CN116850098A - 一种美肤素化妆品组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本申请提供了一种美肤素化妆品组合物，其使用白薇全株4‑6份、积雪草全株4‑6份、龙胆根4‑6份、芍药根4‑6份、母菊花3‑4份、丁二醇18‑25份、1,2‑己二醇0.5‑1份、水46‑62.5份制备。该组合物制备中使用了醇提、柱层析、酶处理等现代生物工程技术，产品具有良好的抗炎、抑菌、舒缓、修护效果。
Description
技术领域
本申请属于化妆品领域，具体地，本申请提供了一种白薇、积雪草、龙胆、芍药、母菊花等原料制成的美肤素化妆品组合物。
背景技术
选用地域特色植物等原料制备提取物用途化妆品，可以充分利用传统医药知识扩展化妆品原料，而且能凸显品牌特色和价值感。例如磷脂、红景天、人参、山茶花、松茸、龙胆乃至冰川水都已经被诸多著名化妆品品牌选用。相比传统熬煮方法，现代化妆品中采用的生物技术提取、萃取、层析纯化等方法可以进一步有效提高原料提取效果。
中国有着丰富的植物资源，几千年的中医发展也为这些资源的利用提供了良好的注释。使用这些资源开发化妆品，并利用现代生物技术和实验方法提高其效果，是新型化妆品开发的重要途径。
发明内容
申请人经过多年研究和验证，选取清热、凉血的龙胆、白薇；清热利湿、解毒消肿、平肝明目的的积雪草、母菊花；以及养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗的白芍制备了一种美肤素化妆品组合物，其具备良好的抗炎、抑菌、舒缓、修护效果。
本申请提供了一种美肤素化妆品组合物，所述组合物使用包括以下成分的原料制备：白薇、积雪草、龙胆、芍药、母菊花。
进一步地，所述组合物使用以下原料制备：白薇全株4-6份、积雪草全株4-6份、龙胆根4-6份、芍药根4-6份、母菊花3-4份、丁二醇18-25份、1,2-己二醇0.5-1份、水46-62.5份。
进一步地，所述组合物使用以下原料制备：白薇全株5份、积雪草全株5份、龙胆根5份、芍药根5份、母菊花4份、丁二醇20份、1,2-己二醇1份、水50份。
进一步地，所述组合物按照以下方面制备：
(1)将积雪草全株、白薇全株、龙胆根、芍药根，母菊花按所需比例混合；
(2)将步骤(1)所得的混合物经破碎、粉碎之后可选地进行酶处理，随后与3-6倍质量的50-90％乙醇混合，投入回流提取罐中60-90摄氏度恒温搅拌提取5-10小时；
(3)提取完成出料后离心、过滤除渣取滤液；
(4)将步骤(3)所得滤液在60-70摄氏度浓缩除乙醇得到浓缩物；
(5)步骤(4)所得浓缩物柱层析纯化分离，浓缩干燥得提取物；
(6)向步骤(5)所得的提取物中加入其他成分，混合均匀，配制成组合物。
进一步地，所述组合物按照以下方面制备：
(1)将积雪草全株、白薇全株、龙胆根、芍药根，母菊花按所需比例混合；
(2)将步骤(1)所得的混合物经破碎、粉碎之后可选地进行酶处理，随后与5倍质量的70％乙醇混合，投入回流提取罐中80摄氏度恒温搅拌提取8小时；
(3)提取完成出料后离心、过滤除渣取滤液；
(4)将步骤(3)所得滤液在60摄氏度浓缩除乙醇得到浓缩物；
(5)步骤(4)所得浓缩物硅胶柱层析纯化分离，浓缩干燥得提取物；
(6)向步骤(5)所得的提取物中加入其他成分，混合均匀，配制成组合物。
进一步地，所述酶处理过程为：
向粉碎后的植物混合物粉末中加入3-5倍体积的，含有纤维素酶和纤维二糖酶的水溶液，调节pH至7.0-9.0，酶处理2-5小时；随后过滤得固体。
进一步地，所述酶处理过程为：
向粉碎后的植物混合物粉末中加入4倍体积的，含有纤维素酶500U/mL和纤维二糖酶100 -150U/mL的水溶液，调节pH至8.0，酶处理3小时；随后过滤得固体。
另一方面，本申请提供了上述组合物在制备化妆品中的用途。
另一方面，本申请提供了化妆品，其包含上述组合物。
进一步地，所述化妆品为保湿液、精华液、面膜、面霜。
本申请中所述的水，可以为根据产品需要选择的不同纯化程度的水，例如但不限于不同离子强度和杂质水平的水；水可以以本领域已知的方法纯化制备，例如但不限于单次或者多次蒸馏、反渗透等。
附图说明
图1为RAW264.7巨噬细胞模型检测产品对IL-6和TNF-α的抑制效果(左侧为1mg/mL浓度、右侧为10mg/mL浓度)；
图2为滤纸扩散法检测对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌的抑菌活性实验结果(左中右三组分别为本申请产品产品、青霉素和无菌水，每组中左中右分别为大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌)；
图3为MTT结晶测定的细胞毒性/活性实验结果；
图4为实际人体修护效果实例；
图5为斑马鱼舒缓行为实验结果；
图6为纤维素酶500U/mL、果胶酶300U/mL、碱性蛋白酶400U/mL、无花果蛋白酶400U/mL酶处理对DPPH清除效果和舒缓效果的影响。
图7为纤维二糖酶50U/mL、100U/mL、150U/mL、200U/mL、250U/mL、300U/mL与纤维素酶500U/mL组合对DPPH清除效果和舒缓效果的影响。
具体实施方式
实施例1基本材料和方法
基本原料：
白薇、积雪草、龙胆、芍药、母菊花购自正规药材经销商，实验中使用质量基本一致的同批次药物。
丁二醇、1,2-己二醇购自正规试剂厂家，等级符合化妆品监管规定。
纤维素酶、果胶酶、纤维二糖酶、碱性蛋白酶、无花果蛋白酶为食品级，购自夏盛生物科技有限公司。
部分实验，如斑马鱼舒缓行为实验为委托第三方进行。
酶处理方法
根据经验和初步验证(结果未展示)，酶处理的基本方法如下：
向粉碎后的植物混合物粉末中加入4倍体积的，含有所需量酶的水溶液，调节pH至8.0，酶处理3小时；随后过滤，所得的固体直接用于下一步的提取(由于乙醇提取在高温下进行，不需要灭酶步骤，实际生产中需要存放原料时可以进行高温灭酶，例如90摄氏度，5分钟)。
DPPH自由基清除能力
将“组合物的基本制备方法”中步骤(5)所得的提取物配制成10mg/mL配置；取液体样品2.5mL，与2.5mL 0.1mM的DPPH无水乙醇溶液(样品)或者2.5mL无水乙醇混合(对照)，25℃下避光反应30min；以分光光度计测定样品反应液、对照反应液以及参比(2.5mL无水乙醇加2.5mL 0.1mM的DPPH无水乙醇溶液)517nm处的吸光度。
DPPH自由基清除率％＝(1-(A样品-A对照)/A参比)。
斑马鱼舒缓行为实验
实验使用野生型AB系斑马鱼自然交配的胚胎；以斑马鱼开始交配受精为0hpf，选用24hpf健康、无畸形、正常发育的鱼胚用于实验；
使用96孔细胞培养板为实验载体，每孔加入胚胎5枚，设置3个复孔；用移液枪吸干养殖水后，除去96孔板中的缓冲水，然后向空白组中每孔加入200uL标准稀释水，模型组中每孔加入100uL十二烷基硫酸钠溶液(500uM)，阳性组中每孔加入100uL的阳性对照试剂溶液(甘草酸二钾溶液，1mM)，样品组每孔分别中加入100uL相应浓度的受试物溶液，盖上培养板面板，在28.0±0.5摄氏度生化培养箱中孵育1h；1h后，除空白对照组外，模型组、阳性组、样品组每孔分别加入100uL造模剂，盖上培养板面板，在28.0±0.5摄氏度生化培养箱中孵育15min后，录制30s视频,统计结果分析数据。
统计每组胚胎自旋运动次数，使用以下公式分析其相对刺激强度，使用GraphPadPrism8.0不同组间利用One-way ANOVA进行显著性分析，判定P<0.05为有显著性差异。
相对刺激强度＝单颗胚胎自旋运动次数/空白组总自旋运动次数/空白胚胎总数实施例1美肤素组合物的制备和基本效果
(1)将积雪草全株、白薇全株、龙胆根、芍药根，母菊花按所需比例混合；
(2)将步骤(1)所得的混合物经破碎、粉碎，随后与5倍质量的70％乙醇混合，投入回流提取罐中80摄氏度恒温搅拌提取8小时；
(3)提取完成出料后离心、过滤除渣取滤液；
(4)将步骤(3)所得滤液在60摄氏度浓缩除乙醇得到浓缩物；
(5)步骤(4)所得浓缩物硅胶柱层析纯化分离，浓缩干燥得提取物(部分检测使用提取物进行)；
(6)向步骤(5)所得的提取物中加入其他成分，混合均匀，配制成组合物。
实际制备中所用的组合物的原料配方为：白薇全株5份、积雪草全株5份、龙胆根5份、芍药根5份、母菊花4份、丁二醇20份、1,2-己二醇1份、水50份。
使用实施例1中的方法检测了提取物的DPPH自由基清除活性，10mg/mL时为78.45％。
使用实施例1中的方法检测和提取物的舒缓功效，结果表明模型组刺激性明显高于空白组，二者相比具有显著差异性(P<0.05)，说明本次检测试验有效；提取物在1％，0.5％，0.25％三个浓度下，可降低造模剂SDS诱导的斑马鱼胚胎刺激，其中1％，0.5％，0.25％浓度具有显著性差异(P<0.05)，具有一定的舒缓功效。(图5)
并检测了对IL-6和TNF-α的抑制效果(RAW264.7巨噬细胞模型)、抑菌活性和细胞毒性，结果表明其可以有效抑制LPS与诱导巨噬细胞分泌的IL-6和TNF-α；对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌有显著的抑制作用；在10mg/mL时24小时对3T3细胞无毒性作用；在实际人体修护中也取得了显著的效果(图1-4)。
实施例3酶处理
为了进一步提高提取物的效果，特别是舒缓效果，申请人尝试对原料进行酶处理以提高有效成分的提取效果/改变部分多糖或蛋白的长度或结构。根据对几种原料的现有技术研究和预实验选择了纤维素酶500U/mL、果胶酶300U/mL、碱性蛋白酶400U/mL、无花果蛋白酶400U/mL进行酶处理，考虑到实际生产中的条件，酶处理过程统一为：向粉碎后的植物混合物粉末中加入4倍体积的，含有纤预定量酶的水溶液，调节pH至8.0，酶处理3小时；随后过滤得固体；进一步按照实施例2中的方法处理提取。
结果如图6所示，在DPPH自由基清除率方面，使用两种多糖酶处理后的提取物DPPH清除效果都有提高，但舒缓效果上(测试使用0.5％的浓度)，仅有纤维素酶略有进步。两种蛋白酶的处理基本没有产生积极效果。
随后，申请人尝试了多种多糖酶的组合，发现纤维素酶配合果胶酶、淀粉酶、木聚糖酶时相比单用纤维素酶均没有进步，而使用纤维二糖酶时较为明显的提高了舒缓效果。进一步验证了纤维素酶500U/mL与纤维二糖酶50U/mL、100U/mL、150U/mL、200U/mL、250U/mL、300U/mL配合的效果(图7)，发现在100-150U/mL的纤维二糖酶用量下，舒缓效果提升明显，但更高的浓度反而有不利影响。
基于此，我们推测，某种原料中的纤维素或类似多糖的结构有其特点，单纯使用纤维素酶的降解难以快速彻底，适量纤维二糖酶的加入可以解决原料中纤维素降解的反馈抑制。
显然，本发明的上述实施例仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而这些属于本发明的精神所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种美肤素化妆品组合物，其特征在于，所述组合物使用包括以下成分的原料制备：白薇、积雪草、龙胆、芍药、母菊花。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物使用以下原料制备：白薇全株4-6份、积雪草全株4-6份、龙胆根4-6份、芍药根4-6份、母菊花3-4份、丁二醇18-25份、1,2-己二醇0.5-1份、水46-62.5份。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物使用以下原料制备：白薇全株5份、积雪草全株5份、龙胆根5份、芍药根5份、母菊花4份、丁二醇20份、1,2-己二醇1份、水50份。
4.根据权利要求2或3所述的组合物，其中所述组合物按照以下方面制备：
(1)将积雪草全株、白薇全株、龙胆根、芍药根，母菊花按所需比例混合；
(2)将步骤(1)所得的混合物经破碎、粉碎之后可选地进行酶处理，随后与3-6倍质量的50-90％乙醇混合，投入回流提取罐中60-90摄氏度恒温搅拌提取5-10小时；
(3)提取完成出料后离心、过滤除渣取滤液；
(4)将步骤(3)所得滤液在60-70摄氏度浓缩除乙醇得到浓缩物；
(5)步骤(4)所得浓缩物柱层析纯化分离，浓缩干燥得提取物；
(6)向步骤(5)所得的提取物中加入其他成分，混合均匀，配制成组合物。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述组合物按照以下方面制备：
(1)将积雪草全株、白薇全株、龙胆根、芍药根，母菊花按所需比例混合；
(2)将步骤(1)所得的混合物经破碎、粉碎之后可选地进行酶处理，随后与5倍质量的70％乙醇混合，投入回流提取罐中80摄氏度恒温搅拌提取8小时；
(3)提取完成出料后离心、过滤除渣取滤液；
(4)将步骤(3)所得滤液在60摄氏度浓缩除乙醇得到浓缩物；
(5)步骤(4)所得浓缩物硅胶柱层析纯化分离，浓缩干燥得提取物；
(6)向步骤(5)所得的提取物中加入其他成分，混合均匀，配制成组合物。
6.根据权利要求3或4所述的组合物，其中所述酶处理过程为：
向粉碎后的植物混合物粉末中加入3-5倍体积的，含有纤维素酶和纤维二糖酶的水溶液，调节pH至7.0-9.0，酶处理2-5小时；随后过滤得固体。
7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述酶处理过程为：
向粉碎后的植物混合物粉末中加入4倍体积的，含有纤维素酶500U/mL和纤维二糖酶100-150U/mL的水溶液，调节pH至8.0，酶处理3小时；随后过滤得固体。
8.根据权利要求1-7任一项所述的组合物在制备化妆品中的用途。
9.化妆品，其特征在于，其包含根据权利要求1-7任一项所述的组合物。
10.根据权利要求9所述的化妆品，其中所述化妆品为保湿液、精华液、面膜、面霜。
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