CN101348832A

CN101348832A - 与猪生长和肉质性状相关的分子标记的克隆及应用

Info

Publication number: CN101348832A
Application number: CNA2008100484112A
Authority: CN
Inventors: 刘榜; 彭勇波; 樊斌; 余梅; 朱猛进; 徐学文; 彭中镇
Original assignee: Huazhong Agricultural University
Current assignee: Huazhong Agricultural University
Priority date: 2008-07-16
Filing date: 2008-07-16
Publication date: 2009-01-21
Anticipated expiration: 2028-07-16
Also published as: CN101348832B

Abstract

本发明属于家畜基因工程技术领域，具体涉及一种作为猪标记辅助选择应用的与猪生长和肉质性状相关的分子标记及其应用。所述的分子标记由JHDM1A基因克隆得到，它的cDNA序列如序列表SEQ ID NO：1所述。在序列表SEQ ID NO：2的第213bp处有一个有一个C213－G213的碱基替换，该替换导致MboI－RFLP酶切多态性。本发明还公开了扩增JHDM1A基因部分cDNA序列所用的引物以及用于多态性检测方法，为猪的标记辅助选择提供了一个新的分子标记。

Description

与猪生长和肉质性状相关的分子标记的克隆及应用

技术领域

本发明属于家畜基因工程技术领域，具体涉及一种与猪生长和肉质性状相关的分子标记的克隆及应用。

背景技术

猪肉是动物性蛋白的主要来源，随着经济的发展和人民生活水平的提高，人们对猪肉需求数量和质量在不断的增长。培育生长速度快、肉质优良的种猪是满足消费者对猪肉需求增长的有效途径。培育和生产生长速度快、肌肉品质高的种猪已成为我国养猪业发展的重要趋势。

生长性状和肉质性状均属于数量性状，由多基因控制。在生长的性状改良上，过去的近30年中，通过对生长性状中达100Kg体重日龄和平均日增重(Average daily gain，ADG)等表型的选择，猪生长速度取得了较大的遗传进展，但随着表型值的提高，通过直接表型选择进一步提高猪生长速度取得的遗传进展有限，而且表型选择存在遗传改良时距长的缺点，抑制了猪生长速度改良的遗传进展。

另外，有研究表明，随着猪生长速度的提高，猪肉品质存在下降的趋势，主要表现在肌内脂肪含量下降、水分含量上升，猪生长速度和肌肉品质性状存在负相关。因此，优质猪育种已将提高肌肉品质列为猪育种目标之一。当前对猪肉质性状度量上，衡量指标较多，包括了肉色、pH值、系水力、肌内脂肪含量、嫩度等多个指标。但对这些性状的度量均须屠宰后才能度量，不仅加大了选择的成本，而且也限制了其遗传进展。

如何在遗传上进一步提高猪生长速度的同时，使肌肉品质保持在一定水平，是摆在我们面前的一项课题。随着分子生物学技术的发展，人们可以通过寻找控制生长或肉质性状的主基因(major gene)或与其连锁的分子标记，从而通过分子标记实施早期选择及间接选择。同时，基因的多效性也决定了通过基因型的选择达到选择猪生长速度的同时，使肉质性状保持在一定的水平具有可行性。

在猪生长性状相关候选基因的鉴定方面，最成功的例子就是氟烷基因(又称兰尼定受体1基因，即RYR1基因)的发现并用于育种实践。另外，生长激素(GH)基因和胰岛素样生长因子(IGF-2)基因由于在生长轴中调控地位的重要性而被作为肌肉生长性状的候选基因。抑肌素基因(MSTN)也被确定为影响肌肉生长的重要候选基因。此外，肌细胞生成素基因(MYOG)也被认为和生长速度及瘦肉率相关。同时，猪IGF-1、PIT-1、Leptin基因等均被认为与猪的生长有关。

关于肉质性状相关候选基因的鉴定方面，除氟烷基因被发现与PSE(Pale Soft Exudatiye)肉产生有关外，酸肉基因RN(又名PRKAG3)的鉴定也是成功的例子之一。钙蛋白酶抑制蛋白基因(CAST)作为影响嫩度的一个标记在生产中也得到应用。心脏脂肪酸结合蛋白基因(heart fatty acid binding protein gene，H-FABP)和脂肪组织脂肪酸结合蛋白基因(adipocyte fatty acid binding protein gene，A-FABP)也被证明是影响肌内脂肪含量(intramuscular fat，IMF)的候选基因。

由上可知，尽管在猪肌肉生长和肉质性状相关候选基因鉴定和应用方面取得了一些进展，但能够真正用于育种实践的影响生长和肉质的分子标记还很有限，进一步寻找猪产肉和肉质相关的候选基因及分子标记是非常必要的。

JHDM1A(JmjC-domain-containing histone demethylases 1A)基因是编码JHDM1蛋白的，是JHDM1基因家族成员之一，又名FBXL11。通过甲基化酶的阵列分析并结合色谱分析技术首次纯化得到了JHDM1蛋白(Tsukada，Y.，J.Fang，H.Erdjument-Bromage，M.E.Warren，et al.″Histone demethylation by afamily of JmjC domain-containing proteins.″Nature，2006，439(7078)：811-6.)。该蛋白含有Jmjc结构域，能使组蛋白H3K36位点的单甲基或双甲基化位点去甲基化。该基因家族成员除含有Jmjc结构域外，还含有两个重要的功能域，即F-box和CXXC锌指结构域。F-box已知能与S期激酶相关蛋白1A(S-phasekinase-associated protein 1A，SKP1)结合形成SKP1-Cullin-F-Box(SCF)E3泛素连接酶复合体，从而将组蛋白的去甲基化与蛋白的泛素化相联系起来，参与细胞周期调节；CXXC锌指结构域能与非甲基化的CpG二核苷酸序列结合，提示JHDM1A介导的去甲基化可能与DNA的甲基化状态有关。该家族中另外一个成员JHDM1B(又名FBXL10)在线虫中的同源基因T26A5.5的RNAi试验结果表明该基因是一个调控生长的基因(Pothof，J.，G.van Haaften，K.Thijssen et al.″Identification of genes that protect the C.elegans genome against mutations by genome-wide RNAi.″Genes Dev，2003，17(4)：443-448.)。同时，在小鼠中研究表明JHDM1B对细胞大小和增殖起负调控作用，其下调表达与一些癌症的发生密切相关(Frescas，D.，D.Guardavaccaro，F.Bassermann et al.″JHDM1B/FBXL10 is a nucleolar protein thatrepresses transcription of ribosomal RNA genes.″Nature 2007，450(7167)：309-313.)。

胚胎期骨骼肌细胞的增殖与分化决定了猪生后生长速度和肉质。通过以上资料可以看出JHDM1A基因在调节组蛋白甲基化修饰方面发挥功能，还与蛋白降解、细胞增殖和分化密切相关。JHDM1A基因可能是影响猪肌肉生长和肉质的一个重要候选基因。因此，研究该基因在猪生长和肉质中的作用，并发现与猪生长和肉质相关的DNA分子标记具有重要的意义。申请人从人源JHDM1A基因得到一段与猪生长性状和肉质性状关联的cDNA序列，利用该cDNA序列进行多态性与关联分析等，以期得到一种作为猪的生长性状和肉质性状相关的分子标记。

发明内容

本发明的目的在于克隆与猪生长性状和肉质性状相关的分子标记的及其作为猪标记辅助育种的应用。同时本发明还包含克隆所述的分子标记的方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种克隆的与猪生长和肉质性状相关的分子标记，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。

所述的分子标记，在该序列的第213位碱基处有一个C213-G213的碱基替换，并导致MboI-RFLP酶切多态性(见附图5所示)。

检测SEQ ID NO：2所述的碱基突变的引物对的DNA序列如下所示：

PL 5′-CCCAGACTGAGCAGGAACC-3′，

PR 5′-GGACACCACGAGGAGAACC-3′。

一种实现所述的分子标记的制备方法，按照以下步骤制备：

用人JHDM1A基因cDNA为信息探针，作同源序列筛选，获得同源性80％以上的表达序列标签(EST)或Trace-WGS序列；然后拼接猪EST-重叠群；根据人鼠同源序列、EST-重叠群和Traces-WGS序列设计的三对引物，扩增得到三个DNA片段；以该三个DNA片段克隆测序获得的序列及搜索得到的EST进行序列组装，获得如序列表SEQ ID NO.1所述的cDNA序列。

更详细的技术方案参见《具体实施方式》。

附图说明

序列表SEQ ID NO：1是本发明克隆的猪生长与肉质相关的基因JHDM1A的cDNA序列；

序列表SEQ ID NO：2是本发明克隆的作为猪生长与肉质相关基因JHDM1A的3’UTR部分序列；

图1：是本发明的技术流程图；

图2：是本发明设计的引物对P1克隆的猪JHDM1A基因Exon2到Exon8之间的部分cDNA序列，该段序列包含了起始密码子，用标有下划线的斜体字母表述，引物对P1的正反引物序列用下化线标示出来；

图3：是本发明设计的引物对P2克隆的猪JHDM1A基因Exon8到Exon15之间的部分cDNA序列，引物对P2的正反引物序列用下化线标示出来；

图4：是本发明设计的引物对P3克隆的猪JHDM1A基因Exon15到Exon18之间的部分cDNA序列，引物对P3的正反引物序列用下化线标示出来；

图5：是本发明设计的引物对P4克隆的猪JHDM1A基因3‘UTR区的部分序列，其中一位于212bp处的多态位点用黑体标示出来，引物对P4的正反引物序列用下化线标示出来；

图6：是本发明中猪基因JHDM1A编码区三个片段的RT-PCR扩增结果，琼脂糖胶浓度为2％。图中：M泳道：DNA分子量标记(DL2000 ladder)；1泳道：P1引物扩增片段，片段长度670bp；2泳道：P2引物扩增片段，片段长度1258bp；3泳道：P3引物扩增片段，片段长度1049bp。

图7：是本发明中猪JHDM1A基因3’UTR区C213G多态位点测序峰图。

图8：是本发明中猪JHDM1A基因3’UTR区的MboI-RFLPs的三种基因型(GG，GC，CC)电泳结果。M：DNA分子量标准(DL2000 ladder)

具体实施方式

实施例1 JHDM1A基因的克隆

(1)引物设计：

用人JHDM1A基因cDNA(GenBank收录号：NM_012308)为信息探针，利用NCBI中的BLAST工具在GenBank猪EST数据库中做同源序列筛选，获得一系列同源性为80％以上的ESTs(片段长度大于100bp)，将这些ESTs的收录号在NCBI中用ENTREZ(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Web/Search/index.html)查询相应序列，然后用DNAstar中的SeqMan程序构建猪的EST-重叠群；同时，利用人NM_012308序列在GenBank中搜索猪Trace-WGS序列，并根据同源性推测可能为猪对应基因相应外显子的部分序列信息。根据人鼠同源序列、EST拼接序列及JHDM1A基因Traces-WGS序列设计扩增JHDM1A基因cDNA序列的三对引物P1，P2和P3，扩增得到三个片段；为获得猪JHDM1A基因的完整编码区序列，分别将扩增得到的三个片段经测序获得的序列及比对获得的EST序列经SeqMan程序进一步拼接获得了包含完整JHDM1A基因编码区和3’UTR区的信息。

表1 用于分离JHDM1A基因cDNA序列的引物

(2)反转录PCR扩增反应：

利用TRIzoL试剂盒(关国GIBCO公司)从成年通城猪肌肉组织中提取总RNA，具体操作依照试剂盒说明书进行。

cDNA第一链的的合成：反应总体积为50μl，首先将2μg总RNA与oligod(T)₁₁混合于一Ependorff管中，70℃温育5min以解除RNA的二级结构，立即置于冰上冷却以避免二级结构的重新生成，经短暂离心后按照表2的加样条件加入其余组分，于37℃温育1h后将温度升至95℃灭活反转录酶，置于-20℃保存备用。

PCR反应：反应总体积为20μl，各组分的加样体积及终浓度如表3所述。PCR扩增程序是94℃3min，94℃30s，退火45s，72℃1min，循环35次，最后72℃延伸5min，退火温度见表1。PCR反应产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测。

(3)PCR产物的纯化、克隆和测序

PCR产物的纯化：用凝胶回收纯化试剂盒通过切胶纯化PCR产物，按照试剂盒说明书操作，具体步骤是在紫外灯下从琼脂糖凝胶上切下含目的片段的凝胶，放入1.5mL离心管中，称重，然后向胶块中加入3倍体积的溶胶液，70℃水浴放置10分钟至胶完全溶解。将所得溶液加入一个吸附柱中，12,000rpm离心30秒，弃废液。吸附柱放回收集管并加入700μL漂洗液，12000rpm离心30秒，弃废液。再次向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm离心30秒，倒掉废液后将吸附柱放回收集管中，12,000rpm离心1分钟。将吸附柱放入一干净的离心管中，向吸附柱膜中间加入洗脱缓冲液，室温放置2分钟后，12,000rpm离心1分钟收集纯化产物。

连接反应：将纯化PCR产物与pMD18-T载体的连接，连接反应总体积是5μl，其中包括2.5μl2×buffer，0.5μl的T载体，0.5μl的纯化PCR产物，0.5μl的T4连接酶，最后加入1μl灭菌水置4℃水浴过夜。

感受态细胞的制备：从37℃培养了16-20h的新鲜平板上挑取一个DH5α单菌落接种于2ml LB中，于37℃振荡培养3h，转接1ml菌液于含有30ml LR的盐水瓶中，继续在37℃振荡培养约4h，待OD₆₀₀达到0.3-0.4时将盐水瓶从摇床取出置冰浴冷却10-15min，然后将菌液转入离心管中于4℃4,000g离心10min以收集细胞，将离心管倒置以弃净培养液，用10ml冰预冷的0.1mol/L的CaCl₂重悬沉淀，冰浴30min，重复4℃4,000g离心10min一次，用4ml冰预冷的0.1mol/L的CaCl₂重悬沉淀，置4℃保存备用。

转化：无菌状态下取100-120μl感受态细胞于1.5ml Ependorff管中，将5μl的连接产物加入混匀，在冰上放置30min，42℃热激90s，其间不要摇动Ependorff管，取出后冰浴3-4min，加入400μl无抗生素的LB液体培养基，37℃振荡培养45min。取100μl涂布于已提前4h涂布了IPTG(Isopropylthio-β-D-galactoside，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)和X-gal的琼脂平板上，37℃平放1h后倒置培养。

阳性克隆鉴定：序列测定策略是每个片段均同时采用PCR产物直接测序和克隆测序两种方法。克隆测序是挑取单个克隆子用于测序，序列测定由上海博亚生物技术公司完成，每个基因片段至少测两个克隆子。

(4)DNA序列同源性检索鉴定：

通过美国国家生物技术信息中心(NCBI，National Center for Biotechnology Information，http://www:ncbi:nlm:nih:gov)网站的BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)软件，将测序后获得的DNA序列与GenBank数据库中公布的已知生理功能基因进行序列同源性比较，以鉴定和获得该DNA序列的功能信息。

(5)猪JHDM1A基因的克隆结果

以成年通城猪的肌肉组织提取总RNA反转录合成的cDNA为模板，分别用表1所列的三对引物P1、P2和P3进行PCR扩增，扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测结果显述均为特异的PGR产物(如图6所述)。将PCR产物回收纯化后克隆测序，测序结果显述三对引物扩增片段大小分别为670bp，1258bp和1049bp。

将以上获得的三个片段及获得的EST序列用DNAstar软件中的SeqMan程序进行拼接，得到一条长度为6122bp的cDNA整合序列。将这段cDNA序列在GenBank中进行同源性检索，检索结果该序列与人JHDM1A基因cDNA(GenBank收录号：NM_012308)的同源性达96％，序列分析表明该cDNA序列具有3489bp(nt51-3539)的开放阅读框，编码一个由1162个氨基酸组成的蛋白质。

实施例2 JHDM1A基因的物理定位：

(1)用于物理定位的引物序列是

P4：PL 5′-CCGCTGCGACCTTTGATGAC-3′in intron 20

PR 5′-AAGGTGACGTTGGCGATGC-3′in exon 21

该引物扩增片段长度为498bp。

(2)用于物理定位的实验材料

用猪×啮齿类体细胞杂种板(Pig×rodent somatic cell hybrid panel，SCHP)进行染色体区域定位，用美国Minnesota大学共同构建的猪辐射杂种板(INRA-Minnesota porcine radiation hybrid panel，IMpRH)进行染色体精确定位，两套体细胞杂种板均由由法国Martin Yerle 博士(Laboratoire de GénétiqueCellulaire，INRA，Castanet-Tolosan，France)惠赠。

IMpRH使用的辐射剂量是7,000-rad。IMpRH包括118个猪×仓鼠辐射杂种细胞系，以及仓鼠和猪基因组DNA阳性对照，用757个标记的鉴定结果表明IMpRH中的平均标记存留率为29：3％，包含有128个连锁群，覆盖了18对常染色体及X染色体，用于估计标记间距离的kb/cR比值是～70kb/cR(1Ray＝100cR)，理论分辨率是145kb。

(3)PCR分型条件

进行扩增的PCR反应总体积为10μl，其中模板DNA为25ng，含1×buffer(Promega)，1.5mmol/LMgCl₂，dNTP终浓度为150μmol/L，引物终浓度为0.4μmol/L，2U Taq DNA聚合酶(购自Promega公司)。PCR扩增程序是：94℃3min，循环35次94℃30s，60℃40s，然后72℃30s，最后72℃延伸5min。PCR反应产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测。

(4)猪JHDM1A基因的定位结果

用P4引物在IMpRH分型结果是1100001001 01？00？0？0？？0？0001011 010？1？0000 11110100100000000001 0000000000 0000000011 1100101100 0011010001 1011101100 11011110(其中“0”和“1”分别表述扩增结果为阴性和阳性，“？”表示扩增结果不确定)。统计分析结果表明JHDM1A基因与猪2号染色体上的标记SW2623紧密连锁，LOD值为8.24，RH 图距是49cR。根据与其连锁标记SW2623在染色体上所处位置，进一步推测该基因位于猪2号染色体p17区域。

实施例3PCR-RFLP诊断方法建立

(1)引物序列

P5：PL 5′-CCCAGACTGAGCAGGAACC-3′

PR 5′-GGACACCACGAGGAGAACC-3′

该引物扩增片段长度453bp。

(2)PCR扩增条件

PCR反应总体积20μl，其中猪基因组DNA约100ng，含1×buffer(Promega)，1.5mmol/L MgCl₂，dNTP终浓度为150μmol/L，引物终浓度为0.2μmol/L，2U Taq DNA聚合酶(购自Promega公司)。PCR扩增程序是：94℃5min，然后再循环34次94℃45s，57℃45s，72℃30s，最后72℃延伸5min。PCR反应产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测并拍照。

(3)RFLP检测条件

PCR产物酶切反应体积是10μl，其中10×buffer 1μl，PCR产物3-5μl，限制性内切酶MboI为0.5μl(5U)，用双蒸水补足至10μl，将样品混匀后离心，37℃水浴6-8h，用2％琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果，记录基因型，在紫外灯下拍照。

(4)RFLP检测的结果

用P5引物对扩增猪基因组DNA得到JHDM1A基因3’UTR区453bp特异扩增片段，(详见图8)。测序的结果发现在该453bp片段中在第213bp处存在1个改变MboI酶切位点(GATC)的突变(祥见附图7)，另在24位和372位还存在两个固定的切点。当第213bp位置是G213时，则该MboI酶切位点不存在，MboII不能将该片段的213处切开；当第213bp位置是C213时，经MboI酶切后有产生4个片段，长度是23bp，189bp，159bp和82bp；三种基因型GG，GC和CC如附图8所述。

实施例4 本发明克隆的分子标记在与猪生长和肉质性状关联分析的应用

在一个由纯种中国地方血缘猪通城猪、外来血缘的大白猪和长白猪及其三元杂种猪大×(长×通)和长×(大×通)大白猪共167头个体组成的群体中进行了JHDM1A基因3’UTR区MboI-RFLP与部分生产性状进行关联分析，所分析性状包括了出生至上市日增重、眼肌面积、眼肌高、眼肌宽、被膘厚度、肌内脂肪含量、滴水损失、肉色、剪切力等生长、胴体和肉质性状。

基因型检测结果表明在167个个体中，GG基因型最少，有37个个体，GC和CC基因型占多数，各有65个个体。不同基因型间性状的简单均数和标准差分析结果总结于表2，分析结果表明，GC与CC基因型个体在出生至上市日增重呈极显著性差异(P＜0.01)，且GC与GG基因型个体间在出生至上市日增重的差异接近显著性水平(p＝0.054))。同时，JHDM1A基因该位点多态还与肉色(p＝0.031)、剪切力(p＜0.01)和滴水损失(p＝0.095)等肉质性状存在关联。

表2 JHDM1A基因3’UTR区MboI-RFLP多态与部分性状的关联分析

注：^*表示P＜0.05，括号中显示的检测到的该基因型个体数；表中性状值为平均数±标准差。

Note：^*indicates P＜0.05，and the numbers of each genotype indicated in parentheses；and valuesof traits were Means±SD.

实施例5 PCR-RFLP-MboI多态性在各猪品种中的分布情况

在7个猪品种中检测猪JHDM1A基因PCR-RFLP-MboI多态性，检测结果如表3所述，表3的数据分析显述，在所检测的这几个猪品种中：在国内地方猪种清平猪、玉山黑猪、二花脸猪、大花白猪中均是C等位基因占优势，频率分别达到0.892，0.829，0.942，0.737；而在所检测的三个国外品种中，杜落洛克猪品种中G等位基因占优势，达到0.793，且G等位基因在长白猪中所占的比例相对于在所检测的国内品种中所占的比例要高，达到0.433(表3)

表3 JHDM1A基因3’UTR区C224G多态在不同猪品种中基因型和基因频率

对猪JHDM1A基因MboI-RFLP多态性位点基因频率在不同品种中的分布差异进行检验，差异显著性结果见表4。根据表4的分析结果表明该位点基因频率在所检测的这六个猪品种中存在较大程度的差异，尤其是两生长快速瘦肉型品种杜洛克和长白猪与国内生长缓慢的肥胖型猪间差异均达到极显著性水平(p＜0.01)。

表4 猪不同品种JHDM1A基因3’UTR区C224G多态基因型频率分布卡方检验

x²0.05(2)＝5.99 x² _0.01(2)＝9.21

a)肩注*表示P＜0.05；肩注**表示P＜0.01。

a)*P＜0.05；**P＜0.01.

序列表

<110>华中农业大学

<120>与猪生长和肉质性状相关的分子标记的克隆及应用

<130>

<141>2008-07-12

160>3

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>3489

<212>DNA

<213>猪(Sus scrofa)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(3489)

<223>

<400>1

atg gaa ccc gaa gaa gaa agg att cgt tac agc cag aga ttg cgt ggt 48

Met Glu Pro Glu Glu Glu Arg Ile Arg Tyr Ser Gln Arg Leu Arg Gly

1 5 10 15

acc atg cga cga cgc tat gaa gat gat ggc att tca gat gat gaa att 96

Thr Met Arg Arg Arg Tyr Glu Asp Asp Gly Ile Ser Asp Asp Glu Ile

20 25 30

gaa ggg aaa aga act ttt gac ttg gaa gag aaa ctc cac acc aac aaa 144

Glu Gly Lys Arg Thr Phe Asp Leu Glu Glu Lys Leu His Thr Asn Lys

35 40 45

tat aat gca aat ttt gtt act ttt atg gaa gga aaa gat ttt aat gta 192

Tyr Asn Ala Asn Phe Val Thr Phe Met Glu Gly Lys Asp Phe Asn Val

50 55 60

gag tat atc cag cgt ggt ggc tta aga gac cct ctg att ttc aag aat 240

Glu Tyr Ile Gln Arg Gly Gly Leu Arg Asp Pro Leu Ile Phe Lys Asn

65 70 75 80

tct gat gga ctt gga ata aag atg cca gat cca gac ttc act gtg aat 288

Ser Asp Gly Leu Gly Ile Lys Met Pro Asp Pro Asp Phe Thr Val Asn

85 90 95

gat gtc aaa atg tgt gtg ggg agt cgt cgt atg gtg gat gtc atg gat 336

Asp Val Lys Met Cys Val Gly Ser Arg Arg Met Val Asp Val Met Asp

100 105 110

gtg aac aca cag aaa ggc att gaa atg act atg gct cag tgg aca cgc 384

Val Asn Thr Gln Lys Gly Ile Glu Met Thr Met Ala Gln Trp Thr Arg

115 120 125

tac tat gag acc cca gag gag gag cga gaa aaa ctc tat aat gtc atc 432

Tyr Tyr Glu Thr Pro Glu Glu Glu Arg Glu Lys Leu Tyr Asn Val Ile

130 135 140

agc cta gag ttc agc cat acc agg ctg gag aac atg gtg cag agg ccg 480

Ser Leu Glu Phe Ser His Thr Arg Leu Glu Asn Met Val Gln Arg Pro

145 150 155 160

tcc acg gtg gat ttc att gac tgg gta gac aac atg tgg cca agg cat 528

Ser Thr Val Asp Phe Ile Asp Trp Val Asp Asn Met Trp Pro Arg His

165 170 175

ttg aag gaa agt cag acc gaa tca aca aac gcg atc ttg gag atg cag 576

Leu Lys Glu Ser Gln Thr Glu Ser Thr Asn Ala Ile Leu Glu Met Gln

180 185 190

tac cct aaa gtg cag aag tac tgt ctg atg agt gtt cga ggc tgc tat 624

Tyr Pro Lys Val Gln Lys Tyr Cys Leu Met Ser Val Arg Gly Cys Tyr

195 200 205

act gac ttc cat gtg gat ttt ggt ggt act tct gtt tgg tat cac atc 672

Thr Asp Phe His Val Asp Phe Gly Gly Thr Ser Val Trp Tyr His Ile

210 215 220

cat caa ggg gga aag gtc ttc tgg ctc atc ccc cct aca gcc cac aac 720

His Gln Gly Gly Lys Val Phe Trp Leu Ile Pro Pro Thr Ala His Asn

225 230 235 240

ctg gag ctg tac gag aat tgg ctg ctg tca ggg aaa cag gga gac atc 768

Leu Glu Leu Tyr Glu Asn Trp Leu Leu Ser Gly Lys Gln Gly Asp Ile

245 250 255

ttt ctg ggt gac cgg gtg tca gat tgc cag cgc att gag ctc aag cag 816

Phe Leu Gly Asp Arg Val Ser Asp Cys Gln Arg Ile Glu Leu Lys Gln

260 265 270

ggc tat acc ttc gtc att ccc tca ggc tgg att cat gct gtg tat act 864

Gly Tyr Thr Phe Val Ile Pro Ser Gly Trp Ile His Ala Val Tyr Thr

275 280 285

ccc aca gac aca tta gtg ttt gga ggc aat ttt ttg cat agc ttc aat 912

Pro Thr Asp Thr Leu Val Phe Gly Gly Asn Phe Leu His Ser Phe Asn

290 295 300

atc ccc atg cag tta aaa atc tat aac att gaa gat cgg aca cgg gtt 960

Ile Pro Met Gln Leu Lys Ile Tyr Asn Ile Glu Asp Arg Thr Arg Val

305 310 315 320

cca aat aag ttc cgc tat ccg ttc tac tat gag atg tgt tgg tat gtg 1008

Pro Asn Lys Phe Arg Tyr Pro Phe Tyr Tyr Glu Met Cys Trp Tyr Val

325 330 335

ctg gag cgc tat gtg tac tgc ata acc aac cgt tcc cac cta act aag 1056

Leu Glu Arg Tyr Val Tyr Cys Ile Thr Asn Arg Ser His Leu Thr Lys

340 345 350

gaa ttt cag aaa gag tcc ctt agc atg gat ttg gag tta aat ggg ttg 1104

Glu Phe Gln Lys Glu Ser Leu Ser Met Asp Leu Glu Leu Asn Gly Leu

355 360 365

gag tcc gga aat ggg gat gag gaa gcg gta gat cga gga ccc cgg cgc 1152

Glu Ser Gly Asn Gly Asp Glu Glu Ala Val Asp Arg Gly Pro Arg Arg

370 375 380

ttg agc aat agg cgt tct gtt ctc act agc cct gta gcc aat ggg gtc 1200

Leu Ser Asn Arg Arg Ser Val Leu Thr Ser Pro Val Ala Asn Gly Val

385 390 395 400

aac ctg gat tat gat gga ctg ggt aaa acc tgc cga agt ctt cca agt 1248

Asn Leu Asp Tyr Asp Gly Leu Gly Lys Thr Cys Arg Ser Leu Pro Ser

405 410 415

ctg aag aaa act ttg tct ggg gat tca acc tct gac tct agc cgg ggc 1296

Leu Lys Lys Thr Leu Ser Gly Asp Ser Thr Ser Asp Ser Ser Arg Gly

420 425 430

tcc cac aat gga caa gtg tgg gat tcc caa tgt agc ccc cgg aag gac 1344

Ser His Asn Gly Gln Val Trp Asp Ser Gln Cys Ser Pro Arg Lys Asp

435 440 445

agg cag gtg cat ctg acc cat ttt gag ctt gaa ggc ctt cgt tgc ctt 1392

Arg Gln Val His Leu Thr His Phe Glu Leu Glu Gly Leu Arg Cys Leu

450 455 460

gta gat aaa ttg gag tct ctg cca ctg cac aag aaa tgt gtc cct aca 1440

Val Asp Lys Leu Glu Ser Leu Pro Leu His Lys Lys Cys Val Pro Thr

465 470 475 480

ggg ata gaa gac gaa gat gct ctc att gct gat gtg aag att ttg ctg 1488

Gly Ile Glu Asp Glu Asp Ala Leu Ile Ala Asp Val Lys Ile Leu Leu

485 490 495

gag gag ctt gcc agc agt gat ccc aag tta gct ctc aca gga gtt cct 1536

Glu Glu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Lys Leu Ala Leu Thr Gly Val Pro

500 505 510

ata gta cag tgg cca aaa agg gat aag ctt aaa ttc ccc acc cgg cca 1584

Ile Val Gln Trp Pro Lys Arg Asp Lys Leu Lys Phe Pro Thr Arg Pro

515 520 525

aag gtg cgg gtt cct acc atc ccc att aca aag cct cac act atg aaa 1632

Lys Val Arg Val Pro Thr Ile Pro Ile Thr Lys Pro His Thr Met Lys

530 535 540

cca gct cca cgg tta aca cct gtg agg cca gct gct gcc tcc ccc ata 1680

Pro Ala Pro Arg Leu Thr Pro Val Arg Pro Ala Ala Ala Ser Pro Ile

545 550 555 560

gtg tca gga gcc agg cgg aga cga gtg cga tgt cga aaa tgc aag gcc 1728

Val Ser Gly Ala Arg Arg Arg Arg Val Arg Cys Arg Lys Cys Lys Ala

565 570 575

tgt gtg caa gga gag tgt ggc gtt tgc cac tac tgc agg gac atg aag 1776

Cys Val Gln Gly Glu Cys Gly Val Cys His Tyr Cys Arg Asp Met Lys

580 585 590

aag ttc ggg gga cct ggt cgt atg aag cag tcc tgt gtc ctt cgg cag 1824

Lys Phe Gly Gly Pro Gly Arg Met Lys Gln Ser Cys Val Leu Arg Gln

595 600 605

tgc ttg gca ccc aga ctg cct cac tcg gtc acg tgt tcc ctc tgt gga 1872

Cys Leu Ala Pro Arg Leu Pro His Ser Val Thr Cys Ser Leu Cys Gly

610 615 620

gag gtg gat cag aat gag gag acg cag gac ttt gag aag aaa ctc atg 1920

Glu Val Asp Gln Asn Glu Glu Thr Gln Asp Phe Glu Lys Lys Leu Met

625 630 635 640

gaa tgc tgt atc tgc aat gag att gtt cat cct ggc tgc ctc cag atg 1968

Glu Cys Cys Ile Cys Asn Glu Ile Val His Pro Gly Cys Leu Gln Met

645 650 655

gat gga gag ggg ttg ctt aac gag gaa ttg cca aat tgc tgg gag tgt 2016

Asp Gly Glu Gly Leu Leu Asn Glu Glu Leu Pro Asn Cys Trp Glu Cys

660 665 670

cca aag tgc tac cag gaa gac agc tca gag aag gcc cag aag cgg aaa 2064

Pro Lys Cys Tyr Gln Glu Asp Ser Ser Glu Lys Ala Gln Lys Arg Lys

675 680 685

atg gaa gag agt gat gaa gaa gcc gtg caa gcc aaa gtc ctg cgg ccc 2112

Met Glu Glu Ser Asp Glu Glu Ala Val Gln Ala Lys Val Leu Arg Pro

690 695 700

ctg cgg agc tgc gac gag ccc ctc acg ccc ccg cct cac tcg ccc acc 2160

Leu Arg Ser Cys Asp Glu Pro Leu Thr Pro Pro Pro His Ser Pro Thr

705 710 715 720

tcc atg ctg cag ctc atc cac gac ccg gcc tcc ccc cgg ggc gtg gtg 2208

Ser Met Leu Gln Leu Ile His Asp Pro Ala Ser Pro Arg Gly Val Val

725 730 735

act cgg tca tcc cct ggg gcc ggc ccc agc gac cac cac agt gcc agc 2256

Thr Arg Ser Ser Pro Gly Ala Gly Pro Ser Asp His His Ser Ala Ser

740 745 750

cgc gat gag cgc ttc aaa cgg cgg cag ttg cta cgg ctg cag gcc aca 2304

Arg Asp Glu Arg Phe Lys Arg Arg Gln Leu Leu Arg Leu Gln Ala Thr

755 760 765

gag cgc acc atg gta cgg gaa aag gag aac aat ccc agc ggc aaa aag 2352

Glu Arg Thr Met Val Arg Glu Lys Glu Asn Asn Pro Ser Gly Lys Lys

770 775 780

gag ctg tct gaa gtt gag aaa gcc aag atc cgg gga tcg tac ctc act 2400

Glu Leu Ser Glu Val Glu Lys Ala Lys Ile Arg Gly Ser Tyr Leu Thr

785 790 795 800

gtc acg ctg cag agg ccc acc aaa gag ctc cac ggg aca tcc att gtg 2448

Val Thr Leu Gln Arg Pro Thr Lys Glu Leu His Gly Thr Ser Ile Val

805 810 815

ccc aag ctg cag gcc atc acg gcc tcc tct gcc aac ctg cgc cat tcc 2496

Pro Lys Leu Gln Ala Ile Thr Ala Ser Ser Ala Asn Leu Arg His Ser

820 825 830

ccc cgt gtg cta gtg cag cac tgc cca gcc cga acc ccc cag cgt ggg 2544

Pro Arg Val Leu Val Gln His Cys Pro Ala Arg Thr Pro Gln Arg Gly

835 840 845

gac gag gag ggg ctg ggg gga gat gag gag gaa gag gag gag gag gag 2592

Asp Glu Glu Gly Leu Gly Gly Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu

850 855 860

gag gaa gat gac agt gca gag gag ggg ggt gca gcc agg ctg aat ggc 2640

Glu Glu Asp Asp Ser Ala Glu Glu Gly Gly Ala Ala Arg Leu Asn Gly

865 870 875 880

cgg ggc agt tgg gct cag gat gga gac gaa agc tgg atg cag cgg gag 2688

Arg Gly Ser Trp Ala Gln Asp Gly Asp Glu Ser Trp Met Gln Arg Glu

885 890 895

gtc tgg atg tct gtc ttc cgc tac ctc agc cgc aga gaa ctt tgt gaa 2736

Val Trp Met Ser Val Phe Arg Tyr Leu Ser Arg Arg Glu Leu Cys Glu

900 905 910

tgt atg cga gtg tgc aag acg tgg tat aaa tgg tgc tgt gac aag aga 2784

Cys Met Arg Val Cys Lys Thr Trp Tyr Lys Trp Cys Cys Asp Lys Arg

915 920 925

ctt tgg aca aaa att gac ttg agt aga tgt aag gct att gta ccc cag 2832

Leu Trp Thr Lys Ile Asp Leu Ser Arg Cys Lys Ala Ile Val Pro Gln

930 935 940

gct ctc agt ggc atc atc aag agg cag cca gtc agc ctc gac ctc agt 2880

Ala Leu Ser Gly Ile Ile Lys Arg Gln Pro Val Ser Leu Asp Leu Ser

945 950 955 960

tgg acc aac atc tcc aaa aaa caa ctg acg tgg ctc gtc aac agg ctg 2928

Trp Thr Asn Ile Ser Lys Lys Gln Leu Thr Trp Leu Val Asn Arg Leu

965 970 975

cca ggg ctg aaa gac ctc ctc cta gca ggc tgt tcc tgg tct gca gtc 2976

Pro Gly Leu Lys Asp Leu Leu Leu Ala Gly Cys Ser Trp Ser Ala Val

980 985 990

tct gcc ctc agc acc tcc agc tgc ccc ctt ctc agg acc ctt gat ctt 3024

Ser Ala Leu Ser Thr Ser Ser Cys Pro Leu Leu Arg Thr Leu Asp Leu

995 1000 1005

cgg tgg gca gta gga atc aag gac cct caa att cgg gac ttg ctg 3069

Arg Trp Ala Val Gly Ile Lys Asp Pro Gln Ile Arg Asp Leu Leu

1010 1015 1020

act cca ccg gct gat aag cca ggt cag gac aat cgt agc aag ctc 3114

Thr Pro Pro Ala Asp Lys Pro Gly Gln Asp Asn Arg Ser Lys Leu

1025 1030 1035

cgg aac atg act gac ttc cgg ctg gca ggc ctc gac atc acg gat 3159

Arg Asn Met Thr Asp Phe Arg Leu Ala Gly Leu Asp Ile Thr Asp

1040 1045 1050

gcc acg ctt cgc ctc atc att cgc cac atg ccc ctc ctg tct cga 3204

Ala Thr Leu Arg Leu Ile Ile Arg His Met Pro Leu Leu Ser Arg

1055 1060 1065

ctc gac ctc agt cac tgc agc cac ctg acg gat cag tcc tcc aat 3249

Leu Asp Leu Ser His Cys Ser His Leu Thr Asp Gln Ser Ser Asn

1070 1075 1080

ctg ctc act gct gtc ggg tct tcc act cgt tac tcc ctc aca gag 3294

Leu Leu Thr Ala Val Gly Ser Ser Thr Arg Tyr Ser Leu Thr Glu

1085 1090 1095

ctc aac atg gca ggt tgc aat aaa ttg aca gac cag acc ctg atc 3339

Leu Asn Met Ala Gly Cys Asn Lys Leu Thr Asp Gln Thr Leu Ile

1100 1105 1110

tac cta cgg cgc atc gcc aac gtc acc ttg att gac ctt cga gga 3384

Tyr Leu Arg Arg Ile Ala Asn Val Thr Leu Ile Asp Leu Arg Gly

1115 1120 1125

tgc aag cag atc act cga aaa gcc tgc gag cac ttc atc tca gac 3429

Cys Lys Gln Ile Thr Arg Lys Ala Cys Glu His Phe Ile Ser Asp

1130 1135 1140

tta tcc atc aac agt ctc tac tgc ctg tct gac gag aag ctg ata 3474

Leu Ser Ile Asn Ser Leu Tyr Cys Leu Ser Asp Glu Lys Leu Ile

1145 1150 1155

cag aag atc agc taa 3489

Gln Lys Ile Ser

1160

<210>2

<211>1162

<212>PRT

<213>猪(Sus scrofa)

<400>2

Met Glu Pro Glu Glu Glu Arg Ile Arg Tyr Ser Gln Arg Leu Arg Gly

1 5 10 15

Thr Met Arg Arg Arg Tyr Glu Asp Asp Gly Ile Ser Asp Asp Glu Ile

20 25 30

Glu Gly Lys Arg Thr Phe Asp Leu Glu Glu Lys Leu His Thr Asn Lys

35 40 45

Tyr Asn Ala Asn Phe Val Thr Phe Met Glu Gly Lys Asp Phe Asn Val

50 55 60

Glu Tyr Ile Gln Arg Gly Gly Leu Arg Asp Pro Leu Ile Phe Lys Asn

65 70 75 80

Ser Asp Gly Leu Gly Ile Lys Met Pro Asp Pro Asp Phe Thr Val Asn

85 90 95

Asp Val Lys Met Cys Val Gly Ser Arg Arg Met Val Asp Val Met Asp

100 105 110

Val Asn Thr Gln Lys GlyIle Glu Met Thr Met Ala Gln Trp Thr Arg

115 120 125

Tyr Tyr Glu Thr Pro Glu Glu Glu Arg Glu Lys Leu Tyr Asn Val Ile

130 135 140

Ser Leu Glu Phe Ser His Thr Arg Leu Glu Asn Met Val Gln Arg Pro

145 150 155 160

Ser Thr Val Asp Phe Ile Asp Trp Val Asp Asn Met Trp Pro Arg His

165 170 175

Leu Lys Glu Ser Gln Thr Glu Ser Thr Asn Ala Ile Leu Glu Met Gln

180 185 190

Tyr Pro Lys Val Gln Lys Tyr Cys Leu Met Ser Val Arg Gly Cys Tyr

195 200 205

Thr Asp Phe His Val Asp Phe Gly Gly Thr Ser Val Trp Tyr His Ile

210 215 220

His Gln Gly Gly Lys Val Phe Trp Leu Ile Pro Pro Thr Ala His Asn

225 230 235 240

Leu Glu Leu Tyr Glu Asn Trp Leu Leu Ser Gly Lys Gln Gly Asp Ile

245 250 255

Phe Leu Gly Asp Arg Val Ser Asp Cys Gln Arg Ile Glu Leu Lys Gln

260 265 270

Gly Tyr Thr Phe Val Ile Pro Ser Gly Trp Ile His Ala Val Tyr Thr

275 280 285

Pro Thr Asp Thr Leu Val Phe Gly Gly Asn Phe Leu His Ser Phe Asn

290 295 300

Ile Pro Met Gln Leu Lys Ile Tyr Asn Ile Glu Asp Arg Thr Arg Val

305 310 315 320

Pro Asn Lys Phe Arg Tyr Pro Phe Tyr Tyr Glu Met Cys Trp Tyr Val

325 330 335

Leu Glu Arg Tyr Val Tyr Cys Ile Thr Asn Arg Ser His Leu Thr Lys

340 345 350

Glu Phe Gln Lys Glu Ser Leu Ser Met Asp Leu Glu Leu Asn Gly Leu

355 360 365

Glu Ser Gly Asn Gly Asp Glu Glu Ala Val Asp Arg Gly Pro Arg Arg

370 375 380

Leu Ser Asn Arg Arg Ser Val Leu Thr Ser Pro Val Ala Asn Gly Val

385 390 395 400

Asn Leu Asp Tyr Asp Gly Leu Gly Lys Thr Cys Arg Ser Leu Pro Ser

405 410 415

Leu Lys Lys Thr Leu Ser Gly Asp Ser Thr Ser Asp Ser Ser Arg Gly

420 425 430

Ser His Asn Gly Gln Val Trp Asp Ser Gln Cys Ser Pro Arg Lys Asp

435 440 445

Arg Gln Val His Leu Thr His Phe Glu Leu Glu Gly Leu Arg Cys Leu

450 455 460

Val Asp Lys Leu Glu Ser Leu Pro Leu His Lys Lys Cys Val Pro Thr

465 470 475 480

Gly Ile Glu Asp Glu Asp Ala Leu Ile Ala Asp Val Lys Ile Leu Leu

485 490 495

Glu Glu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Lys Leu Ala Leu Thr Gly Val Pro

500 505 510

Ile Val Gln Trp Pro Lys Arg Asp Lys Leu Lys Phe Pro Thr Arg Pro

515 520 525

Lys Val Arg Val Pro Thr Ile Pro Ile Thr Lys Pro His Thr Met Lys

530 535 540

Pro Ala Pro Arg Leu Thr Pro Val Arg Pro Ala Ala Ala Ser Pro Ile

545 550 555 560

Val Ser Gly Ala Arg Arg Arg Arg Val Arg Cys Arg Lys Cys Lys Ala

565 570 575

Cys Val Gln Gly Glu Cys Gly Val Cys His Tyr Cys Arg Asp Met Lys

580 585 590

Lys Phe Gly Gly Pro Gly Arg Met Lys Gln Ser Cys Val Leu Arg Gln

595 600 605

Cys Leu Ala Pro Arg Leu Pro His Ser Val Thr Cys Ser Leu Cys Gly

610 615 620

Glu Val Asp Gln Asn Glu Glu Thr Gln Asp Phe Glu Lys Lys Leu Met

625 630 635 640

Glu Cys Cys Ile Cys Asn Glu Ile Val His Pro Gly Cys Leu Gln Met

645 650 655

Asp Gly Glu Gly Leu Leu Asn Glu Glu Leu Pro Asn Cys Trp Glu Cys

660 665 670

Pro Lys Cys Tyr Gln Glu Asp Ser Ser Glu Lys Ala Gln Lys Arg Lys

675 680 685

Met Glu Glu Ser Asp Glu Glu Ala Val Gln Ala Lys Val Leu Arg Pro

690 695 700

Leu Arg Ser Cys Asp Glu Pro Leu Thr Pro Pro Pro His Ser Pro Thr

705 710 715 720

Ser Met Leu Gln Leu Ile His Asp Pro Ala Ser Pro Arg Gly Val Val

725 730 735

Thr Arg Ser Ser Pro Gly Ala Gly Pro Ser Asp His His Ser Ala Ser

740 745 750

Arg Asp Glu Arg Phe Lys Arg Arg Gln Leu Leu Arg Leu Gln Ala Thr

755 760 765

Glu Arg Thr Met Val Arg Glu Lys Glu Asn Asn Pro Ser Gly Lys Lys

770 775 780

Glu Leu Ser Glu Val Glu Lys Ala Lys Ile Arg Gly Ser Tyr Leu Thr

785 790 795 800

Val Thr Leu Gln Arg Pro Thr Lys Glu Leu His Gly Thr Ser Ile Val

805 810 815

Pro Lys Leu Gln Ala Ile Thr Ala Ser Ser Ala Asn Leu Arg His Ser

820 825 830

Pro Arg Val Leu Val Gln His Cys Pro Ala Arg Thr Pro Gln Arg Gly

835 840 845

Asp Glu Glu Gly Leu Gly Gly Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu

850 855 860

Glu Glu Asp Asp Ser Ala Glu Glu Gly Gly Ala Ala Arg Leu Asn Gly

865 870 875 880

Arg Gly Ser Trp Ala Gln Asp Gly Asp Glu Ser Trp Met Gln Arg Glu

885 890 895

Val Trp Met Ser Val Phe Arg Tyr Leu Ser Arg Arg Glu Leu Cys Glu

900 905 910

Cys Met Arg Val Cys Lys Thr Trp Tyr Lys Trp Cys Cys Asp Lys Arg

915 920 925

Leu Trp Thr Lys Ile Asp Leu Ser Arg Cys Lys Ala Ile Val Pro Gln

930 935 940

Ala Leu Ser Gly Ile Ile Lys Arg Gln Pro Val Ser Leu Asp Leu Ser

945 950 955 960

Trp Thr Asn Ile Ser Lys Lys Gln Leu Thr Trp Leu Val Asn Arg Leu

965 970 975

Pro Gly Leu Lys Asp Leu Leu Leu Ala Gly Cys Ser Trp Ser Ala Val

980 985 990

Ser Ala Leu Ser Thr Ser Ser Cys Pro Leu Leu Arg Thr Leu Asp Leu

995 1000 1005

Arg Trp Ala Val Gly Ile Lys Asp Pro Gln Ile Arg Asp Leu Leu

1010 1015 1020

Thr Pro Pro Ala Asp Lys Pro Gly Gln Asp Asn Arg Ser Lys Leu

1025 1030 1035

Arg Asn Met Thr Asp Phe Arg Leu Ala Gly Leu Asp Ile Thr Asp

1040 1045 1050

Ala Thr Leu Arg Leu Ile Ile Arg His Met Pro Leu Leu Ser Arg

1055 1060 1065

Leu Asp Leu Ser His Cys Ser His Leu Thr Asp Gln Ser Ser Asn

1070 1075 1080

Leu Leu Thr Ala Val Gly Ser Ser Thr Arg Tyr Ser Leu Thr Glu

1085 1090 1095

Leu Asn Met Ala Gly Cys Asn Lys Leu Thr Asp Gln Thr Leu Ile

1100 1105 1110

Tyr Leu Arg Arg Ile Ala Asn Val Thr Leu Ile Asp Leu Arg Gly

1115 1120 1125

Cys Lys Gln Tle Thr Arg Lys Ala Cys Glu His Phe Ile Ser Asp

1130 1135 1140

Leu Ser Ile Asn Ser Leu Tyr Cys Leu Ser Asp Glu Lys Leu Ile

1145 1150 1155

Gln Lys Ile Ser

1160

<210>3

<211>453

<212>DNA

<213>猪(Sus scrofa)

<220>

<221>gene

<222>(1)..(453)

<223>

<220>

<221>primer_bind

<222>(435)..(453)

<223>

<220>

<221>primer_bind

<222>(1)..(19)

<223>

<220>

<221>mutation

<222>(213)..(213)

<223>

<220>

<221>3’UTR

<222>(1)..(453)

<223>

<400>3

cccagactga gcaggaaccc gatcttccct gaccccccgc cgggagaggt ctctctccgc 60

tcctgcacag gctctggggc cagtgtcaca ctccctctct gctctcctgc cccttgagcc 120

cttccctgac aggcggggca gagagggtgg tggacaccag gcttccctgc ccgctcctct 180

ccctcctaag gagaagggag tggcagattg atccaagggg aaagcacagg ctgtgtgttg 240

tcacggtgcc tgctcgcttg ctctcccacc tgcctgcccg ctcgcctgcc gggaggccag 300

gctctcagtt tggggtgtct gcgcagccgt catctgcact gggccctggg gcccccctcc 360

ccatccatga tccccagcag tgcctggttc tgagcaaact cccagggaag aaagcggccc 420

tgtgtccgtg gccaggttct cctcgtggtg tcc 453

Claims

1、一种克隆的与猪生长和肉质性状相关的分子标记，它的核苷酸序列如序列表SEQID NO：2所示。

2、根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，序列表SEQ ID NO：2所示序列的第213位碱基处有一个C213-G213的碱基替换，导致MboI-RFLP酶切多态性。

3、检测权利要求2所述碱基突变的引物对的DNA序列如下所示：

PL 5′-CCCAGACTGAGCAGGAACC-3′，

PR 5′-GGACACCACGAGGAGAACC-3′。

4、一种实现权利要求1或2所述的分子标记的制备方法，其特征按照以下步骤：

用人JHDM1A基因cDNA为信息探针，作同源序列筛选，获得同源性80％以上的表达序列标签(EST)或Trace-WGS序列；然后拼接猪EST-重叠群；根据人鼠同源序列、EST-重叠群和Traces-WGS序列设计的三对引物，扩增得到三个DNA片段；以该三个DNA片段克隆测序获得的序列及搜索得到的EST进行序列组装，获得如序列表SEQ ID NO：1所述的cDNA序列。

5、权利要求1或2所述的分子标记在猪标记辅助选择中的应用。