水溶性的脂质体及其制备方法。

本发明的技术方案如下：

一种淫羊藿苷元脂质体，其特征在于：它的质量组成为大豆卵磷脂50％～85％，胆固醇10％～35％，淫羊藿苷元2％～25％，其表面为磷脂双分子层，双分子层外部的亲水基团形成一个亲水的帽冠，双分子层内部的亲水基团构成一内水相，双分子层间的疏水基团构成一疏水区域，淫羊藿苷元包埋于脂质体的磷脂双层间，所述的脂质体水化后Zeta电位的绝对值大于40mV。

一种制备上述脂质体的方法，它由下列步骤组成：

步骤1.按如下质量百分比配比下列原料：大豆卵磷脂50％～85％，胆固醇10％～35％，淫羊藿苷元2％～25％；

步骤2.将上述配比的大豆卵磷脂、胆固醇和淫羊藿苷元加入二氯甲烷溶解；

步骤3.将二氯甲烷溶液在搅拌下滴加入水或P-188水溶液中，滴加完后继续搅拌0.5～1小时；

步骤4.在步骤3所得的脂质体混悬液中加入脂质体混悬液体积10％～20％的甘露醇或乳糖，冷冻干燥，即得淫羊藿苷元脂质体。

该制备方法特征在于：以生物相容性较好的大豆卵磷脂为膜材，以二氯甲烷为有机相，以水或P-188水溶液作为分散介质，采用改良滴定法制备包载难溶性植物性药物淫羊藿苷元的脂质体。以甘露醇或乳糖作为冻干保护剂，制备药物包封率高达90％以上，平均粒径为200-500nm的淫羊藿苷元脂质体。

上述实施例所制备的脂质体结构，其特征在于：其表面为磷脂双分子层，双分子层外部的亲水基团形成一个亲水的帽冠，双分子层内部的亲水基团构成一内水相，双分子层间的疏水基团产生一疏水区域。淫羊藿苷元是疏水性的，其包埋于脂质体的磷脂双层间。

对淫羊藿苷元进行溶解度及油水分配系数测定表明：淫羊藿苷元脂溶性极强。按《中国药典》2005版二部规定，淫羊藿苷元的溶解度可以描述为：在二氯甲烷和乙酸乙酯中略溶，在甲醇、无水乙醇和水等中几乎不溶或不溶；在不同pH缓冲液中几乎不溶或不溶。淫羊藿苷元油水分配系数测定过程中，淫羊藿苷元在水相中的溶解度低于HPLC检测限。淫羊藿苷元脂质体载药量可达到2mg/mL，极大改善了淫羊藿苷元的溶解度。

淫羊藿苷元脂质体冻干前后的形态通过透射电镜进行表征，结果见图3和图4。本发明制备的淫羊藿苷元脂质体呈完整的球形，脂质体的双层结构清晰可见。冻干前后淫羊藿苷元脂质体的平均粒径及Zeta电位用Malvren粒径分析测定仪进行测定，与冻干前相比，冻干后脂质体平均粒径有所下降，Zeta电位绝对值有所下降。用凝胶柱层析法对淫羊藿苷元脂质体进行包封率测定，冻干后脂质体包封率由70％左右提高至90％以上。

淫羊藿苷元脂质体稳定性考察(参照《中国药典2005版》加速实验)：将冻干前后淫羊藿苷元脂质体置于40℃，湿度为75％条件下密封储存。储存三个月后外观及色泽均无明显变化，它们的粒径和Zeta电位变化见表1和表2，说明淫羊藿苷元脂质体能在较长时间内保存，具有良好的物理稳定性。

本发明的淫羊藿苷元脂质体在大鼠体肠灌流模型实验表明：淫羊藿苷元脂质体的渗透系数>3，吸收良好。

表1 冻干前后淫羊藿苷元脂质体0月样品分析结果表

表2 冻干前后淫羊藿苷元脂质体3月样品分析结果表

采用本发明的淫羊藿苷元脂质体及其制备方法具有以下特点：

1、该制备方法简单易行，原材料大豆卵磷脂具有良好的生物相容性，可生物降解，来源广，成本低。

2、利用纳米化技术将中药活性成分淫羊藿苷元包裹于脂质体的磷脂双层间，提高其水溶性。

3、淫羊藿苷元脂质体的物理稳定性较好，放置较长时间后，未见分层，絮凝。

附图说明：

图1为实施例1制备的淫羊藿苷元冻干脂质体粒径分布图。

图2为实施例1制备的淫羊藿苷元冻干脂质体Zeta电位分布图。

图3为实施例1制备的淫羊藿苷元未冻干脂质体透射电镜图。

图4为实施例1制备的淫羊藿苷元冻干脂质体透射电镜图。

图5为实施例2制备的淫羊藿苷元冻干脂质体粒径分布图。

图6为实施例2制备的淫羊藿苷元冻干脂质体Zeta电位分布图。

图7为实施例3制备的淫羊藿苷元冻干脂质体粒径分布图。

图8为实施例3制备的淫羊藿苷元冻干脂质体Zeta电位分布图。

图9为实施例4制备的淫羊藿苷元冻干脂质体粒径分布图。

图10为实施例4制备的淫羊藿苷元冻干脂质体Zeta电位分布图。

图11为实施例5制备的淫羊藿苷元冻干脂质体粒径分布图。

图12为实施例5制备的淫羊藿苷元冻干脂质体Zeta电位分布图。

图13为实施例6制备的淫羊藿苷元冻干脂质体粒径分布图。

图14为实施例6制备的淫羊藿苷元冻干脂质体Zeta电位分布图。

图15为实施例7制备的淫羊藿苷元冻干脂质体粒径分布图。

图16为实施例7制备的淫羊藿苷元冻干脂质体Zeta电位分布图。

具体实施方式：

实施例1：

称取淫羊藿苷元20mg，大豆卵磷脂200mg，胆固醇100mg，用20mL二氯甲烷溶解，将二氯甲烷溶液转移至注射器，将二氯甲烷溶液在电动增力搅拌条件下缓慢注入25mL 0.5％ P-188(南京威尔化工提供)水溶液中，加完后继续水化0.5小时，得脂质体混悬液。在脂质体混悬液中加入混悬液体积的20％的甘露醇，冷冻干燥，即得淫羊藿苷元脂质体，其粒径分布及Zeta电位见图1，图2。其冻干前、后的透射电镜图见图3，图4.

实施例2：

称取淫羊藿苷元20mg，大豆卵磷脂200mg，胆固醇100mg，用10mL二氯甲烷溶解，将二氯甲烷溶液转移至注射器，将二氯甲烷溶液在电动增力搅拌条件下缓慢注入25mL 0.5％ P-188(南京威尔化工提供)水溶液中，加完后继续水化0.5小时，得脂质体混悬液。在脂质体混悬液中加入混悬液体积的15％的甘露醇，冷冻干燥，即得淫羊藿苷元脂质体，其粒径分布及Zeta电位见图5，图6。

实施例3：

称取淫羊藿苷元20mg，大豆卵磷脂600mg，胆固醇100mg，用10mL二氯甲烷溶解，将二氯甲烷溶液转移至注射器，将二氯甲烷溶液在电动增力搅拌条件下缓慢注入25mL 0.5％ P-188(南京威尔化工提供)水溶液中，加完后继续水化0.5小时，得脂质体混悬液。在脂质体混悬液中加入混悬液体积的10％的甘露醇，冷冻干燥，即得淫羊藿苷元脂质体，其粒径分布及Zeta电位见图7，图8。

实施例4：

称取淫羊藿苷元20mg，大豆卵磷脂600mg，胆固醇100mg，用20mL二氯甲烷溶解，将二氯甲烷溶液转移至注射器，将二氯甲烷溶液在电动增力搅拌条件下缓慢注入25mL 0.5％ P-188(南京威尔化工提供)水溶液中，加完后继续水化0.5小时，得脂质体混悬液。在脂质体混悬液中加入混悬液体积的10％的乳糖，冷冻干燥，即得淫羊藿苷元脂质体，其粒径分布及Zeta电位见图9，图10。

实施例5：

称取淫羊藿苷元100mg，大豆卵磷脂200mg，胆固醇100mg，用10mL二氯甲烷溶解，将二氯甲烷溶液转移至注射器，将二氯甲烷溶液在电动增力搅拌条件下缓慢注入25mL 0.5％ P-188(南京威尔化工提供)水溶液中，加完后继续水化0.5小时，得脂质体混悬液。在脂质体混悬液中加入混悬液体积的10％的乳糖，冷冻干燥，即得淫羊藿苷元脂质体，其粒径分布及Zeta电位见图11，图12。

实施例6：

称取淫羊藿苷元100mg，大豆卵磷脂600mg，胆固醇100mg，用10mL二氯甲烷溶解，将二氯甲烷溶液转移至注射器，将二氯甲烷溶液在电动增力搅拌条件下缓慢注入25mL 0.5％ P-188(南京威尔化工提供)水溶液中，加完后继续水化0.5小时，得脂质体混悬液。在脂质体混悬液中加入混悬液体积的10％的甘露醇，冷冻干燥，即得淫羊藿苷元脂质体，其粒径分布及Zeta电位见图13，图14。

实施例7：

称取淫羊藿苷元100mg，大豆卵磷脂600mg，胆固醇100mg，用20mL二氯甲烷溶解，将二氯甲烷溶液转移至注射器，将二氯甲烷溶液在电动增力搅拌条件下缓慢注入50mL水中，加完后继续水化0.5小时，得脂质体混悬液。在脂质体混悬液中加入混悬液体积的10％的甘露醇，冷冻干燥，即得淫羊藿苷元脂质体，其粒径分布及Zeta电位见图15，图16。

实施例8：

麻醉SD大鼠，置于小电热毯上和灯光下，保持正常的体温，沿腹中线切口4cm打开腹腔，靠近十二指肠处插入胆汁导管，分别在十二指肠、空肠、回肠和结肠两端插聚乙烯管，用手术线固定，实验时用等渗生理盐水浸渍的纱布覆盖于肠组织表面以保湿。以HBSS溶液配制淫羊藿苷元脂质体溶液作为灌流液。用等渗生理盐水冲洗肠内容物后换灌流液，用一恒速泵灌流肠腔。每隔30min收集出口管中灌流液，灌注后测量小肠的长度。出口管中药物浓度用HPLC检测。

Claims (2)

1.一种淫羊藿苷元脂质体，其特征在于：它的质量组成为大豆卵磷脂50％～85％，胆固醇10％～35％，淫羊藿苷元2％～25％，其表面为磷脂双分子层，双分子层外部的亲水基团形成一个亲水的帽冠，双分子层内部的亲水基团构成一内水相，双分子层间的疏水基团构成一疏水区域，淫羊藿苷元包埋于脂质体的磷脂双层间，所述的脂质体水化后Zeta电位的绝对值大于40mV。

2.一种制备上述脂质体的方法，其特征是它由下列步骤组成：

步骤1.按如下质量百分比配比下列原料：大豆卵磷脂50％～85％，胆固醇10％～35％，淫羊藿苷元2％～25％；

步骤2.将上述配比的大豆卵磷脂、胆固醇和淫羊藿苷元加入二氯甲烷溶解；

步骤3.将二氯甲烷溶液在搅拌下滴加入水或P-188水溶液中，滴加完后继续搅拌0.5～1小时；

步骤4.在步骤3所得的脂质体混悬液中加入脂质体混悬液体积的10％～20％的甘露醇或乳糖，冷冻干燥，即得淫羊藿苷元脂质体。

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