CN101411686A - 克拉霉素亚微乳注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物制剂领域，更具体而言，涉及一种以磷脂复合物载药的克拉霉素亚微乳注射液及其制备方法。以100mL注射液计，其包含：克拉霉素磷脂复合物(以克拉霉素计)0.05g～0.5g；中链脂肪酸甘油三酯10g～20g；注射用大豆油0g～10g；大豆卵磷脂0.2g～2g；Pluronic F－68 0.2g～1g；吐温－80 0g～0.5g；L－半胱氨酸0.01g～0.05g；油酸钠0.05g～0.3g；甘油2g～5g；注射用水70g～90g；其中，克拉霉素磷脂复合物中克拉霉素与大豆卵磷脂的质量比为1∶1～1∶12。本发明的克拉霉素亚微乳注射液，理化性质符合静脉用药要求，不仅能进行高温灭菌，而且长期储存物理化学稳定性良好，并且血管刺激性小，提高患者顺应性，适于临床应用。

Description

克拉霉素亚微乳注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，更具体而言，涉及一种以磷脂复合物载药的克拉霉素亚微乳注射液及其制备方法。

背景技术

克拉霉素(clarithromycin)是1981年日本大正制药公司开发的一种大环内酯类抗生素，其化学名为6-O-甲基红霉素，化学结构式如下所示：

克拉霉素与细菌核糖体50S亚单位结合，通过阻断转肽的作用和mRNA的移位过程，阻止了肽链的延长，抑制了细菌蛋白质的合成，从而产生抗菌作用。克拉霉素在局部感染治疗中主要用于治疗呼吸道感染及皮肤软组织感染和泌尿道感染；在消化系统疾病的治疗中主要用于治疗幽门螺杆菌和分枝杆菌病；在儿科应用中主要治疗小儿慢性胃窦炎；另外克拉霉素还与乙胺嘧啶联用治疗肺囊虫性肺炎等疾病。

克拉霉素片剂、胶囊已收载入中国药典2005年版，目前生产的剂型还有颗粒剂、分散片、缓释片、注射剂和干混悬剂。克拉霉素静脉注射剂由美国雅培公司制造生产，商品名为

但是克拉霉素静脉使用刺激性较大，易引起化学性静脉炎；且由于药物本身具有较强刺激性，亦可引起血管痉挛，血液减少，相对局部药物浓度增大，加重静脉炎；若输液速度大于血液流速，则静脉炎的发生率明显增高。在临床用于外周浅静脉输液时，发生浅静脉炎的比例相当高。因此，为了降低克拉霉素静脉给药时引起的刺激性，拓宽克拉霉素的给药途径，研制新的剂型势在必行。

Lovell等曾报道过一种含有油酸和己酸的低刺激性静脉注射克拉霉素脂肪乳剂的处方和制备方法(Int.J.Pharm.，1994，109(1)，45-57)，但是因为油酸和己酸的存在限制了其灭菌方法，它只能以0.22μm微孔滤膜无菌过滤的方法灭菌，这一方面影响了乳剂的稳定性，另一方面限制了乳剂的工业化生产和临床应用的前景。

中国专利申请200510109312.7公开了一种克拉霉素的脂质微球注射液及其制备方法，其中制备方法具体如下：将克拉霉素溶解在油相增溶剂(例如己酸、庚酸、辛酸、壬酸或油酸等)中，再与注射用油混合，形成油相；将表面活性剂、金属螯合剂和甘油分散在注射用水中，形成水相；将油相加入到水相中，得到初乳；经匀浆、均质，得到克拉霉素乳剂。这样得到的克拉霉素乳剂同样因为油酸、己酸的存在限制了其灭菌方法，而且在说明书中没有提及如何灭菌。

克拉霉素为油水均难溶的药物，现有技术中还没有报道将此类药物制备成亚微乳注射液，经过前期的各项药学研究，本发明人成功的将克拉霉素亚微乳注射液制备成功，其各项指标都达到了国家食品药品管理局关于新药研究、开发的要求。

发明内容

本发明人采用磷脂复合物载药的方式制备克拉霉素亚微乳注射液，一方面提高了克拉霉素在亚微乳剂中的溶解性能和稳定性，另一方面也大大降低了克拉霉素注射液的静脉刺激性，为克拉霉素亚微乳注射液的工业化生产和临床应用奠定了基础。本发明人经过进一步深入的研究，发现可以采用克拉霉素磷脂复合物的形式来增大克拉霉素在油相中的溶解度，并且可以将克拉霉素磷脂复合物配以适宜的辅料用于制备亚微乳剂，提高了克拉霉素在亚微乳剂中的溶解性能和稳定性，有效解除长期静脉营养病人脂肪酸提供不足而导致的脂肪酸缺乏问题，使得本产品在临床治疗上的安全性得到了充分的保证。到达了药物在人体内的释放速度、提高疗效。

因此，本发明的目的在于提供一种“以磷脂复合物载药”的克拉霉素亚微乳注射液，其理化性质符合静脉用药要求，不仅能进行高温灭菌，而且长期储存物理化学稳定性良好，并且血管刺激性小，提高患者顺应性，适于临床应用。

本发明的另一目的在于提供上述克拉霉素亚微乳注射液的制备方法。

根据本发明的第一目的，本发明提供“以磷脂复合物载药”的克拉霉素亚微乳注射液，以100mL注射液计，其包含：

克拉霉素磷脂复合物    以克拉霉素计         0.05g～0.5g

中链脂肪酸甘油三酯(MCT)                    10g～20g

注射用大豆油(LCT)                          0g～10g

大豆卵磷脂                                 0.2g～2g

Pluronic F-68                              0.2g～1g

吐温-80                                    0g～0.5g

L-半胱氨酸                                 0.01g～0.05g

油酸钠                                     0.05g～0.3g

甘油                                       2g～5g

注射用水                                   70g～90g

其中，克拉霉素磷脂复合物中克拉霉素与大豆卵磷脂的质量比为1:1～1:12；

从磷脂本身的结构来看，其既有亲油基也有亲水基，所以，具有表面活性。在本发明中，所述磷脂为大豆卵磷脂。

在本发明最优选的实施方案中，所述克拉霉素亚微乳注射液，以100mL注射液计，其包含：

克拉霉素磷脂复合物   以克拉霉素计    0.25g

中链脂肪酸甘油三酯(MCT)              16g

注射用大豆油(LCT)                    4g

大豆卵磷脂                           1g

Pluronic F-68                         0.2g

吐温-80                              0.2g

L-半胱氨酸                           0.02g

油酸钠                               0.1g

甘油                                 2.5g

其余为注射用水

其中，克拉霉素磷脂复合物中克拉霉素与大豆卵磷脂的质量比为1:10。

磷脂本身具有一定的药理作用，与其它活性药物复合可制得磷脂复合物。其制备方法主要是将药物与磷脂溶于反应溶剂中，反应一段时间后，可通过蒸发或真空干燥除去溶剂，也可采用冷冻干燥法或非溶剂沉淀法分离复合物。药物与磷脂形成复合物后，其理化性质和生物特性较原化合物均有不同程度的改变，能增强药物的亲脂性能，从而增强药物的药理作用，延长作用时间，增加在胃肠道中的吸收。本发明注射液中采用克拉霉素磷脂复合物，一方面提高了克拉霉素在亚微乳剂中的溶解性能和稳定性，另一方面也大大降低了克拉霉素注射液的静脉刺激性。

克拉霉素磷脂复合物按如下方法得到：按质量比为1:1-1:12将克拉霉素和大豆卵磷脂置于圆底烧瓶中，搅拌下缓缓加入无水乙醇至克拉霉素完全融入大豆卵磷脂中后，继续加入无水乙醇为已加入量的1/3量后，停止加入无水乙醇，将所得混合物在40-80℃温度下加热回流一段时间后，将澄清的反应溶液蒸发除去无水乙醇，得到克拉霉素磷脂复合物。

本发明的克拉霉素亚微乳注射液，选用中链脂肪酸甘油三酯(MCT)和注射用大豆油(LCT)作为油相，其中MCT是现有技术公知的主要由饱和的脂肪酸辛酸C8和葵酸C10酯化成的脂肪酸酯。本发明选用中链甘油三酯是因为其能更快地从血中清除，具有更快的氧化功能，更适合为人体提供能量，尤其适合为需要静脉营养的病人提供能原。为长期静脉营养(5天以上)病人提供足够的必需脂肪酸，防止必需脂肪酸缺乏。

本发明中使用的大豆油系由豆科植物大豆的种子提炼制成的脂肪油，是一种对人体具有重要生理功能的高热量、营养丰富的天然植物油脂，是重要的能量补充剂及药用辅料，特别适宜作为溶剂使用。

Pluronic F-68(泊洛沙姆)，商品名为普流尼克，无毒、对皮肤粘膜无刺激性、无过敏性，对人体十分安全。在本发明中起到作乳化剂和稳定剂作用，增加药物的表面溶解度，促进药物的吸收。

本发明克拉霉素磷脂复合物中的大豆卵磷脂之外的作为辅料使用的大豆卵磷脂起乳化剂的作用。

Tween-80和油酸钠为辅助乳化剂以形成致密牢固的乳化剂界面膜来稳定亚微乳剂，L-半胱氨酸用作抗氧化剂。

根据本发明的另一目的，本发明提供“以磷脂复合物载药”的克拉霉素亚微乳注射液的制备方法，以制备100mL注射液计，该方法包括：

步骤1：将注射用甘油2g～5g、Pluronic F-68 0.2g～1g、吐温-80 0g～0.5g、注射用油酸钠0.05g～0.3g、L-半胱氨酸0.01g～0.05g分散于适量注射用水中，使其全部溶解，制得水相；

步骤2：将0.2g～2g大豆卵磷脂分散于油相MCT 10g～20g和LCT 0g～10g中，使其全部溶解，然后再将克拉霉素磷脂复合物分散于其中，使复合物全部溶解，制得油相；

步骤3：在搅拌下，将水相加入至油相中，制得初乳；

步骤4：将初乳用注射用水稀释定容至配方量，转移至高压均质机中进行均质；

步骤5：将步骤4均质后的乳剂用碱或酸调节pH值至8.0，装瓶，封罐氮气，灭菌，即得克拉霉素亚微乳注射液；

其中，克拉霉素磷脂复合物中克拉霉素与大豆卵磷脂的质量比为1:1～1:12，克拉霉素含量为0.05g～0.5g。

更具体而言，该方法各步骤具体如下：

步骤1：将注射用甘油2.5g、Pluronic F-68 0.2g、吐温-80 0.2g、注射用油酸钠0.1g、L-半胱氨酸0.02g分散于适量注射用水中，置磁力搅拌器中加热至80℃，并搅拌至全部溶解分散于适量注射用水中，制得水相；

步骤2：将1g大豆卵磷脂分散于油相MCT 16g和LCT 4g中，置磁力搅拌器加热至55℃，搅拌至全部溶解，然后再将克拉霉素磷脂复合物分散于上述油相中，再置磁力搅拌器中加热至55℃，并搅拌至复合物全部溶解，制得油相；

步骤3：在高速组织捣碎机搅拌下(1,7000rpm)，将水相加入至油相中，搅拌3次，每次3min，制得初乳；

步骤4：将初乳用注射用水稀释定容至配方量，转移至高压均质机中，以冰水浴控制均质温度在40℃以下，以700bar压力均质7次；

步骤5：将步骤4中得到的乳剂用0.1mol·L^-1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至8.0，装瓶，封罐氮气，100℃旋转水浴灭菌30min，冰水浴迅速降温即得克拉霉素亚微乳注射液；

其中，克拉霉素磷脂复合物的制备方法为：以克拉霉素：大豆卵磷脂为1:10(质量比)，在65℃条件下无水乙醇中反应3h，蒸发挥干溶剂，即得。

本发明的“磷脂复合物载药”的克拉霉素亚微乳注射液，具有如下优点：

各项基本理化性质符合静脉用药要求，平均粒径140.3±47.2nm，ζ-电位-20.99mV，包封率91.4％；

能够进行高温灭菌，例如100℃旋转水浴灭菌30min；

振摇稳定性实验表明以磷脂复合物载药的克拉霉素亚微乳注射液经剧烈振摇后粒径无显著变化，无絮凝、合并现象产生，说明该制剂可经受住制备、灭菌及运输和储藏过程中振摇碰撞所产生的影响；

以磷脂复合物载药的克拉霉素亚微乳注射液在高温60℃加速10天后，含量仅下降了5.7％，仍在标示含量的90％以上；长期稳定性考察的结果显示：在25±2℃及10±2℃条件下放置6个月，其外观、pH值、药物含量、包封率以及平均粒径等指标都没有发生显著的变化，仍符合静脉用药要求；

以磷脂复合物载药的克拉霉素亚微乳注射液和克拉霉素溶液剂的药时过程均符合三隔室模型，两者的药动学特征曲线相似；按统计矩原理来计算两者的非隔室模型参数，结果显示除参数Vss外，两种制剂间主要药动学参数没有显著性差异(n＝6，P>0.05)。

另外，在本发明的克拉霉素亚微乳注射液中，将该复合物与中链甘油三酯、大豆油、Pluronic F-68、吐温-80、L-半胱氨酸、油酸钠、甘油等物质联合使用也起到了协同效果：1、可以有效的解除长期静脉营养(5天以上)病人脂肪酸提供不足而导致的脂肪酸缺乏问题，使得本产品在临床治疗上的安全性得到了充分的保证。2、可以调节产品在人体内的释放速度、提高疗效。3、保证了克拉霉素和大豆卵磷脂做成的复合物可以充分的溶解于水溶液当中，使得制剂的稳定性得到了提高和保证。4、可以保证乳剂产品在生产、贮存、运输过程中不受热压灭菌、高温、氧化和低温冰冻的影响，保证产品的质量稳定。

附图说明

图1为实施例1制备的克拉霉素亚微乳注射液典型的粒径测定高斯分布图PSD_I、PSD_V和PSD_N；

图2为按实施例1配方制备的三批克拉霉素亚微乳注射液ζ-电位测定的图谱；

图3为实施例1制备的克拉霉素亚微乳注射液在振摇前后粒度分布变化图；

图4为单剂量股静脉注射克拉霉素亚微乳注射液和溶液剂的平均血药浓度—时间曲线(n＝6)。

具体实施方式

下面通过实施例具体地说明本发明，但本发明不局限于这些实施例。以下实施例中，克拉霉素原料药来自浙江华义医药有限公司，中链脂肪酸甘油三酯来自德国Lipoid公司，Pluronic F-68来自德国BASF公司，大豆卵磷脂来自上海太伟药业有限公司(卫生部药品标准)的注射用大豆卵磷脂EPIKURON 170。

实施例1    配方1          克拉霉素含量250mg/100mL

以100mL注射液计

克拉霉素磷脂复合物    以克拉霉素计      0.25g

中链脂肪酸甘油三酯(MCT)                 16g

注射用大豆油(LCT)                       4g

大豆卵磷脂                              1g

Pluronic F-68                           0.2g

吐温-80                                 0.2g

L-半胱氨酸                              0.02g

油酸钠                 0.1g

甘油                   2.5g

其余为注射用水

其中，克拉霉素磷脂复合物中克拉霉素与大豆卵磷脂的质量比为1:10。

克拉霉素磷脂复合物的制备：将克拉霉素0.25g与大豆卵磷脂2.5g置于圆底烧瓶中，搅拌下缓缓加入无水乙醇至克拉霉素完全融入大豆卵磷脂中后，继续加入无水乙醇为已加入量的1/3量后，停止加入无水乙醇，在65℃条件下无水乙醇中反应3h，得澄清的反应液，蒸发挥干溶剂，即得克拉霉素磷脂复合物。

克拉霉素亚微乳注射液的制备：

步骤1：将注射用甘油2.5g、Pluronic F-68 0.2g、吐温-80 0.2g、注射用油酸钠0.1g、L-半胱氨酸0.02g分散于适量注射用水中，置磁力搅拌器中加热至80℃，并搅拌至全部溶解分散于适量注射用水中，制得水相；

步骤2：将1g大豆卵磷脂分散于油相MCT 16g和LCT 4g中，置磁力搅拌器加热至55℃，搅拌至全部溶解，然后再将克拉霉素磷脂复合物分散于上述油相中，再置磁力搅拌器中加热至55℃，并搅拌至复合物全部溶解，制得油相；

步骤3：在高速组织捣碎机搅拌下(1,7000rpm)，将水相加入至油相中，搅拌3次，每次3min，制得初乳；

步骤4：将初乳用注射用水稀释定容至配方量，转移至高压均质机中，以冰水浴控制均质温度在40℃以下，以700bar压力均质7次；

步骤5：将步骤4中得到的乳剂用0.1mol·L^-1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至8.0，装瓶，封罐氮气，100℃旋转水浴灭菌30min，冰水浴迅速降温即得克拉霉素亚微乳注射液。

实施例2    配方2克       拉霉素含量100mg/100mL

以100mL注射液计

克拉霉素磷脂复合物    以克拉霉素计     0.1g

中链脂肪酸甘油三酯(MCT)                12g

注射用大豆油(LCT)                      8g

大豆卵磷脂                             0.5g

Pluronic F-68                           0.4g

吐温-80                                0.2g

L-半胱氨酸                             0.02g

油酸钠                                 0.1g

甘油                                   2.5g

其余为注射用水

其中，克拉霉素磷脂复合物中克拉霉素与大豆卵磷脂的质量比为1:12。

克拉霉素磷脂复合物的制备：克拉霉素0.1g与大豆卵磷脂1.2g按实施例1相同的方法制备复合物。

克拉霉素亚微乳注射液的制备：

步骤1：将注射用甘油2.5g、Pluronic F-68 0.4g、吐温-80 0.2g、注射用油酸钠0.1g、L-半胱氨酸0.02g分散于适量注射用水中，置磁力搅拌器中加热至80℃，并搅拌至全部溶解分散于适量注射用水中，制得水相；

步骤2：将0.5g大豆卵磷脂分散于油相MCT 12g和LCT 8g中，置磁力搅拌器加热至55℃，搅拌至全部溶解，然后再将克拉霉素磷脂复合物分散于上述油相中，再置磁力搅拌器中加热至55℃，并搅拌至复合物全部溶解，制得油相；

步骤3：在高速组织捣碎机搅拌下(1,7000rpm)，将水相加入至油相中，搅拌3次，每次3min，制得初乳；

步骤4：将初乳用注射用水稀释定容至配方量，转移至高压均质机中，以冰水浴控制均质温度在40℃以下，以700bar压力均质7次；

步骤5：将步骤4中得到的乳剂用0.1mol·L^-1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至8.0，装瓶，封罐氮气，100℃旋转水浴灭菌30min，冰水浴迅速降温即得克拉霉素亚微乳注射液。

实施例3    配方3克      拉霉素含量500mg/100mL

以100mL注射液计

克拉霉素磷脂复合物    以克拉霉素计   0.5g

中链脂肪酸甘油三酯(MCT)              18g

注射用大豆油(LCT)                    2g

大豆卵磷脂                           0.2g

Pluronic F-68                        0.4g

吐温-80                              0.3g

L-半胱氨酸                           0.02g

油酸钠                               0.1g

甘油                                 2.5g

其余为注射用水

其中，克拉霉素磷脂复合物中克拉霉素与大豆卵磷脂的质量比为1:8。

按实施例1相同的方法制备克拉霉素磷脂复合物。

克拉霉素亚微乳注射液的制备：

步骤1：将注射用甘油2.5g、Pluronic F-68 0.4g、吐温-80 0.3g、注射用油酸钠0.1g、L-半胱氨酸0.02g分散于适量注射用水中，置磁力搅拌器中加热至80℃，并搅拌至全部溶解分散于适量注射用水中，制得水相；

步骤2：将0.2g大豆卵磷脂分散于油相MCT 18g和LCT2g中，置磁力搅拌器加热至55℃，搅拌至全部溶解，然后再将克拉霉素磷脂复合物分散于上述油相中，再置磁力搅拌器中加热至55℃，并搅拌至复合物全部溶解，制得油相；

步骤3：在高速组织捣碎机搅拌下(1,7000rpm)，将水相加入至油相中，搅拌3次，每次3min，制得初乳；

步骤4：将初乳用注射用水稀释定容至配方量，转移至高压均质机中，以冰水浴控制均质温度在40℃以下，以700bar压力均质7次；

步骤5：将步骤4中得到的乳剂用0.1mol·L^-1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至8.0，装瓶，封罐氮气，100℃旋转水浴灭菌30min，冰水浴迅速降温即得克拉霉素亚微乳注射液。

测试例

1.外观

肉眼观察实施例1～3的克拉霉素亚微乳注射液的外观均为白色或类白色均匀乳状液体。

2.粒径及粒度分布考察

用过0.22μm微孔滤膜的注射用水将按实施例1配方制得的乳剂样品稀释5000倍后立即放入Nicomp^TM PSS380粒度测定仪的样品池内，调节光强度至300左右，光源为HeNe激光(λ₀＝633nm)，将操作参数中温度设为测定时的室温，开始测定，保持测定至Time history曲线趋于直线时停止测定，保存数据。20071011批样品典型的粒径测定高斯分布图(PSD_I，PSD_V，PSD_N)如图1所示。三批样品的粒度测定结果见表1所示。

表1 三批样品的粒度测定结果

 

批号	表示形式	PSDI(nm)
			20071011	高斯分布	140.0±46.8
20071013	高斯分布	144.2±45.6

 

20071015

高斯分布

141.2±45.8

3.ζ-电位的测定

采用Nicomp^TM PSS380进行ζ-电位的测定。将按实施例1配方制得的乳剂样品用过0.22μm微孔滤膜的注射用水(调至与样品相同的pH值)稀释50倍，放入样品池内，调节光强度至2000左右，光源为HeNe激光(λ₀＝633nm)，电场强度15V/cm，散射角θ＝18.9°，将操作参数中温度设为测定时室温，测定时间1min。三批样品ζ-电位测定典型的图谱见图2。三批样品ζ-电位测定结果见表2。

表2 三批样品的ζ-电位测定结果

 

批号	20071011	20071013	20071015	平均值
					ζ-电位(mV)	-20.81	-21.26	-20.90	-20.99

由图2和表2看出，ζ—电位为-20.99mV，满足稳定的微粒液体体系对ζ-电位一般控制在-20～-45mV范围内的要求。

4.含量测定及包封率(Entrapment efficiency，EE)考察

采用甲醇破乳，用HPLC测定克拉霉素亚微乳注射液中克拉霉素的含量。

包封率的测定方法：取克拉霉素亚微乳注射液0.5mL，加入超滤离心管中，置离心机中以3,000rpm离心15min，重复操作3次，合并离心套管中的超滤液，直接注入HPLC仪，测定水相中药物含量，并按以下公式计算包封率：

包封率(EE)％＝[1-水相体积百分比×水相中药物浓度/药物总浓度]×100％

将按实施例1配方制得的三批克拉霉素亚微乳注射液的含量和包封率测定结果如下表3所示。

表3 三批样品的克拉霉素含量和包封率测定结果

 

批号	20071011	20071013	20071015	平均值
					含量(％)	102.1	100.2	100.9	101.1
EE(％)	91.1	92.0	91.0	91.4

5.克拉霉素亚微乳注射液的稳定性考察

1)振摇稳定性考察

取实施例1制备的克拉霉素亚微乳注射液适量，充氮、密封于西林瓶中，于室温置空气浴振荡器中，以100rpm振摇，分别于3h、6h、12h、24h取样，测定零时及各取样时间点下乳剂的粒度，结果如图3所示。由图3可见，乳剂平均粒径及粒度分布无显著性变化，可认为克拉霉素亚微乳注射液振摇稳定性良好，适于工业化生产和运输。

2)加速稳定性考察

取实施例1制备的克拉霉素亚微乳注射液放置于60℃烘箱中，分别于第3、6和10天取样进行外观、pH、粒度、含量测定，测定结果见如下表4。

表4 克拉霉素亚微乳注射液60℃条件下加速实验结果

 

	3天	6天	10天
				外观	良好	良好	良好
pH	7.71	7.53	7.42
				PSD(nm)	140.1±49.7	156.1±63.2	183.0±81.8
含量(％)	97.3	95.0	94.3

由表4看出，以磷脂复合物载药的克拉霉素亚微乳注射液在高温60℃加速10天后，含量仅下降了5.7％，仍在标示含量的90％以上。

3)长期稳定性考察

取按实施例1配方制备的克拉霉素亚微乳注射液三批样品(批号：20071011、20071013、20071015)放置于25℃±2℃和10℃±2℃条件下储藏6个月，分别于第1、2、3、6月取样进行各项理化性质的检查与测定，结果见表5和表6。

表5 克拉霉素亚微乳注射液长期稳定性实验结果(25℃±2℃)

表6 克拉霉素亚微乳注射液长期稳定性实验结果(10℃±2℃)

长期稳定性考察的结果显示：在25±2℃及10±2℃条件下放置6个月，其外观、pH值、药物含量、包封率以及平均粒径等指标都没有发生显著的变化，仍符合静脉用药要求。

6)大鼠体内药代动力学研究

Wister种雄性大白鼠，体重(200±20)g，沈阳药科大学试验动物中心提供；

克拉霉素溶液剂的制备：将适量克拉霉素溶解在pH值为1的磷酸溶液中，用10％NaOH调节上述磷酸溶液pH值到5.5，用注射用水定容至100mL，然后经0.22μm微孔滤膜过滤，充氮、封装后即可制得克拉霉素溶液剂。克拉霉素溶液剂中药物浓度为2.5mg·mL^-1。

给药方案与血浆样品采集

将12只体重为(200±20)g的雄性Wister大鼠随机分成二组，每组6只，实验前禁食一夜。甲组为受试制剂，于右后股静脉注射实施例1的克拉霉素亚微乳注射液(2.5mg·mL^-1)1.8mL；乙组为参比制剂，于右后股静脉注射克拉霉素溶液剂(2.5mg·mL^-1)1.8mL。分别于给药后5min、10min、15min、20min、30min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h眼眶取血0.5mL，置预先肝素化的尖底离心试管中，5000rpm离心10min，分离血浆，-20℃冷冻保存，待测。

血浆样品的处理与测定

取血浆样品100μL，分别加入30μL内标溶液(4μg·mL^-1罗红霉素溶液)、20μL甲醇水溶液(甲醇:水 1:1，v/v)和100μLNa₂CO₃溶液(0.5mol·L^-1)，涡旋30秒，混匀；加入3mL正己烷-二氯甲烷-异丙醇(300:150:15，v/v/v)，涡旋10min。以10,000rpm离心5min，取上清液置干净试管中，用美国LABCONCO公司离心浓缩干燥仪在40℃条件下真空蒸发除去溶剂，残留物加入1mL甲醇溶解，涡旋混合，离心取上清液5μL进样分析，采用超高效液相色谱与质谱连用的测定方法分析，以标准曲线计算各时间点血浆样品中克拉霉素的浓度。实验动物静脉注射克拉霉素亚微乳注射液后各时间点的血药浓度测定结果见表7，实验动物静脉注射克拉霉素溶液剂后各时间点的血药浓度测定结果见表8，实验动物各时间点血药浓度的平均值与时间的关系见图4。

表7 单剂量股静脉注射克拉霉素亚微乳注射液后大鼠各时血药浓度

表8 单剂量股静脉注射克拉霉素溶液剂后大鼠各时血药浓度

结果处理

隔室模型药物动力学参数

用DAS 2.0统计计算软件(中国药理学会数学药理专业委员会)药物动力学程序处理克拉霉素亚微乳剂和克拉霉素溶液剂的血药浓度数据。根据AIC和拟合度判断两者的模型归属，结果表明，克拉霉素亚微乳注射液和克拉霉素溶液剂的血药浓度数据均符合三隔室模型，两者的药动学特征曲线相似。

非隔室模型药物动力学参数

血药浓度数据采用统计矩计算(天津药学，1999，11(1)，1-3)，用统计矩分析药物的体内过程属于一种非隔室的分析方法，它不需对药物设定专门的隔室。使用DAS2.0统计计算软件的药物动力学程序，根据血药浓度-时间实测数据所描述的体内过程，计算克拉霉素亚微乳注射液和克拉霉素溶液剂的统计矩药物动力学参数，结果见表9。

表9 非隔室模型拟合克拉霉素亚微乳注射液与参比溶液剂的各项药动学参数

应用SPSS11.0统计软件分析克拉霉素亚微乳注射液和克拉霉素溶液剂的各统计矩药动学参数，结果表明：受试制剂和参比制剂除参数Vss有显著性差异外(n＝6，P<0.05)，其他参数没有显著性差异(n＝6，P>0.05)。

Claims (6)

1、一种克拉霉素亚微乳注射液，以100mL注射液计，其包含：

克拉霉素磷脂复合物    以克拉霉素计            0.05g～0.5g

中链脂肪酸甘油三酯                            10g～20g

注射用大豆油                                  0g～10g

大豆卵磷脂                                    0.2g～2g

Pluronic F-68                                 0.2g～1g

吐温-80                                       0g～0.5g

L-半胱氨酸                                    0.01g～0.05g

油酸钠                                        0.05g～0.3g

甘油                                          2g～5g

注射用水                                      70g～90g

其中，克拉霉素磷脂复合物中克拉霉素与大豆卵磷脂的质量比为1:1～1:12。

2、根据权利要求1所述的克拉霉素亚微乳注射液，其特征是，以100mL注射液计，其包含：

克拉霉素磷脂复合物   以克拉霉素计                 0.25g

中链脂肪酸甘油三酯                                16g

注射用大豆油                                      4g

大豆卵磷脂                                        1g

Pluronic F-68                                     0.2g

吐温-80                                           0.2g

L-半胱氨酸                                        0.02g

油酸钠                                            0.1g

甘油                                              2.5g

其余为注射用水

其中，克拉霉素磷脂复合物中克拉霉素与大豆卵磷脂的质量比为1:10。

3、根据权利要求1或2所述的克拉霉素亚微乳注射液，其特征是，亚微乳平均粒径为140.3±47.2nm，ζ-电位为-20.99mV，包封率为91.4％。

4、一种权利要求1～3中任一项所述的克拉霉素亚微乳注射液的制备方法，其特征是，以制备100mL注射液计，该方法包括：

步骤1：将注射用甘油 2g～5g、Pluronic F-68 0.2g～1g、吐温-80 0g～0.5g、注射用油酸钠0.05g～0.3g、L-半胱氨酸0.01g～0.05g分散于适量注射用水中，使其全部溶解，制得水相；

步骤2：将0.2g～2g大豆卵磷脂分散于油相中链脂肪酸甘油三酯10g～20g和注射用大豆油0g～10g中，使其全部溶解，然后再将克拉霉素磷脂复合物分散于其中，使复合物全部溶解，制得油相；

步骤3：在搅拌下，将水相加入至油相中，制得初乳；

步骤4：将初乳用注射用水稀释定容至配方量，转移至高压均质机中进行均质；

步骤5：将步骤4均质后的乳剂用碱或酸调节pH值至8.0，装瓶，封罐氮气，灭菌，即得克拉霉素亚微乳注射液；

其中，克拉霉素磷脂复合物中克拉霉素与大豆卵磷脂的质量比为1:1～1:12，克拉霉素含量为0.05g～0.5g。

5、根据权利要求4所述的克拉霉素亚微乳注射液的制备方法，其特征是，所述克拉霉素磷脂复合物按如下方法得到：将克拉霉素和大豆卵磷脂按质量比为1:1～1:12置于圆底烧瓶中，加入无水乙醇，加热回流得澄清的反应溶液，然后蒸发除去乙醇，得到克拉霉素磷脂复合物。

6、根据权利要求4或5所述的克拉霉素亚微乳注射液的制备方法，其特征是，该方法各步骤如下：

步骤1：将注射用甘油2.5g、Pluronic F-68 0.2g、吐温-80 0.2g、注射用油酸钠0.1g、L-半胱氨酸0.02g分散于适量注射用水中，置磁力搅拌器中加热至80℃，并搅拌至全部溶解分散于适量注射用水中，制得水相；

步骤2：将1g大豆卵磷脂分散于油相中链脂肪酸甘油三酯16g和注射用大豆油4g中，置磁力搅拌器加热至55℃，搅拌至全部溶解，然后再将克拉霉素磷脂复合物分散于上述油相中，再置磁力搅拌器中加热至55℃，并搅拌至复合物全部溶解，制得油相；

步骤3：在高速组织捣碎机搅拌下，以1,7000rpm，将水相加入至油相中，搅拌3次，每次3min，制得初乳；

步骤4：将初乳用注射用水稀释定容至配方量，转移至高压均质机中，以冰水浴控制均质温度在40℃以下，以700bar压力均质7次；

步骤5：将步骤4中得到的乳剂用0.1mol·L^-1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至8.0，装瓶，封罐氮气，100℃旋转水浴灭菌30min，冰水浴迅速降温即得克拉霉素亚微乳注射液。

Images