CN101433620A

CN101433620A - 一种龙眼水溶性活性物质及其提取方法和应用

Info

Publication number: CN101433620A
Application number: CNA2008102198543A
Authority: CN
Inventors: 张名位; 唐小俊; 张瑞芬; 魏振承; 池建伟; 张雁; 邓媛元; 李健雄
Original assignee: GUANGDONG BOSUN HEALTH FOOD RESEARCH DEVELOPMENT CENTER; Agricultural Biotechnology Research Institute Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; Sericulture and Agri Food Research Institute GAAS
Current assignee: Guangdong Bosun Health Food Co., Ltd.; Sericulture and Agri Food Research Institute GAAS
Priority date: 2008-12-10
Filing date: 2008-12-10
Publication date: 2009-05-20
Anticipated expiration: 2028-12-10
Also published as: CN101433620B

Abstract

本发明公开了一种龙眼水溶性活性物质及其提取方法和在制备具有免疫调节作用的保健食品中的应用，该提取方法包括：(1)磨浆；(2)酶解；(3)灭酶、过滤和浓缩；(4)调配；(5)干燥。本发明提取效率高，反应条件温和，经济环保，提高了龙眼的附加值，推进了龙眼工业的深加工。

Description

一种龙眼水溶性活性物质及其提取方法和应用

技术领域

本发明涉及一种水溶性龙眼活性物质，还涉及该龙眼水溶性活性物质的提取方法及其在制备具有调节免疫作用的保健食品中的应用。

背景技术

龙眼是我国南方重要的经济作物之一，总产量居世界首位。早在汉朝时期，龙眼就已作为药用，《神农本草经》、《本草纲目》等著名的中药书里，都记载着龙眼具有补益心脾、养血安神等功效。因此，研究龙眼果肉中水溶性生物活性物质及其提取制备具有重要的开发应用价值。

目前我国龙眼的加工主要以龙眼干、龙眼果肉(桂圆)等初级产品为主，附加值较低，精加工产品少，开发高值的龙眼产品是其加工利用急需解决的重要问题。

现有技术对龙眼果肉中水溶性生物活性物质的提取方法主要有水提醇沉法、超声波提取法、微波前处理-热水浸提法，而对于酶解提取方法缺乏研究，酶解提取方法是利用酶对龙眼果肉中大分子物质的降解作用，使包裹在果肉组织中的活性物质得以更好的释放出来，从而促进其提取。

发明内容

本发明的目的在于提供一种龙眼水溶性活性物质及其提取方法。

本发明的目的还在于提供该方法制备的龙眼水溶性活性物质在制备具有免疫调节作用的保健食品中的应用。

本发明提供的龙眼水溶性活性物质，由龙眼干经预处理、磨浆、酶解、灭酶、调配和干燥后冷却得龙眼水溶性活性物质。

本发明提供的龙眼水溶性物质的提取方法为：取龙眼干预处理后磨浆，调节浆液pH3～4，温度30～50℃，加果胶酶和纤维素酶进行酶解2～4h后，再经灭酶、调配和干燥冷却即得龙眼水溶性活性物质。

进一步的：本发明所提供的该龙眼水溶性活性物质的提取方法，包括以下步骤：

(1)磨浆：取龙眼肉，加入其2～4倍重量的水，室温浸泡8～16h，磨浆，得浆液；

(2)酶解：在浆液中再加入龙眼肉6～12倍重量的水，调整pH3～4，温度30～50℃，加入果胶酶和纤维素酶，酶解2～4h；

(3)灭酶：调节温度为90～100℃，灭酶，过滤酶解液，浓缩，得浓缩液；

(4)调配：在浓缩液中加入麦芽糊精或β-环糊精进行调配，混匀，得混合液；

(5)干燥：预热混合液，进行喷雾干燥，冷却后即得龙眼水溶性活性物质。

步骤(2)中所述果胶酶的体积百分比为0.02～0.04％，纤维素酶的体积百分比为0.01～0.03％。

步骤(3)中浓缩至浓缩液中可溶性固形物的重量百分比为20～30％。

步骤(4)中所述麦芽糊精或β-环糊精占浓缩液的重量百分比为12～30％。

步骤(5)中预热的温度为40～65℃。

步骤(5)中调节热风温度160～210℃，热风流量20～33m³/h，入料流量0.1～0.3L/h。

采用酶解法处理技术可以有效地降解龙眼果肉中的纤维和果胶等一些生物大分子物质，促使各类营养和生理活性物质更容易被释放出来，从而明显提高了可溶性固形物的提取率。

上述方法制备的龙眼水溶性活性物质在制备具有免疫调节作用的保健食品中应用。

本发明方法制备的龙眼水溶性活性物质可以直接饮用或制备成食品学上所述的剂型或以活性物质增强剂的方式添加于保健食品。

本发明具有如下优点：

(1)本发明采用了酶解法处理技术，并对pH、温度、酶解时间、果胶酶和纤维素酶的用量等反应条件进行了优化，在该最优化条件下，总可溶性固形物提取率可达到84.87％，比传统水提工艺高出20％以上。

(2)本发明采用了喷雾干燥工艺，选择麦芽糊精或β-环糊精为助干剂，对喷雾干燥工艺条件热风温度、热风流量、入料流量等因素进行了响应面分析优化，建立了各因素的回归模型，确定了其最佳工艺参数。

(3)本发明酶解法与传统的热水法比较具有条件温和、效率高和环保等优点，符合工业发展要求，易于推广。

(4)本发明方法制备的龙眼水溶性活性物质提取物，不仅可以直接为男女老幼体虚体弱之人群食用，也可以以活性物质增强剂的方式添加于保健食品、普通食品等产品中，应用领域广阔，市场潜力巨大，这对促进龙眼深加工业的发展、提高龙眼产业的经济效益、推动龙眼产业的可持续发展具有重要意义。

附图说明

图1是LE和LS对小鼠脾淋巴细胞增值能力影响图。

具体实施方式

以下列举实施例只用于对本发明作进一步说明，不代表本发明的保护范围，其他人根据本发明的提示做出的非本质的修改和调整，仍属于本发明的保护范围。

(一)本发明龙眼水溶性活性物质的提取方法及应用

实施例1

取龙眼干10kg，除去皮及核，得龙眼肉，取2kg龙眼肉，加4L蒸馏水室温浸泡8h，用高速组织捣碎机捣碎，再加入12L蒸馏水，调整pH为3，按体积加入0.02％的果胶酶和0.01％的纤维素酶，30℃酶解2h，酶解完成后，90℃灭酶，过滤，收集滤液，真空浓缩至提取液中可溶性固形物含量为20％，按滤液重量加入12％的麦芽糊精，溶解混均，调节温度为45℃预热，调节热风温度为160℃、热风流量为20m³/h，入料流量为0.1L/h进行喷雾干燥，冷却后即得龙眼粉状水溶性活性物质提取物。

实施例2

取龙眼干10kg，除去皮及核，取2kg龙眼肉，加6L蒸馏水室温浸泡12h，用高速组织捣碎机捣碎，再加入18L蒸馏水，调整pH至3.5，按体积加入0.03％的果胶酶和0.02％的纤维素酶，40℃酶解3h，酶解完成后，95℃灭酶，过滤，收集滤液，真空浓缩至提取液中可溶性固形物含量为25％，按滤液重量加入21％的β-环糊精，溶解混均，调节温度为50℃预热，调节热风温度为185℃、热风流量为26.5m³/h，入料流量为0.2L/h进行喷雾干燥，冷却后即得龙眼粉状水溶性活性物质提取物。

实施例3

取龙眼干10kg，除去皮及核，取龙眼肉2kg，加蒸馏水水8L室温浸泡16h，用高速组织捣碎机捣碎，再加入24L蒸馏水，调整pH至4，按体积加入0.04％的果胶酶和0.03％的纤维素酶，50℃酶解4h，酶解完成后，100℃灭酶，过滤，收集滤液，真空浓缩至提取液中可溶性固形物含量为30％，按滤液重量加入30％的麦芽糊精，溶解混均，调节温度为65℃预热，调节热风温度为210℃、热风流量为33m³/h，入料流量为0.3L/h进行喷雾干燥，冷却后即得龙眼粉状水溶性活性物质提取物。

实施例4

本发明所述粉状水溶性活性物质直接饮用，每日5～100g，可用于人体的抗病毒、增强免疫力、抗肿瘤、延缓衰老、降血糖、抗凝血等作用。

实施例5

本发明所述粉状水溶性活性物质与茶等合用，配比在1:1～10之间，冲剂，每日10～200g，可用于人体的抗病毒、增强免疫力、抗肿瘤、延缓衰老、降血糖、抗凝血等作用。

实施例6

本发明所述粉状水溶性活性物质以活性物质增强剂的方式添加于保健食品，配比是1:2～5，可用于人体的抗病毒、增强免疫力、抗肿瘤、延缓衰老、降血糖、抗凝血等作用。

(二)本发明方法制备的龙眼粉状水溶性活性物质的药效试验

1、试验方法

1.1 样品龙眼水溶性活性物质(LE)，龙眼果浆(LS)。龙眼果浆：取与制作LE相同重量的龙眼干果肉，充分浸泡后用高速组织捣碎机捣碎，高压均质，真空浓缩与全价营养配合饲料混匀压制而成。

1.2 仪器5％CO₂培养箱，紫外可见分光光度计，酶标仪，倒置显微镜，超速冷冻离心机，数显恒温水浴锅，超净工作台，高速组织捣碎机，高压均质机。

1.3 龙眼干基本成分测定：按大连轻工业学院、华南理工大学等单位于1994合编的《食品分析》所述的方法进行。

1.4 动物及分组：SPF级雄性KM小鼠120只，体重20±2g，南方医科大学实验动物中心提供，按体重将小鼠随机分为阴性对照组及龙眼提取物低、高剂量组(LLE、HLE)和龙眼果浆低、高剂量组(LLS、HLS)，每项实验各组取小鼠12只。阴性对照组给予全价营养配合饲料，自由摄食饮水，LE剂量组分别给予5.83g/(kg·d)和17.5g/(kg·d)，LS剂量组给予8.33g/(kg·d)和25g/(kg·d)自制饲料，自由摄食饮水，每日测定各组小鼠的体重和进食量。

1.5 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验：颈椎脱臼处死小鼠，75％酒精中浸泡消毒后取脾脏，剪碎，过滤吸取上清，离心，弃上清液，用1ml三蒸水重悬细胞沉淀以裂解红细胞，30s后加入1.7％ NaCl溶液调整至等渗状态。离心，弃上清液，细胞沉淀用适量预冷的含10％小牛血清的RPMI-1640培养液重悬，得单个脾细胞悬液。

取上述制备好的脾淋巴细胞悬液加入平底培养板中，每只动物设6个复孔，其中3孔再加入ConA作为试验孔，另外3孔每孔再加入10ul 10％胎牛血清RPM I 1640培养基作为阴性对照孔。每板设6个空白对照孔，将培养板置37℃，5％CO₂培养箱中培养至第68小时，每孔加入5mg/ml MTT 20ul，再培养4h后加入酸性异丙醇100ul/孔，于5％CO₂培养箱放置过夜后，用酶标仪测各孔光密度值，各动物实验孔和阴性对照孔三孔平均吸光度值的差值作为增殖指数。

1.6 血清溶血素测定：实验结束前一周每鼠腹腔注射5％的鸡红细胞悬液0.2ml进行免疫，7天后摘取眼球取血，离心分离血清。用生理盐水稀释，取稀释血清1ml，与5％ CRBC悬液0.5ml、10％补体0.5ml混合，另设不加血清的空白对照，取其上清液作为比色时调零的基准，在37℃恒温箱中保温30分钟后，0℃冰水浴中止反应。离心，取上清液比色，以光密度值作为血清溶血素的指标。

2、试验结果

2.1 龙眼水溶性活性物质对小鼠T淋巴细胞的影响

从图1中可以看出，与空白对照组相比较，低剂量龙眼果浆和高剂量龙眼果浆均无显著性差异，而低剂量龙眼水溶性活性提取物和高剂量龙眼水溶性活性提取物与空白组对照相比，均有显著性差异，小鼠T淋巴细胞转化值显著提高。

2.2 龙眼水溶性活性物质对小鼠血清溶血素值的影响

由SPSS数据分析方法得到：空白对照组(NC)：1.319±0.153^a，低剂量龙眼果浆(LLS)：1.592±0.151^a，高剂量龙眼果浆(HLS)：1.454±0.138^a，低剂量龙眼水溶性活性提取物(LLE)：1.851±0.174^b，高剂量龙眼水溶性活性提取物(HLE)：1.999±0.182^b，其中，a与NC比较p>0.05，b与NC比较p<0.05。

所以，与空白对照组相比较，低剂量龙眼果浆和高剂量龙眼果浆均无显著性差异，而低剂量龙眼水溶性活性提取物和高剂量龙眼水溶性活性提取物与空白组对照相比，均有显著性差异，小鼠血清溶血素值显著提高。

综上，通过研究其对正常小鼠免疫功能的调节作用发现：与正常对照组比较，自由摄食龙眼粉状水溶性活性物质提取物剂量组，T淋巴细胞转化值显著提高，小鼠的溶血素值明显增加，这说明一定剂量的龙眼水溶性活性物质提取物能明显提高正常昆小鼠的体液免疫和细胞免疫功能。

Claims

1、一种龙眼水溶性活性物质，其特征在于，由龙眼干经预处理、磨浆、酶解、灭酶、调配和干燥后冷却得龙眼水溶性活性物质。

2、权利要求1所述龙眼水溶性活性物质的提取方法，其特征在于，取龙眼干预处理后磨浆，调节浆液pH3～4，温度30～50℃，加果胶酶和纤维素酶进行酶解2～4h后，再经灭酶、调配和干燥冷却即得龙眼水溶性活性物质。

3、根据权利要求2所述龙眼水溶性活性物质的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

4、根据权利要求3所述龙眼水溶性活性物质的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述果胶酶的体积百分比为0.02～0.04％，纤维素酶的体积百分比为0.01～0.03％。

5、根据权利要求3所述龙眼水溶性活性物质的提取方法，其特征在于，步骤(3)中浓缩至浓缩液中可溶性固形物的重量百分比为20～30％。

6、根据权利要求3所述龙眼水溶性活性物质的提取方法，其特征在于，步骤(4)中所述麦芽糊精或β-环糊精占浓缩液的重量百分比为12～30％。

7、根据权利要求3所述龙眼水溶性活性物质的提取方法，其特征在于，步骤(5)中预热的温度为40～65℃。

8、根据权利要求3所述龙眼水溶性活性物质的提取方法，其特征在于，步骤(5)中调节热风温度160～210℃，热风流量20～33m3/h，入料流量0.1～0.3L/h。

9、权利要求1所述龙眼水溶性活性物质的用途，其特征在于，该物质在制备具有免疫调节作用的保健食品中应用。