CN101357952A

CN101357952A - 一种具有降血脂活性的贻贝多糖ma及其制备方法

Info

Publication number: CN101357952A
Application number: CNA2008102000231A
Authority: CN
Inventors: 易杨华; 李玲; 马明华; 张文; 储智勇; 李树林
Original assignee: Second Military Medical University SMMU
Current assignee: Second Military Medical University SMMU
Priority date: 2008-09-18
Filing date: 2008-09-18
Publication date: 2009-02-04
Anticipated expiration: 2028-09-18
Also published as: CN101357952B

Abstract

本发明涉及医药技术领域，是一种从紫贻贝中分离到的贻贝多糖MA及其制备方法。经动物体内降血脂试验表明，贻贝多糖MA对高脂饲料诱导的大鼠高脂血症有明显的治疗作用，可降低大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平，作用与阳性药普伐他汀或血脂康相当。因此，贻贝多糖MA可用于制备降血脂的药物或食品。本发明对充分利用海洋生物资源具有重要意义。

Description

一种具有降血脂活性的贻贝多糖MA及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是一种从海洋生物紫贻贝中分离到的多糖MA及其制备方法。

背景技术

紫贻贝(Mytilus galloprovincialis Lamarck)为贻贝科(Mytilidae)贻贝属(Mytilus)的海洋生物，广泛分布于中国沿海。紫贻贝呈楔形，壳质较轻薄，但较坚韧，壳长一般70～90mm，呈黑褐色或紫褐色，表面光滑。紫贻贝资源丰富，产量高，肉味鲜美，营养丰富，是高级蛋白的重要来源。除可鲜食外，又可制成罐头、贻贝油和干制品等美味食品。在药用方面除用做滋补品和药剂外，它又是提取维生素D的重要原料(王祯瑞.中国动物志.软体动物门.双壳纲：贻贝目.第1版.北京：北京科学出版社.1997：50-55)。现代药理学研究认为贻贝有多种药理活性，包括抗动脉粥样硬化，降血脂，抑制血小板的凝聚从而抑制血栓的形成，改善心肌氧和营养物质的供应及保护实验性心肌缺血，改善微循环和降血压等(邵伯芹等.贻贝多活素对大鼠肠系膜微循环的影响.中国药理学通报，1997，13(3)：260-262)。但至今未见从海洋生物紫贻贝中分离到具有降血脂活性的贻贝多糖MA的相关报道。

发明内容

本发明提供一种具有降血脂活性的贻贝多糖MA及其制备方法。

本发明从生长于中国浙江海域的紫贻贝中提取分离到的贻贝多糖MA的制备方法如下：

1.多糖的提取

将紫贻贝贝肉鲜品用搅碎机制备成匀浆，用水煮沸提取2次，第一次加3倍体积水，提取2小时，第二次加2倍体积水，提取1小时，离心过滤，合并滤液，将滤液浓缩后加4倍体积95％乙醇，搅匀，放置5小时，待沉淀完全析出，倾去上清液，沉淀中加入等体积95％乙醇，搅匀，离心过滤，沉淀物用等体积无水乙醇洗涤3次离心抽干，再按常规经2次Savager法除蛋白，蒸馏水溶解后，冷冻干燥即得到贻贝多糖粗品。

2.分离纯化

将粗品溶于0.05mol□L^-1的NaCl溶液中，离心去除不溶物后，按常规上DEAE-cellulose柱，用0.05mol□L^-1的NaCl洗至无糖检出时为止，流速30mL□h^-1，用硫酸-苯酚法跟踪检测，收集洗脱部分，用截流分子量为3000的滤膜超滤杯加压脱盐浓缩，得到均一的贻贝多糖MA。

贻贝多糖MA为白色絮状物，较易溶于水和二甲基亚砜，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，硫酸-苯酚反应呈阳性，HPGFC检测为单一对称峰，MA的相对分子量为112,700左右。IR(KBr)cm^-1：3423(羟基)，1636(乙酰氨基)，1154、1080、1021(糖环醚键)，847(α-糖苷键)。硫酸咔唑法测定MA的糖醛酸含量为6.759％。¹HNMR谱确定MA的端基质子为α-吡喃己糖(δ5.248)。用GC-MS法对MA的酸水解产物进行组分分析，结果表明MA由阿拉伯糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖胺和半乳糖组成，摩尔数比例依次为0.381、0.081、0.080、97.272、0.587、0.968和0.631。Smith降解后做GC-MS分析，检出物有大量的葡萄糖，少量的氨基糖、甘油及微量的岩藻糖、甘露糖、半乳糖，没有赤藓醇检出。由此证明多糖MA存在的连接方式有1□3，1□6，1□2且比例约为80.390∶13.434∶6.176，其主链为1□3连接，还有少量的1□6连接，支链为1□2连接。

经动物试验表明，贻贝多糖MA具有明显的降血脂活性，因此，可用于制备降血脂的药物或食品。

具体实施方式：

现结合实施例，对本发明作详细描述。

实施例1.贻贝多糖MA的制备

取生长于中国浙江嵊泗海域的紫贻贝鲜品16千克，用搅碎机制备成匀浆，水煮沸提取2次，第一次加3倍体积水，提取2小时，第二次加2倍体积水，提取1小时，离心过滤，合并滤液，将滤液浓缩后加4倍体积95％乙醇，搅匀，放置5小时，待沉淀完全析出，倾去上清液，沉淀中加入等体积95％乙醇，搅匀，离心过滤，沉淀物用等体积无水乙醇洗涤3次离心抽干，再经2次Savager法除蛋白，蒸馏水溶解后，冷冻干燥即得到贻贝多糖粗品约960g。取该粗品约6g溶于10ml 0.05mol□L^-1的NaCl溶液中，离心去除不溶物后，上DEAE-cellulose柱，用0.05mol□L^-1的NaCl洗至无糖检出时为止，流速30mL□h^-1，用硫酸一苯酚法跟踪检测，收集洗脱部分，用截流分子量为3000的滤膜超滤杯加压脱盐浓缩，得到均一多糖MA约486mg。

动物降血脂试验

取70只SD大鼠(购自复旦大学实验动物科学部)，体重180±10g，随机分组，每组10只，雌雄各半，共分7组：正常对照组、模型对照组、阳性药普伐他汀组、阳性药血脂康组以及贻贝多糖MA低、中、高剂量组。各组以基础饲料喂养一周，分别眼眶取血少量，检测血清总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)。然后，除正常对照组仍喂食基础饲料外，其余各组喂食高脂饲料4周，使其成为高脂动物模型。将药物分别用蒸馏水配成相应浓度的溶液，除正常对照组每鼠灌胃1毫升蒸馏水外，其余各组每鼠灌胃1毫升相应药液，按体重给药剂量为：普伐他汀2mg/kg、血脂康1mg/kg、贻贝多糖MA低、中、高剂量组分别为25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg，每天一次，连续4周，每周称重一次。最后一次给药后大鼠隔夜禁食，腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg眼眶取血，分离血清，测血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白。结果见表1：

表1.各组大鼠血清中血脂水平测定结果比较

(单位：mmol/L)

^##P＜0.01与正常对照组比较；*P＜0.05 **P＜0.01与模型对照组比较。

由表1可见，大鼠喂饲高脂饲料4周后，模型对照组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白较喂饲基础饲料的正常对照组有非常显著的升高(P＜0.01)。各药物治疗组与模型对照组比较，能降低大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平，差异显著或非常显著(P＜0.05或P＜0.01)。贻贝多糖MA低、中、高三个剂量组(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)与阳性对照药普伐他汀、血脂康组相比，降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平相当，表明贻贝多糖MA具有良好的降血脂作用，因此可用于制备降血脂的药物或食品。本发明对开发利用海洋药用生物资源具有重要意义。

Claims

1.贻贝多糖MA的制备方法，具体步骤如下：

1)多糖的提取：

将紫贻贝贝肉鲜品用搅碎机制备成匀浆，用水煮沸提取2次，第一次加3倍体积水，提取2小时，第二次加2倍体积水，提取1小时，离心过滤，合并滤液，将滤液浓缩后加4倍体积95％乙醇，搅匀，放置5小时，待沉淀完全析出，倾去上清液，沉淀中加入等体积95％乙醇，搅匀，离心过滤，沉淀物用等体积无水乙醇洗涤3次离心抽干，再经2次Savager法除蛋白，蒸馏水溶解后，冷冻干燥即得到贻贝多糖粗品；

2)分离纯化：将贻贝多糖粗品溶于0.05mol口L^-1的NaCl溶液中，离心去除不溶物后，上DEAE-cellulose柱，用0.05mol□L^-1的NaCl洗至无糖检出时为止，流速30mL□h^-1，用硫酸-苯酚法跟踪检测，收集洗脱部分，用截流分子量为3000的滤膜超滤杯加压脱盐浓缩，得到均一的贻贝多糖MA。

2.权利要求1所述方法制备的贻贝多糖MA，其特征在于由阿拉伯糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖胺、半乳糖胺组成，摩尔比依次为：0.381、0.081、0.080、97.272、0.587、0.968和0.631。

3.权利要求2所述贻贝多糖MA在制备降血脂药物或食品中的应用。