CN102626390A

CN102626390A - 一种天麻素多相脂质体注射液

Info

Publication number: CN102626390A
Application number: CN2012101185294A
Authority: CN
Inventors: 陈彦; 陶灵刚
Original assignee: Hainan Lingkang Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Ling Kang Pharmaceutical Group Limited by Share Ltd
Priority date: 2012-04-19
Filing date: 2012-04-19
Publication date: 2012-08-08
Anticipated expiration: 2032-04-19
Also published as: CN102626390B

Abstract

本发明公开一种天麻素多相脂质体注射液及其制法。该脂质体注射液由特定重量配比的天麻素、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、吐温80、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、海藻糖和EDTA-2Na制成。本发明的脂质体注射液具有良好的制剂稳定性，符合静脉注射要求，并且长期储存后，脂质体保持良好的包封率；本发明提高了天麻素的溶解度，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

Description

一种天麻素多相脂质体注射液

技术领域

本发明涉及一种天麻素的注射液，具体涉及一种天麻素多相脂质体注射液及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

在目前的市场上天麻素(Glastrodin)为兰科植物天麻的干燥根块提取物，原料产地为云南。天麻素的化学名称为：4-羟甲基苯-β-D吡喃葡萄糖苷半水合物，分子式：C₁₃H₁₈O₇·1/2H₂O，分子量295.38，结构式为：

天麻素注射液能扩张脑血管、提高脑细胞抗缺氧能力、增加脑血流量、减少脑血管阻力。尤其是对椎-基底动脉的血流改善具有良好的效果，使椎-基底动脉供血不足的患者脑供血得到明显改善，从而解除由供血不足而带来的平衡障碍、眩晕、耳鸣和眼球震颤等症状。同时天麻素能改善小脑前下动脉、小脑后下动脉、迷路动脉及内耳供血不足，保护神经细胞，促进心肌细胞能量代谢的功能。临床上广泛用于神经衰弱、神经衰弱综合征及血管神经性头痛等症(如偏头痛、三叉神经痛、枕骨大神经痛等)，还可用于脑外伤性综合征，眩晕症如美尼尔病、药性眩晕、外伤性眩晕、突发性耳聋、前庭神经元炎和椎-基底动脉供血不足。

目前以天麻素为主要活性成分应用于临床的剂型有：片剂、胶囊剂、冻干粉针剂和注射液。然而，片剂和胶囊剂等口服制剂患者的依从性差，不适合于儿童、老年人、卧床病人和吞咽困难患者服用，并且口服制剂经胃肠道吸收进入血液发挥作用起效慢，药物的生物利用度低。

天麻素在临床上作为注射剂使用时，现有的给药途径有肌内注射和静脉注射。肌内注射后经过皮肤吸收到达血液后发挥作用，起效慢；并且肌内注射的患者注射部位疼痛，长期注射可能出现局部红肿、淤血、肿块、甚至肌肉坏死等不良反应。然而，静脉注射给药避免了上述问题的发生。

专利文献CN1634091A公开了一种天麻素注射液，包括天麻素、注射用水、金属络合剂；将天麻素经水沉、冷藏、超滤技术处理，灭菌，制成天麻素注射液。

专利文献CN101623254B公开了一种天麻素注射液及其制备方法，该天麻素注射液由活性成分天麻素、辅料和注射用水组成。

普通工艺所制备的天麻素注射液，物理和化学性质稳定性差，长期存放药品质量会下降而且还会生成一些杂质，带来毒副作用，给临床使用留下了隐患。

在药物载体输送系统中，微乳、微球、纳米粒、脂质体、药质体等亚微粒的研究已经成为药物新剂型研究中非常活跃的领域。将药物包封于这些亚微粒中可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。

在靶向给药系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性。

脂质体是将药物包封在由磷脂、胆固醇构成的双分子层空间制成粒径5μm以下的微球状人工细胞。自上世纪60年代末问世以来，70年代初便开始作为药物载体应用，它是一种定向药物载体，具有类细胞结构。

脂质体的形成机理：脂质体的骨架物质是磷脂和胆固醇。常用的磷脂有卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂等。磷脂分子含有两个亲水性基团，即磷酸基和季胺基，但烃链R1、R2为非极性部分，其结构与肥皂的分子相似。胆固醇亦属两亲分子，结构上具有亲水和亲油两种基团，但其亲油性较强。这种物质是共同构成细胞膜的物质。

将磷脂溶液加入水中，亲水基向水而亲油基向空气分子定向排列于水表面。当极性类脂质分子被水完全包围时，其极性基向外，而亲油基向内彼此相对缔合成双分子层，也可形成球状(脂质体)。

专利文献CN1411803A公开了采用卵磷脂、磷脂酰胆碱/胆固醇、豆磷脂、硬脂酰胺来制备天麻素的前体脂质体的方法，然而由于天麻素与上述成膜材料的相容性不够理想，造成脂质体并未完全包封天麻素。

发明内容

本发明人惊喜地发现在制备普通脂质体时加入一定量的非离子型表面活性剂，将未包封的药物分散成超微粒，使药物镶嵌在胶团中，此部分应属胶体分散系统，另外一部分药物被非离子表面活性剂乳化成O/W或W/O/W型复合乳剂，包入乳滴中，从而避免脂质体对药物包封不全而成较大油滴。此外，这样制备得到的多相脂质体更加稳定，一般能经受100℃30分钟灭菌，灭菌后虽然也有聚结，但振摇后发生分子重排，脂质体的结构重新组合，而且粒径分布和粒径大小与灭菌前无显著差异，符合静脉注射。

为了解决普通天麻素多相脂质体注射液的不足，本发明人提出了一种天麻素多相脂质体注射液及其制备方法，并且本发明的天麻素多相脂质体注射液完全符合静脉注射的要求。

此外，为了形成品质优良的天麻素多相脂质体注射液，重要地是寻找能与天麻素良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以及寻找能使多相脂质体形成稳定注射液的赋形剂成分。

为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和试验，发现特定重量配比的天麻素、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、吐温80、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、海藻糖和EDTA-2Na能制成天麻素多相脂质体注射液，其中，作为药物活性成分的天麻素的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，与现有技术中的天麻素注射液相比，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

一方面，本发明提供一种天麻素多相脂质体注射液，其主要由以下重量配比的成份制成：

其中，吐温80和聚氧乙烯40氢化蓖麻油优选按照1∶1的重量比配合使用。

作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。在本发明中，本发明人通过研究发现大豆磷脂酰肌醇特别适于作为基础磷脂成膜材料。

大豆磷脂酰肌醇作为一种天然磷脂，其含量非常高，容易获得，价格低廉。大豆磷脂酰肌醇的相变温度较高，易于形成稳定的脂质体膜。

当使用其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性、和渗漏率等性质差。

为了改善脂质体的稳定性，所用大豆磷脂酰肌醇的纯度为98％以上，优选99％以上。

在本发明的天麻素多相脂质体注射液中，相对于1重量份的天麻素而言，大豆磷脂酰肌醇的用量为0.8-2重量份。如果大豆磷脂酰肌醇的用量低于0.8重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果大豆磷脂酰肌醇的用量高于2重量份，则作为药物活性成分的天麻素的包封率下降，注射液的品质以及疗效降低。

在本发明的天麻素多相脂质体注射液中，胆固醇用于调节脂质体双分子层的流动性、通透性和稳定性。

胆固醇是一种双亲性分子，与大豆磷脂酰肌醇相结合，阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入大豆磷脂酰肌醇双层，类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时，胆固醇可以使膜减少有序排列，增加流动性；当高于相变温度时，胆固醇可以增加膜的有序排列，从而降低膜的流动性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。

本发明人经过研究发现，相对于1重量份的天麻素而言，胆固醇的用量为0.4-2重量份。当胆固醇的用量低于0.4重量份时，膜稳定性降低，天麻素易于渗漏；当胆固醇的用量高于2重量份时，天麻素脂质体膜流动性过高，被包裹在脂质体内的天麻素易于释放。

吐温80和聚氧乙烯40氢化蓖麻油是非离子表面活性剂，在制备脂质体时将未包封的药物分散成超微粒，使药物镶嵌在胶团中，另外一部分药物被非离子表面活性剂乳化成O/W或W/O/W型复合乳剂，包入乳滴中。非离子表面活性剂使脂质体的粒径均匀，粒径较小，灭菌后虽然也有聚结，但振摇后发生分子重排，脂质体的结构重新组合，而且粒径分布和粒径大小与灭菌前无显著差异。

本发明人经过研究发现，相对于1重量份的天麻素而言，吐温80和聚氧乙烯40氢化蓖麻油的用量各为0.2-0.5重量份，且吐温80和聚氧乙烯40氢化蓖麻油的重量之比为1∶1。当吐温80和聚氧乙烯40氢化蓖麻油的用量低于0.2重量份或高于0.5重量份时，或者两者使用重量配比不当时，所形成的脂质体包封率低，粒径较大，粒径不均匀。

海藻糖通过氢键与磷脂的极性基团结合来稳定冻结时的脱水膜，有效地取代了在极性基团周围的残余水分；还可增加空间效应，减少磷脂酰基之间的范德华力，降低相变温度。

研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的天麻素多相脂质体注射液的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

研究发现，当使用上述特定量的天麻素、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、吐温80、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、海藻糖和EDTA-2Na时，可以得到品质优良的天麻素脂质体，其粒径均匀，包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。

在本发明的天麻素多相脂质体注射液中，使用EDTA-2Na作为赋形剂，用于形成稳定的注射液。

EDTA-2Na能够与碱土金属和重金属离子形成稳定的水溶性螯合剂，螯合剂中的离子几乎无游离离子的特性，EDTA-2Na螯合能催化自氧化反应的如铜、铁和锰等微量金属离子，提高药物制剂的稳定性。

本发明的天麻素多相脂质体注射液，其规格可以为1ml∶100mg、2ml∶200mg、5ml∶500mg和5ml∶600mg(注射液体积∶天麻素重量)。

脂质体的制备方法有很多，如注入法、薄膜分散法、熔融法、冷冻干燥法、超声分散法和冻融法等，本发明天麻素多相脂质体注射液的制备优选采用冷冻干燥法。

冷冻干燥法制备脂质体是将类脂高度分散在水溶液中，冷冻干燥，然后再分散到含药的水性介质中，形成脂质体。本试验成功的要素之一是冻结保护剂的选择，冻结保护剂能降低冷冻和融化过程对脂质体的损害。

另一方面，本发明还提供一种天麻素多相脂质体注射液的制备方法，具体包括如下制备步骤：

(1)将吐温80、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、胆固醇以及大豆磷脂酰肌醇溶于适量的缓冲盐溶液中，搅拌，超声粉碎处理两次，每次10分钟，然后加入海藻糖混匀，在真空条件下冷冻干燥，制成未包封药物的多相脂质体；

(2)将天麻素溶于适量的缓冲盐溶液中，搅拌，使其溶解，经超声法处理两次，每次10分钟；

(3)向未包封药物的多相脂质体中加入天麻素缓冲盐溶液和EDTA-2Na，置组织捣碎机中高速搅拌；

(4)加入注射用水定容，0.45μm微孔滤膜过滤，灌封于安瓿瓶中，121℃灭菌15分钟，制得天麻素多相脂质体注射液。

上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种，优选为pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液。

上述所述的制备方法，其中步骤(3)中所述的组织捣碎机的搅拌速度为5000rpm。

本发明提供的天麻素脂质体注射剂可以用于静脉注射中。其应用方法为：静脉注射，每次600mg(以天麻素计)，一日1次，用5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液250-500ml稀释后使用。

制备脂质体的挑战在于如何使脂质体膜形成适当大小、适当结构材料的包封率高的囊泡。而且这些材料在形成脂质体不漏出。

本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺，获得了品质优良的天麻素多相脂质体注射液，脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高，并且适合于静脉注射。

本发明的脂质体注射液减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，具有良好的制剂稳定性，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率。

通过本发明方法制得的天麻素多相脂质体注射液，符合静脉注射的要求，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1是本发明天麻素多相脂质体注射液及对比例和上市制剂的血药浓度-时间曲线。

其中：

实施例1

对比例2对比例3

对比例4

上市例

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，但绝不是对本发明范围的限制。下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1天麻素多相脂质体注射液的制备

所用原辅料成分及其重量如下：

采用如下制备工艺制备天麻素多相脂质体注射液：

(1)将50g吐温80、50g聚氧乙烯40氢化蓖麻油、200g胆固醇以及200g大豆磷脂酰肌醇溶于500ml pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中，搅拌，超声粉碎处理两次，每次10分钟，然后加入60g海藻糖混匀，在真空条件下冷冻干燥，制成未包封药物的多相脂质体；

(2)将100g天麻素溶于200ml pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中，使其溶解，经超声法处理两次，每次10分钟；

(3)向未包封药物的多相脂质体中加入天麻素缓冲盐溶液和EDTA-2Na，置组织捣碎机中5000rpm高速搅拌；

(4)加入注射用水定容至1000ml，0.45μm微孔滤膜过滤，灌封于安瓿瓶中，121℃灭菌15分钟，制得1000支天麻素多相脂质体注射液。

实施例2天麻素多相脂质体注射液的制备

所用原辅料成分及其重量如下：

采用如下制备工艺制备天麻素多相脂质体注射液：

(1)将70g吐温80、70g聚氧乙烯40氢化蓖麻油、300g胆固醇以及300g大豆磷脂酰肌醇溶于1000ml pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中，搅拌，超声粉碎处理两次，每次10分钟，然后加入40g海藻糖混匀，在真空条件下冷冻干燥，制成未包封药物的多相脂质体；

(2)将200g天麻素溶于400ml pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中，使其溶解，经超声法处理两次，每次10分钟；

(4)加入注射用水定容至2000ml，0.45μm微孔滤膜过滤，灌封于安瓿瓶中，121℃灭菌15分钟，制得1000支天麻素多相脂质体注射液。

实施例3天麻素多相脂质体注射液的制备

所用原辅料成分及其重量如下：

采用如下制备工艺制备天麻素多相脂质体注射液：

(1)将100g吐温80、100g聚氧乙烯40氢化蓖麻油、200g胆固醇以及400g大豆磷脂酰肌醇溶于2000ml pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中，搅拌，超声粉碎处理两次，每次10分钟，然后加入150g海藻糖混匀，在真空条件下冷冻干燥，制成未包封药物的多相脂质体；

(2)将500g天麻素溶于1000ml pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中，使其溶解，经超声法处理两次，每次10分钟；

(4)加入注射用水定容至5000ml，0.45μm微孔滤膜过滤，灌封于安瓿瓶中，121℃灭菌15分钟，制得1000支天麻素多相脂质体注射液。

对比例1-4天麻素脂质体注射液的制备

采用分别与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的成份制成天麻素多相脂质体注射液。

表1对比例1-3中所用成份

其中，“/”表示未使用。

对比例4为根据CN1411803A的实施例3制备得到的天麻素前体脂质体，遇水后重组成天麻素脂质体溶液，制成天麻素脂质体注射液。

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-4中未包封药物的脂质体，置于SubmicronParticle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2脂质体粒径检测结果

从表2可知，实施例1-3制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-4制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得脂质体的颗粒外观及其平均粒径明显优于对比例1-4中所得的脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得天麻素脂质体的外观劣于本发明，平均粒径明显大出很多。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-4中制备的天麻素脂质体注射液以5000r/min的转速高速离心，离心20分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测天麻素含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体注射液的包封率显著的高于对比例1-4的脂质体注射液的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外，或者制备工艺为非本发明所述工艺时，所得脂质体的包封率低于本发明。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例和对比例制备的样品和上市天麻素注射液(批号：20110702，湖南五洲通药业有限责任公司)分别置于高温40℃、相对湿度75％的条件下6个月，进行加速试验考察，实验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，对比例和上市制剂含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4血药浓度的测定

将28只大鼠随机分成7组，每组分别注射给药实施例1及对比例2-4中制备的脂质体注射液，以及市售天麻素注射液(批号：20110702，湖南五洲通药业有限责任公司)，注射量为50mg天麻素。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1制备的天麻素多相脂质体注射液、对比例2-4制备的天麻素脂质体注射液和市售天麻素注射液的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与对比例制备的天麻素脂质体注射液和市售天麻素注射液相比，本发明实施例1中制备的天麻素多相脂质体注射液具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了改进的缓释效果，生物利用度增加。

试验例5检测方法

本试验例为本发明注射液pH值、注射液项下有关的各项规定项目的检测。

pH值：按照中国药典2010年版二部附录VIH测定，本发明天麻素多相脂质体注射液pH为5.0-7.0，符合质量标准。

热源：取本发明实施例1的注射液，依法检查(中国药典2010年版二部附录XID测定)，剂量按家兔体重每千克缓慢注射1ml，符合规定。

异常毒性：取本发明实施例1的注射液，用无菌注射用水稀释成每毫升含天麻素100mg的溶液，依法检查(中国药典2010年版二部附录XIC测定)，本品符合规定。

无菌：取本发明实施例1的注射液，依法检查(中国药典2010年版二部附录XIH测定)，本品符合规定。

澄明度：取本发明实施例1的注射液，依《澄明度检查细则和判断标准》检查，本品符合规定。

试验例6毒性试验

急性毒性试验表明：小鼠尾静脉注射本发明天麻素多相脂质体注射液(实施例1)，剂量为5g/kg(以天麻素计)，观察三天，未见中毒死亡。

亚急性毒性试验表明：犬及小鼠给药4-6天后，对红细胞、白细胞和血小板计数无影响。

血液化验测定对谷丙转氨酶、非蛋白质及胆固醇均无影响。用动物的心、肺、脾、肝、肾、胃和肠作组织切片镜检，未见细胞变性。以上结果表明，天麻素对造血系统、肝、肾功能及血脂均无影响。

工业实用性

由上述实施例以及实验例的结果可知，本发明的天麻素脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，符合静脉注射要求，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims

1.一种天麻素多相脂质体注射液，其特征在于主要由以下重量配比的成份制成：

2.根据权利要求1所述的天麻素多相脂质体注射液，其特征在于规格可以为1ml∶100mg、2ml∶200mg、5ml∶500mg和5ml∶600mg(注射液体积∶天麻素重量)。

3.一种制备天麻素多相脂质体注射液的方法，其特征在于包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的缓冲盐溶液是选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种，优选为pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液。

5.根据权利要求3所述的天麻素多相脂质体注射液的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述的组织捣碎机的搅拌速度为5000rpm。

6.根据权利要求1所述的天麻素脂质体注射剂在制备静脉注射给药的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其中所述的静脉注射给药包括：静脉注射，每次600mg(以天麻素计)，一日1次，用5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液250-500ml稀释后使用。

8.权利要求1所述的天麻素多相脂质体注射液在制备治疗神经衰弱、神经衰弱综合征及血管神经性头痛等症(如偏头痛、三叉神经痛、枕骨大神经痛等)，脑外伤性综合征，眩晕症如美尼尔病、药性眩晕、外伤性眩晕、突发性耳聋、前庭神经元炎和椎-基底动脉供血不足的药物中的应用。