CN101376884A - 与猪肉质性状系水力相关的分子标记克隆及应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于家畜分子标记制备技术领域，具体涉及一种作为猪标记辅助选择应用的与猪肉质性状系水力相关的分子标记的克隆及应用。所述的分子标记由MASTR基因克隆得到，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所述。在序列表SEQ ID NO：1的第400bp处有一个C400－T400的碱基突变，导致MspI－RFLP多态性。本发明还公开了扩增MASTR基因部分DNA序列所用的引物以及用于多态性的检测方法。本发明为猪的标记辅助选择提供了一个新的分子标记。

Description

与猪肉质性状系水力相关的分子标记克隆及应用

技术领域

本发明属于猪的分子标记制备技术领域，具体涉及一种作为猪标记辅助选择的与肉质性状中系水力相关的分子标记的克隆及应用。

背景技术

猪经济性状的遗传基础十分复杂，国际上动物遗传育种领域的科学家和研究人员已经开展了大量的研究工作，但功能基因的鉴定及能用于育种实践的分子标记还十分有限；20世纪80年代以来，分子标记研究取得飞速发展，形成了以分子标记为核心的分子标记辅助选择和渗入等分子育种技术，这些技术与常规育种方法相结合，大大提高了猪的育种效率。

肉质性状主要包括肌肉pH值、肌内脂肪含量、大理石纹、系水力、剪切力、肉色、嫩度、肌纤维直径等指标。其中系水力是指当肌肉受到外力作用时保持其原有水分和添加水分的能力，常用滴水损失或失水率来衡量肌肉的系水力。肌肉系水力不仅关系到肉品的质地、风味和组织状态，而且具有重要的经济价值。例如，2000年我国猪肉产量4031.4万吨，如果因系水力不良造成多损失1％重量，则将损失40.31万吨食肉。据报道，美国仅肌肉系水力下降一项每年约损失1万吨肉，因此，无论养猪生产者、屠宰厂、加工业、贮存、运输和销售业都非常重视这类性状。但是由于系水力等肉质性状是一类活体难于度量的性状，因此对这类性状的改良一直是遗传改良工作的难点，若通过寻找可用的分子标记进行标记辅助选择，将会加快肉质性状的改良速度。

目前发现与猪肉质性状相关的的QTL几乎分布于猪的所有染色体上，通过功能候选基因法或位置克隆的策略筛选了一些与肌肉品质相关的分子标记。目前已发现许多与肌肉品质存在显著相关的基因，如：RYR1基因(Fujii，J等，Identification of a mutation in porcine ryanodine receptor associated with malignanthyperthermia.Science，1991，253：448-451)，研究表明该基因的C1843T错义突变可以导致猪产生应激综合症而发生肌肉品质的下降。(2)PRKAG3基因(Milan，D等，A mutation in PRKAG3 associated with excessglycogen content in pig skeletal muscle.Science，2000，288：1248-1251)，研究表明该基因的一个突变是导致汉普夏猪产生“酸肉”的主要原因。目前已有多个与肉质性状紧密连锁的功能基因分子标记被发现并申请专利：Rothschild等发现CAST基因与肉质性状中的嫩度关联并在猪肉质性状改良中进行标记辅助选择应用(专利号US，WO2003060151-A2)；Rothschild等检测了与肌肉生长和肉质性状相关的CKM，SCN4 alpha，LDH alpha三个基因的变异，为猪育种提供了分子标记(专利号US，WO2004081194-A2)；Gerbens等发现H-FABP基因的变异与肌内脂肪含量相关(专利号EP，WO9735878-A)；Kojima等发现pLEPR基因的变异能提高猪的产肉量(专利号US，WO2005017204-A2)等。

MASTR是Creemers等人在2006年研究Myocardin(MYOCD)基因的功能时发现的，DNA分子中含有SAP结构域和MEF2结合序列，其中SAP结构域是一个由33个氨基酸残基形成的保守模序；MEF2结合序列是MEF2的共激活物，和Myocardin家族同属于含SAP结构域转录因子家族。目前对该基因的研究主要集中在非洲蟾蜍属和小鼠，Esther等(2006)研究发现MASTR基因可以通过增加内源性MEF2的活性进而增强肌形成(Esther等Coactivation of MEF2 by the SAP Domain Proteins Myocardin and MASTR.Mol Cell.2006，23(1):83-96)。在非洲蟾蜍属中，MASTR在早期骨骼肌中呈特异性表达，MASTR和MYOD、MYF5共表达协同激活一些肌肉分化(marker)基因的表达，是胚胎期肌肉基因表达所必须的(Stryder等Themyocardin-related transcription factor，MASTR，cooperates with MyoD to activate skeletal muscle geneexpression.PNAS，2008，105(5):1545-1550)。另外，MASTR基因参与MRF4、MEF2D和myocardin蛋白的功能，这些蛋白在调控肌肉发育和生理学中起着重要作用。本专利申请者将猪MASTR基因定位于猪6号染色体上SSC6q11-q21。目前报道猪的6号染色体上存在有多个与肌肉品质相关的QTL，其中与系水力相关的QTL有6个(G.Yue等Linkage and QTL mapping for Sus scrofa chromosome 6.J Anim Breed Genet.，2003，120(1)；45-55)。另外，Ellen Markljung等研究发现，在6号染色体的51-69cM区域存在有影响滴水损失的QTL(Ellen Markljung等，Genome-wide identification of quantitative trait loci in a cross betweenHampshire and Landrace II：Meat quality traits.BMC Genetics.2008，9：22。通过以上研究结果我们可以得出MASTR基因在肌肉发育过程中发挥重要作用。寻找基因中的变异位点，通过与性状间的关联分析发现基因与性状间的关系是研究基因功能的一个重要手段，也是进行标记辅助选择的基础。为此开展了猪MASTR基因的克隆和SNP筛查、基因型检测及与性状关联分析。

发明内容

本发明的目的在于克隆一种作为猪标记辅助选择的与肉质性状系水力相关的分子标记，为猪标记辅助选择提供有用的分子标记。

本发明通过以下技术方案实现：

利用比较基因组方法根据人的MASTR基因序列信息克隆猪MASTR基因，获得其编码区序列，在编码区筛查SNP并建立检测方法，在已经建立的试验群体中检测MASTR基因型并进行基因型-性状间关联分析，得到SNP与性状间的关联结果。

申请人通过克隆得到一种与猪肉质性状系水力相关的MASTR基因片段，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所述。序列表SEQ ID NO：1的400bp处有1个C400-T400的碱基突变，导致MspI-RFLP多态性。

制备了检测上述序列表SEQ ID NO：1基因片段突变的引物对，所述的引物对的正向引物为5＇-CCTCACTTTCCCGCATCTTC-3＇，反向引物为5＇-GCTCCCTATTCTTCCTTTCCAG-3＇。

利用上述制备的与猪肉质性状系水力相关的分子标记对外来猪和中国地方猪进行了关联分析的应用，从而完成了本发明。

(1)猪MASTR基因片段cDNA序列的获得。

利用人MASTR基因mRNA为信息探针，作同源序列筛选，获得同源性80％以上的表达序列标签(EST)；然后拼接猪EST-重叠群，与人同源比对，根据表达序列标签-重叠群设计引物；用成年大白猪(外来猪)组织样提取总RNA，RT-PCR扩增、PCR产物纯化和克隆测序，进行序列分析。申请人设计了一对克隆猪MASTR基因的cDNA序列(CDS)引物，该引物扩增的CDS如SEQ ID NO：1所述(它包括完整CDS区)。

(2)SNP发现与检测方法建立。

利用不同猪品种的RNA进行RT-PCR，通过混合池测序筛查存在于编码区的SNP，结果发现存在于序列表SEQ ID NO：1所示的第400位碱基处有一个C400-T400的碱基突变，该突变位于第4外显子内，且引起丝氨酸-脯氨酸的改变，导致Msp I-RFLP多态性。申请人设计了扩增包含该SNP引物，该基因扩增片段有221bp，当第145bp位置是T145时，则该Msp I酶切位点不存在，Msp I酶切后检测结果只有1个片段，长度是221bp(定为等位基因T)；当存在C145→T145的转换时，其结果导致第145bp处一个Msp I酶切位点的产生，得到2个片段，长度分别为145bp和77bp(定为等位基因C)，三种基因型CC，CT，TT如图4所述。

(3)基因型-肉质性状间关联结果。

根据方差分析中的最小二乘法原理，使用SAS(视窗V8版)软件中的一般线性模型(GeneralLinearModel，GLM)程序对基因型与性状进行关联分析，具体模型如下：y_ijk＝μ+G_i+C_j+P_k+B_j+ε_ijk。其中，y_ijk是性状观察值，μ为总体均数，G_i为基因型效应，C_j为品种效应，P_k为父本效应，B_j为批次效应，ε_ijk为随机误差，假定ε_ijk相互独立，服从N(0，σ²)分布。性状关联分析表明：MASTR基因SNP位点对失水率和滴水损失有显著影响(P<0.05)，此位点对其它肉质性状没有显著影响。

更详细的技术方案见《具体实施方式》。

附图说明

SEQ ID NO：1是本发明克隆的与猪肉质性状系水力相关的MASTR基因片段的核苷酸序列(cDNA序列)；

图1：是本发明的技术流程图；

图2：是本发明中猪MASTR基因用于克隆的CDS片段。下划线为引物，英文字母Y后的括号内为碱基突变；

图3：是本发明中猪MASTR基因用于PCR-RFLP检测的DNA片段。下划线为引物，英文字母Y后的括号内为碱基突变；

图4：是本发明中猪MASTR基因Msp I-RFLP的三种基因型(CC CT TT)电泳结果。图中M：DNA分子量标准(DL2000 ladder)。

具体实施方式

实施例1、MASTR基因的克隆

1、引物设计

用人MASTR基因cDNA(GenBank收录号：NM_001130915)为信息探针，利用NCBI中的BLAST工具在GenBank猪EST数据库中做同源序列筛选，获得一系列同源性为80％以上的ESTs(片段长度大于100bp)，将这些ESTs的收录号在NCBI中用ENTREZ(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Web/Search/index.html)查询相应序列，然后用GeneTool中的ASSEMBLY程序构建猪EST-重叠群。根据EST拼接序列设计一对引物M-F和M-R，序列如下

MASTR：M-F5＇-CCCAAGGGGAATCTGACATAC-3＇

       M-R5＇-GCTCCCTATTCTTCCTTTCCAG-3＇

2、PCR产物的克隆和测序

将纯化后的PCR产物与pGEM-T载体在4℃水浴过夜连接；无菌状态下取100～120μl感受态细胞于1.5ml Ependorff管中，将5μl的连接产物加入混匀，在冰上放置30min，42℃热激90s，后冰浴3～4min，加入400μl无抗生素的LB液体培养基，37℃振荡培养45min。取100μl涂布于IPTG(Isopropylthio-β-D-galactoside，中文名称为异丙基硫代—β-D—半乳糖苷)和X-gal的琼脂平板上，37℃平放1h后倒置培养。挑取平板上的单菌落，接种于2—3ml LB中，37℃300r/min培养过夜。用1.5ml EP管12000r/min离心数秒收集菌体进行制备少量的质粒。验证后的重组质粒采用双脱氧末端终止法在DNA自动测序仪上进行测序，序列测定由北京奥科生物技术有限公司完成。用GeneTool1.0软件中的ASSEMBLY程序进行拼接，得到一条长度为827bp的CDS序列(见SEQ ID NO：1所述)。

DNA序列同源性检索鉴定：

通过美国国家生物技术信息中心(NCBI，National Center for Biotechnology Information，http://www.ncbi.nlm.nih.gov)网站的BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)软件，将测序后获得的DNA序列与GenBank数据库中公布的已知生理功能基因进行序列同源性比较，以鉴定和获得该DNA序列的功能信息。检索结果表明所测序列与人MASTR基因DNA(GenBank收录号：NM_001130915)的部分序列同源性达83％。

实施例2、SNP的筛查和PCR-RFLP诊断方法的建立

1、SNP的筛查

运用M-F和M-R引物分离猪基因组片段，通过在不同猪种的基因组中扩增，回收进行pool产物送公司测序，发现在该基因片段的第400位碱基处有一个C-T的碱基突变，并且引起丝氨酸-脯氨酸的改变，导致Msp I-RFLP多态性。

基因组测序的引物序列：

M-F：5＇-CCCAAGGGGAATCTGACATAC-3＇

M-R：5＇-GCTCCCTATTCTTCCTTTCCAG-3＇

2、PCR-RFLP诊断方法的建立

1、引物序列

MASTR P-SF 5＇-CCTCACTTTCCCGCATCTTC-3＇

      P-SR 5＇-ACTCCCCAAACTCACCGTCA-3＇

2、PCR扩增条件

PCR反应总体积20μl，其中猪基因组DNA约100ng，含1×buffer(Promega)，1.5mmol/L MgCl₂，dNTP终浓度为150μmol/L，引物终浓度为0.4μmol/L，2U Taq DNA聚合酶(Promega)。PCR扩增程序是：94℃3min，循环35次94℃30s，59℃30s，然后72℃20s，最后72℃延伸5min。PCR反应产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测。

3、PCR-RFLP检测条件

PCR产物酶切反应体积是10μl，其中1×buffer 1μl，PCR产物3～5μl，限制性内切酶MspI为0.3μl(10U)，用H₂O补足10μl，将样品混匀后离心，37℃水浴4h，用2％琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果，记录基因型，在紫外灯下拍照。对该位点两个纯合子的测序结果显述，在该221bp片段中存在一个Msp I酶切位点(GTCTC↓)，其中第145bp处为多态性切点，位于外显子4中。当第145bp位置是T145时，则该MspI酶切位点不存在，Msp I酶切后检测结果只有1个片段，长度是221bp(定为等位基因T)；但存在C145→T145的替换时，其结果导致第145bp处一个Msp I酶切位点的产生，得到2个片段，长度分别为145bp和77bp(定为等位基因C)，三种基因型CC，CT，TT如图4所述。

4、PCR—RFLP—Msp I多态性在各猪品种中的分布情况

利用PCR-RFLP-Msp I检测了6个不同中外猪品种：其中国外猪品种有大白，长白和杜洛克，中国地方猪品种有通城猪、荣昌猪和二花脸猪。该突变位点在不同猪种中的基因型和基因频率如表1所示，结果显示MASTR基因各基因型在荣昌猪、大白猪、大白猪和杜洛克猪都有分布，在通城猪和二花脸猪中只有TT基因型。χ²检验6个不同中外猪品种间基因型频率差异如表2所示，结果显示国内外不同品种间基因频率分布存在着极显著差异。

      表1：几个猪品种MASTR基因Msp I多态性的基因型和基因频率

表2：猪MASTR基因Msp I-RFLP多态性位点在不同品种中分布的差异性检验结果

注：表示^**P<0.01，^*表示P<0.05。

5、本发明的分子标记在猪肉质性状标记性状关联分析中的应用

试验共检测了169个猪个体：中国地方猪通城纯种34头，外来猪大白纯种23头，长白纯种25头，中国地方猪与外来猪的杂交猪大长通(大白×(长白×通城))37头、长大通(长白×(大白×通城))47头，确定其基因型，并进行基因型与生产性状(出生至上市平均日增重、胴体直长、胴体斜长、腿臀比率、腿臀肉骨率、板油率、皮脂重、失水率、滴水损失、肌肉pH值、肌内脂肪含量、肉色、眼肌面积、臀部膘厚)的关联分析。建立如下所述的最小二乘模型：

y_ijk＝μ+G_i+C_j+P_k+B_j+ε_ijk

其中，y_ijk是性状观察值，μ为总体均数，G_i为基因型效应，C_j为品种效应，P_k为父本效应，B_j为批次效应，ε_ijk为随机误差，假定ε_ijk相互独立，服从N(0，σ²)分布。基因型检测结果表明在169个个体中CC基因型，有43个，CT基因型有72个个体，TT基因型有50个个体。基因型与性状关联分析的结果是：MASTR基因与失水率和滴水损失呈显著相关。

由表3可知，MASTR基因SNP位点对失水率和滴水损失有显著影响(P<0.05)，此位点对其它肉质性状没有显著影响。

表3 MASTR基因MspI-RFLP多态不同基因型与部分肉质性状的关联分析

对失水率和滴水损失有显著影响(P<0.05)的MASTR基因的SNP位点基因型的最小二乘均数如表3所示。

表4：SNP位点(MASTR)基因型滴水损失和失水率的最小二乘均数

注：^**表示P<0.01，^*表示P<0.05。

表3表明，CC基因型个体的滴水损失和失水率都显著高于TT基因个体的对应值，CT基因型个体居中。因此可以看出TT基因型个体的滴水损失和失水率较低。

<110>华中农业大学

<120>与猪肉质性状系水力相关的分子标记克隆及应用

<130>

<141>2008-10-13

<160>2

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>827

<212>DNA

<213>猪(Sus scrofa)

<220>

<221>gene

<222>(1)..(827)

<223>

<220>

<221>primer_bind

<222>(806)..(827)

<223>

<220>

<221>primer_bind

<222>(1)..(21)

<223>

<220>

<221>mutation

<222>(400)..(400)

<223>

<220>

<221>CDS

<222>(31)..(801)

<223>

<400>1

cccaagggga atctgacata ccaccagtac atg cct cca gag cca aga caa ggg  54

                                 Met Pro Pro Glu Pro Arg Gln Gly

                                 1               5

acg agg gca gac ccc cag gct gaa ggg tcg gcc ttg ggt ccc cct gga 102

Thr Arg Ala Asp Pro Gln Ala Glu Gly Ser Ala Leu Gly Pro Pro Gly

    10                  15                  20

cca cct ctg tgg gaa ggg aca cac tca cag cag cca cct cct agg atg 150

Pro Pro Leu Trp Glu Gly Thr His Ser Gln Gln Pro Pro Pro Arg Met

25                  30                  35                  40

aag ccc act ccc ttc act tcc tcc cca cca gga gtc ccc ggt ccc tcg 198

Lys Pro Thr Pro Phe Thr Ser Ser Pro Pro Gly Val Pro Gly Pro Ser

                45                  50                  55

ccc cct tca cac aag ttg gaa ctt cag acc ctc aaa ctg gag gag ctg 246

Pro Pro Ser His Lys Leu Glu Leu Gln Thr Leu Lys Leu Glu Glu Leu

            60                  65                  70

acg gtc tca gag ctc cga cag cag ctg cgc ctg cgg ggc ctc ccg gtg 294

Thr Val Ser Glu Leu Arg Gln Gln Leu Arg Leu Arg Gly Leu Pro Val

        75                  80                  85

tct ggg acg aag tcg atg ctc ctg gag cgc atg cgc ggc ggt gcc ycg 342

Ser Gly Thr Lys Ser Met Leu Leu Glu Arg Met Arg Gly Gly Ala Xaa

    90                  95                  100

ccc cgc gag cgg cca aag ccg cgg cgc gag gac agt ccc ctg gat gct 390

Pro Arg Glu Arg Pro Lys Pro Arg Arg Gul Asp Ser Pro Leu Asp Ala

105                 110                 115                 120

ccc tgg cca cgc ttc agg gcc aaa gct ttg gga gcc tcc cgg agg ccc 438

Pro Trp Pro Arg Phe Arg Ala Lys Ala Leu Gly Ala Ser Arg Arg Pro

                125                 130                 135

gga tcg ttc aag ccg agt cca aca cct cac tcg cct cct cct cct cca 486

Gly Ser Phe Lys Pro Ser Pro Thr Pro His Ser Pro Pro Pro Pro Pro

            140                 145                 150

cat gcc gcg gaa acc gtt atg atg gct ccg gct ccg gct ccg cct gcg 534

His Ala Ala Glu Thr Val Met Met Ala Pro Ala Pro Ala Pro Pro Ala

        155                 160                 165

acg acg gct ccg gct cca gcg ccg atc cct ttc tca gca cca gcc tcg 582

Thr Thr Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ile Pro Phe Ser Ala Pro Ala Ser

    170                 175                 180

aca gcc ctg aca ctg gag gag gag ctg cag gaa gcg atc cgc aga gcg   630

Thr Ala Leu Thr Leu Glu Glu Glu Leu Gln Glu Ala Ile Arg Arg Ala

185                 190                 195                 200

cag ctg ctt ccg aac cgg ggc atc gat gac atc cta gaa gat caa gtg   678

Gln Leu Leu Pro Asn Arg Gly Ile Asp Asp Ile Leu Glu Asp Gln Val

                205                 210                 215

gaa cct gag ggt aag agc cga act ctg agc ttt ggg ctg agg ttc tgg   726

Glu Pro Glu Gly Lys Ser Arg Thr Leu Ser Phe Gly Leu Arg Phe Trp

            220                 225                 230

gct tct ggg tct gag gga ggg aca ggt tgg tgt ctg aat tcc tgg gtc   774

Ala Ser Gly Ser Glu Gly Gly Thr Gly Trp Cys Leu Asn Ser Trp Val

        235                 240                 245

cta agg agg agt ggg ctg gat acc taa acttctggaa aggaagaata gggagc  827

Leu Arg Arg Ser Gly Leu Asp Thr

    250                 255

<210>2

<211>256

<212>PRT

<213>猪(Sus scrofa)

<220>

<221>misc_feature

<222>(104)..(104)

<223>The’Xaa’at location 104 stands for Pro，or Ser.

<400>2

Met Pro Pro Glu Pro Arg Gln Gly Thr Arg Ala Asp Pro Gln Ala Glu

1               5                   10                  15

Gly Ser Ala Leu Gly Pro Pro Gly Pro Pro Leu Trp Glu Gly Thr His

            20                  25                  30

Ser Gln Gln Pro Pro Pro Arg Met Lys Pro Thr Pro Phe Thr Ser Ser

        35                  40                  45

Pro Pro Gly Val Pro Gly Pro Ser Pro Pro Ser His Lys Leu Glu Leu

    50                  55                  60

Gln Thr Leu Lys Leu Glu Glu Leu Thr Val Ser Glu Leu Arg Gln Gln

65                  70                  75                  80

Leu Arg Leu Arg Gly Leu Pro Val Ser Gly Thr Lys Ser Met Leu Leu

                85                  90                  95

Glu Arg Met Arg Gly Gly Ala Xaa Pro Arg Glu Arg Pro Lys Pro Arg

            100                 105                 110

Arg Glu Asp Ser Pro Leu Asp Ala Pro Trp Pro Arg Phe Arg Ala Lys

        115                 120                 125

Ala Leu Gly Ala Ser Arg Arg Pro Gly Ser Phe Lys Pro Ser Pro Thr

    130                 135                 140

Pro His Ser Pro Pro Pro Pro Pro His Ala Ala Glu Thr Val Met Met

145                 150                 155                 160

Ala Pro Ala Pro Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala Pro Ala Pro Ala Pro

                165                 170                 175

Ile Pro Phe Ser Ala Pro Ala Ser Thr Ala Leu Thr Leu Glu Glu Glu

            180                 185                 190

Leu Gln Glu Ala Ile Arg Arg Ala Gln Leu Leu Pro Asn Arg Gly Ile

        195                 200                 205

Asp Asp Ile Leu Glu Asp Gln Val Glu Pro Glu Gly Lys Ser Arg Thr

    210                 215                 220

Leu Ser Phe Gly Leu Arg Phe Trp Ala Ser Gly Ser Glu Gly Gly Thr

225                 230                 235                 240

Gly Trp Cys Leu Asn Ser Trp Val Leu Arg Arg Ser Gly Leu Asp Thr

                245                 250                 255

Claims (5)

1、一种与猪肉质性状系水力相关的MASTR基因片段，它的核苷酸序列如序列表SEQID NO：1所述。

2、根据权利要求1所述的与猪肉质性状系水力相关的MASTR基因片段，其特征在于，序列表SEQ ID NO：1的400bp处有1个C400-T400的碱基突变，导致MspI-RFLP多态性。

3、检测权利要求2所述的一种猪肉质性状系水力相关的MASTR基因片段突变的引物对，所述的引物对的正向引物为5′-CCTCACTTTCCCGCATCTTC-3′，反向引物为5′-GCTCCCTATTCTTCCTTTCCAG-3′。

4、制备如权利要求2所述的与猪肉质性状系水力相关的MASTR基因片段的方法，按照以下步骤：

利用权利要求3所述的引物进行PCR扩增，PCR产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测，利用限制性内切酶Msp I对PCR产物进行酶切鉴定，最后用2％琼脂糖凝胶电泳检测CC，CT，TT基因型的分布。

5、权利要求2所述的与猪肉质性状系水力相关的MASTR基因片段在猪分子标记辅助选择中的应用。

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