CN101416996A - 一种植物抗敏剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种植物抗敏剂及其制备方法。该方法，包括以下步骤：1)用纤维素酶处理仙人掌，以降解细胞壁，得到细胞裂解液；2)将上述步骤1)的细胞裂解液灭酶，灭酶后的溶液静置，取上清液；3)调节上述步骤2)的上清液的pH值至4.2，再向其中加入活性炭，搅拌，过滤，收集滤液，得到仙人掌提取液；4)将上述步骤3)的仙人掌提取液进行离子交换层析，以脱盐和脱色，收集流出液，得到植物抗敏剂。本发明所提供的植物抗敏剂的制备方法不需要有机试剂，提取分离方法简便，得到的抗敏剂质量稳定，抗敏功效明显。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物抗敏剂及其制备方法。
背景技术
过敏反应是指人体对抗原物质接触后的不正常反应。皮肤过敏的一般表现是：干燥、瘙痒、红肿和色素沉着等。它与正常的免疫反应不同，不但不起保护作用，相反由于反应过度强烈而导致生理功能紊乱和组织损伤。仙人掌含有多种植物营养素，18种氨基酸，以及各类维生素和矿物质，能给皮肤带来珍贵的养分和能量，能够抵抗外界对皮肤造成的刺激，还可以有效消除因外界刺激而造成的皮肤表面泛红现象，具有抗敏和舒敏作用。
目前，仙人掌有效成分的提取一般都通过有机溶剂提取或者采用温和碱提取法，这些方法都需要引入有机溶剂，成本高，去除不易；而且，在蛋白分离过程中普遍采用等电点沉淀的方法，杂蛋白去除效率低，且去除过程需要离心，不利于工业化生产；这些提取方法还存在操作步骤繁琐，加入试剂多，所得产品纯度不高等缺点。
发明内容
本发明的目的是提供一种植物抗敏剂及其制备方法。
本发明所提供的植物抗敏剂的制备方法，包括以下步骤：
1)用纤维素酶处理仙人掌茎，以降解细胞壁，得到细胞裂解液；
2)将上述步骤1)的细胞裂解液灭酶，灭酶后的溶液静置，取上清液；
3)调节上述步骤2)的上清液的pH值至4.2，再向其中加入活性碳，搅拌，过滤，收集滤液，得到仙人掌提取液；
4)将上述步骤3)的仙人掌提取液进行离子交换层析，以脱盐和脱色，收集流出液，得到植物抗敏剂。
具体制备时，可以使用仙人掌粉，也可以使用新鲜的仙人掌茎作为原料。
上述方法中，所述步骤1)中，所述纤维素酶的酶活为50万-100万U/g，所述仙人掌茎和所述纤维素酶的质量比为1：(0.02-0.005)，优选为1：0.01。
所述步骤2)中，所述灭酶条件为80℃加热10分钟。
所述步骤3)中，所述过滤是将反应液用硅藻土和板框过滤器进行过滤。
所述步骤4)中，所述离子交换层析是用阳离子树脂001*7和阴离子树脂D309进行的。
上述方法还包括将所述植物抗敏剂进行浓缩得到浓缩液，然后在浓缩液中加入海藻糖和甘油得到混合液的步骤；所述浓缩液体积为所述植物抗敏剂体积的1/3；所述混合液中，所述浓缩液、海藻糖和甘油三者的配比为为1g海藻糖：4ml甘油：10ml浓缩液。
上述方法还包括将所述混合液进行灭菌的步骤，所述灭菌条件为90℃灭菌30min。
上述方法还包括将灭菌后的混合液冷却，然后在冷却的混合液中加入防腐剂L.G.P(丙二醇/双咪唑烷基脲/碘代丙炔基丁基甲胺酸酯，购自美国ISP公司)的步骤；所述L.G.P和所述混合液的质量比为1：167。
采用上述方法制备的植物抗敏剂也属于本发明的保护范围。
本发明的植物抗敏剂的生产工艺，不需要加入有机试剂，提取分离方法简便，得到的抗敏剂质量稳定，抗敏功效明显。
附图说明
图1为植物抗敏剂的生产工艺流程图
图2为皮肤表面的失水量百分比随时间变化的曲线
图3为皮肤表面的含水量百分比随时间变化的曲线
图4为植物抗敏剂对皮肤的舒敏作用实验结果
图5为植物抗敏剂对皮肤的抗敏作用实验结果
具体实施方式
实施例1、植物抗敏剂的生产
植物抗敏剂的生产工艺流程如图1所示，具体过程如下：
1)将100g仙人掌粉(购自昕圣生物科技发展有限公司)和2L水以1：20的质量比混合，再加入20g酶活为100万U/g的纤维素酶，50℃下搅拌1h，以不出现沉淀为指标，得到仙人掌粉的水溶液；
2)将上述仙人掌粉的水溶液在80℃条件下加热10分钟，使酶失活，酶失活后的溶液静置2小时，取上清液；
3)取1800ml上述步骤2)的上清液，调节pH值至4.2，再向其中加入36g活性碳，使活性碳和上清液的配比为1：50，70℃搅拌1.5小时；
4)将上述步骤3)的反应液5000转/分离心15分钟，得到的上清液分别用硅藻土和板框过滤器(购自温州天富机械有限公司，滤径0.2um～5.0um)进行过滤，收集滤液，得到仙人掌粉提取液；
5)将上述仙人掌粉提取液按照1：6的上样比分别过阳离子树脂001*7和阴离子树脂D309(购自丹东明珠特种树脂有限公司)，以降低其电导率，收集流出液；
6)将上述步骤5)的流出液进行浓缩，使浓缩液的体积为上述步骤5)的流出液体积的1/3，向浓缩液中加入60g海藻糖和240ml甘油，使混合液中三者的配比为1g海藻糖：4ml甘油：10ml浓缩液；
7)将上述步骤6)获得的混合液于90℃灭菌30分钟；
8)将900ml上述步骤7)的混合液冷却至40℃以下，加入防腐剂L.G.P(丙二醇/双咪唑烷基脲/碘代丙炔基丁基甲胺酸酯，购自美国ISP公司)使L.G.P和混合液的质量比为1：167，混合均匀，得到植物抗敏剂。
实施例2、植物抗敏剂的功能实验
1、保湿功效实验
选取20个自愿者，志愿者男女各半，将志愿者左、右前臂分别用清水清洗干净，在未擦用任何化妆品的情况下进行保湿功效实验。
用水分测试仪测试受试者左、右前臂皮肤的水份含量和TEWL值，然后在受试者左前臂涂抹上述实施例1制备的植物抗敏剂，右前臂作为空白对照，不涂抹任何化妆品。每半小时测试一次，共4小时。实验设三次重复，受试者皮肤表面的平均水份含量和平均水份散失的百分比随时间的变化曲线如图2和图3所示。结果表明，上述实施例1制备的植物抗敏剂具有良好的长效保湿效果。
2、植物抗敏剂的舒敏实验
选取6个自愿者，志愿者男女各半，将志愿者左、右前臂分别用清水清洗干净，在温度为20-26℃，相对湿度为50-60％的环境下，受试者未擦用任何化妆品的情况下进行舒敏实验。
将受试者左、右前臂分别涂抹辣椒素，每半小时涂抹一次，直至将皮肤刺激到红肿为止。然后将受试者的左前臂涂抹上述实施例1制备的植物抗敏剂，每半个小时涂抹一次，右前臂作为对照，不涂抹上述实施例1制备的植物抗敏剂。观察受试者手臂的反应，结果如图4所示。其中，A为涂抹辣椒素而未涂抹上述实施例1制备的植物抗敏剂4h后受试者的手臂，B为涂抹辣椒素后再涂抹上述实施例1制备的植物抗敏剂4h后受试者的手臂。结果表明，受试者左前臂涂抹上述实施例1制备的植物抗敏剂后，红肿现象在4个小时后消失，而未涂抹上述实施例1制备的植物抗敏剂的右前臂，红肿现象在8个小时后才消失。可见，上述实施例1制备的植物抗敏剂有一定的舒敏作用。
3、植物抗敏剂的抗敏实验
选取6个自愿者，志愿者男女各半，将志愿者左、右前臂分别用清水清洗干净，在温度为20-26℃，相对湿度为50-60％的环境下，受试者未擦用任何化妆品的情况下进行舒敏实验。
将受试者左前臂涂抹上述实施例1制备的植物抗敏剂，每半个小时涂抹一次，共涂抹10次，右前臂不涂抹任何化妆品作为空白对照。然后将受试者的左、右前臂分别涂抹质量百分含量为5％的十二烷基硫酸钠(SDS)。观察受试者手臂的反应，结果如图5所示。其中，A为涂抹上述实施例1制备的植物抗敏剂后再涂抹SDS的受试者的手臂，B为只涂抹SDS的受试者的手臂。结果表明，涂抹上述实施例1制备的植物抗敏剂后，再涂抹刺激物，左前臂的刺痛感和红肿现象不明显。而作为空白对照的右前臂对刺激物的刺激反应强烈，涂抹刺激物0.5h后皮肤内立刻红肿，并伴有刺痛感发生。说明上述实施例1制备的植物抗敏剂有一定的抗敏作用。
Claims (9)
1、一种抗敏剂的制备方法，包括如下步骤：
1)用纤维素酶处理仙人掌茎，以降解细胞壁，得到细胞裂解液；
2)将上述步骤1)的细胞裂解液灭酶，灭酶后的溶液静置，取上清液；
3)调节上述步骤2)的上清液的pH值至4.2，再向其中加入活性碳，搅拌，过滤，收集滤液，得到仙人掌提取液；
4)将上述步骤3)的仙人掌提取液进行离子交换层析，以脱盐和脱色，收集流出液，得到抗敏剂。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述纤维素酶的酶活为50万-100万U/g，所述仙人掌茎和所述纤维素酶的质量比为1：(0.02-0.005)，优选为1：0.01。
3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述灭酶的条件为80℃加热10分钟。
4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述过滤是将反应液用硅藻土和板框过滤器进行过滤。
5、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤4)中，所述离子交换层析是用阳离子树脂001*7和阴离子树脂D309进行的。
6、根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将所述抗敏剂进行浓缩得到浓缩液，然后在浓缩液中加入海藻糖和甘油得到混合液的步骤；
所述浓缩液体积为所述抗敏剂体积的1/3；
所述混合液中，所述浓缩液、海藻糖和甘油三者的配比为1g海藻糖：4ml甘油：l0ml浓缩液。
7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将所述混合液进行灭菌的步骤，所述灭菌条件为90℃灭菌30min。
8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将灭菌后的混合液冷却，然后在冷却的混合液中加入L.G.P的步骤；
所述L.G.P和所述混合液的质量比为1：167。
9、根据权利要求1-8中任一所述的方法制备的抗敏剂。
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