CN101410409A - 免疫调节组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明的组合物含有异源疏水性细胞因子蛋白的酵母生产菌细胞的水不溶性成分、增溶剂和水，其中，目的疏水性细胞因子蛋白已在所述生产菌中合成。具体来说，所述细胞因子蛋白为白细胞介素－2(IL－2)，酵母生产菌为在全俄微生物菌种保藏中心以编号No.Y－791保藏的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株。所述组合物表现出免疫调节活性，可用于免疫导向治疗，特别是用于肿瘤、传染性疾病、自身免疫疾病和过敏性疾病的治疗。还公开了一种含有异源疏水性蛋白－细胞因子酵母生产菌破碎细胞的水不溶性成分的组合物，其中，在所述酵母生产菌中已合成了目的疏水性蛋白－细胞因子。所述组合物本身无活性，可通过向其中添加增溶剂和水来用于制备免疫调节组合物。

Description

免疫调节组合物
技术领域
本发明涉及免疫调节药物，可用于医学和兽医学中。具体来说，本发明涉及可用于免疫导向治疗(immune-oriented)的免疫调节组合物，特别是用于肿瘤、传染性疾病、自身免疫疾病和过敏性疾病的治疗的免疫调节组合物。
背景技术
免疫系统不能有效地发挥其基本功能导致了各种继发性免疫缺陷的发生，其在临床上表现为几种典型的综合症：传染性综合症、过敏(特应性反应)性综合症、自身免疫性综合症和淋巴组织增生综合症。
现在公知大部分多发病和功能性障碍伴发有免疫缺陷。免疫抑制不仅伴发于AIDS，也伴发于许多传染性疾病、肿瘤、创伤、烧伤和损伤中。其可以在各种病因学的腐败状态、老化、分娩、新生儿的早产和外科手术中观察到。
免疫导向治疗方法的应用是现在重要的一种应用医学。若没有这些方法则不能治疗许多疾病，它们是综合治疗的一种必须组成。具有亲免疫活性的药物的范围很宽而且多样化。
由现有技术(专利US 4138479，公开于06.02.1979)已知一种水溶性免疫增强剂，其表现为破碎酵母细胞壁的抽提产物。
已知一种免疫调节组合物(专利US 6509313、公开于2003年1月21日)，其含有具有细胞因子活性的制剂，该制剂可以为天然、重组或突变的细胞因子。该组合物用于刺激、维持或抑制免疫应答。
在专利US 6509313说明书中记载了含有细胞因子活性剂的组合物的口服给药可能性。然而，如可从提供的实施例推断的：该组合物通过皮下注射给药或通过硬膏或吸入器的应用来给药。而且提出建议“避免胃肠道的水解环境”(15栏倒数第二段)。
此外，还应指出的是，迄今为止已知的细胞因子活性剂为生产成本极高的高纯度的天然或重组蛋白。
还已知一种组合物，其含有酵母细胞壁成分作为活性成分(专利US6919082、公开于2005年7月19日)。其口服给药表现出疗效，特别是在过敏性疾病的治疗中。上述成分刺激短链脂肪酸的合成，所述短链脂肪酸对人肠道的健康状况的贡献最近备受重视。该组合物未利用有巨大潜力的酵母作为异源蛋白的生产菌。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种低成本制剂，其可用于免疫导向治疗，特别是用于肿瘤、传染性疾病、自身免疫疾病和过敏性疾病的治疗，而且不破坏皮肤表皮就能对病人给药。考虑到患者的免疫系统由于未知的原因不识别已经存在的外源因子而导致疾病，本发明人的目的在于，开发一种制剂，所述制剂通过进一步刺激各种免疫细胞增殖，可以提供附加的抗原刺激以实现第一阶段免疫应答。从而本发明的进一步目的在于，提供一种含有人和动物免疫细胞活化和增殖因子的药物组合物。
上述目的通过提供一种含有异源疏水性细胞因子蛋白的酵母生产菌的水不溶性破碎细胞成分的组合物来达成，其中，所述生产菌中目的疏水性细胞因子蛋白已被合成。具体来说，该细胞因子蛋白为白细胞介素-2(IL-2)，该酵母生产菌为在全俄微生物菌种保藏中心以No.Y-791保藏的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株。
这种组合物其本身无活性，但是可以在加入增溶剂和水后最终得到本发明的免疫调节组合物后用于免疫调节的目的。
在一种替代和最优选的实施方式中，本发明的组合物含有酵母生产菌(其中目的异源疏水性细胞因子蛋白(特别是白细胞介素-2(IL-2))已被合成)的水不溶性破碎的细胞成分和增溶剂(特别是十二烷基硫酸钠)。加入水便足以活化所述组合物。
最后，本发明的目的通过提供一种组合物来达成，所述组合物含有异源疏水性细胞因子蛋白的酵母生产菌的水不溶性破碎细胞成分、增溶剂和水，所述生产菌中已合成了目的疏水性细胞因子蛋白。具体来说，提供一种含有酵母生产菌的水不溶性破碎细胞成分的组合物，其中所述生产菌中已合成了异源白细胞介素-2(IL-2)，该组合物还含有增溶剂和水。该组合物具有免疫调节活性。
在优选的实施方式中，该酵母生产菌为在全俄微生物菌种保藏中心以No.Y-791保藏的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株，该菌株为人重组白细胞介素-2的生产菌。
在该组合物中使用的增溶剂优选为十二烷基硫酸钠。
所要求保护的组合物可以以最有效的方式利用异源细胞因子的酵母生产菌的治疗潜力，同时避免了非常复杂的细胞因子纯化过程，这大幅降低了得到的组合物的成本，如此得到的配制品可以不破坏皮肤表皮来给药，即口服给药。
所要求保护的组合物对于免疫调节药物来说是一种非常新的方式。其结合了酵母和细胞因子的治疗效果，并且所提议的溶液虽然看起来非常简单，但是在现有的技术领域中是绝对意想不到的。提供这种组合物可以彻底地改变细胞因子治疗的方式，因为用这种天然方法得到的组合物可以同时解决几种问题：降低细胞因子治疗成本、简化给药方法(口服给药而不是皮下或静脉给药)、增加治疗效果，特别是在耐受细胞因子的单一治疗的情况下。
由本发明组合物的试验结果可知，所述组合物在效果方面与公知的细胞因子制剂相比具有极高的竞争力，特别是与白细胞介素-2制剂等相比，根据初步的数据，破碎酵母细胞的水不溶性成分含有激活因子，若无该激活因子，则细胞因子，特别是白细胞介素-2，所代表的增殖因子则不能提供任何治疗效果。
具体实施方式
在本说明书中，三种类型的对免疫系统的影响即免疫保护、免疫修正和免疫恢复被理解为免疫调节。
免疫保护指的是，防止在例如重机械性创伤、大型外科手术、大面积烧伤等异常因素或情况下免疫缺陷的产生成为多器官功能衰竭的组成之一。在这些情况下，免疫缺陷在相当大程度上与全身炎症系统功能紊乱，以及与失血、休克、缺氧和内因性中毒有关，而且免疫缺陷也是急性产生的严重多器官衰竭(即经常导致致命结果的危及生命的情况)的发病机理的关键因素。
免疫修正指的是，补偿与免疫系统的细胞组成相关的所表现出的免疫缺陷，和对该组成的不均衡的消除。
免疫恢复指的是，免疫活性细胞，主要是T-淋巴细胞的整个库的重建，以及免疫系统的形态和功能完整性的恢复。
正常地，免疫应答在有机体中被激活是由于病毒因子、细菌因子或真菌因子的侵入，还由于在有机体中形成恶性细胞，也就是说，免疫应答被抗原激活。
然而，医师经常面临的情况为，由于不明原因，在伴发有免疫缺陷状态下，患者的有机体对抗原刺激未应答，且患者感染伴发有外源因子的永久携带的慢性疾病(该疾病为肺结核、乙型肝炎和丙型肝炎、窦炎、反复发作的过敏性疾病、慢性衣原体和支原体病、慢性病毒感染携带状态、持续脓性皮炎、肾盂肾炎、真菌感染等)。
因此，可以推断：在某种情况下仅使用增殖因子对于免疫调节目的来说是不够的，还需要激活因子。
特别是，该内源性IL-2的作用机理包括刺激CD4+和CD8+淋巴细胞的抗原依赖性增殖。换而言之，即上述T-淋巴细胞的成功增殖以及随后的级联免疫事件的开始(大量细胞因子的分泌，适当受体的表达，免疫应答反应形式等)需要活化因子(抗原刺激)和增殖因子(白细胞介素-2)两者都存在(SmithK.A.“T-cell growth factor”.//Immunol.Rev.-1980.-51.-p.337-357.RubinJ.T.“Interleukin-2：its biology and clinical application in patients with cancer”.//Cancer investigation.-1993.-11(4).-p.460-472)。
如上所述，根据临床病理学，通过抗原激活免疫应答的发生可能由于病毒因子、细菌因子和真菌因子侵入有机体，而且也可由于在有机体中形成了恶性细胞。
若IL-2是在这种情况下导入到有机体中，则仅刺激抗原激活细胞的增殖，这是因为其生物活性由于与仅由激活的靶细胞表达的特异性受体的相互作用而表现出来。
所要求保护的组合物具有免疫调节作用，可用于治疗：恶性疾病；各种感染：败血病、腹膜炎、胰腺炎、骨髓炎、脓性皮炎、子宫内膜炎、肠炎、真菌病；抗生素抗性感染：结核病、假性结核病；乙型和丙型肝炎、艾滋病毒感染、衣原体(导致的疾病)；自身免疫性疾病：多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症、肾小球肾炎、克罗恩氏病、神经性皮炎；过敏性疾病：草花粉过敏、动物皮毛过敏、过敏性哮喘、接触性过敏、饮食过敏等。
已知基因修饰的微生物，特别是酵母可以作为异源蛋白生产菌。具体来说，利用基因工程和生物技术方法可以获得具有细胞因子活性的蛋白的酵母重组生产菌。
大多数动物细胞因子为分泌性蛋白。在分泌过程中，天然细胞因子蛋白得到它们的糖残基，从而形成糖蛋白，达到其正确的空间构象和生物活性，并最终可溶。还已知异源蛋白经常以“包涵体”形式存在于生产菌微生物的细胞内。在“包涵体”中，目的重组蛋白为不溶解(疏水性)且无活性的形式。具体来说，这是由于在生产菌微生物的细胞内合成过程中异源蛋白未采用正确构象而导致的。
为了提供具有适宜状态的蛋白以使其具有正确构象，提出了各种技术来溶解疏水性异源蛋白(美国专利申请20060052583、公开于2006年3月9日)。然而，本发明提供了目的蛋白的所述性质在制备新型组合物中的应用。通过酵母产生的包括重组白细胞介素-2的疏水性重组蛋白趋向于保持在破碎的生产菌细胞的离心后的沉淀物中(EP 0152358中第4页最后一段)。
因此，在本说明书中，“异源疏水性细胞因子蛋白的酵母生产菌”表示已将编码细胞因子的基因导入到其中的酵母菌株；该蛋白的产生对于所考虑的酵母菌株来说不是常规的，因此该蛋白被称为异源蛋白。本发明仅涉及在重组生产菌菌株的细胞中合成后在细胞内蓄积并表现出疏水性质的蛋白。尽管在天然状态下细胞因子被糖基化、被分泌而且具有亲水性，但是在所述生产菌微生物中它们可以被蓄积在细胞内，且因此是非糖基化和疏水性的。通过生产菌细胞合成这种重组蛋白过程中，其空间构象未正确形成，这种蛋白的主要特征为其在所述生产菌细胞破碎后保持在水不溶性成分中。
细胞因子蛋白被理解为控制血细胞和免疫系统的增殖、分化以及功能的生长因子(Sedlacek H.-H.，Moroy T.“Immune reactions：headlines，overviews，tables and graphics”.//Springer-Verlag Berlin Heidelberg.-1995.-p.1-53)。细胞因子包括干扰素、集落刺激因子(CSF)、趋化因子、转化生长因子、肿瘤坏死因子、白细胞介素及其它因子(A.S.Simbirtsev.“Cytokines：classification and biological functions”.//Cytokins and inflammation.-2004.-Vol.3，No.2，p.16-22)。
更具体地说，细胞因子是小分子蛋白(分子量为8～80kDa)，以自分泌(即对产生它们的细胞起作用)和/或旁分泌(即对相邻细胞起作用)形式起作用。细胞因子主要是由血细胞和免疫系统细胞分泌的，在免疫系统中参与细胞间的信号转导。为了实现它们的功能，细胞因子应与在它们的靶细胞的膜上的特异性受体结合并将它们激活。由淋巴细胞合成，并且是增殖和分化的调节因子，特别是造血和免疫系统细胞增殖和分化的调节因子的细胞因子，也称为淋巴因子。其包括白细胞介素(interleukine，IL)(该词来源于inter-在...之间和leukins-白细胞)、干扰素和集落刺激因子。
一种细胞因子-白细胞介素-2(IL-2)的作用机理包括刺激CD4+和CD8+淋巴细胞的抗原依赖性增殖。IL-2的其它重要性质在于其对Th1/Th2平衡的影响、对Th1细胞的自分泌型作用以及对Th2细胞亚群的旁分泌型作用的影响(Carol B.and Kendall A.S.，2002.Sedlacek H.-H.，Moroy T.“Immunereactions：headlines，overviews，tables and graphics”.//Springer-Verlag BerlinHeidelberg.-1995.-p.15-21)。同样地对被选择的类型和免疫反应的持续时间有影响，IL-2实际上表现出多方面的免疫生物学性质。
在过去数十年间，细胞因子的治疗应用，即，如IL-2的治疗应用，成为深入研究的课题。在用各种生产菌得到重组细胞因子方面已取得了重大的进展。
虽然酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是最普遍的酵母生产菌，其它一些非致病性酵母也可以成为生产菌，例如布拉酵母(Saccharomycesboulardi)，或毕赤酵母属(Pichia)酵母例如毕赤酵母(Pichia pastoris)，克鲁维酵母属(Kluyveromyce)酵母如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)或汉逊酵母属(hansenula)酵母如多形汉逊酵母(hansenula polymorpha)等。
具体来说，在全俄微生物菌种保藏中心以No.Y-791保藏的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株可以作为人IL-2酵母生产菌的一例。根据被导入到生产菌菌株中的表达载体的结构，目的异源蛋白可以被分泌或保持在细胞内。若蛋白保持在细胞内，则其进一步纯化应该通过破碎生产菌菌株细胞进行。
可以用能确保目的蛋白完整性的任意已知方法破碎酵母细胞，特别是通过物理方法，例如在高压下通过冻-融法利用带玻璃珠的高速破碎机破碎。
在本说明书中，通过将蛋白酶抑制剂添加到破碎细胞悬浮液中来确保目的产品的完整性，从而在酵母细胞破碎时释放的酵母蛋白酶不会被破坏目的蛋白，具体来说是IL-2。若可以避免所使用的试剂对目的蛋白的蛋白水解作用，则破碎酵母细胞的酶原方法也是可行的。
可以通过离心分离水不溶性成分。因此，酵母细胞的几乎所有水溶性组分被转移到上清液中，然后被除去，而水不溶性成分则保留在沉淀中。在离心过程中除去蛋白酶、可溶性蛋白、核糖核酸(RNA)、染色体DNA和质粒DNA。也可以通过其它可行的方法，特别是过滤，来进行水不溶性成分的分离。
对分离的水不溶性成分可以进行某些处理以改进其物理性质。例如，对其可以用0.005M的tris-HCl缓冲溶液洗涤一次和几次或进行冻干。也可以用丙酮对该成分进行处理使其完全脱水，除去丙酮成分后，可以容易地干燥沉淀物而得到粉末状物质。
目的细胞因子蛋白在所述水不溶性成分的干燥沉淀物中的重量百分比为1～4％。可以通过任意一种用于检测目的蛋白的标准方法来测定该细胞因子蛋白的量，例如通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(Laemmli U.“Cleavage ofstructural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4”.//Nature.-1970.-227.-p.680-685)或使用免疫酶分析法(Gehman L.O.andRobb R.J.“An ELISA-based assay for quantitation of human interleukin-2.”//J.Immunol.Methods.-1984.-vol.74.-p.39)等测定。
该组合物的给药剂量根据得到的细胞因子的活性决定。为此，溶解水不溶性成分，并通过任何标准试验来测定液体相中的细胞因子蛋白活性。
对于各种细胞因子都已经开发了其活性评价的专用标准试验。
例如，得到的IL-2的生物活性可以通过国际标准试验来评价，所述标准试验利用培养IL-2-依赖性肿瘤特异性细胞毒性的小鼠T-淋巴细胞的CTLL-2细胞系来进行(Hammerling U.et al.《Development and validationbioassay for interleukin-2》.//J.Pharmaceut.&Biochem.Analysis，-1992.-vol.10.-p.547.Gearing A.J.H.and Thorpe R.《The international standard for humaninterleukin-2.Calibration by international collaborative study.》//J.Immunol.Methods.-1984.-vol.74.-p.39)。有生物活性的重组IL-2应刺激这些细胞的增殖。生物活性通过使用四唑染料MTT的比色法来测定。被IL-2刺激的存活的细胞吸收该染料并在细胞质中蓄积水不溶性暗蓝色甲(formazan)晶体(还原的MTT)。在除去培养基后且该晶体完全溶解在二甲基亚砜中后，通过计算机辅助的光度计方法在波长530nm和690nm下测定得到的溶液的光密度。含有IL-2的样品中溶液的暗蓝色呈色应取决于加入到培养基中的IL-2浓度。通过对比样品的光密度和IL-2的活性标准的光密度，测定培养样品中的IL-2的生物活性。
具体来说，对于IL-2，约100mg的干燥的水不溶性成分表现出400～500万国际单位(IU)的活性水平。因此，若需要使用100万IU剂量的IL-2，则取约20～25mg的干燥水不溶性成分。
向含有异源疏水性细胞因子蛋白的水不溶性成分中添加增溶剂和水使该蛋白转换为其活性形式。
增溶剂(去污剂)是一种有助于疏水性物质溶解在水中的物质。十二烷基硫酸钠、十二烷基肌氨酸盐、脱氧胆酸盐、脲和Triton-X 100可以被用作增溶剂。
在酵母细胞内制备的重组IL-2为水不溶性的，其与细胞壁相结合。还发现增溶剂可以使IL-2从细胞壁脱离。
增溶剂在组合物中的含量可以在所述水不溶性成分干重的4.0％～20.0％范围内变动，优选为12％。
含有上述水不溶性成分和增溶剂的组合物为一种在使用前需要向其中添加水的免疫调节剂。
向含有干燥的水不溶性成分和增溶剂的组合物中添加水使疏水性异源蛋白溶解，实现所述异源蛋白的正确构象，并由此形成活性细胞因子。每100mg水不溶性成分中可以加入1～10ml水。
组合物还可以含有适于形成上述组合物的适当药物剂型的任何可药用的赋形剂。可以是通常用于制药工业的赋形剂、稳定剂、抗氧化剂等。
通常本发明的组合物可选择性地含有本说明书中公开的任意适当的组分、由本说明书中公开的任意适当的组分组成或主要由本说明书中公开的任意适当的组分组成，而且本发明组合物可以另外，或者可选择地，以不使用用于由背景技术已知的制剂中的或对于实现本发明的技术结果来说不是必须的任意组分、材料、成分或物质的方式制备。
实施例1.所述组合物的制备
为了制备该组合物，分取部分-70℃下保存在甘油中的酵母菌株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Y-791，将其接种到含有50mg/l组氨酸的营养培养基Sd1中。Sd1培养基的组成如下：0.67％酵母氨基酸氮源(“DifcoLaboratories”，Detroit，MI)、2％葡萄糖。细胞质量与Sd1培养基的体积的比例约为0.2g/升。
在Sd1培养基中进行培养直至光密度OD600达到2.5～4.0(优选OD600＝3.0)。
当达到所需的光密度值，将得到的接种转移到10倍体积的Sd2培养基中并进一步培养直至OD600为6.0～9.0(优选OD600＝7.5)。
培养基Sd2的组成如表1所示。
表1
营养培养基Sd2的组成
  培养基组成   每升中的量
  组氨酸   0.05g
  (NH4)-柠檬酸盐(无水)   7.6g
  MgSO4   0.5g
  NaCl   0.1g
  CaCl2·6H2O   0.1g
  KCl   1.5g
  KH2PO4   0.03g
  葡萄糖   20g
  H3BO3   0.5mg
  CuSO4·5H2O   0.04mg
  KI   0.1mg
  FeCl3·6H2O   0.2mg
  MnSO4   0.4mg
  NaMoO4·2H2O   0.2mg
  ZnSO4·7H2O   0.4mg
  生物素   0.02mg
  泛酸钙   2mg
  叶酸   0.002mg
  肌醇   10mg
  烟酸   0.4mg
  对氨基苯甲酸   0.2mg
  盐酸吡哆醇   0.4mg
  核黄素   0.2mg
  硫胺素   0.4mg
在Sd2培养基中培养可以改变为在相同体积的PEP营养培养基中培养以达到相同的光密度值。PEP营养培养基的组成如表2所示。
表2
PEP营养培养基的组成
  组成   在PEP培养基中的含量、g/l
  蛋白胨   20
  葡萄糖   20
在Sd2培养基(或在PEP培养基)中培养结束时，将细胞从培养基中分离(通过离心或过滤)，通常收率为每1升营养培养基8～12g细胞。对细胞进行所有进一步操作，除去培养基。
在添加有PMSF(终浓度为1mM)的缓冲溶液A中制备50％的细胞悬浮液。缓冲溶液A为0.005M tris-HCl缓冲溶液，pH为7.2。
在+2℃～+10℃的温度、3000rpm转子转速的条件下，使用Dyno Mill破碎机将酵母细胞破碎。
在+4℃的温度、4000～10000rpm转子转速的条件下，将破碎酵母细胞的悬浮液离心。
除去上清液，用缓冲溶液A洗涤沉淀以除去酵母蛋白酶、RNA、染色体DNA、质粒DNA和可溶的酵母蛋白；然后在+4℃的温度、4000～10000rpm转子转速的条件下，将该溶液再次离心。除去上清液。除了离心之外，也可以通过过滤分离水不溶性酵母成分。
在此阶段中获得的湿沉淀物为本发明的实施方式之一。为了用于治疗必须如下所述添加水和增溶剂。以这种方式，可以获得液体形式的本发明的组合物。
从通过任意有效的方法，例如冷冻干燥，进行干燥的上述破碎细胞沉淀物获得的粉末为本发明组合物的另一实施方式。以重量计，基于破碎酵母干燥产物重量，以4～20％、优选12％的量将增溶剂添加到所述干燥沉淀物中以获得本发明组合物的又一实施方式。
也可以使用冷丙酮对破碎细胞的沉淀物进行处理。在这种情况下，在与增溶剂混合时无需进一步粉碎就得到更细的粉末。
在冷却到+4℃的水中制备得到的破碎细胞沉淀物的75％悬浮液用于上述处理过程。为此，将0.3ml水加入到1g沉淀物中。上述悬浮液在冰浴中制备。
为了进一步进行处理，将所有玻璃器具和丙酮冷却到-10℃～-30℃，优选-20℃。冷却丙酮的体积应超过细胞悬浮液的体积15～20倍，优选20倍。
将破碎酵母细胞的悬浮液缓慢加入到丙酮中并均化5分钟。
然后，在-10℃～-30℃的温度，优选-20℃，2000～5000rpm的转速下通过真空过滤从丙酮中分离脱水的破碎的酵母细胞。
用2倍～10倍、优选5倍体积的丙酮洗涤得到的破碎酵母细胞沉淀物，并再次在-10℃～-30℃的温度，优选-20℃，2000～5000rpm的转速下进行真空过滤。
将沉淀物转移到搪瓷容器中，并在排风罩中于室温下干燥15～30小时、优选18小时。
最终，从1g的最初完整的酵母细胞得到含有破碎的IL-2生产菌细胞的水不溶性成分的细粉末约80～160mg。
在此阶段中得到的粉末为本发明组合物的实施方式之一。
必须加入水和增溶剂来用于治疗。
以重量计，以粉末重量的4～20％、优选12％量将水和增溶剂添加到粉末中，以获得本发明组合物的又一实施方式。
为了使用以粉末和增溶剂的形式的该含有水不溶性成分的组合物，有必要用5ml水搅拌得到的组合物100g，这相当于IL-2的400～500万IU的剂量。
实施例2.用于HIV-感染的单一免疫治疗
治疗方案
以几个疗程进行治疗。每个疗程持续5天，每天给药IL-2一次。以其间为2个月的间隔来完成四个疗程。在每个疗程后的四周内，对免疫图谱、临床和生物化学的血液试验、病毒HIV负载进行研究。前两个疗程使用IL-2
Figure A20078001156400151
(Biotech，俄罗斯)以100万IU的量来进行注射，所述代表纯化的蛋白。在后两个疗程中，以20mg组合物/5ml水的剂量口服给予本发明的组合物，其相当于100万IU的IL-2剂量。
患者：男性，38岁。在用本发明组合物治疗之前4个月诊断出HIV感染。不知道疾病的持续时间。
治疗前：
-CD4+淋巴细胞血液计数-418/微升
-HIV病毒负载-41000拷贝/ml
-泌尿生殖系统衣原体。
CD4+T-淋巴细胞的量表示迄今为止发生的HIV引发的对免疫系统损伤的程度。对于HIV阳性患者的疾病恶化危险性的确定来说，有必要进行HIV病毒RNA的血浆水平和CD4+T-淋巴细胞血液计数的有规律可重复的测定。
CD4+血液计数小于500/微升、病毒负载大于10000拷贝/ml为无症状的HIV感染下开始抗病毒治疗的指征。
结果
患者充分耐受该治疗；无陈诉，且未观察到不良反应。完全解决了衣原体感染。患者主观上感觉到劳动能力增强。
表3
CD4+和HIV病毒负载动力学
Figure A20078001156400161
有一些数据表明在某些情况下IL-2制剂的给药会增加病毒负载。在上述公开的治疗过程中无这种效果，甚至还有病毒负载的大幅降低，这是上述制剂的治疗前景的证据。
治疗的第一阶段(用
Figure A20078001156400162
)与第二阶段(用本发明制剂)的动力学都被证明是良好的。
与注射纯IL-2相比，以本发明的制剂给药时，CD4+含量动力学的显著改进可能是由于该制剂具有附加的刺激活性。
实施例3.HIV-感染下的单一免疫治疗
治疗方案
以几个疗程进行治疗。每个疗程持续5天、每天以100mg制剂/5ml水的剂量口服给予本发明制剂一次，共给药5次，相当于400～500万IU的IL-2剂量。以4个月的间隔完成两个疗程。
患者：男性，25岁。HIV感染伴发持续性全身淋巴结病。
结果
在每个疗程完成后的四周内测定免疫图谱。免疫图谱表明了相对的CD3+、CD4+以及CD8+淋巴细胞血液总数(抗原阳性细胞含量在血液T-淋巴细胞亚群中的百分率)，以及以CD4+与CD8+淋巴细胞之间的比例计算的免疫调节指数。
表4
CD3+、CD4+和CD8+的动力学以及免疫调节指数
指标   治疗开始时的基线   第一个疗程启   第二个疗程启 标准比率
  CD3+   82％   83％   82％   60～76％
  CD4+   25％   31％   39％   30～46％
  CD8+   52％   53％   52％   25～40％
  CD4+/CD8+   0.48   0.6   0.75   1.0～1.7
由免疫图谱的结果可知，治疗使患者免疫状态得到改善，其降低了患者对传染因子的敏感性，生活质量得到提高。
实施例4.过敏治疗
治疗方案
治疗方案如下所述：患者隔天与过敏因子接触；表现出过敏症状时以100mg组合物/5ml水的剂量给予患者本发明组合物，相当于400～500万IU的IL-2剂量。
1.患者：女性，36岁，患有饮食过敏12年。根据临床表现和皮下激发试验来诊断饮食过敏。根据点刺试验(PRICK-test)，检测对于8种过敏因子的反应。
在上述研究中，对患者进行单抗原-绿苹果试验。根据上述方案治疗疗程持续5天；接触绿苹果并给予本发明组合物共三次。
结果
试验开始后第15天重复点刺试验。该试验表明对绿苹果无反应，而对其它七种激怒物有阳性反应。
6个月后进行的检查试验表现出同样的结果。
2.患者：14岁少女，患有猫皮毛过敏4年。根据直接接触猫得到的观察结果来进行临床诊断。
治疗持续5天。
结果：
在开始治疗后第9天与猫接触期间未检测到过敏症状。
由此表明，本发明组合物具有治疗效果，可以有效地用于治疗多种疾病，包括以往未建议利用细胞因子进行治疗的疾病。

Claims (9)

1、一种免疫调节组合物，包括异源疏水性细胞因子蛋白的酵母生产菌的水不溶性的破碎的细胞成分、增溶剂和水，其中，所述生产菌中已合成了目的疏水性细胞因子蛋白。
2、根据权利要求1所述的组合物，其中，所述细胞因子蛋白为白细胞介素-2(IL-2)。
3、根据权利要求2所述的组合物，其中，所述酵母生产菌为在全俄微生物菌种保藏中心以No.Y-791保藏的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae菌株。
4、根据权利要求1～3中任一项所述的组合物，其中，所述增溶剂为十二烷基硫酸钠。
5、一种用于制备权利要求1所述免疫调节组合物的组合物，包括异源疏水性细胞因子蛋白的酵母生产菌的水不溶性破碎细胞成分，其中，所述生产菌中已合成了目的疏水性细胞因子蛋白。
6、根据权利要求5所述的组合物，其中，所述细胞因子蛋白为白细胞介素-2(IL-2)。
7、根据权利要求6所述的组合物，其中，所述酵母生产菌为在全俄微生物菌种保藏中心以No.Y-791保藏的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae菌株。
8、根据权利要求5～7中任一项所述的组合物，其中，所述组合物进一步含有增溶剂。
9、根据权利要求8所述的组合物，其中，所述增溶剂为十二烷基硫酸钠。
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