CN101386852B - 与猪肉质性状相关的分子标记的克隆及应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于家畜分子标记制备技术领域，具体涉及一种作为猪标记辅助选择应用的与猪肉质性状相关的分子标记的制备与应用。所述的分子标记由CMYA5基因克隆得到，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所述。在序列表SEQ ID NO：1的第7189bp处有1个A7189-C7189的碱基替换，导致BspT I-RFLP酶切多态性。本发明还公开了扩增CMYA5基因部分DNA序列所用的引物以及用于多态性检测方法，为猪的标记辅助选择提供了一个新的分子标记。

Description

与猪肉质性状相关的分子标记的克隆及应用

技术领域

本发明属于猪的分子标记辅助选择技术领域，具体涉及一种作为猪标记辅助选择的与肉质性状相关的分子标记的克隆及应用，该分子标记与CMYA5基因有关，利用本发明克隆的分子标记与猪肉质相关的性状进行关联分析。

背景技术

随着人们生活水平的提高以及膳食结构与饮食观念的变化，消费者对肉质提出了更高的要求，色香味俱全的营养优质猪肉成为当前畜牧业发展的首要任务。猪肉品质是一个多因素综合指标。肉质性状包括肌肉颜色(肉色)评分(muscle color score)、肌肉pH值(muscle pH value)、肌肉失水率(water losingpercentage)、滴水损失(drip loss)、肌肉剪切力(muscle shear force)、肌肉大理石纹评分(marbling score)、肌内脂肪含量(intramuscular fat content)、肌纤维直径(diameter of fibers)、嫩度(subjective tendernessscore)、风味(subjective flavor score)、多汁(subjective juiciness score)等。

猪肉质性状为屠宰后测定的性状，因而在选育实践中不能进行直接选择。因此标记辅助选择是肉质性状选择的唯一有效途径。随着分子生物学技术的飞速发展以及猪基因组计划的顺利进行，使得猪重要经济性状的QTL定位以及候选基因的鉴定工作取得了重要进展，目前已经鉴定出的影响猪肉质性状的主效基因包括：

1)氟烷基因(halothane gene，Hal)：又称氟烷敏感基因或猪应激综合征基因或兰尼定受体1基因，即RYR1基因，是影响猪肉质的主效基因，它能导致灰白水样肉(Pale，soft，exudative pork，PSE肉)。Fujii等(Fujii J等，Identification of a mutation in porcine ryanodine receptor associated with malignant hyperthermia.Science，1991，253：448-51)对氟烷基因的克隆分析和比较发现，正常猪和应激猪的C1843→T1843突变使受体蛋白第615位的精氨酸(Arg)变为半胱氨酸(Cys)，引起兰尼定受体蛋白结构和功能的改变，这种改变导致PSE肉的产生。

2)酸肉基因(rendement napole，RN)：RN基因是一个显性遗传基因，是Le Roy等(Le Roy P等，Evidencefor a new major gene influencing meat quality in pigs.Genet Res.，1990，55：33-40)最先提出的，包括突变的显性基因RN-和正常的隐性基因rn⁺。其中RN^-为不利等位基因，它可以使肌肉中肌糖原含量升高，终端pH值降低，造成酸肉。该基因被定位于15号染色体的p2.1-2.2(Milan D等，Accurate mapping of ″theacid meat″RN gene on genetic and physical maps of pig chromosome 15.Mamm Genome.，1996，7：47-51)。

3)心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)：Urban等(UrbanT等，A study of associations of the H-FABP genotypeswith fat and meat production of pigs.J Appl Genet.，2002，43：505-9)检测了H-FABP-HinfI在97头大白和长白猪中的多态性发现该多态位点与肌内脂肪含量存在相关趋势(P＝0.06)。Arnyasi等(Arnyasi M等，Investigation of two candidate genes for meat quality traits in a quantitative trait locus region on SSC6：theporcine short heterodimer partner and heart fatty acid binding protein genes.J Anim Breed Genet.，2006，123：198-203)研究表明心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)与肌内脂肪存在显著关联。高妍(高妍，猪H-FABP基因遗传多态性及与肉质性状的相关分析.吉林大学硕士学位论文，2007)研究表明H-FABP-Hinf I(T1324C)多态性与肌内脂肪含量以及长白猪肉色显著关联；H-FABP-Msp I(T1489C)多态性与PIC猪肌内脂肪含量以及杜洛克失水率、大白滴水损失显著关联；H-FABP-HaeIII(C1811G)多态性与肌内脂肪含量、PIC猪大理石纹、大白剪切力显著关联。

4)钙蛋白酶抑素(CAST)基因：Ciobanu等(Ciobanu DC等，New alleles in calpastatin gene are associatedwith meat quality traits in pigs.J Anim Sci.，2004，82：2829-39)检测了钙蛋白酶抑素(CAST)基因编码区多个SNPs，发现该基因与剪切力性状存在显著关联，与多汁性状存在极显著关联。程丰等(程丰等，猪CAST基因PCR-RFLPs与肉质相关性的分析.河南农业科学，2006，2：103-104)在新荣昌I系猪(70头)中检测了CAST基因的多态性，结果显示CAST-Msp I酶切位点中DD基因型与肌内脂肪含量存在显著正关联；CAST-RsaI酶切位点中EF基因型与失水率存在显著负关联。Krzecio等(Krzecio E等，Association ofcalpastatin(CAST/MspI)polymorphism with meat quality parameters of fatteners and its interaction with RYR1genotypes.J Anim Breed Genet.，2005，122：251-8)在4个杂交群体共计201头个体中检测得出CAST-MspI基因型与滴水损失存在显著关联。Xue等(Xue HL等，Genetic polymorphisms and genetic effects of CASTgene in pigs.Fen Zi Xi Bao Sheng Wu Xue Bao.，2007，40：403-9)利用PCR-RFLP方法研究了CAST基因A317G和G2042C位点在多态性，并与经济性状进行关联分析，结果显示这2个位点的单倍型与肌肉嫩度存在显著关联(P<0.05)。

与本发明关联的目的基因的研究进展：CMYA5基因(cardiomyopathy associated 5：原发性心肌症相关蛋白5)又名myospryn、genethonin 3、TRIM76或DTNBP2(dystrobrevin binding protein 2)基因。该基因在人上位于5q14.1，在小鼠上位于13C3。

肌营养不良蛋白基因突变引起肌营养障碍缺陷，进而引起进行性假肥大性肌营养不良症(DMD)。为了探索肌营养不良症的分子机制，Tkatchenko等(Tkatchenko AV等，Identification of altered gene expressionin skeletal muscles from Duchenne muscular dystrophy patients.Neuromuscul Disord.，2001，11：269-77)分析了DMD骨骼肌以及正常肌肉中差异表达基因，发现genethonin 3基因的表达量几乎降低了10倍。Benson等(Benson MA等，Myospryn is a novel binding partner for dysbindin in muscle.J Biol Chem.，2004，279：10450-8)通过酵母双杂交筛选dysbindin在肌肉组织中的互作蛋白得到myospryn。myospryn基因编码3739个氨基酸，其分子量为413.1kDa，等电点为4.71。它只在骨骼肌和心肌中表达。myospryn氨基端含有19拷贝的12个氨基酸的重复序列，羧基端含有BBC，FN3以及SPRY结构域，说明该蛋白属于TRIM蛋白家族。通过免疫共沉淀实验得出dysbindin和myospryn共定位在一起，其作用位点是dysbindin的卷曲螺旋结构。通过以上结果，作者推断myospryn是dysbindin在肌肉组织的特异配体。Durham等(Durham JT等，Myospryn is a direct transcriptional target for MEF2A that encodes a striated muscle，alpha-actinin-interacting，costamere-localized protein.Biol Chem.，2006，281：6841-9)利用DNA芯片技术检测野生型小鼠和MEF2A基因敲除小鼠中差异表达基因，其中一个表达量下降2倍的基因与人CMYA5基因同源。该基因片段大小为12kb，与心肌线粒体Z线蛋白α辅肌动蛋白互作，并且亚细胞定位结果显示该基因位于胞质。该基因直接位于MEF2A下游，因此作者推测其参与肌纤维的发生过程。myospryn转录本起始位点上游-220bp存在cAMP效应元件(cAMP-response element，CRE)结合蛋白(CRE binding protein，CREB)结合位点，其序列是TAACGTTA。CREB是PKA信号通路的主要效应分子。并且Reynolds等(Reynolds JG等，DeregulatedPKA signaling and myospryn expression in muscular dystrophy.J Biol Chem.，2008 Feb 5[Epub ahead of print])通过转录活性实验以及CRE位点突变实验得出myospryn是PKA-CREB信号转导通路的下游靶基因。

通过以上资料我们可以得出CMYA5基因在构建细胞骨架、调节肌肉发育中发挥重要作用。但是其功能研究还不是很透彻，而且目前国内外对CMYA5基因的研究进展主要集中在小鼠以及人上，未见任何有关猪的该基因的报道。寻找该基因中的变异位点，通过与性状间的关联分析发现基因与性状间的关系是研究基因功能的一个重要手段，也是进行标记辅助选择的基础。为此开展了猪CMYA5基因的克隆、定位和SNP检测及与性状关联分析。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，克隆一种作为猪标记辅助选择的与猪肉质性状相关的分子标记，并将该分子标记作为猪的标记辅助选择的应用。

本发明通过以下技术方案实现：

申请人从猪CMYA5基因片段中克隆得到一种作为猪标记辅助选择的与生长速度相关的分子标记，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。在SEQ ID NO：1所示序列的第7189位碱基处有一个A7189-C7189的碱基替换，该替换引起氨基酸由异亮氨酸变成亮氨酸，并导致BspT I-RFLP酶切多态性。

其中用于检测SEQ ID NO：1所示序列的第7189位碱基处有一个A7189-C7189的碱基替换的引物对的DNA序列如下所示：

正向引物：5’-ACATAATACCAGAGCCCAAAC-3’，

反向引物：5′-CTTTTGTGGCACTTTATCTACT-3′。

制备上述分子标记的方法，按照以下步骤：

从猪血液基因组中提取DNA，用人CMYA5基因cDNA为信息探针，作同源序列筛选，获得同源性80％以上的表达序列标签(EST)；然后拼接猪EST-重叠群，设计引物扩增中间未知片段，纯化克隆测序；通过序列分析获得如序列表SEQ ID NO：1所述的核苷酸序列(序列全长为12056bp，其编码区(CDS)是从第1个碱基开始到12009位碱基处)。

申请人将上述克隆的分子标记成功地应用于与猪肉质相关性状标记辅助选择的关联分析上，从而完成了本发明。

附图说明

序列表SEQ ID NO：1是本发明克隆的作为猪肉质相关性状标记的CMYA5基因片段，序列全长为12056bp，其编码区(CDS)是从第1个碱基开始到12009位碱基处)；

图1：是本发明CMYA5基因制备的流程图；

图2：是本发明中猪CMYA5基因用于定位的DNA片段。所用的引物序列用下划线标注(括号内为突变的碱基)；

图3：是本发明中猪CMYA5基因用于PCR-RFLP检测的DNA片段。所用的引物序列用下划线标注；

图4：是本发明中猪CMYA5基因BspTI-RFLP的三种基因型(AA，AC，CC)电泳结果。图中M：DNA分子量标准(DL2000)。

具体实施方式

实施例1、CMYA5基因的克隆

1、引物设计

用人CMYA5基因cDNA(GenBank收录号：NM_153610)为信息探针，利用NCBI中的BLAST工具在GenBank猪EST数据库中做同源序列筛选，获得一系列同源性为80％以上的ESTs(片段长度大于100bp)，将这些ESTs的收录号在NCBI中用ENTREZ(http://www.ncbi.nm.nih.gov/Web/Search/index.html)查询相应序列，然后用GeneTool中的ASSEMBLY程序构建猪EST-重叠群。根据EST拼接序列设计5对引物CMYA5P-1F和CMYA5P-1R，CMYA5P-2F和CMYA5P-2R，CMYA5P-3F和CMYA5P-3R，CMYA5P-4F和CMYA5P-4R，CMYA5P-5F和CMYA5P-5R，引物信息请参见表1。

表1  猪CMYA5基因分离的引物信息和PCR扩增条件

2、PCR产物的纯化、克隆和测序

PCR产物的纯化：在紫外灯下从低熔点琼脂糖凝胶上切下含目的片段的凝胶，放入1.5ml Ependorff管中，于70℃温育至凝胶完全融化，然后用PCR产物纯化试剂盒(购自Promega公司)纯化PCR产物，按照试剂盒说明书操作，具体步骤是在每300μl融化的凝胶中加入1ml Resin，混匀20s，将Resin/DNA混合物装入注射器，使浆液通过Minicolumn挤出。再在注射器中加入80％的异丙醇2ml，轻推活塞使异丙醇通过Minicolumn挤出，取下Minicolumn装入1.5ml Ependorff管中，10,000g离心2min以干燥Resin，将Minicolumn装入另一个干净的1.5ml Ependorff管中，加入30～50μl灭菌水，静置1min，10,000g离心20s，以洗脱DNA存于Ependorff管中。

连接反应：将纯化的PCR产物与pGEM-T载体连接，连接反应总体积是5μl，其中包括2.5μl2×buffer，0.5μl的T载体(购自Promega公司)，0.5μl的纯化PCR产物，0.5μl的T4连接酶，最后加入1μl灭菌水置4℃水浴过夜。

感受态细胞的制备：从37℃培养了16～20h的新鲜平板上挑取一个DH5α单菌落接种于2ml LB中，于37℃振荡培养3h，转接1ml菌液于含有30ml LB的盐水瓶中，继续在37℃振荡培养约4h，待OD600达到0.3～0.4时将盐水瓶从摇床取出置冰浴冷却10～15min，然后将菌液转入离心管中于4℃4,000g离心10min以收集细胞，将离心管倒置以弃净培养液，用10ml冰预冷的0.1mol/L的CaCl₂重悬沉淀，冰浴30min，重复4℃4,000g离心10min一次，用4ml冰预冷的0.1mol/L的CaCl₂重悬沉淀，置4℃保存备用。

转化：无菌状态下取100～120μl感受态细胞于1.5ml Ependorff管中，将5μl的连接产物加入混匀，在冰上放置30min，42℃热激90s，其间不要摇动Ependorff管，取出后冰浴3～4min，加入400μl无抗生素的LB液体培养基，37℃振荡培养45min。取100μl涂布于已提前4h涂布了IPTG(Isopropylthio-β-D-galactoside，中文名称为异丙基硫代—β-D—半乳糖苷)和X-gal的琼脂平板上，37℃平放1h后倒置培养。

质粒的小量制备：挑取平板上的单菌落，接种于2—3ml LB中，37℃300r/min培养过夜。用1.5ml EP管12000r/min离心数秒收集菌体。每管加入100μl用冰预冷的溶液I[50mM葡萄糖，25mM Tris.Cl(pH8.0)，10mM EDTA(pH8.0)]，涡旋振荡至菌体充分悬浮。加入新配制的溶液II[0.2M NaOH，1％SDS]200μl，快速颠倒混匀，冰浴5min，然后加入预冷的溶液III[5M乙酸钾，冰乙酸11.5ml，H2O28.5ml]150μl，混匀后冰浴5min，12000r/min离心5min，将上清转至另一EP管中，加入苯酚：氯仿：异戊醇500μl，涡旋振荡，离心后小心吸取上层水相，加入2倍体积的无水乙醇，—20℃沉淀30min，12000r/min离心5min，沉淀用70％乙醇洗涤2次，抽干，加入含有RNA酶的TE20μl。

重组质粒的酶切鉴定：取3μl质粒DNA与适量的双蒸水混匀，使其总体积为15μl，加入2—3U限制性内酶EcoR I及2μl相应的10X限制性内切酶反应缓冲液，轻弹管壁混匀并离心，置37℃水浴1—2小时，取2—3μl反应液于琼脂糖凝胶电泳检测，酶切结果与预计完全相同者，即为目的重组质粒。重组质粒采用双脱氧末端终止法在DNA自动测序仪上进行测序，序列测定由北京奥科生物技术有限公司完成。用GeneTool1.0软件中的ASSEMBLY程序进行拼接，得到一条长度为12056bp的cDNA序列(见SEQ ID NO：1所述)。

cDNA序列同源性检索鉴定：

通过美国国家生物技术信息中心(NCBI，National Center for Biotechnology Information，http://www.ncbi.nlm.nih.gov)网站的BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)软件，将测序后获得的cDNA序列与GenBank数据库中公布的已知生理功能基因进行序列同源性比较，以鉴定和获得该cDNA序列的功能信息。检索结果表明获得的该条序列与人CMYA5基因cDNA(GenBank收录号：NM_153610)的序列同源性达81％。

实施例2、CMYA5基因的定位

1、用于基因定位的引物序列

CMYA5M-F：5’-GACTACACCACCCAGAGGCT-3’

CMYA5M-R：5’-AAACAGACACCCCGAAGG-3’

该引物扩增片段长度为267bp。

2、用于基因定位的实验材料

用法国Minnesota大学构建的猪辐射杂种板(INRA-Minnesota porcine radiation hybrid panel，IMpRH)进行染色体精确定位，该杂种板由法国Martin Yerle博士(Laboratoire de Génétique Cellulaire，INRA，Castanet-Tolosan，France)惠赠。

IMpRH使用的辐射剂量是7,000-rad。IMpRH包括118个猪×仓鼠辐射杂种细胞系，以及仓鼠和猪基因组DNA阳性对照，用757个标记的鉴定结果表明IMpRH中的平均标记存留率为29.3％，包含有128个连锁群，覆盖了18对常染色体及X染色体，用于估计标记间距离的kb/cR比值是～70kb/cR(1Ray＝100cR)，理论分辨率是145kb。各细胞系中所包含的猪染色体及染色体片段信息可从WWW(http://www.toulouse.inra.fr/lgc/lgc.html/)获得。

3、PCR分型条件

PCR反应总体积为10μl，其中模板DNA为20ng，含1×buffer(Promega)，1.5mmol/L MgCl₂，dNTP终浓度为150μmol/L，引物终浓度为0.4μmol/L，2U Taq DNA聚合酶(Promega)。PCR扩增程序是：94℃5min，循环35次94℃ 30s，60℃ 30s，然后72℃ 20s，最后72℃延伸5min。PCR反应产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测，IMpRH分型结果见表2。

表2  CMYA5基因在IMpRH中的PCR分型结果

^a表中的分型结果中的“1”阳性克隆，扩增出目的带，“0”表示阴性克隆，未扩增出目的带，“？”表示不能确定。

将以上的检测结果提交网站(http://www.toulouse.inra.fr/lgc/lgc.html/)，统计分析结果，CMYA5基因位于猪2q21-24，与微卫星SW1602紧密连锁，LOD值为6.74。

实施例3、PCR-RFLP诊断方法的建立

1、引物序列

CMYA5SF：5’-ACATAATACCAGAGCCCAAAC-3’

SR：5’-CTTTTGTGGCACTTTATCTACT-3’

该引物扩增片段长度458bp。

2、PCR扩增条件

PCR反应总体积20μl，其中猪基因组DNA约100ng，含1×buffer(Promega)，1.5mmol/L MgCl₂，dNTP终浓度为150μmol/L，引物终浓度为0.4μmol/L，2U Taq DNA聚合酶(Promega)。PCR扩增程序是：94℃5min，循环35次94℃ 30s，60℃ 30s，然后72℃ 30s，最后72℃延伸5min。PCR反应产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测。

3、RFLP检测条件

PCR产物酶切反应体积是10μl，其中10×buffer 1μl，PCR产物3～5μl，限制性内切酶BspTI为0.3μl(10U/μl)，用H₂O补足10μl，将样品混匀后离心，37℃水浴4h，用2％琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果，记录基因型，在紫外灯下拍照。对该位点两个纯合子的测序结果显示，当第384bp位置是A时，则该BspTI酶切位点不存在，BspTI酶切后检测结果只有1个片段，长度是458bp(定为等位基因A)；但存在A384→C384的碱基替换时，其结果导致第384bp处一个BspTI酶切位点的产生，得到2个片段，长度分别为384bp和74bp(定为等位基因C)，三种基因型AA，AC，CC，见图4所示。

4、PCR—RFLP—BspTI多态性在各猪品种中的分布情况

利用PCR-RFLP-BspTI检测了6个不同中外猪品种：其中具有国外猪血缘的猪种分别是杜洛克、长白和大白猪，具有中国地方猪血缘的猪种分别是通城、清平和小梅山猪。该突变位点在不同猪种中的基因型和基因频率如表3所示，结果显示结果显示在长白中A等位基因占优势，在其它品种中C等位基因占优势，在清平以及小梅山中C等位基因频率接近或等于1。对猪CMYA5基因多态性位点基因频率在不同品种中的分布差异进行检验，差异显著性结果见表4。分析结果表明该位点基因频率在所检测的这6个猪品种中，长白与检测的其它所有品种差异极显著(P<0.01)；杜洛克与除通城外的其它检测品种差异极显著(P<0.01)；大白与除通城外的其它检测品种差异极显著(P<0.01)；小梅山与除清平外的其它检测品种猪差异极显著(P<0.01)。

表3  6个猪品种CMYA5基因的BspTI-RFLP的基因型以及基因频率分布情况

表4  CMYA5基因的BspTI-RFLP基因型分布x²检验结果

注：肩注^*表示P<0.05，肩注^**表示P<0.01；df＝2，χ² _0.05(df＝2)＝5.99，χ² _0.01(df＝2)＝9.21

5、本发明的分子标记在猪肉质性状关联分析中的应用

试验共检测了193头猪个体：中国地方猪通城纯种45头，外来猪大白纯种27头，长白纯种24头，中国地方猪与外来猪的杂交猪大长通(大白×(长白×通城))43头、长大通(长白×(大白×通城))54头的多态，确定其基因型，并进行基因型与经济性状(出生至上市平均日增重、胴体直长、胴体斜长、腿臀比率、腿臀肉骨率、板油率、皮脂重、失水率、肌内脂肪含量、肉色、眼肌面积、臀部膘厚)的关联分析。

利用SAS(视窗V8版)GLM程序对一些性状在不同基因型之间的差异进行最小二乘方差分析。线性模型：

Y_ijklmn＝μ+G_i+B_j+S_k+C_l+F_m(C)+ε_ijklmn

其中，Y_ijklmn为性状观察值，μ为重复数相等时的性状总平均数，G_i为基因型效应，B_j为屠宰批次效应，S_k为性别效应，C_l为组合效应，F_m(C)为组合内的家系效应，ε_ijklmn为随机误差，假定服从N(0，σ²)分布。

基因型检测结果表明在193头个体中AA基因型，有27头个体，AC基因型有69头个体，CC基因型有87头个体。基因型与性状关联分析的结果如表5所示。

表5  CMYA5基因BspTI-RFLP多态不同基因型与部分生产性状的关联分析

注：^*表示P<0.05。

由表5可知，CMYA5基因SNP位点对失水率有显著影响(P<0.05)，此位点对其它肉质性状如屠宰后24小时pH值、剪切力以及肌内脂肪含量存在相关趋势。对肉质性状有显著影响的CMYA5基因的不同基因型的最小二乘均数如表6所示。

表6  CMYA5不同基因型(A7189C)与肉质性状的关联分析

注：^**表示P<0.01，^*表示P<0.05。

表6表明，AC基因型个体屠宰后24小时pH值以及剪切力较低，CC基因型个体的失水率以及肌内脂肪含量较低。其中，AC基因型个体的失水率与CC型个体存在极显著差异(P<0.01)，AC基因型个体的肌内脂肪含量与CC型个体存在显著差异(P<0.05)。

序列表

110>华中农业大学

<120>与猪肉质性状相关的分子标记的克隆及应用

130>

<141>2008-10-24

60>1

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>12056

<212>DNA

<213>猪(Sus scrofa)

<220>

<221>gene

<222>(1)..(12056)

<223>

<220>

<221>mutation

<222>(7189)..(7189)

<223>

<400>1

Claims (3)

1.一种克隆的与猪肉质性状相关的分子标记，它的核苷酸序列是序列表SEQ ID NO：1所示序列在第7189位碱基处有1个A7189-C7189碱基替换的序列，并导致BspT I-RFLP酶切多态性。

2.检测权利要求1所述分子标记的碱基替换的引物对，其DNA序列如下所示正向引物：5’-ACATAATACCAGAGCCCAAAC-3’，反向引物：5’-CTTTTGTGGCACTTTATCTACT-3’。

3.权利要求1所述的分子标记在猪肉质性状相关辅助选择中的应用。

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