CN100554419C

CN100554419C - 一种猪背膘厚基因cmya1的克隆及其应用

Info

Publication number: CN100554419C
Application number: CNB2005100199124A
Authority: CN
Inventors: 刘榜; 许晓玲; 李奎; 樊斌; 徐学文; 余梅; 赵书红; 朱猛进; 彭中镇
Original assignee: Huazhong Agricultural University
Current assignee: Huazhong Agricultural University
Priority date: 2005-11-29
Filing date: 2005-11-29
Publication date: 2009-10-28
Anticipated expiration: 2025-11-29
Also published as: CN1978640A

Abstract

本发明属于动物基因工程技术领域，具体地说涉及猪背膘厚基因CMYAl的克隆及其制备方法。本发明的特征是克隆到如序列表SEQ ID NO：1所示的猪背膘厚基因CMYAl基因的cDNA和DNA序列，检测到3个影响猪背膘厚的碱基突变。本发明公开了猪CMYAl基因序列和影响猪背膘厚的碱基突变位点。进而，还公开了获得上述基因的制备方法。本发明为猪的标记辅助育种提供了新的分子标记。

Description

一种猪背膘厚基因CMYA1的克隆及其应用

技术领域

本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及一种猪背膘厚基因CMYA1的克隆以及作为猪背膘厚相关性状的分子标记的应用。

背景技术

育种目标是由市场和消费需求而决定的。20世纪以来，人们主要的目标性状是生长速度、饲料转化率和屠宰后的胴体瘦肉率。随着国内外活猪及猪肉产品的商品市场的发展及科技水平的提高，对胴体品质评定的标准化、规格化等已成为研究热门，目前世界上公认的胴体品质评定指标具体有：胴体瘦肉率(leanpercentage in the carcass，CLP)、瘦肉量(lean content in the carcass，CLC)或可销售瘦肉分割块比率(lean cutsratio，LCR)。在实际工作中，人们试图寻找一种简便的活体评定胴体品质的方法，以减少屠宰带来的经济损失，因此大量研究致力于寻找胴体组成的最佳预测指标。活体性状与胴体瘦肉率的遗传相关分析结果表明，活体平均背膘厚与胴体瘦肉切块产量的r_A最高，为-0.80，活体背膘厚与胴体瘦肉量的r_A为-0.54，背膘厚的年遗传进展为：-0.35mm/年(Kennedy，1996)。因此通过对活体背膘厚的直接选择，可望使瘦肉率(量)获得相关反应(彭中镇等：《猪的遗传改良》，北京，农业出版社，1991)，而目前DNA分子标记技术的发展和应用，为胴体瘦肉率的直接选择，特别是早期选择和胴体品质的快速评定开辟了新途径。

目前已研究的与猪背膘厚相关的基因有：(1)Yu等(Yu T P等，Association of PIT1 polymorphisms withgrowth and carcass traits in pigs.J Anim Sci，1995，73：1282-1288.)在一个含中国与美国猪品种“血液”的资源家系中检测到垂体转录因子(Pituitary transcription factor 1，PIT1)与平均背膘厚存在显著相关。(2)Jeon等(Joen J T等，A paternally expressed QTL affecting skeletal and muscle mass in pigs maps tothe IGF2locus.Nature Genetics，1992，21：157-158.)和Nezer等(Nezer C等，An imprinted QTL withmajor effect on muscle mass and fat deposition maps to the IGF2 locus in pigs.Nature Genetics，1992，21：155-156.)分别用两个家系类胰岛素生长因子2(Insulin like growth factor II，IGF-II)定位于猪2号染色体上，并检测到该基因与背膘厚有显著相关。(3)黑素皮质激素受体4(Melanocortin-4receptor，MC4R)位于猪1号染色体上(Kim K S等，Linkage and physical mapping of the porcine melanocortin-4receptor(MC4R)gene：J Anim Sci，2000a，78：791-792)，Kim等(Kim K S等，A missense variant of the porcinemelanocortin-4receptor(MC4R)gene is association with fatness，growth，and feed intake traits.Mamm Genome，2000b，11：131-135.)在5个猪商品系中检测到MC4R基因遗传变异与背膘厚显著相关。(4)正在研究的与猪生长和胴体性状相关的候选基因还有：与生长、胴体性状可能有关的瘦素基因(Leptin，LEP)即肥胖基因和生肌因子3(myf3)(Kim K S等，A missense variant of the porcine melanocortin-4receptor(MC4R)geneis association with fatness，growth，and feed intake traits.Mamm Genome，2000，11：131-135)。对骨骼肌的生长有负调控作用的肌肉生长抑制素(Myostatin，MSTN)基因，该基因又称GDF-8(Growth differentiation factor8，生长分化因子8)(Mcpherron A C等，Double muscling in cattle due to mutation in the myostatin gene：ProcNatl Acad Sci，USA，1997，94(23)：12457-12461：)，与背膘厚有显著相关的组织蛋白酶B(Cathepsin B，CTSB)基因(Russo V等，Investigation of candidate genes for meat quality in dry-cured ham production：theporcine cathepsin B(CTSB)and cystatin B(CSTB)genes.Anim Genet，2002，33：123-131.)等。

CMYA1(cardiomyopathy associated 1)基因编码的蛋白又称心蛋白。目前已有人、鸡、斑马鱼和小鼠CMYA1基因组织结构、表达和功能研究报道。人CMYA1基因定位在3p22.2，cDNA序列全长为6451bp，编码1843个氨基酸。小鼠CMYA1基因在9F4，cDNA序列为5810bp，编码1133个氨基酸。

目前对该基因的研究主要表现在：1996年，人们通过差显得到，它特异地在心脏发育的早期表达(Wang等，Differential displaying of mRNAs from the atrioventricular region of developing chicken hearts at stages 15and 21.Front.Biosci.，1，1-15)。1999年，人们用心蛋白的寡聚核苷酸对培养的鸡胚胎处理可导致鸡心脏的生长形态发生异常，从而显示了心蛋白对心脏形态的生长的重要作用；对小鼠和鸡的CMYA1基因的氨基酸序列的比较分析结果表明该基因具有很高的物种之间的保守性，并分析了它们之间具有共同的核定位信号、DNA结合结构域以及SH3结合结构域，因此可以推测该基因可能是一个转录调控因子，并参与了蛋白质之间相互作用的信号传导(Wang等，Requirement of a novel gene，Xin，in cardiac morphogenesis，Development，1999，126，1281-1294)，SH3结合结构域在细胞内信号传导，生长调控以及细胞骨架组织调控等方面发挥重要作用(Christopher等，Primary sequence of paxillin contains putative SH2and SH3domainbinding motifs and multiple LIM domains：identification of a vinculin and pp 125Fak-binding region.，Journal ofCell Science，1994，107：1583-1591)；SH3结合结构域起着基因与核内受体相联接的作用，进而控制细胞的生长、发育以及动态平衡(Zhou等，PNRC2is a 16kDa coactivator that interacts with nuclear receptorsthrough an SH3-binding motif.Nucleic Acids Research，2001，，29(19)：3939-3948)。人心蛋白中含有16个氨基酸的重复序列，该重复序列是一个新的肌动蛋白的结合位点(Dirk等，Xin repeats define a novelactin-binding motif，，2004，Journal of Cell Science，117：5257-5268)。通过免疫共沉淀和荧光印记检测发现，从胚胎发生到成年的整个发育过程中都观察到Xin与β连锁蛋白(beta-catenin)的共定位(colocalization)(Haley等，Localization of the Novel Xin Protein to the Adherens Junction Complex in Cardiacand Skeletal Muscle During Development.，Developmental Dynamics，2002，225：1-13)。而在心脏发育过程中，Xin早于vinculin(alpha-actin)被检测到，并且与其共存于胚胎及出生后的心脏闰盘中，在胚胎发育的第10天，最初在体节中检测到Xin的表达，随后在肌腱接点处检测到表达；在培养的C2C12细胞中检测到Xin蛋白表达于很多斑点状和纤维丝状结构中，与原肌球蛋白共表达于压力纤维中，Xin与闰盘蛋白及细丝蛋白相关的时空表达特征表明Xin在细胞与细胞之间联系的形成中发挥作用，并可能在肌原纤维形成(Myofibrillogenesis发生)中发挥作用。通过以上资料我们可以得出CMYA1基因是一个重要的肌肉生长发育相关基因。因此将该基因运用在分子辅助标记选择中具有重要的意义。

尽管猪背膘厚侯选基因的研究取得了一些重要进展，但仍然存在不足：(1)猪的重要经济性状通常是数量性状，涉及到的生理生化过程相当复杂，即使同一个数量性状，它也受多个基因的调控，尽管已揭述其1-2个受控基因，但仍有其它具有大效应的新基因有待发现。(2)目前有关数量性状基因的研究，基本上是选用单一候选基因进行分析，忽略了基因间的相互作用。现代分子育种的内容之一是基因组育种，即根据个体所有性状的基因和基因型的组织结构及功能效应进行整体或全基因组选择、选配、保种和杂种优势分析利用等，其基础是有完整的高密度的基因图，并充分了解所有基因的组织结构、功能表达调控机理以及与性状的关联，然而目前在猪中已经遗传定位和物理定位的基因和标记仍十分有限，这方面的工作还需要进一步的加强。(3)寻找具有重要生理功能基因的方法不够全面，检测基因的数量有限，效率不高，需要创新，进一步寻找与猪重要经济性状相关新基因的工作迫在眉睫。

为此本申请人以探索猪生长发育的分子机理，了解中外猪种肌肉生长、胴体瘦肉率和肌肉品质表型差异形成的遗传本质的目的，先后采用mRNA差异显示、cDNA宏阵列技术开展了同一阶段不同品种和同一品种不同发育阶段肌肉组织中差异表达EST的筛选工作，发现了一批具有品种间差异或时空差异的EST。对于这些EST进一步获得其cDNA序列并开展功能研究是寻找猪生长相关候选基因的一条捷径。其中通过mRNA差异显示筛选并经反Northern Blot和Northern Blot验证的一条EST——ESThp1(GenBank登录号为BI596262)仅在骨骼肌和心肌中表达，且该EST在杜洛克猪肌肉组织中表达量明显高于二花脸猪(一种具有中国地方血缘的猪种)。但目前国内外对猪CMYA1基因的研究还是空白。

发明内容

本发明的目的在于克隆一种猪背膘厚基因CMYA1，利用该基因的部分突变位点作为猪背膘厚相关性状的分子标记的应用，为猪的育种提供一种标记辅助选择。

本发明通过以下技术方案实现：

一种猪背膘厚基因CMYA1，它的DNA序列如序列和cDNA序列如序列表SEQ ID NO：1所述。该cDNA序列长度为6310bp，序列中包含5421bp的开放阅读框，158bp的5’非翻译区和731bp的3’非翻译区。

其中：所获得的CMYA1基因cDNA序列中有3个碱基位点突变，即：

(1)G 1552-A 1552的碱基替换，该替换引起氨基酸由精氨酸变成组氨酸；

(2)A1909-G1909的碱基替换，该替换引起氨基酸由天门冬氨酸变成甘氨酸；

(3)A3448-C3448的碱基替换，该替换引起氨基酸由天冬酰胺变成苏氨酸。

一种制备前述cDNA序列的方法，它按照以下步骤制备：

用人CMYA1基因cDNA为信息探针，作同源序列筛选，获得同源性80％以上的表达序列标签；然后拼接猪EST-重叠群，设计引物扩增中间未知片段，纯化克隆测序；设计5’和3’RACE引物；提取猪肌肉组织总RNA并做cDNA第一链反转录；RACE的PCR扩增和RACE产物的纯化克隆和测序；通过序列分析获得如序列表SEQ ID NO：1所述的cDNA序列。

制备前述的DNA序列的方法，按照以下步骤：

从猪血液基因组中提取DNA，以猪CMYA1基因cDNA序列为模扳设计引物，进行PCR扩增，PCR产物纯化和克隆测序，获得如序列表SEQ ID NO：1所述DNA序列；

作为一种成功的实施例，本申请人已经采用上述PCR-RFLP方法检测猪CMYA1基因第1552位、1909位、3448位的碱基替换。

根据本发明的基本思想和具体实施例，很显然，本发明的cDNA序列可以应用于猪多态性分析，另外本发明所述的DNA序列也可以在猪多态性分析中得到应用。

更详细的技术方案由以下所述：

1.CMYA1基因的克隆：

(1)引物设计：

用人CMYA1基因cDNA(GenBank收录号：NM_194293)为信息探针，利用NCBI中的BLAST工具在GenBank猪EST数据库中做同源序列筛选，获得一系列同源性为80％以上的ESTs(片段长度大于100bp)，将这些ESTs的收录号在NCBI中用ENTREZ(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Web/Search/index.html)查询相应序列，然后用GeneTool中的ASSEMBLY程序构建猪EST-重叠群。根据EST拼接序列设计一对引物P1-F和P1-R，扩增得到一条片段F1R1

表1：用于CMYA1基因cDNA克隆的引物序列

(2)建立RACE方法：利用TRIzoL试剂盒(购自美国GIBCO公司)从成年长白肌肉组织中提取总RNA，具体操作依照试剂盒说明书进行。总RNA溶于RACE试剂盒提供的超纯水，用Beckman DU640核酸蛋白质浓度测定仪测定其A260nm值，并通过1.2％的甲醛凝胶电泳检测其完整性。

利用RACE试剂盒(购自美国CLONTECH公司)进行cDNA末端快速扩增，具体操作按试剂盒说明书进行。

(3)RACE产物的纯化、克隆和测序：RACE产物的纯化：在紫外灯下从低熔点琼脂糖凝胶上切下含目的片段的凝胶，放入1.5ml Ependorff管中，于70℃温育至凝胶完全融化，然后用PCR产物纯化试剂盒(购自Promega公司)纯化PCR产物，按照试剂盒说明书操作，具体步骤是在每300μl融化的凝胶中加入1ml Resin，混匀20s，将Resin/DNA混合物装入注射器，使浆液通过Minicolumn挤出。再在注射器中加入80％的异丙醇2ml，轻推活塞使异丙醇通过Minicolumn挤出，取下Minicolumn装入1.5ml Ependorff管中，10,000g离心2min以干燥Resin，将Minicolumn装入另一个干净的1.5ml Ependorff管中，加入30～50μl灭菌水，静置1min，10,000g离心20s，以洗脱DNA存于Ependorff管中。

连接反应：将纯化RACE产物与pGEM-T载体连接，连接反应总体积是5μl，其中包括2.5μl 2×buffer，0.5μl的T载体(购自Promega公司)，0.5μl的纯化PCR产物，0.5μl的T4连接酶，最后加入1μl灭菌水置4℃水浴过夜。

感受态细胞的制备：从37℃培养了16～20h的新鲜平板上挑取一个DH5α单菌落接种于2ml LB中，于37℃振荡培养3h，转接1ml菌液于含有30ml LB的盐水瓶中，继续在37℃振荡培养约4h，待OD600达到0.3～0.4时将盐水瓶从摇床取出置冰浴冷却10～15min，然后将菌液转入离心管中于4℃4,000g离心10min以收集细胞，将离心管倒置以弃净培养液，用10ml冰预冷的0.1mol/L的CaCl₂重悬沉淀，冰浴30min，重复4℃4,000g离心10min一次，用4ml冰预冷的0.1mol/L的CaCl₂重悬沉淀，置4℃保存备用。

转化：无菌状态下取100～120μl感受态细胞于1.5ml Ependorff管中，将5μl的连接产物加入混匀，在冰上放置30min，42℃热激90s，其间不要摇动Ependorff管，取出后冰浴3～4min，加入400μl无抗生素的LB液体培养基，37℃振荡培养45min。取100μl涂布于已提前4h涂布了IPTG(Isopropylthio-β-D-galactoside，中文名称为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)和X-gal的琼脂平板上，37℃平放1h后倒置培养。

质粒的小量制备：挑取平板上的单菌落，接种于2-3ml LB中，37℃300r/min培养过夜。用1.5ml EP管12000r/min离心数秒收集菌体。每管加入100μl用冰预冷的溶液I[50mM葡萄糖，25mM Tris.Cl(pH8.0)，10mM EDTA(pH8.0)]，涡旋振荡至菌体充分悬浮。加入新配制的溶液II[0.2M NaOH，1％SDS]200μl，快速颠倒混匀，冰浴5min，然后加入预冷的溶液III[5M乙酸钾，冰乙酸11.5ml，H2O 28.5ml]150μl，混匀后冰浴5min，12000r/min离心5min，将上清转至另一EP管中，加入苯酚∶氯仿∶异戊醇500μl，涡旋振荡，离心后小心吸取上层水相，加入2倍体积的无水乙醇，-20℃沉淀30min，12000r/min离心5min，沉淀用70％乙醇洗涤2次，抽干，加入含有RNA酶的TE20μl。

重组质粒的酶切鉴定：取3μl质粒DNA与适量的双蒸水混匀，使其总体积为15μl，加入2-3U限制性内酶EcoR I及2μl相应的10X限制性内切酶反应缓冲液，轻弹管壁混匀并离心，置37℃水浴1-2小时，取2-3μl反应液于琼脂糖凝胶电泳检测，酶切结果与预计完全相同者，即为目的重组质粒。重组质粒采用双脱氧末端终止法在DNA自动测序仪上进行测序，序列测定由北京奥科生物技术有限公司完成。

(4)DNA序列同源性检索鉴定：通过美国国家生物技术信息中心(NCBI，National Center forBiotechnology Information，http://www.ncbi.nlm.nih.gov)网站的BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)软件，将测序后获得的DNA序列与GenBank数据库中公布的已知生理功能基因进行序列同源性比较，以鉴定和获得该DNA序列的功能信息。

2.基因定位：

(1)用于基因定位的引物序列是

CMYA1：P-MF 5′-GCTAACCAAGGTGCCCAGAC-3′

P-MR 5′-TGGGCAACTCAGGGAGCATC-3′

该引物扩增片段长度为363bp。

(2)用于基因定位的实验材料

用法国Minnesota大学构建的猪辐射杂种板(INRA-Minnesota porcine radiation hybrid panel，IMpRH)进行染色体精确定位，该杂种板由法国Martin Yerle博士(Laboratoire de Génétique Cellulaire，INRA，Castanet-Tolosan，France)惠赠。

IMpRH使用的辐射剂量是7,000-rad。IMpRH包括118个猪×仓鼠辐射杂种细胞系，以及仓鼠和猪基因组DNA阳性对照，用757个标记的鉴定结果表明IMpRH中的平均标记存留率为29.3％，包含有128个连锁群，覆盖了18对常染色体及X染色体，用于估计标记间距离的kb/cR比值是～70kb/cR(1Ray＝100cR)，理论分辨率是145kb。各细胞系中所包含的猪染色体及染色体片段信息可从WWW(http://www.toulouse.inra.fr/lgc/lgc.html/)获得。

(3)PCR分型条件

进行扩增的PCR反应总体积为10μl，其中模板DNA为20ng，含1×buffer(Promega)，1.5mmol/LMgCl₂，dNTP终浓度为150μmol/L，引物终浓度为0.4μmol/L，2U Taq DNA聚合酶(Promega)。PCR扩增程序是：94℃3min，循环35次94℃30s，66℃30s，然后72℃30s，最后72℃延伸5min。PCR反应产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测。

3.PCR-RFLP诊断方法建立

(1)引物序列

CMYA1 P-S1F 5′-CAACTCACTCATTGGGCACG-3′

P-S1R 5′-CAGGGCTACAGGTGGATG-3′

该引物扩增片段长度291bp。

CMYA1 P-S2F 5′-CAGCCCGGCCTGATGTTAG-3′

P-S2R 5′-CCGTGCCTTGTCCTTAGTTGTG-3′

该引物扩增片段长度989bp。

CMYA1 P-S3F 5′-GACAGCAACAGCCGAAGC-3′

P-S3R 5′-TCCTGAATAGTCACCCACCC-3′

该引物扩增片段长度246bp。

(2)PCR扩增条件：PCR反应总体积20μl，其中猪基因组DNA约100ng，含1×buffer(Promega)，1.5mmol/L MgCl₂，dNTP终浓度为150μmol/L，引物终浓度为0.4μmol/L，2U Taq DNA聚合酶(Promega)。PCR扩增程序是：94℃3min，循环35次94℃30s，58-60℃30s，然后72℃15-40s，最后72℃延伸5min。PCR反应产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测。

(3)RFLP检测条件：PCR产物酶切反应体积是10μl，其中1×buffer 1μl，PCR产物3～5μl，限制性内切酶HaeIII/NcoI/RsaI为0.3μl(10U)，用H₂O补足10μl，将样品混匀后离心，37℃水浴4h，用2％琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果，记录基因型，在紫外灯下拍照。

4.标记性状关联分析：在利用申请人所在的动物分子生物学与育种实验室组建的“通城猪”(该品种属于一种公开饲养的中国地方猪品种)和其他血缘的猪群做性状关联分析，取大约200个DNA样品用于基因型检测。所分析的性状有部分生长性能和部分肉质性状。申请人建立了如下最小二乘模型：

y_ijk＝μ+GENOTYPE_i+SEX_j+COMBINATION_k+ε_ijk，

其中，y_ijk是性状观察值，μ为总体均数，GENOTYPE_i为基因型效应，SEX_j为性别效应，COMBINATION_k为组合的效应，ε_ijk为随机误差，假定服从N(0，σ²)分布。

本发明的效果是：

1.猪CMYA1基因的克隆结果：以成年“长白猪”(一种来源于欧洲血缘的猪种)的肌肉组织提取总RNA反转录合成的cDNA为模板，分别用表1所列的引物进行PCR扩增，扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测结果显示均为特异的PCR产物。将PCR产物回收纯化后克隆测序，并用GeneTool1.0软件中的ASSEMBLY程序进行拼接，得到一条长度为6310bp的cDNA整合序列(见SEQ IDNO：1所述)。将这段cDNA序列在GenBank中进行同源性检索，检索结果该序列与人CMYA1基因cDNA(GenBank收录号：NM 194293)的同源性达81％，序列分析表明该cDNA序列具有5421bp(nt 159-5579)的开放阅读框，编码一个由1806个氨基酸组成的蛋白质。

2.猪CMYA1基因的定位结果：用CMYA1的MF和MR引物在IMpRH分型结果是00000100000010010000 0000001000 0000000010 0000000000 000100101？0000010000 0000100？000000000010 0100000010 1000001000 01010000(其中0和1分别表述扩增结果为阴性和阳性，？表示不确定)。将以上的检测结果提交网站(http://www.toulouse.inra.fr/lgc/lgc.html/)，统计分析结果，CMYA1基因与猪13号染色体上的微卫星S0288紧密连锁，LOD值为11.59，RH图距是0.27Ray。

3.PCR-RFLP诊断方法建立：用CMYA1 S1F和S1R引物扩增猪基因组DNA得到291bp特异扩增片段，该片段位于第二外显子内(如图2)。测序的结果发现在该291bp片段中存在一个HaeIII酶切位点(GG↓CC)，其中第212bp处为多态性切点，位于外显子2中，再分别对该位点两个纯合子的测序结果显述，当第212bp位置是A212时，则该HaeIII酶切位点不存在，HaeIII酶切后检测结果只有1个片段，长度是291bp(定为等位基因A)；但存在A212→G212的替换时，其结果导致第212bp处一个HaeIII酶切位点的产生，得到2个片段，长度分别为212bp和79bp(定为等位基因G)，三种基因型AA，AG，GG如图3所述。

用CMYA1 S2F和S2R引物扩增猪基因组DNA得到989bp特异扩增片段，该片段位于第二外显子内(如图2)。测序的结果发现在该989bp片段中存在一个NcoI酶切位点(C↓CATGG)，其中第499bp处为多态性切点，位于外显子2中，再分别对该位点两个纯合子的测序结果显述，当第499bp位置是A499时，则该NcoI酶切位点不存在，NcoI酶切后检测结果只有1个片段，长度是989bp(定为等位基因A)；但存在A499→G499的替换时，其结果导致第499bp处一个NcoI酶切位点的产生，得到2个片段，长度分别为499bp和490bp(定为等位基因G)，三种基因型AA，AG，GG如图4所述。

用CMYA1 S3F和S3R引物扩增猪基因组DNA得到246bp特异扩增片段，该片段位于第二外显子内(如图2)。测序的结果发现在该246bp片段中存在一个RsaI酶切位点(GT↓AC)，其中第132bp处为多态性切点，位于外显子2中，再分别对该位点两个纯合子的测序结果显述，当第132bp位置是A132时，则该RsaI酶切位点不存在，RsaI酶切后检测结果只有1个片段，长度是246bp(定为等位基因A)；但存在A132→C132的替换时，其结果导致第132bp处一个RsaI酶切位点的产生，得到2个片段，长度分别为132bp和114bp(定为等位基因C，三种基因型AA，AC，CC如图5所述。

4.标记性状关联分析：对猪CMYA1基因第2外显子HaeIII-RFLP多态性位点与部分生产性状进行关联分析，所分析的性状是170日龄屠宰时的背膘厚。

基因型检测结果表明在204个个体中AA基因型，有66个，AG基因型有106个个体，GG基因型有32个个体。在与部分生产性状进行关联分析中，所分析的性状是170日龄屠宰时的屠宰率、胸腰椎背膘厚和三点平均背膘厚。基因型间性状的简单均数和标准差分析结果总结于表2。关联分析结果表明，AA与GG基因型猪，以及AG型与GG型猪的背膘厚呈显著差异，GG基因型猪的背表厚为：平均值2.9645±0.168(cm)最薄。

表2：不同CMYA1基因HaeIII-RFLP基因型与部分生产性状的关联分析

对猪CMYA1基因第2外显子RsaI-RFLP多态性位点与部分生产性状进行关联分析，所分析的性状是170日龄屠宰时的背膘厚。

基因型检测结果表明在199个个体中AA基因型，有28个，AC基因型有92个个体，CC基因型有79个个体。在与部分生产性状进行关联分析中，所分析的性状是170日龄屠宰时的屠宰率、胸腰椎背膘厚和三点平均背膘厚。基因型间性状的简单均数和标准差分析结果总结于表3。关联分析结果表明，AC与CC基因型猪的背膘厚呈显著差异。

表3：不同CMYA1基因RsaI-RFLP基因型与部分生产性状的关联分析

附图说明

序列表SEQ IDNO：1是本发明克隆的猪背膘厚CMYA1基因的cDNA和DNA序列；

图1：是本发明CMYA1基因制备的流程图；

图2：是本发明中猪CMYA1基因用于PCR-RFLP检测的部分DNA片段。所用的引物序列用下划线标注；

图3：是本发明中猪CMYA1基因第2外显子的HaeIII-RFLPs的三种基因型(AAAG GG)电泳结果。M：DNA分子量标准(100bp ladder)；

图4：是本发明中猪CMYA1基因第2外显子的NcoI-RFLPs的三种基因型(AA AG GG)电泳结果。M：DNA分子量标准(100bp ladder)；

图5：是本发明中猪CMYA1基因第2外显子的RsaI-RFLPs的三种基因型(AA AG GG)电泳结果。M：DNA分子量标准(100bp ladder)。

具体实施方式

实施例1：不同CMYA1基因第2外显子HaeIII-RFLP基因型与部分生产性状的关联分析

在一个通城猪群中对猪CMYA1基因第2外显子HaeIII-RFLP多态性位点与部分生产性状进行关联分析，在与部分生产性状进行关联分析中，所分析的性状是170日龄屠宰时的屠宰率、胸腰椎背膘厚和三点平均背膘厚。基因型间性状的简单均数和标准差分析结果总结于表4。关联分析结果表明，AA与GG基因型猪，以及AG型与GG型猪的背膘厚呈显著差异。

表4不同CMYA1基因HaeIII-RFLP基因型与部分生产性状的关联分析

实施例2：PCR-RFLP-HaeIII多态性在各猪品种中的分布情况

在9个猪品种中检测猪CMYA1基因PCR-RFLP-HaeIII多态性，检测结果如表5所述。表5的数据分析显示，在所检测的这几个猪品种中，杜洛克、通城和大花白猪中占优势的等位基因A的频率分别为0.8077、0.9286和0.93640，而大白、小梅山和二花脸中优势等位基因G的频率分别为0.7000、0.8750和0.7353，在长白猪中等位基因A和等位基因G的频率接近，分别为0.5714和0.4286。

表5几个猪品种中CMYA1基因HaeIII多态性的基因型和基因频率

对猪CMYA1基因HaeIII-RFLP多态性位点基因频率在不同品种中的分布差异进行检验，差异显著性结果见表6。根据表6的分析结果表明该位点基因频率在所检测的这八个猪品种中存在较大程度的差异。

表6猪CMY41基因HaeIII-RFLP多态性位点在不同品种中分布的差异性检验结果

注：肩注^*表述P＜0.05；肩注^**表述P＜0.01。

实施例3：PCR-RFLP-NcoI多态性在各猪品种中的分布情况

在9个猪品种中检测猪CMYA1基因PCR-RFLP-NcoI多态性，检测结果如表7所述。表7的数据分析显述，在所检测的这几个猪品种中，杜洛克猪中占优势的等位基因A的频率为0.8846，而长白、通城、玉西黑、清平、大花白、小梅山和二花脸中优势等位基因G的频率分别为0.7143、0.9643、0.7700、0.7222、0.8415、1.0000和1.0000，在大白猪中等位基因A和等位基因G的频率接近，分别为0.5833和0.4167

表7几个猪品种中CMYA1基因NcoI多态性的基因型和基因频率

表8猪CMYA1基因NcoI-RFLP多态性位点在不同品种中分布的差异性检验结果

注：肩注^*表述P＜0.05；肩注^**表述P＜0.01。

实施例4：不同CMYA1基因第2外显子RsaI-RFLP基因型与部分生产性状的关联分析

基因型检测结果表明在199个个体中AA基因型，有28个，AC基因型有92个个体，CC基因型有79个个体。在与部分生产性状进行关联分析中，所分析的性状是170日龄屠宰时的屠宰率、胸腰椎背膘厚和三点平均背膘厚。基因型间性状的简单均数和标准差分析结果总结于表9。关联分析结果表明，AC与CC基因型猪的背膘厚呈显著差异。

表9：不同CMYA1基因RsaI-RFLP基因型与部分生产性状的关联分析

实施例5：PCR-RFLP-RsaI多态性在各猪品种中的分布情况

在6个猪品种中检测猪CMYA1基因PCR-RFLP-RsaI多态性，检测结果如表10所述。表10的数据分析显示，在所检测的这6个猪品种中，杜洛克猪中占优势的等位基因C的频率为0.7703，大花白猪中占优势的等位基因A的频率为0.6250，而大白、通城、清平和二花脸中等位基因A和等位基因C的频率接近。

表10几个猪品种中CMYA1基因RsaI多态性的基因型和基因频率

对猪CMYA1基因RsaI-RFLP多态性位点基因频率在不同品种中的分布差异进行检验，差异显著性结果见表11。根据表11的分析结果表明该位点基因频率在所检测的这6个猪品种中，杜洛克猪和其它猪之间存在较大程度的差异。

表11猪CMYA1基因RsaI-RFLP多态性位点在不同品种中分布的差异性检验结果

注：肩注^*表述P＜0.05；肩注^**表述P＜0.01。

<110>华中农业大学

<120>一种猪背膘厚基因CMYA1的克隆及其应用

<130>

<141>2005-11-28

<160>2

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>6310

<212>DNA

<213>猪(sus scrofa)

<220>

<221>gene

<222>(1)..(6310)

<223>

<220>

<221>polyA_signal

<222>(6280)..(6310)

<223>

<220>

<221>mutation

<222>(3448)..(3448)

<223>

<220>

<221>mutation

<222>(1552)..(1552)

<223>

<220>

<221>mutation

<222>(1909)..(1909)

<223>

<220>

<221>3’UTR

<222>(5580)..(6310)

<223>

<220>

<221>5’UTR

<222>(1)..(158)

<223>

<220>

<221>CDS

<222>(159)..(5579)

<223>

<400>1

gcggggacag agacccagag cctgggcagc gagaaggcac ctggccgagc cagcagagca 60

caaccagccc caaacaacaa caagaggaac cacagaccct taggccacac ctgccgcaga 120

ccccacgccc ccatcagcca aacaggaccc tcagaagg atg gct gac acc cag acg 176

Met Ala Asp Thr Gln Thr

1 5

cag gtg gcc cca aaa cca acc atc cca gtg gca act gca gag gac ctg 224

Gln Val Ala Pro Lys Pro Thr Ile Pro Val Ala Thr Ala Glu Asp Leu

10 15 20

ccc ttc cct ccc cca cct gcc cct gag gat ctg ccg ctg cca cca ccc 272

Pro Phe Pro Pro Pro Pro Ala Pro Glu Asp Leu Pro Leu Pro Pro Pro

25 30 35

aag gag tcc ttc tcc aag ttc cac cag cag cga caa gcc agt gag ctc 320

Lys Glu Ser Phe Ser Lys Phe His Gln Gln Arg Gln Ala Ser Glu Leu

40 45 50

cgc cgc ctc tac aag cac att cac ccc gag ctc cgc aag aat ctg gct 368

Arg Arg Leu Tyr Lys His Ile His Pro Glu Leu Arg Lys Asn Leu Ala

55 60 65 70

gag gcc gtg gct gaa gac ctg gct gag gtc ctg ggt tcc gag gag ccc 416

Glu Ala Val Ala Glu Asp Leu Ala Glu Val Leu Gly Ser Glu Glu Pro

75 80 85

acc gaa ggt gat gtc cag tgc atg cgc tgg atc ttt gag aac tgg cgg 464

Thr Glu Gly Asp Val Gln Cys Met Arg Trp Ile Phe Glu Asn Trp Arg

90 95 100

ctg gat gcc att ggg gac cat gac agg cca cct gcc aag gag ccg gtg 512

Leu Asp Ala Ile Gly Asp His Asp Arg Pro Pro Ala Lys Glu Pro Val

105 110 115

cct ggt ggc aac gtt cag gcc acc tcc cga aaa ttt gaa gaa gga tcc 560

Pro Gly Gly Asn Val Gln Ala Thr Ser Arg Lys Phe Glu Glu Gly Ser

120 125 130

ttt gcc aac agc ata gac cag gag cca gct aga cct cag cca tcc cga 608

Phe Ala Asn Ser Ile Asp Gln Glu Pro Ala Arg Pro Gln Pro Ser Arg

135 140 145 150

ggg gat gtc cgt gca gcc cgc tgg ctg ttt gag aca aag ccg ctg gat 656

Gly Asp Val Arg Ala Ala Arg Trp Leu Phe Glu Thr Lys Pro Leu Asp

155 160 165

gag ctg aca ggc cag acg gag gca ccg gag gct cca gtg aag gag cct 704

Glu Leu Thr Gly Gln Thr Glu Ala Pro Glu Ala Pro Val Lys Glu Pro

170 175 180

gaa gcc agt ggc gat gtc cag ggt act agg atg ctc ttt gag aca cgg 752

Glu Ala Ser Gly Asp Val Gln Gly Thr Arg Met Leu Phe Glu Thr Arg

185 190 195

cca ctg gac cgc cta ggc tct cgt ccc tcc atc cag gaa cag agc ccc 800

Pro Leu Asp Arg Leu Gly Ser Arg Pro Ser Ile Gln Glu Gln Ser Pro

200 205 210

ttg gag cta cgc tca gag atc cag gag ctg aag ggt gat gtg aag aag 848

Leu Glu Leu Arg Ser Glu Ile Gln Glu Leu Lys Gly Asp Val Lys Lys

215 220 225 230

acg gtg aag ctg ttc caa aca gag cca ctg tgt gcc atc cag gac gca 896

Thr Val Lys Leu Phe Gln Thr Glu Pro Leu Cys Ala Ile Gln Asp Ala

235 240 245

gag ggc gcc atc cat gag gtc aag gcc gcc tgc cgg gag gag atc cag 944

Glu Gly Ala Ile His Glu Val Lys Ala Ala Cys Arg Glu Glu Ile Gln

250 255 260

agc aat gca gtg agg act gcc cgt tgg ctc ttc gag acc caa cct ctg 992

Ser Asn Ala Val Arg Thr Ala Arg Trp Leu Phe Glu Thr Gln Pro Leu

265 270 275

gac gcc atc aac cgg gac ccc agc cag gtg cgg gtg att cgg ggg atc 1040

Asp Ala Ile Asn Arg Asp Pro Ser Gln Val Arg Val Ile Arg Gly Ile

280 285 290

tcc ctg gag gag gca gcc cgg cct gat gtt agc gca act cgc tgg atc 1088

Ser Leu Glu Glu Ala Ala Arg Pro Asp Val Ser Ala Thr Arg Trp Ile

295 300 305 310

ttt gag aca cag ccc ctg gat gcc atc cgg gag atc ttg gtg gac gag 1136

Phe Glu Thr Gln Pro Leu Asp Ala Ile Arg Glu Ile Leu Val Asp Glu

315 320 325

aag gac ttc cag cca tcc cca gat ctt atc cct cct ggc cca gat gtt 1184

Lys Asp Phe Gln Pro Ser Pro Asp Leu Ile Pro Pro Gly Pro Asp Val

330 335 340

cag cag cag cgg cac ctg ttt gag acc cga cca cta gac act ctc aag 1232

Gln Gln Gln Arg His Leu Phe Glu Thr Arg Pro Leu Asp Thr Leu Lys

345 350 355

ggg gaa gag gag gct gaa gca gag gtc cca ccc aaa gag gaa gtg gtc 1280

Gly Glu Glu Glu Ala Glu Ala Glu Val Pro Pro Lys Glu Glu Val Val

360 365 370

cct ggt gat gtc cgc tcc acc ctg tgg cta ttt gag aca aag ccc ctg 1328

Pro Gly Asp Val Arg Ser Thr Leu Trp Leu Phe Glu Thr Lys Pro Leu

375 380 385 390

gac aca cct aga gac aag gtc caa gtg ggc cac ctg cag cga gtg ggt 1376

Asp Thr Pro Arg Asp Lys Val Gln Val Gly His Leu Gln Arg Val Gly

395 400 405

ccc cag gag agt aag ggg ttc aca cgt gag cat cta tcc agc gat ggc 1424

Pro Gln Glu Ser Lys Gly Phe Thr Arg Glu His Leu Ser Ser Asp Gly

410 415 420

tcc tca gcg ctg tcc ctc tct cag tgt gcg ccc cag ggg gat gtg gtg 1472

Ser Ser Ala Leu Ser Leu Ser Gln Cys Ala Pro Gln Gly Asp Val Val

425 430 435

aag ggg gat gta aag acc ttc aag aat ctt ttc gag acc ctt ccc ctg 1520

Lys Gly Asp Val Lys Thr Phe Lys Asn Leu Phe Glu Thr Leu Pro Leu

440 445 450

gat agc atc ggg cag ggt gaa gct ttg gcc cgt ggg aat gta agc aga 1568

Asp Ser Ile Gly Gln Gly Glu Ala Leu Ala Arg Gly Asn Val Ser Arg

455 460 465 470

gca gaa gga act gat tct gct gag cag tcc caa gac ata ggg tcc cca 1616

Ala Glu Gly Thr Asp Ser Ala Glu Gln Ser Gln Asp Ile Gly Ser Pro

475 480 485

gtg tac gcc ctg cag gat ggc aaa ggc cac ctt cat gcc ctg aca tcc 1664

Val Tyr Ala Leu Gln Asp Gly Lys Gly His Leu His Ala Leu Thr Ser

490 495 500

gtc agc aga gag cag gtc gtg gga ggt gat gtg cag ggc tac agg tgg 1712

Val Ser Arg Glu Gln Val Val Gly Gly Asp Val Gln Gly Tyr Arg Trp

505 510 515

atg ttt gag aca cag ccc cta gac caa cta ggt cga aac ccc agt acc 1760

Met Phe Glu Thr Gln Pro Leu Asp Gln Leu Gly Arg Asn Pro Ser Thr

520 525 530

gtc gac gtg gtg cgg ggc atc acc cgg gag gaa gtg gtg gct gga gat 1808

Val Asp Val Val Arg Gly Ile Thr Arg Glu Glu Val Val Ala Gly Asp

535 540 545 550

gtg ggc act gcc cgg tgg ctc ttt gag act cag ccc ctg gag gta atc 1856

Val Gly Thr Ala Arg Trp Leu Phe Glu Thr Gln Pro Leu Glu Val Ile

555 560 565

cac caa cgg gag cag cag gaa cga cag gaa gag gaa gga atg cct ccg 1904

His Gln Arg Glu Gln Gln Glu Arg Gln Glu Glu Glu Gly Met Pro Pro

570 575 580

gga gac cct cag cct gag gca ccc ctc aag ggt gat gtg cag acc atc 1952

Gly Asp Pro Gln Pro Glu Ala Pro Leu Lys Gly Asp Val Gln Thr Ile

585 590 595

cgc tgg ttg ttc gag acg tgc cca atg agt gag ttg gcc gag aag cag 2000

Arg Trp Leu Phe Glu Thr Cys Pro Met Ser Glu Leu Ala Glu Lys Gln

600 605 610

ggg tca gag gtc aca gat ccc aca act aag gac aag gca cgg tcc tgc 2048

Gly Ser Glu Val Thr Asp Pro Thr Thr Lys Asp Lys Ala Arg Ser Cys

615 620 625 630

acc tgg atg ttc atg tcc caa ccc cca gcc agg cca gaa gtt tcc cag 2096

Thr Trp Met Phe Met Ser Gln Pro Pro Ala Arg Pro Glu Val Ser Gln

635 640 645

gag cag cac ctt cag gtt agc cag gtc cag gct ggg gaa aga cag aca 2144

Glu Gln His Leu Gln Val Ser Gln Val Gln Ala Gly Glu Arg Gln Thr

650 655 660

gac aga cac gtc ttc gag acc gag cct ctg cag ggc tca ggc cgt ccc 2192

Asp Arg His Val Phe Glu Thr Glu Pro Leu Gln Gly Ser Gly Arg Pro

665 670 675

agt gga aga ggg ctg ata cga tac tgc agc aga gtg gac atc cct tca 2240

Ser Gly Arg Gly Leu Ile Arg Tyr Cys Ser Arg Val Asp Ile Pro Ser

680 685 690

ggg cag gtg tct cgc cag aag gag gtt ttc cag gcc ctg gag gca ggc 2288

Gly Gln Val Ser Arg Gln Lys Glu Val Phe Gln Ala Leu Glu Ala Gly

695 700 705 710

aag aag gaa gac cag gag tcc agg gtc atc cct gag ccc att cca gtg 2336

Lys Lys Glu Asp Gln Glu Ser Arg Val Ile Pro Glu Pro Ile Pro Val

715 720 725

ggc tct gtg cac aag ttc acc tgg ctc ttt gag aac tgc ccc atg ggc 2384

Gly Ser Val His Lys Phe Thr Trp Leu Phe Glu Asn Cys Pro Met Gly

730 735 740

tcc ctg gca gct gag agt atc caa ggg ggt aac ttc caa gag gag caa 2432

Ser Leu Ala Ala Glu Ser Ile Gln Gly Gly Asn Phe Gln Glu Glu Gln

745 750 755

cct gtg ggc tcc tcg gcc gac aga gtt cta gag aga cag gag act gca 2480

Pro Val Gly Ser Ser Ala Asp Arg Val Leu Glu Arg Gln Glu Thr Ala

760 765 770

gcc gag ggg acc ctg cgg act ctg cat gcc aca cct ggc atc ctg cac 2528

Ala Glu Gly Thr Leu Arg Thr Leu His Ala Thr Pro Gly Ile Leu His

775 780 785 790

cat gga ggc atc ctc atg gaa gcc cga ggg cca ggg gag ctc tgc ctg 2576

His Gly Gly Ile Leu Met Glu Ala Arg Gly Pro Gly Glu Leu Cys Leu

795 800 805

acc aag tac gtg ctc cca ggc ccg ggg cag ggc agt ccc cag gtt cgg 2624

Thr Lys Tyr Val Leu Pro Gly Pro Gly Gln Gly Ser Pro Gln Val Arg

810 815 820

aag gag gag ctg gtg ttt ggc gag ctt ccc agg atc att cgc caa gtg 2672

Lys Glu Glu Leu Val Phe Gly Glu Leu Pro Arg Ile Ile Arg Gln Val

825 830 835

ctg cgc cgg cca gac ata gac cag cag ggg ctg ctg gtg cag gag gac 2720

Leu Arg Arg Pro Asp Ile Asp Gln Gln Gly Leu Leu Val Gln Glu Asp

840 845 850

cca atg ggc cag ctt caa ctc aag ccg ctg aaa ctg cca gca cca ggc 2768

Pro Met Gly Gln Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Leu Pro Ala Pro Gly

855 860 865 870

agc aat ggg aac ctt gaa gac atg gac cct gag ttc cag cag ttg ctg 2816

Ser Asn Gly Asn Leu Glu Asp Met Asp Pro Glu Phe Gln Gln Leu Leu

875 880 885

gct tgt ggc ctt ggg acc tcg gtg gcg agg act ggg cta gtg atg caa 2864

Ala Cys Gly Leu Gly Thr Ser Val Ala Arg Thr Gly Leu Val Met Gln

890 895 900

gag aca gag cag ggc ctg gtg gca ctg act gcc tac tct ctg cag ccc 2912

Glu Thr Glu Gln Gly Leu Val Ala Leu Thr Ala Tyr Ser Leu Gln Pro

905 910 915

cgg cta acc agc agg gcc ccg gag agg agc agt gtg cag ctg ctg gcc 2960

Arg Leu Thr Ser Arg Ala Pro Glu Arg Ser Ser Val Gln Leu Leu Ala

920 925 930

agc tgc ata gac aaa gga gac ctg agc agc ctg cat agc ctg cgg tgg 3008

Ser Cys Ile Asp Lys Gly Asp Leu Ser Ser Leu His Ser Leu Arg Trp

935 940 945 950

gag ccc cca gct gac tca agt cca gag cca gtc agt gaa ggg gcc cag 3056

Glu Pro Pro Ala Asp Ser Ser Pro Glu Pro Val Ser Glu Gly Ala Gln

955 960 965

agg ctg ccc ccg aca gag agc atc atc cat gtc ccc cca ctg gac ccc 3104

Arg Leu Pro Pro Thr Glu Ser Ile Ile His Val Pro Pro Leu Asp Pro

970 975 980

ggc atg agg atg gag aat ctg agg aga ccg gga gcc acc ccc tgc ccc 3152

Gly Met Arg Met Glu Asn Leu Arg Arg Pro Gly Ala Thr Pro Cys Pro

985 990 995

cca cag gcc acg gga aag gca gtc cct ctg gct ggg gca gaa aag 3197

Pro Gln Ala Thr Gly Lys Ala Val Pro Leu Ala Gly Ala Glu Lys

1000 1005 1010

cag gaa agc agg tac acg gga cag aaa ggg atg gca gct ttg gga 3242

Gln Glu Ser Arg Tyr Thr Gly Gln Lys Gly Met Ala Ala Leu Gly

1015 1020 1025

aag tca gaa gga gcc acc act gtg ccc cca ggg gct ggg gcc tca 3287

Lys Ser Glu Gly Ala Thr Thr Val Pro Pro Gly Ala Gly Ala Ser

1030 1035 1040

gac ctc cag gct gct atg cag agt ctg cgg aca gca aca gcc gaa 3332

Asp Leu Gln Ala Ala Met Gln Ser Leu Arg Thr Ala Thr Ala Glu

1045 1050 1055

gcc cag agc ctg cac cag caa gtt ctg agc aag cac aag cag ggc 3377

Ala Gln Ser Leu His Gln Gln Val Leu Ser Lys His Lys Gln Gly

1060 1065 1070

cct gcc cct gga gtt gcc tct aca ccc act cag aat ggt ctt cag 3422

Pro Ala Pro Gly Val Ala Ser Thr Pro Thr Gln Asn Gly Leu Gln

1075 1080 1085

caa gcc act ggg act gcc cag agt aac acc aag ctt atg gcg gga 3467

Gln Ala Thr Gly Thr Ala Gln Ser Asn Thr Lys Leu Met Ala Gly

1090 1095 1100

ggt gac ccc agg atc cca gca gcc cct gga aag gtc agt ggg gaa 3512

Gly Asp Pro Arg Ile Pro Ala Ala Pro Gly Lys Val Ser Gly Glu

1105 1110 1115

cag aaa gca cta cct gga gag ctg cct ggg ggg tgg gtg act att 3557

Gln Lys Ala Leu Pro Gly Glu Leu Pro Gly Gly Trp Val Thr Ile

1120 1125 1130

cag gat ggc atc tac act gct cac cct gtg agg acc ttt gac cca 3602

Gln Asp Gly Ile Tyr Thr Ala His Pro Val Arg Thr Phe Asp Pro

1135 1140 1145

cct ggg ggt gtc cgg cct tct gag aga gga ccc ctg cca agg ggc 3647

Pro Gly Gly Val Arg Pro Ser Glu Arg Gly Pro Leu Pro Arg Gly

1150 1155 1160

agg gag act gcc ccc aca tcc cag cct ccc agc cca ttc ttg gaa 3692

Arg Glu Thr Ala Pro Thr Ser Gln Pro Pro Ser Pro Phe Leu Glu

1165 1170 1175

ggc cca gtt cag agt ctc agg cct gag caa gag gag cct ggg ggc 3737

Gly Pro Val Gln Ser Leu Arg Pro Glu Gln Glu Glu Pro Gly Gly

1180 1185 1190

tac aca cag aag gcc tgg gag cct cca gag aag gtg atg gca gaa 3782

Tyr Thr Gln Lys Ala Trp Glu Pro Pro Glu Lys Val Met Ala Glu

1195 1200 1205

cat ggc cca ggg ggc ctc cga gct cca gag acc acc ctg aag gct 3827

His Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ala Pro Glu Thr Thr Leu Lys Ala

1210 1215 1220

gcc cct tta gcc cac cac aca ctg gcc tct ggg cct ggg gct gca 3872

Ala Pro Leu Ala His His Thr Leu Ala Ser Gly Pro Gly Ala Ala

1225 1230 1235

gat gcc agc ctg cac tcc cat aat gcc tct gtt cct cct cct cct 3917

Asp Ala Ser Leu His Ser His Asn Ala Ser Val Pro Pro Pro Pro

1240 1245 1250

ctt ctc cca gct gct gtg acg aga cct gac ttt cca gcc cga gct 3962

Leu Leu Pro Ala Ala Val Thr Arg Pro Asp Phe Pro Ala Arg Ala

1255 1260 1265

ggc cat gat gag gac tcc agc cag cag gcc tcc aag ccc cca cag 4007

Gly His Asp Glu Asp Ser Ser Gln Gln Ala Ser Lys Pro Pro Gln

1270 1275 1280

gac ccc ctt ctc tac tcc cac agc agc cct gct ggc cag aga agc 4052

Asp Pro Leu Leu Tyr Ser His Ser Ser Pro Ala Gly Gln Arg Ser

1285 1290 1295

cct ggg gag tca cag gca aag acc ctg aaa ctg gag ccc act aca 4097

Pro Gly Glu Ser Gln Ala Lys Thr Leu Lys Leu Glu Pro Thr Thr

1300 1305 1310

tgc cca agg aag aag ccc cag ctg ccc ccc aaa cct gca cac cta 4142

Cys Pro Arg Lys Lys Pro Gln Leu Pro Pro Lys Pro Ala His Leu

1315 1320 1325

agc cag atc cct ctt cct cac tgg ctg ccc aag ccc tta gcc ccg 4187

Ser Gln Ile Pro Leu Pro His Trp Leu Pro Lys Pro Leu Ala Pro

1330 1335 1340

tct ccc agc acc tct aag gag gag ggg caa gga aaa tgc aaa caa 4232

Ser Pro Ser Thr Ser Lys Glu Glu Gly Gln Gly Lys Cys Lys Gln

1345 1350 1355

ggt gag act ggt aca gct gac cat gat acc cag cca gcc aag gcc 4277

Gly Glu Thr Gly Thr Ala Asp His Asp Thr Gln Pro Ala Lys Ala

1360 1365 1370

ccc acc act gca ggc cag ggc tgc ata cct ctg gct aga tgc ccc 4322

Pro Thr Thr Ala Gly Gln Gly Cys Ile Pro Leu Ala Arg Cys Pro

1375 1380 1385

act gga cag agc cca ccc agc ccc cca tat ggc ccc agc acc aca 4367

Thr Gly Gln Ser Pro Pro Ser Pro Pro Tyr Gly Pro Ser Thr Thr

1390 1395 1400

gcc ttc aag ccc acc aag agc caa gct atg agc agc aac aac cag 4412

Ala Phe Lys Pro Thr Lys Ser Gln Ala Met Ser Ser Asn Asn Gln

1405 1410 1415

agc cct gag tcc ccc aag ctt tca gct ccc gga agt gac ccc acc 4457

Ser Pro Glu Ser Pro Lys Leu Ser Ala Pro Gly Ser Asp Pro Thr

1420 1425 1430

tca ctg cag caa ggc ctc agc tcc cca gga gag aag tac atg gat 4502

Ser Leu Gln Gln Gly Leu Ser Ser Pro Gly Glu Lys Tyr Met Asp

1435 1440 1445

ggc tcc cag caa gca gcc cct aga agt cct gag atc ctg cag gaa 4547

Gly Ser Gln Gln Ala Ala Pro Arg Ser Pro Glu Ile Leu Gln Glu

1450 1455 1460

agc cag caa gag ctc cag ggc ctc ctg agt caa gtg caa gcc ctg 4592

Ser Gln Gln Glu Leu Gln Gly Leu Leu Ser Gln Val Gln Ala Leu

1465 1470 1475

gag aag gag gcc aaa agc act gtg gat gtg cgg gcg ctt cgg aga 4637

Glu Lys Glu Ala Lys Ser Thr Val Asp Val Arg Ala Leu Arg Arg

1480 1485 1490

ctc ttt gag gct gtg ccc cag ctg aga ggg gcc cct cca gct ccc 4682

Leu Phe Glu Ala Val Pro Gln Leu Arg Gly Ala Pro Pro Ala Pro

1495 1500 1505

gct gcc ctc cac aag ccc gag gcc tct gtg gag cag gcc ttt ggg 4727

Ala Ala Leu His Lys Pro Glu Ala Ser Val Glu Gln Ala Phe Gly

1510 1515 1520

gaa ttg acg agg gtc agc acg gag gtg gcc ctg ctg aag gaa cag 4772

Glu Leu Thr Arg Val Ser Thr Glu Val Ala Leu Leu Lys Glu Gln

1525 1530 1535

acc ctg gcc agg ttg ctg gac att gag aag gcc gtg cac aag gcc 4817

Thr Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Glu Lys Ala Val His Lys Ala

1540 1545 1550

ctc agc tcc atg tct agc ctc cag cct ggg act aac acc agg ggc 4862

Leu Ser Ser Met Ser Ser Leu Gln Pro Gly Thr Asn Thr Arg Gly

1555 1560 1565

cat ccc cag gga ccc cca aag gac cat agt acc cac aag gtc aat 4907

His Pro Gln Gly Pro Pro Lys Asp His Ser Thr His Lys Val Asn

1570 1575 1580

gtc tca gac agc agt aga gct agg ccc aac tgc cca agc cag gag 4952

Val Ser Asp Ser Ser Arg Ala Arg Pro Asn Cys Pro Ser Gln Glu

1585 1590 1595

gtc ggg ggt cca act gaa gtt cgg agc caa acc gat ggt aca tgc 4997

Val Gly Gly Pro Thr Glu Val Arg Ser Gln Thr Asp Gly Thr Cys

1600 1605 1610

cct act gag atc tgg agt caa gcc aag gtc aga agt ccc act gag 5042

Pro Thr Glu Ile Trp Ser Gln Ala Lys Val Arg Ser Pro Thr Glu

1615 1620 1625

gca aga agt caa gca tcc ctg ccc acc tct acc acc agg agg ctg 5087

Ala Arg Ser Gln Ala Ser Leu Pro Thr Ser Thr Thr Arg Arg Leu

1630 1635 1640

gac aca ttg aga gaa gat tgg ggc ctc cct cga gta tta cct ccc 5132

Asp Thr Leu Arg Glu Asp Trp Gly Leu Pro Arg Val Leu Pro Pro

1645 1650 1655

agc aga cat tca ccc tcc tcc cca acc ttc atc tct atc gag tca 5177

Ser Arg His Ser Pro Ser Ser Pro Thr Phe Ile Ser Ile Glu Ser

1660 1665 1670

gcc aca agg aaa ctt cca gag gct ccc aga cct cag ggc agc cct 5222

Ala Thr Arg Lys Leu Pro Glu Ala Pro Arg Pro Gln Gly Ser Pro

1675 1680 1685

gat gtc tca gtg aaa agc aca cac ctc agc cag gat gtg ggc caa 5267

Asp Val Ser Val Lys Ser Thr His Leu Ser Gln Asp Val Gly Gln

1690 1695 1700

gct cag ctc cac cag aaa gat gtc cag gac aag gcc agg aag agg 5312

Ala Gln Leu His Gln Lys Asp Val Gln Asp Lys Ala Arg Lys Arg

1705 1710 1715

gag gcc acc gag tgc tct gga cag ccc cag cct gct cct gcc tca 5357

Glu Ala Thr Glu Cys Ser Gly Gln Pro Gln Pro Ala Pro Ala Ser

1720 1725 1730

gcc agc ccc ctg ccc act ggg cgg cag aag agc att ctg gag ctg 5402

Ala Ser Pro Leu Pro Thr Gly Arg Gln Lys Ser Ile Leu Glu Leu

1735 1740 1745

cag act ggc cca ggt ggc tcc cag tgc tac aga gcc aca aga act 5447

Gln Thr Gly Pro Gly Gly Ser Gln Cys Tyr Arg Ala Thr Arg Thr

1750 1755 1760

gtg aat gag cag cat gag agg gtg aac cag tgt ggg aac aca gca 5492

Val Asn Glu Gln His Glu Arg Val Asn Gln Cys Gly Asn Thr Ala

1765 1770 1775

ctc aca ttc ccc acc atg gtc acg gag ccc aca gag cta acc aag 5537

Leu Thr Phe Pro Thr Met Val Thr Glu Pro Thr Glu Leu Thr Lys

1780 1785 1790

gtg ccc aga ccc cca cct cgg tgc tcc aca cct ccc cct tga 5579

Val Pro Arg Pro Pro Pro Arg Cys Ser Thr Pro Pro Pro

1795 1800 1805

tgaggcagtt cctgcgcagc ccagccgagc tcagcggggg cctggcagaa gcagggatgg 5639

cgcctatgcc cttcagccac ttccagccag cagctcagtg agcccctaaa cctcccacca 5699

ccacctccca cccatcccct gggctccgga cagaggtggg tgcctacctt ttgcacacgt 5759

gaggaaagga ccaagaagaa aaggcatctg ctgagattgt gggcagtttc tttttcatcg 5819

gttccgtcca tcatctgcat tcttgcaaaa gagggaaaag aaaactgcaa agatgctccc 5879

tgagttgccc gagcacagga acaggacggg ggcttatggc taccagtgga ggctatgata 5939

tgtacagaca ggcgtgccaa caccagtgag tctgcaagcc actacgggag acagtccttg 5999

agtcaccctc cactttcagc ctttttttct tttactatga gtcttctcct ccttaattcc 6059

tggagagaag aaggacagct ggacaaggga ttggtctctg tttcacattg atcctagggc 6119

cccttcatca ccatcttcac tgctccaaag ctcacacaga aaaggctggc aatcagcaat 6179

gtccctagaa cccaaagctt ccctccaccc ccactacccc tcactctgcc cctcaaaagg 6239

gaaggacacg gtctgaataa acccaagttt tattccctca taaaaaaaaa aaaaaaaaaa 6299

aaaaaaaaaa a 6310

<210>2

<211>1806

<212>PRT

<213>猪(sus scrofa)

<400>2

Met Ala Asp Thr Gln Thr Gln Val Ala Pro Lys Pro Thr Ile Pro Val

1 5 10 15

Ala Thr Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Pro Pro Pro Ala Pro Glu Asp

20 25 30

Leu Pro Leu Pro Pro Pro Lys Glu Ser Phe Ser Lys Phe His Gln Gln

35 40 45

Arg Gln Ala Ser Glu Leu Arg Arg Leu Tyr Lys His Ile His Pro Glu

50 55 60

Leu Arg Lys Asn Leu Ala Glu Ala Val Ala Glu Asp Leu Ala Glu Val

65 70 75 80

Leu Gly Ser Glu Glu Pro Thr Glu Gly Asp Val Gln Cys Met Arg Trp

85 90 95

Ile Phe Glu Asn Trp Arg Leu Asp Ala Ile Gly Asp His Asp Arg Pro

100 105 110

Pro Ala Lys Glu Pro Val Pro Gly Gly Asn Val Gln Ala Thr Ser Arg

115 120 125

Lys Phe Glu Glu Gly Ser Phe Ala Asn Ser Ile Asp Gln Glu Pro Ala

130 135 140

Arg Pro Gln Pro Ser Arg Gly Asp Val Arg Ala Ala Arg Trp Leu Phe

145 150 155 160

Glu Thr Lys Pro Leu Asp Glu Leu Thr Gly Gln Thr Glu Ala Pro Glu

165 170 175

Ala Pro Val Lys Glu Pro Glu Ala Ser Gly Asp Val Gln Gly Thr Arg

180 185 190

Met Leu Phe Glu Thr Arg Pro Leu Asp Arg Leu Gly Ser Arg Pro Ser

195 200 205

Ile Gln Glu Gln Ser Pro Leu Glu Leu Arg Ser Glu Ile Gln Glu Leu

210 215 220

Lys Gly Asp Val Lys Lys Thr Val Lys Leu Phe Gln Thr Glu Pro Leu

225 230 235 240

Cys Ala Ile Gln Asp Ala Glu Gly Ala Ile His Glu Val Lys Ala Ala

245 250 255

Cys Arg Glu Glu Ile Gln Ser Asn Ala Val Arg Thr Ala Arg Trp Leu

260 265 270

Phe Glu Thr Gln Pro Leu Asp Ala Ile Asn Arg Asp Pro Ser Gln Val

275 280 285

Arg Val Ile Arg Gly Ile Ser Leu Glu Glu Ala Ala Arg Pro Asp Val

290 295 300

Ser Ala Thr Arg Trp Ile Phe Glu Thr Gln Pro Leu Asp Ala Ile Arg

305 310 315 320

Glu Ile Leu Val Asp Glu Lys Asp Phe Gln Pro Ser Pro Asp Leu Ile

325 330 335

Pro Pro Gly Pro Asp Val Gln Gln Gln Arg His Leu Phe Glu Thr Arg

340 345 350

Pro Leu Asp Thr Leu Lys Gly Glu Glu Glu Ala Glu Ala Glu Val Pro

355 360 365

Pro Lys Glu Glu Val Val Pro Gly Asp Val Arg Ser Thr Leu Trp Leu

370 375 380

Phe Glu Thr Lys Pro Leu Asp Thr Pro Arg Asp Lys Val Gln Val Gly

385 390 395 400

His Leu Gln Arg Val Gly Pro Gln Glu Ser Lys Gly Phe Thr Arg Glu

405 410 415

His Leu Ser Ser Asp Gly Ser Ser Ala Leu Ser Leu Ser Gln Cys Ala

420 425 430

Pro Gln Gly Asp Val Val Lys Gly Asp Val Lys Thr Phe Lys Asn Leu

435 440 445

Phe Glu Thr Leu Pro Leu Asp Ser Ile Gly Gln Gly Glu Ala Leu Ala

450 455 460

Arg Gly Asn Val Ser Arg Ala Glu Gly Thr Asp Ser Ala Glu Gln Ser

465 470 475 480

Gln Asp Ile Gly Ser Pro Val Tyr Ala Leu Gln Asp Gly Lys Gly His

485 490 495

Leu His Ala Leu Thr Ser Val Ser Arg Glu Gln Val Val Gly Gly Asp

500 505 510

Val Gln Gly Tyr Arg Trp Met Phe Glu Thr Gln Pro Leu Asp Gln Leu

515 520 525

Gly Arg Asn Pro Ser Thr Val Asp Val Val Arg Gly Ile Thr Arg Glu

530 535 540

Glu Val Val Ala Gly Asp Val Gly Thr Ala Arg Trp Leu Phe Glu Thr

545 550 555 560

Gln Pro Leu Glu Val Ile His Gln Arg Glu Gln Gln Glu Arg Gln Glu

565 570 575

Glu Glu Gly Met Pro Pro Gly Asp Pro Gln Pro Glu Ala Pro Leu Lys

580 585 590

Gly Asp Val Gln Thr Ile Arg Trp Leu Phe Glu Thr Cys Pro Met Ser

595 600 605

Glu Leu Ala Glu Lys Gln Gly Ser Glu Val Thr Asp Pro Thr Thr Lys

610 615 620

Asp Lys Ala Arg Ser Cys Thr Trp Met Phe Met Ser Gln Pro Pro Ala

625 630 635 640

Arg Pro Glu Val Ser Gln Glu Gln His Leu Gln Val Ser Gln Val Gln

645 650 655

Ala Gly Glu Arg Gln Thr Asp Arg His Val Phe Glu Thr Glu Pro Leu

660 665 670

Gln Gly Ser Gly Arg Pro Ser Gly Arg Gly Leu Ile Arg Tyr Cys Ser

675 680 685

Arg Val Asp Ile Pro Ser Gly Gln Val Ser Arg Gln Lys Glu Val Phe

690 695 700

Gln Ala Leu Glu Ala Gly Lys Lys Glu Asp Gln Glu Ser Arg Val Ile

705 710 715 720

Pro Glu Pro Ile Pro Val Gly Ser Val His Lys Phe Thr Trp Leu Phe

725 730 735

Glu Asn Cys Pro Met Gly Ser Leu Ala Ala Glu Ser Ile Gln Gly Gly

740 745 750

Asn Phe Gln Glu Glu Gln Pro Val Gly Ser Ser Ala Asp Arg Val Leu

755 760 765

Glu Arg Gln Glu Thr Ala Ala Glu Gly Thr Leu Arg Thr Leu His Ala

770 775 780

Thr Pro Gly Ile Leu His His Gly Gly Ile Leu Met Glu Ala Arg Gly

785 790 795 800

Pro Gly Glu Leu Cys Leu Thr Lys Tyr Val Leu Pro Gly Pro Gly Gln

805 810 815

Gly Ser Pro Gln Val Arg Lys Glu Glu Leu Val Phe Gly Glu Leu Pro

820 825 830

Arg Ile Ile Arg Gln Val Leu Arg Arg Pro Asp Ile Asp Gln Gln Gly

835 840 845

Leu Leu Val Gln Glu Asp Pro Met Gly Gln Leu Gln Leu Lys Pro Leu

850 855 860

Lys Leu Pro Ala Pro Gly Ser Asn Gly Asn Leu Glu Asp Met Asp Pro

865 870 875 880

Glu Phe Gln Gln Leu Leu Ala Cys Gly Leu Gly Thr Ser Val Ala Arg

885 890 895

Thr Gly Leu Val Met Gln Glu Thr Glu Gln Gly Leu Val Ala Leu Thr

900 905 910

Ala Tyr Ser Leu Gln Pro Arg Leu Thr Ser Arg Ala Pro Glu Arg Ser

915 920 925

Ser Val Gln Leu Leu Ala Ser Cys Ile Asp Lys Gly Asp Leu Ser Ser

930 935 940

Leu His Ser Leu Arg Trp Glu Pro Pro Ala Asp Ser Ser Pro Glu Pro

945 950 955 960

Val Ser Glu Gly Ala Gln Arg Leu Pro Pro Thr Glu Ser Ile Ile His

965 970 975

Val Pro Pro Leu Asp Pro Gly Met Arg Met Glu Asn Leu Arg Arg Pro

980 985 990

Gly Ala Thr Pro Cys Pro Pro Gln Ala Thr Gly Lys Ala Val Pro Leu

995 1000 1005

Ala Gly Ala Glu Lys Gln Glu Ser Arg Tyr Thr Gly Gln Lys Gly

1010 1015 1020

Met Ala Ala Leu Gly Lys Ser Glu Gly Ala Thr Thr Val Pro Pro

1025 1030 1035

Gly Ala Gly Ala Ser Asp Leu Gln Ala Ala Met Gln Ser Leu Arg

1040 1045 1050

Thr Ala Thr Ala Glu Ala Gln Ser Leu His Gln Gln Val Leu Ser

1055 1060 1065

Lys His Lys Gln Gly Pro Ala Pro Gly Val Ala Ser Thr Pro Thr

1070 1075 1080

Gln Asn Gly Leu Gln Gln Ala Thr Gly Thr Ala Gln Ser Asn Thr

1085 1090 1095

Lys Leu Met Ala Gly Gly Asp Pro Arg Ile Pro Ala Ala Pro Gly

1100 1105 1110

Lys Val Ser Gly Glu Gln Lys Ala Leu Pro Gly Glu Leu Pro Gly

1115 1120 1125

Gly Trp Val Thr Ile Gln Asp Gly Ile Tyr Thr Ala His Pro Val

1130 1135 1140

Arg Thr Phe Asp Pro Pro Gly Gly Val Arg Pro Ser Glu Arg Gly

1145 1150 1155

Pro Leu Pro Arg Gly Arg Glu Thr Ala Pro Thr Ser Gln Pro Pro

1160 1165 1170

Ser Pro Phe Leu Glu Gly Pro Val Gln Ser Leu Arg Pro Glu Gln

1175 1180 1185

Glu Glu Pro Gly Gly Tyr Thr Gln Lys Ala Trp Glu Pro Pro Glu

1190 1195 1200

Lys Val Met Ala Glu His Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ala Pro Glu

1205 1210 1215

Thr Thr Leu Lys Ala Ala Pro Leu Ala His His Thr Leu Ala Ser

1220 1225 1230

Gly Pro Gly Ala Ala Asp Ala Ser Leu His Ser His Asn Ala Ser

1235 1240 1245

Val Pro Pro Pro Pro Leu Leu Pro Ala Ala Val Thr Arg Pro Asp

1250 1255 1260

Phe Pro Ala Arg Ala Gly His Asp Glu Asp Ser Ser Gln Gln Ala

1265 1270 1275

Ser Lys Pro Pro Gln Asp Pro Leu Leu Tyr Ser His Ser Ser Pro

1280 1285 1290

Ala Gly Gln Arg Ser Pro Gly Glu Ser Gln Ala Lys Thr Leu Lys

1295 1300 1305

Leu Glu Pro Thr Thr Cys Pro Arg Lys Lys Pro Gln Leu Pro Pro

1310 1315 1320

Lys Pro Ala His Leu Ser Gln Ile Pro Leu Pro His Trp Leu Pro

1325 1330 1335

Lys Pro Leu Ala Pro Ser Pro Ser Thr Ser Lys Glu Glu Gly Gln

1340 1345 1350

Gly Lys Cys Lys Gln Gly Glu Thr Gly Thr Ala Asp His Asp Thr

1355 1360 1365

Gln Pro Ala Lys Ala Pro Thr Thr Ala Gly Gln Gly Cys Ile Pro

1370 1375 1380

Leu Ala Arg Cys Pro Thr Gly Gln Ser Pro Pro Ser Pro Pro Tyr

1385 1390 1395

Gly Pro Ser Thr Thr Ala Phe Lys Pro Thr Lys Ser Gln Ala Met

1400 1405 1410

Ser Ser Asn Asn Gln Ser Pro Glu Ser Pro Lys Leu Ser Ala Pro

1415 1420 1425

Gly Ser Asp Pro Thr Ser Leu Gln Gln Gly Leu Ser Ser Pro Gly

1430 1435 1440

Glu Lys Tyr Met Asp Gly Ser Gln Gln Ala Ala Pro Arg Ser Pro

1445 1450 1455

Glu Ile Leu Gln Glu Ser Gln Gln Glu Leu Gln Gly Leu Leu Ser

1460 1465 1470

Gln Val Gln Ala Leu Glu Lys Glu Ala Lys Ser Thr Val Asp Val

1475 1480 1485

Arg Ala Leu Arg Arg Leu Phe Glu Ala Val Pro Gln Leu Arg Gly

1490 1495 1500

Ala Pro Pro Ala Pro Ala Ala Leu His Lys Pro Glu Ala Ser Val

1505 1510 1515

Glu Gln Ala Phe Gly Glu Leu Thr Arg Val Ser Thr Glu Val Ala

1520 1525 1530

Leu Leu Lys Glu Gln Thr Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Glu Lys

1535 1540 1545

Ala Val His Lys Ala Leu Ser Ser Met Ser Ser Leu Gln Pro Gly

1550 1555 1560

Thr Asn Thr Arg Gly His Pro Gln Gly Pro Pro Lys Asp His Ser

1565 1570 1575

Thr His Lys Val Asn Val Ser Asp Ser Ser Arg Ala Arg Pro Asn

1580 1585 1590

Cys Pro Ser Gln Glu Val Gly Gly Pro Thr Glu Val Arg Ser Gln

1595 1600 1605

Thr Asp Gly Thr Cys Pro Thr Glu Ile Trp Ser Gln Ala Lys Val

1610 1615 1620

Arg Ser Pro Thr Glu Ala Arg Ser Gln Ala Ser Leu Pro Thr Ser

1625 1630 1635

Thr Thr Arg Arg Leu Asp Thr Leu Arg Glu Asp Trp Gly Leu Pro

1640 1645 1650

Arg Val Leu Pro Pro Ser Arg His Ser Pro Ser Ser Pro Thr Phe

1655 1660 1665

Ile Ser Ile Glu Ser Ala Thr Arg Lys Leu Pro Glu Ala Pro Arg

1670 1675 1680

Pro Gln Gly Ser Pro Asp Val Ser Val Lys Ser Thr His Leu Ser

1685 1690 1695

Gln Asp Val Gly Gln Ala Gln Leu His Gln Lys Asp Val Gln Asp

1700 1705 1710

Lys Ala Arg Lys Arg Glu Ala Thr Glu Cys Ser Gly Gln Pro Gln

1715 1720 1725

Pro Ala Pro Ala Ser Ala Ser Pro Leu Pro Thr Gly Arg Gln Lys

1730 1735 1740

Ser Ile Leu Glu Leu Gln Thr Gly Pro Gly Gly Ser Gln Cys Tyr

1745 1750 1755

Arg Ala Thr Arg Thr Val Asn Glu Gln His Glu Arg Val Asn Gln

1760 1765 1770

Cys Gly Asn Thr Ala Leu Thr Phe Pro Thr Met Val Thr Glu Pro

1775 1780 1785

Thr Glu Leu Thr Lys Val Pro Arg Pro Pro Pro Arg Cys Ser Thr

1790 1795 1800

Pro Pro Pro

1805

Claims

1、一种猪背膘厚相关性状的分子标记，它的核苷酸序列在序列表SEQ ID NO：1的1552bp处有1个G1552-A1552的碱基替换，该替换引起氨基酸由精氨酸变成组氨酸；导致NcoI-RFLP多态性；在序列表SEQ ID NO：1的1909bp处有1个A1909-G1909的碱基替换，该替换引起氨基酸由天门冬氨酸变成甘氨酸，导致HaeIII-RFLP多态性；在序列表SEQ IDNO：1的3448bp处有1个A3448-C3448的碱基替换，该替换引起氨基酸由天冬酰胺变成苏氨酸，导致RsaI-RFLP多态性。

2、权利要求1所述的分子标记在猪标记辅助选择中的应用。