CN101455405B - 一种促进手术后伤口愈合的食品或药品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种促进手术后伤口愈合的食品或药品,其特征在于它的活性成分主要由下列重量份的原料制成:大豆肽1-100g、海洋胶原肽1-100g。原料中还包括下述重量份的葡萄糖酸锌0.01-0.5g、维生素C0.1-1g、枸杞多糖0.1-10g、水溶性膳食纤维1-100g、酪蛋白磷酸肽0.1-10g中的一种或多种;本发明可采用保健食品或药品上可接受的制备工艺和辅料制成的包括但不限于颗粒剂、口服液等常规口服制剂。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,特别是涉及海洋胶原肽和大豆肽在促进手术后伤口愈合的保健食品或药品。
背景技术
王正国主编《创伤愈合与修复》,山东科学技术出版社1998年第1版中论述了伤口愈合是组织生长、再生的一种特殊生物学过程,所涉及的炎症反应细胞增殖、新生血管和淋巴管形成,以及细胞外基质合成,是一个连续动态过程,不能截然分开。因此,凡是能促进或抑制某一个环节的因素,均可影响伤口愈合的整个过程。伤口愈合过程中的某些环节可受一些营养代谢因素的影响,如某些氨基酸缺乏或失衡会严重影响伤口蛋白质合成和伤口愈合,碳水化合物和脂肪代谢紊乱对伤口愈合有直接和间接双重作用,维生素C、微量元素是体内许多金属酶的基本辅助成分,参与蛋白质合成过程中多聚体形成。
朱兆明《皮肤储存与应用》,人民军医出版社2002第1版中论述了,胶原蛋白(也称胶原,Collagen)是细胞外基质的主要成分,是一种白色、不透明、无支链的纤维蛋白质。胶原是参与创伤愈合的主要结构蛋白。同时胶原蛋白可促进肉芽组织生成,加速创面的愈合。胶原分子对成纤维细胞的趋化反应,使胶原在伤口愈合过程中起重要作用。
关于促进伤口愈合的药物,申请号98804333.5、97180607.1、97180613.6、98813966.9、97180606.3专利文献中分别公开了N-羟基-2-(烷基、芳基或杂芳基硫烷基、亚磺酰基或磺酰基)-3-取代的烷基、芳基或杂芳基酰胺、邻-亚磺酰氨基杂芳基异羟肟酸、邻亚磺酰氨基芳基异羟肟酸、N-羟基-2-(烷基、芳基或杂芳基硫烷基、亚磺酰基或磺酰基)-3取代的烷基、芳基或杂基酰胺、β-亚磺酰氨基异羟肟酸等用于组织溃疡、异常的伤口愈合,其机理为金属蛋白酶抑制剂。
关于低分子肽类的药物,申请号200410022266.2专利文献中公开了c-ski基因及其多肽促进损伤愈合又减轻瘢痕;申请号01109400.1专利文献中公开了基因重组成纤维细胞生长因子-8a多肽具有上调细胞连接蛋白(Connexin 43)表达,活化上皮功能,加速伤口愈合,以及促进软骨分化等生物活性;申请号200610152684.2专利文献中公开了具有促进血管形成、组织再生及伤口愈合作用的多肽组合制剂;申请号200410098483.X专利文献中公开了一组具有促进新血管形成、组织再生及伤口愈合作用的活性小分子多肽:胸腺素β16及其药物组合物;申请号200410015853.9专利文献中公开了促进皮肤、结缔组织、骨生长的多肽组合物;申请号01820299.3专利文献中公开了新的一类多肽成纤维细胞生长因子具有促进伤口愈合等作用;申请号200610112159.8专利文献中公开了涉及用于加速伤口愈合的组合物,该组合物中包含有血栓调节蛋白的EGF样区域之氨基酸序列的多肽或其中保守性变异体;申请号00116910.6专利文献中公开了一种新的多肽——上皮形成素9.9和编码这种多肽的多核苷酸用于促进伤口愈合等;申请号99816184.5专利文献中公开了取代的杂环酰基-三肽在伤口愈合和防止血小板凝聚中的用途。
海洋胶原肽是以海洋鱼皮作主要原料,用酶解法生产的、相对分子质量低于1000的低聚肽(短肽)为主要成分的粉末状产品。
彭宏斌《海洋胶原肽辅助降血糖和免疫营养功能的效果研究》,CHKD博硕士学位论文全文数据库2008年博士论文中报导海洋胶原肽具有辅助降血糖功能,可改善糖尿病患者胰岛素敏感性和改善胰岛素分泌功能,缩短糖尿病患者的血糖调整期,降低夜间低血糖的发生率。海洋胶原肽短期干预手术后患者可以改善营养状况、提高免疫能力、缩短平均住院日。
刘桂琴等《海洋胶原肽对2型糖尿病大鼠过氧化应激标志物表达的影响》,中国组织工程研究与临床康复,2008,12(23)中报导体外实验证实海洋胶原肽具有抗氧化等生物活性。海洋胶原肽可能具有一定的抗炎症效应。
关于海洋胶原肽的用途,申请号200710157641.8专利文献中公开了海洋胶原肽作为制备降血糖药物、保健食品或食品的用途,申请号200710157643.7专利文献中海洋胶原肽作为制备抗氧化药物、保健食品、食品或化妆品的用途,申请号200610086812.8专利文献中公开了海洋胶原肽在制备免疫调节药物或食品中的用途。
大豆肽是以大豆、豆粕或大豆蛋白为主要原料,用酶解法或微生物发酵法生产的,主要成分为肽,且分子量分布在10000Dalton以下的粉末状产品。
大豆肽含有的八种必需氨基酸,除蛋氨酸为限制氨基酸以外,甘氨酸、脯氨酸等其它氨基酸均超过或接近世界卫生组织(WHO)的推荐标准,因此具有较高的营养价值。分子量小于1000的肽吸收率高达90%以上。优质大豆肽的分子量分布以小于1000的为主,分子量主要在300~700范围内。
大豆肽能促进矿物质吸收、降低血压,大豆肽能促进脂肪代谢,大豆肽还有免疫功能,抗氧化功能,降低血糖作用。
关于大豆肽的用途,申请号200510077612.1专利文献中公开了具有解酒护肝功能的产品及制备方法和用途,申请号200610026655.1专利文献中公开了一种促进肥牛肌腱发育的多肽及微生物制剂及制备方法,以上专利均未述及肽用于促进手术后伤口愈合的用途。
现有天然来源的短肽类产品中有同仁堂牌短肽特殊营养食品,分别有供产后人群食用、肾病患者、瘤患者、肝病患者、糖尿病患者、骨伤患者、术后患者食用的相应产品。其中术后患者食用的短肽特殊营养食品配方为:海洋胶原肽、海洋骨原肽、乳清蛋白肽、卵白蛋白肽、山药提取物、大枣提取物、桑椹提取物、低聚异麦芽糖、复合维生素、复合矿物质,产品特征在于短肽分子量小于1000D,适用于各种外科手术围手术期、烧伤病人、营养不良以及体弱者。
李英杰等《枸杞多糖免疫调节作用机制研究进展》中国新药杂志,2004,13(10))研究表明枸杞多糖能人体增强免疫力;杨海军,功能性食品配料——水溶性膳食纤维,中国食物与营养,2003,(9)报导水溶性膳食纤维能增强胃肠蠕动;黄祥元,酪蛋白磷酸肽及其促进矿物质吸收的因素,食品与机械,2008,(3)报导酪蛋白磷酸肽能增强钙、铁等微量元素的吸收。
综上所述,目前还没有关于分子量在10000以下的天然来源的肽与葡萄糖酸锌、维生素C组成的应用于促进手术后伤口愈合方面药品或食品的报道,也没有在其中加入枸杞多糖、水溶性膳食纤维、酪蛋白磷酸肽的药品或食品的报道。
发明内容
本发明的目的提供一种促进手术后伤口愈合的保健食品或药品及其制备方法。
本发明的技术方案是该促进手术后伤口愈合的食品或药品,它的活性成分主要由下列重量份的原料制成的口服制剂:大豆肽1-100g、海洋胶原肽1-100g。
优选的技术方案可以是上述的主要活性成份中加入下述重量份的葡萄糖酸锌0.01-0.5g、维生素C 0.1-1g、枸杞多糖0.1-10g、水溶性膳食纤维1-100g、酪蛋白磷酸肽0.1-10g中的一种或多种原料。
较优选的方案是由大豆肽20-60g、海洋胶原肽20-60g、葡萄糖酸锌0.1-0.3g、维生素C 0.2-0.8g组成。
更较优选的方案是由大豆肽30g、海洋胶原肽30g、葡萄糖酸锌0.3g、维生素C 0.4g组成。
本发明中枸杞多糖可以增强免疫力;加入水溶性膳食纤维增强胃肠蠕动;加入酪蛋白磷酸肽可增强钙、铁等微量元素的吸收。
本发明可采用保健食品或药品上可接受的制备工艺和辅料制成的包括但不限于颗粒剂、口服液等常规口服制剂。
本产品具有成本低,疗效好,天然来源无毒副作用特点。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进一步说明:
实施例1:取海洋胶原肽300g、大豆肽300g、水溶性膳食纤维100g、糖粉258.4g、酪蛋白磷酸肽5g、葡萄糖酸锌3g、维生素C4g、枸杞多糖10g、柠檬酸10g、阿斯巴甜2g、固体香精5g,将所有原辅料分别过100目筛,用等比递增的方法混合均匀。将混匀的物料用聚维酮K30的10%水溶液作粘合剂进行沸腾制粒,控制雾化压力为0.15MPa,物料温度为45℃,进风温度为75℃;所得颗粒用20目筛整粒。用纸铝包装,每袋10克。
实施例2:取海洋胶原肽300g、大豆肽300g、糖粉400g,将原辅料分别过100目筛,混合均匀。将混匀的物料用聚维酮K30的10%水溶液作粘合剂进行沸腾制粒,控制雾化压力为0.15MPa,物料温度为45℃,进风温度为75℃;所得颗粒用20目筛整粒。用纸铝包装,每袋10克。
实施例3:取海洋胶原肽400g、大豆肽200g、糖粉400g,将原辅料分别过100目筛,混合均匀。将混匀的物料用聚维酮K30的10%水溶液作粘合剂进行沸腾制粒,控制雾化压力为0.15MPa,物料温度为45℃,进风温度为75℃;所得颗粒用20目筛整粒。用纸铝包装,每袋10克。
实施例4:取海洋胶原肽200g、大豆肽400g、糖粉400g,将原辅料分别过100目筛,混合均匀。将混匀的物料用聚维酮K30的10%水溶液作粘合剂进行沸腾制粒,控制雾化压力为0.15MPa,物料温度为45℃,进风温度为75℃;所得颗粒用20目筛整粒。用纸铝包装,每袋10克。
实施例5:取海洋胶原肽30g、大豆肽30g、水溶性膳食纤维30g、酪蛋白磷酸肽0.5g、葡萄糖酸锌0.3g、维生素C0.4g、枸杞多糖1g、柠檬酸2g、三氯蔗糖0.1g、麦芽糖醇150g、乙二胺四乙酸二钠0.2g、香精(MANE W0826602)0.51g,在配制罐中加入500ml纯化水,依次加入海洋胶原肽、大豆肽、乙二胺四乙酸二钠、枸杞多糖、柠檬酸和水溶性膳食纤维,搅拌使溶解。用板框过滤器过滤,得到滤液。将三氯蔗糖、维生素C、酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌用适量纯化水溶解后,加入到滤液中,再加入麦芽糖醇,加水至1000ml,搅拌15分钟,加入香精,再搅拌10分钟,用2μm滤芯过滤。灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例6:取海洋胶原肽30g、大豆肽30g、葡萄糖酸锌0.3g、维生素C 0.4g,在配制罐中加入500ml纯化水,依次加入海洋胶原肽、大豆肽,搅拌使溶解。用板框过滤器过滤,得到滤液。将维生素C、葡萄糖酸锌用适量纯化水溶解后,加入到滤液中,加水至1000ml,搅拌15分钟,用2μm滤芯过滤。灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例7:取海洋胶原肽1g、大豆肽99g,在配制罐中加入500ml纯化水,依次加入海洋胶原肽、大豆肽,搅拌使溶解。用板框过滤器过滤,得到滤液,加水至1000ml,搅拌15分钟,用2μm滤芯过滤。灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例8:取海洋胶原肽99g、大豆肽1g,在配制罐中加入500ml纯化水,依次加入海洋胶原肽、大豆肽,搅拌使溶解。用板框过滤器过滤,得到滤液,加水至1000ml,搅拌15分钟,用2μm滤芯过滤。灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
一、促进手术后大鼠伤口愈合的功效研究
1.材料与方法
1.1原料:实施例1-4样品、海洋胶原肽粉。
1.2实验动物:健康雄性二级SD大鼠,体重230~250克。
1.3实验条件:清洁级动物室,温度范围21-23℃,相对湿度50%-60%。
1.4实验方法
1.4.1动物模型建立方法:大鼠经1%戊巴比妥钠麻醉后,剃去背部皮肤,常规皮肤消毒,背部两侧分别切一个2cm长的纵行切口,同时切开肌肉,深达腹腔,然后逐层缝合肌肉和皮肤。整个过程模拟临床手术过程,同时手术当天计为术后第0天(POD0),以此类推。
1.4.2实验动物分组:取144只体重为230-250g的大鼠,随即分为6组,每组24只,分别为空白组、实施例样品1-4(0.667g/kg.bw)、海洋胶原肽粉(0.667g/kg.bw)。手术当天开始,每日灌胃。分别于第3、7、14天处死大鼠,每个时间点各8只动物。
1.4.3伤口愈合观察
1.4.3.1肉眼观察:每隔日用放大镜观察切口变化情况。各组于术后第3天观察伤口及其周围组织的创伤反应,第7、14天观察伤口的恢复情况。术后创伤反应及伤口恢复情况统一按本实验室自制标准评定。
1.4.3.1.1伤口及其周围组织的创伤反应评定:①I期反应。伤口有轻度肿胀。②II期反应。伤口及周围组织轻度水肿,皮下有散在淤血斑。③III期反应。切口有少量血痂附着,伤口及周围组织明显水肿。
1.4.3.1.2伤口恢复情况评定:①优。伤口组织无肿胀,皮肤青紫现象消失。②良。伤口组织轻度肿胀,皮下淤血斑消失,青紫现象逐渐消退。③差。伤口及周围组织肿胀。
1.4.3.2切口愈合的组织病理学观察:各组大鼠分别于术后第3、7、14天于伤口处距切口边缘约0.5cm取全层皮肤组织。左侧伤口所取组织的一半用4%多聚甲醛固定,保存待做石蜡切片及HE、Masson染色,另一半用于抗拉力检测,右侧伤口皮肤用于羟脯氨酸测定和其他指标的检测。
1.4.3.3胶原纤维染色(Masson染色):组织切片脱蜡至蒸馏水,苏木素染色5~10分钟,盐酸酒精分化,流水蓝化,蒸馏水洗,丽春红酸性品红液中染5~8分钟,蒸馏水,1%磷钼酸中染1~3分钟,直接入苯胺蓝液或亮绿液5分钟,水速洗,置60℃温箱中烘干,二甲苯透明,封固。结果:胶原纤维绿色,肌纤维、纤维素红色。
1.4.3.4切口的抗张强度检测:术后第7、14天,沿切口垂直方向切取以切口为中线,宽为0.5cm长为中线双侧各0.5cm,并包含切口在内的皮肤试件组织,去除皮下脂肪组织,于长方形短边以丝线缝合作为牵引线,将皮条置于带有张力感受器的装置中间,张力感受器另一端连接于多功能生物信号采集系统,采用带有游标卡尺的微调装置手动逐渐拉伸皮条,记录皮条被拉断时的张力。测微尺测量皮肤的厚度,每平方毫米面积的张力即为切口的抗张强度。
1.4.3.5羟脯氨酸测定切取大鼠切口周围2-3毫米的皮肤用于测定羟脯氨酸,方法依据南京建成生物工程公司的羟脯氨酸检测试剂盒进行操作。
1.4.4统计方法:采用SPSS软件进行单因素方差分析。
2.结果
2.1大鼠术后伤口愈合的肉眼观察结果
肉眼观察表现,术后第3天,各组创伤反应比较好,但是没有统计学意义(表1)。术后第7和14天,各组大鼠伤口愈合好,并无统计学意义(表2)。
表1各组伤口创伤反应情况比较例(%)
表2各组伤口恢复情况比较例(%)
2.2肽对大鼠术后伤口皮肤愈合的组织学观察结果
组织学结果发现,术后第7天组织切片观察:各组伤口表皮、瘢痕组织、炎性细胞浸润、成纤维细胞和毛细血管相当,与海洋胶原肽组无显著差异。术后第14天组织切片观察显示,各组伤口表皮完整,瘢痕组织明显少于对照组,炎性细胞明显减少,与海洋胶原肽组无显著差异。
2.3Masson染色光镜组织学观察
Masson染色将结缔组织和胶原纤维染成绿色,平滑肌染成红色,细胞核染成褐色。术后第7天结果发现,各组大鼠切口胶原纤维数量相当,与海洋胶原肽组无显著差异。术后第14天同样发现各组胶原纤维数量相当,与海洋胶原肽组无显著差异。
2.4术后不同时间伤口抗张力比较
术后第7、14天各组伤口抗张力值见表3。从表3可见,第7天和第14天各组之间伤口的抗张力强度与海洋胶原肽组无统计学差异(P>0.05)。
表3术后各组伤口抗张力值(g/mm2,`X□SD)
注:*表示与对照组比较,P<0.05
2.5切口肉芽组织羟脯氨酸结果
术后第7、14天各组伤口羟脯氨酸检测结果见表4。从表4可见,第7天和第14天各组之间伤口的羟脯氨酸表达无差异(P>0.05)。
表4术后各组羟脯氨酸结果(μg/mg,X□SD)
注:*表示与对照组比较,P<0.05
3.结论
本研究发现经口给予术后大鼠相同浓度的本发明样品后,能提高术后伤口的抗张力值、胶原纤维数量、羟脯氨酸的表达水平、伤口恢复的效果,各给药组无显著性差异,都具有临床实际应用价值。
二、低聚肽含量测定
1.方法提要
低分子量的蛋白质水解物(包含肽类及游离氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液;高分子量的蛋白质在三氯乙酸溶液中易沉淀。样品经三氯乙酸溶液溶解后,离心分离出沉淀蛋白质物质,测定出离心清液中的酸溶蛋白质含量,清液中的酸溶蛋白质含量减去游离氨基酸含量即为低聚肽的含量。
2.分析步骤
2.1酸溶蛋白质含量的测定
称取2g(精确至1mg)样品,加入10mL 15%三氯乙酸溶液,混合均匀,静置10min。将样品溶液在4000rpm下离心10min后,取全部清液,按GB/T 5009.5规定的方法测定清液中的酸溶蛋白质,蛋白质换算系数为6.25。检验结果根据样品的干燥失重,折算为干基。
2.2游离氨基酸含量的测定
样品前处理:称取20~30mg样品,精确到0.0001g,用3%磺基水杨酸溶液溶解均匀。将样品溶液转移至50ml容量瓶中,定容。将样品溶液在转速为4000r/min离心机上离心5min得清液,再用0.45μm微孔滤膜过滤清液,将滤液转移至50ml容量瓶中,定容后作为仪器检测用样品。其余操作同GB 12292水果、蔬菜汁游离氨基酸含量的测定规定的方法。
2.3结果的表述
低聚肽的含量P2按式(1)计算:
P2□P1□A……………………………………………………(1)
式中:
P2——样品中低聚肽含量(以干基计),%;
P1——样品中酸溶蛋白质含量(以干基计),%;
A——样品中游离氨基酸含量(以干基计),%。
2.4测定结果
实施例1-5测定低聚肽含量,结果见表5。
表5、低聚肽含量测定结果
3.相对分子质量小于1000的肽所占比例(高效凝胶过滤色谱法)
3.1方法提要
采用高效凝胶过滤色谱法测定。即以多孔性填料为固定相,依据样品组分分子体积大小的差别进行分离,在肽键的紫外吸收波长220nm条件下检测,使用凝胶色谱测定相对分子质量分布的专用数据处理软件(即GPC软件),对色谱图及其数据进行处理,计算得到低聚肽的相对分子质量大小及分布范围。
3.2试剂
乙腈:色谱纯;三氟醋酸:分析纯;水:超纯水或二次蒸馏水。
相对分子质量校正曲线所用标准品:细胞色素C(cyyochrome,MW12500);抑酞酶(aprotinin,MW6500);杆菌酶(bacitracin,MW1450);乙氨酸-乙氨酸-酪氨酸-精氨酸(MW451);乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸(MW189)
3.3仪器和设备
高效液相色谱仪:配有紫外检测器和含有GPC数据处理软件的色谱工作站或积分仪;流动相真空抽滤脱气装置;超声波振荡器;分析天平:感量0.0001g。
3.4色谱条件与系统适应性实验
色谱柱:TSKgel G2000 SWXL 300mm×7.8mm或性能与此相近的同类型其他适用于测定蛋白质和多肽的凝胶柱;流动相:乙腈∶水∶三氟乙酸,45∶55∶0.1(体积比)检测波长:UV220nm;流速:0.5ml/min;柱温:30℃;进样体积:10μl。
为使色谱系统符合检测要求,规定在上述色谱条件下,凝胶色谱柱的柱效即理论塔板数(N)按三肽标准品(乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸)峰计算不低于5000,低聚肽的分配系数(Kd)应在0~1之间。
3.5相对分子质量校正曲线制作
分别用流动相配制成0.1%(W/V)的上述不同相对分子质量的肽标准品溶液,用孔径为0.2-0.5μm聚四氟乙烯或尼龙过滤膜过滤后分别进样,得到系列标准品的色谱图。以相对分子质量的对数(1gMW)对保留时间作图或作线性回归得到相对分子质量校正曲线及其方程。
3.6样品制备
称取样品20.0mg于10mL容量瓶中,用流动相定容至刻度,超声振荡10min,使样品充分溶解混匀,用孔径为0.2-0.5μm聚四氟乙烯或尼龙过滤膜过滤后,上机进样。
3.7相对分子质量的计算
将3.6制备的样品溶液在上述色谱条件下分析。然后用GPC数据处理软件,将样品的色谱数据代入校正曲线方程中进行计算,即可得到样品中肽的相对分子质量及其分布范围。用峰面积归一化法计算相对分子质量范围在1000以下的肽的峰面积相对百分比之和。
3.8测定结果
取实施例1-5样品测定分子量分布范围,测定结果见表6-10。
表6、实施例1
表7、实施例2
表8、实施例3
表9、实施例4
表10、实施例5
以上结果表明,本发明制备的保健食品主要成分的分子量主要集中在140-1000,占10000分子量以下物质中的80%以上。
Claims (6)
1.一种促进手术后伤口愈合的食品或药品,其特征在于主要由下列重量份的原料作为活性成分制成口服制剂:大豆肽1-100份、海洋胶原肽1-100份。
2.根据权利要求1所述的食品或药品,其特征在于原料中还包括下述重量份的葡萄糖酸锌0.01-0.5份、维生素C0.1-1份、枸杞多糖0.1-10份、水溶性膳食纤维1-100份、酪蛋白磷酸肽0.1-10份中的一种或多种原料。
3.根据权利要求2所述的食品或药品,其特征在于主要由下列重量份的原料制成:大豆肽20-60份、海洋胶原肽20-60份、葡萄糖酸锌0.1-0.3份、维生素C0.2-0.8份。
4.根据权利要求3所述的食品或药品,其特征在于主要由下列重量份的原料制成:大豆肽30份、海洋胶原肽30份、葡萄糖酸锌0.3份、维生素C0.4份。
5.根据权利要求1--4任一所述的食品或药品,其特征在于:可采用食品或药品上常规的制备工艺和辅料制成常规口服制剂。
6.根据权利要求5所述的食品或药品,其特征在于:口服制剂为颗粒剂或口服液。
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