CN112094878A - 一种二步酶提取香菇多糖的方法、香菇多糖提取物及其应用 - Google Patents
一种二步酶提取香菇多糖的方法、香菇多糖提取物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种二步酶提取香菇多糖的方法、香菇多糖提取物及其应用。所述方法首先使用纤维素酶和乙醇活化剂在温度35～45℃的条件下进行提取，渣料再用净水二次提取，提取液合并后调节pH为6～6.8左右，在温度40～50℃条件下静置聚合反应12小时以上，去除沉淀，上清液减压浓缩至比重1.2～1.25的浸膏，最后在温度上限≤60℃，下限≥50℃的条件下干燥。所述方法便于工业化实施，显著提高了多糖得率和单位含量，提取物为水全溶物，并最大程度地保留了原料中的有效成分。细胞和动物试验证实，所述香菇多糖提取物对帕金森病具有良好的防治作用。
Description
技术领域
本发明涉及植物活性成分提取领域，具体地说，涉及一种二步酶提取香菇多糖的方法、香菇多糖提取物及其应用。
背景技术
香菇是药食两用的天然植物，从野生采摘到人工种植，多少年来留下了非常好的口碑。以现代工艺研究的结果，已基本解析了香菇美味是含有丰富的氨基酸，不仅品种齐全而且含量占12％以上。除了营养滋补外，香菇还具有药用功能，它含有高分子量的多糖。香菇多糖是从香菇子实体中提取的多糖，它是由半乳糖，甘露糖，鼠李糖，木糖，阿拉伯糖，β-吡喃多糖等十多种糖官能团聚的聚合物，分子量大，功效明确。研究表明香菇多糖对原发性肿瘤具有显著的抑制作用，可防止化学和病毒等因素的致癌作用，抑制肿瘤病灶转移，增强对细菌、病毒(包括艾滋病毒)、寄生虫致病的抵抗力。香菇多糖不是与这些致病因子拮抗，而是通过刺激体内免疫系统的活性，促使整体平衡达到恢复健康，且它没有因化学反应残留的致病物，长期服用也没有副作用或耐药性，因此又是治未病的保健品。
国内在九十年代末就有香菇多糖蛋白提取工艺的专利(CN1240137A，公开日2000.01.05)，至今已有许多企业单位在做香菇提取和相关产品，研究单位也很多，综合各种信息，归纳下来有几个特点：1)香菇多糖是一种杂多糖，绝对提纯工艺难度大也不利功效的完整；2)香菇体中含有如蛋白，果胶类的粘性混合物，阻碍了不同单糖官能团的聚合，影响了最后成品多糖的单位含量，这就是目前市场上许多香菇多糖单位含量低的因素之一；3)香菇多糖提取工艺的研究真正能运用到企业上大规模生产的只有不同溶剂(如水，稀酸，稀碱)的加热回流提取和超声提取，其他提取方法如酶提取、超临界提取、超高压提取、微波提取等受设备条件、提取成本和安全性的影响暂时无法在大规模生产中应用；4)多糖应是水溶性好的性质，但是市场上以及一些研究文章多表述了香菇多糖有不易水溶的情况。其中，针对上述第2)点即香菇多糖单位含量低的问题，市场上目前主要采取以下两种方法：①在提取物浓缩后，先加入添加剂，然后冷冻到-60℃以下，再在40～50℃高真空下使水分升华得到冻干粉剂，上述专利文献CN1240137A的方法即是这种思路，该方法固然可以提高香菇多糖的单位含量，但必定提高工艺成本且不适于规模化生产；②提取过程加入碱剂，使多糖物质从不溶的纤维组织上剥离下来，同时破坏了部分蛋白质结构使粘度减小，这样产品得率(产品重量与原料之比)就会提高，但是出现两个另外的结果，首先，碱性状态会破坏香菇多糖最重要的三股螺旋结构的三维状态，它是提高免疫抗癌因子的主要因素，同时因极性的干扰，使多糖聚合度以及与肽类，小蛋白的螯合发生变化，总之，这些措施使产品得率(产品重量与原料之比)增加了，但是多糖的单位含量(mg/g)低了，折算成多糖总得率(多糖总量与原料之比)并没有提高甚至低了。因此，亟需一种适于规模化生产、工艺成本低、能提高多糖单位含量和得率、最大程度地保留提取物活性的香菇多糖提取工艺。
就香菇多糖的保健和药用价值来说，目前报道主要集中于抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能方面，而实际上香菇多糖提取物中有效成分的种类很多，其潜在的用途非常广泛，有待进一步挖掘。帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种以老年人群为主的神经系统变性疾病，据统计，我国65岁以上人群帕金森病的患病率大约是1.7％。帕金森病最主要的病理改变是中脑黑质多巴胺能神经元的变性死亡，由此而引起纹状体DA含量显著性减少而致病。其临床表现主要为静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态障碍，另外还包括情绪低落、焦虑、睡眠障碍、认知障碍等非运动症状，对患者的生活造成严重影响。而目前未见香菇多糖防治帕金森病方面的报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种二步酶提取香菇多糖的方法、香菇多糖提取物及其应用。
在本发明的第一方面，提供了一种二步酶提取香菇多糖的方法，所述方法的步骤为：
1)选用干净的香菇仔细清除杂物晒干，粉碎至20～40目；
2)浸泡：用城市居民饮用水加工成纯净水，以1:10的料液比，在常温下浸泡2～4小时；
3)加酶提取：加入纤维素酶和食品级乙醇，纤维素酶加入量为600～900U/g(以干原料重量为基准来计算)，食品级乙醇的终体积浓度为5％～10％，温度35～45℃，在酶反应器中反应8～12小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
4)渣液分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；
5)分离的渣料用纯净水二次提取，温度50～60℃，在酶反应器中反应8～12小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
6)渣液再分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；废渣另行处理；
7)提取液储于锥型储罐，pH值控制在6～6.8左右，温度40～50℃，静置聚合反应12小时后，分离锥形储罐底部的溶解不完全的小颗粒以及不溶解的纤维素产生的絮凝沉淀；
8)减压浓缩：取锥形储罐内的上清液，经过减压浓缩器，调整蒸汽和上清液流量，使沸点控制在40℃以下，取样测定，得到比重1.2～1.25的浸膏分开存放，冷却后浸膏呈胶冻状；
9)中温干燥：将浸膏分盘后放入真空干燥箱，控制温度上限≤60℃，下限≥50℃，至含水量≤5％，得到块状成品；
10)粉碎：将块状成品通过粉碎机粉碎，筛网选用100目不锈钢专用网，得到粉状成品。
作为一个优选例，所述粉状成品完全溶于水。
作为另一优选例，步骤7)中聚合反应时间为12-14小时。
在本发明的第二方面，提供了一种香菇多糖提取物，所述香菇多糖提取物是按照以下方法制备的：
1)选用干净的香菇仔细清除杂物晒干，粉碎至20～40目；
2)浸泡：用城市居民饮用水加工成纯净水，以1:10的料液比，在常温下浸泡2～4小时；
3)加酶提取：加入纤维素酶和食品级乙醇，纤维素酶加入量为600～900U/g，食品级乙醇的终体积浓度为5％～10％，温度35～45℃，在酶反应器中反应8～12小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
4)渣液分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；
5)分离的渣料用纯净水二次提取，温度50～60℃，在酶反应器中反应8～12小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
6)渣液再分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；废渣另行处理；
7)提取液储于锥型储罐，pH值控制在6～6.8左右，温度40～50℃，静置聚合反应12小时后，分离锥形储罐底部的溶解不完全的小颗粒以及不溶解的纤维素产生的絮凝沉淀；
8)减压浓缩：取锥形储罐内的上清液，经过减压浓缩器，调整蒸汽和上清液流量，使沸点控制在40℃以下，取样测定，得到比重1.2～1.25的浸膏分开存放，冷却后浸膏呈胶冻状；
9)中温干燥：将浸膏分盘后放入真空干燥箱，控制温度上限≤60℃，下限≥50℃，至含水量≤5％，得到块状成品；
10)粉碎：将块状成品通过粉碎机粉碎，筛网选用100目不锈钢专用网，得到粉状成品。
作为一个优选例，所述粉状成品完全溶于水。
作为另一优选例，步骤7)中聚合反应时间为12-14小时。
在本发明的第三方面，提供了以上任一所述的香菇多糖提取物在制备防治帕金森病的药物中的应用。
本发明优点在于：
在香菇多糖的提取工艺方面：
1、本发明采用二步酶提取的方法，第一步采用纤维素酶，并加入一定量的食品级乙醇作为表面活性剂，增加渗透性，提高了酶的效率和多糖得率；第二步使用纯净水提取渣料，促进多糖的彻底溶出，进一步提高了多糖得率。
2、我们研究认为香菇中的氨基酸，蛋白质随着糖类，淀粉，果胶等的一起溶出，形成一种粘稠质，它们阻碍了香菇多糖的聚合。而本发明在提取过程中乙醇的添加，以及在酶解液的聚合过程中调节pH为6.5左右，温度40～50℃，为初提物的聚合提供了良好的条件，并有效促进了纤维素等不溶物的分离，进而提高了多糖的得率和单位含量。试验进一步表明当乙醇浓度为5％～10％时作用最为显著。
3、提取物的干燥是在≥50℃且≤60℃条件下完成，很好地保持了多糖的架构，保证了多糖的得率和有效成分的活性。
4、多糖应是水溶性好的性质，但是市场上以及一些研究文章多表述了香菇多糖有不易水溶的情况。我们的研究认为，香菇多糖是支链形态，其中直链结构(1-4)为非水溶，侧链(1-3)(1-6)为水溶性，它们的聚合链结是有数量比例的，如果不匹配会出现部分不易水溶的现象。另外，香菇中含有10％左右的蛋白类物质，提取物中它们和糖类一起干燥，脱水，包裹成不易水溶物，出现溶解慢，后出现絮凝的现象。而本发明的方法所制备的香菇多糖成品干粉为水全溶物，品质更高。
5、本发明的工艺提取物为全提取物，完整地将各种有效物一起提取出来，并不去除蛋白、氨基酸，同时香菇中多糖的官能团也是多样性的，也尽可能多地保存下来。
6、本发明的方法在常温条件下进行，对设备要求低，适于并已实现规模化生产。
7、本发明的方法未使用有机溶剂，无有害成分残留。
在香菇多糖提取物的保健和医药用途方面：
本发明首次证实香菇多糖提取物对帕金森病具有良好的防治作用，而且采用本发明工艺制备的提取物很好地保留了各有效成分，效果突出，这为帕金森病的治疗提供了一种新的途径。
附图说明
附图1是本发明二步酶提取香菇多糖的方法的流程图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1本发明二步酶提取香菇多糖的方法(一)
1、香菇多糖的提取
按照以下步骤提取香菇多糖：
1)选用干净的香菇仔细清除杂物晒干，共100kg，粉碎至30目；
2)浸泡：用城市居民饮用水加工成纯净水，以1:10的料液比，在常温下浸泡3小时；
3)加酶提取：加入纤维素酶和食品级乙醇，纤维素酶加入量为800U/g，食品级乙醇的终体积浓度为设置为0、2％、4％、5％、6％、8％、10％、12％八个梯度，温度40℃，在酶反应器中反应10小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
4)渣液分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；
5)分离的渣料用纯净水二次提取，温度55℃，在酶反应器中反应10小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
6)渣液再分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；废渣另行处理；
7)提取液储于锥型储罐，pH值控制在6.5，温度45℃，静置聚合反应12小时，分离锥形储罐底部的溶解不完全的小颗粒以及不溶解的纤维素产生的絮凝沉淀；
8)减压浓缩：取锥形储罐内的上清液，经过减压浓缩器，调整蒸汽和上清液流量，使沸点控制在40℃以下，取样测定，得到比重1.23的浸膏分开存放，冷却后浸膏呈胶冻状；
9)中温干燥：将浸膏分盘后放入真空干燥箱，控制温度为55℃，至含水量≤5％，得到块状成品；
10)粉碎：将块状成品通过粉碎机粉碎，筛网选用100目不锈钢专用网，得到粉状成品。
每个处理做3个平行。
2、多糖单位含量和多糖得率检测
根据【农业行业标准】NY T 1676-2008检测多糖含量。计算香菇多糖得率(多糖总量与原料之比)。
各处理组的多糖单位含量和多糖得率的统计结果如表1所示。结果表明，当酶解过程中加入乙醇，有效地提高了香菇多糖得率和单位含量，提高了提取物的品质，且当体系中乙醇浓度控制在5％～10％时效果最为显著。
表1各处理组的多糖单位含量和多糖得率比较
注：与乙醇终体积浓度＝0组比较，*，P<0.05。
3、水溶性测试
将各处理组所得粉状成品10g以1:20净水常温下搅拌稀释10分钟，观察溶解情况，并通过中速定性滤纸测试其溶解性。
各处理组的粉状成品的水溶性测试结果见表2。
表2各处理组的粉状成品水溶性比较
实施例2本发明二步酶提取香菇多糖的方法(二)
1、香菇多糖的提取
按照以下步骤提取香菇多糖：
1)选用干净的香菇仔细清除杂物晒干，共100kg，粉碎至40目；
2)浸泡：用城市居民饮用水加工成纯净水，以1:10的料液比，在常温下浸泡2小时；
3)加酶提取：加入纤维素酶和食品级乙醇，纤维素酶加入量为900U/g，食品级乙醇的终体积浓度为5％，温度45℃，在酶反应器中反应8小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
4)渣液分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；
5)分离的渣料用纯净水二次提取，温度50℃，在酶反应器中反应12小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
6)渣液再分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；废渣另行处理；
7)提取液储于锥型储罐，pH值控制在6.0，温度50℃，静置聚合反应14小时后，分离锥形储罐底部的溶解不完全的小颗粒以及不溶解的纤维素产生的絮凝沉淀；
8)减压浓缩：取锥形储罐内的上清液，经过减压浓缩器，调整蒸汽和上清液流量，使沸点控制在40℃以下，取样测定，得到比重1.25的浸膏分开存放，冷却后浸膏呈胶冻状；
9)中温干燥：将浸膏分盘后放入真空干燥箱，控制温度为60℃，至含水量≤5％，得到块状成品；
10)粉碎：将块状成品通过粉碎机粉碎，筛网选用100目不锈钢专用网，得到粉状成品。
2、多糖单位含量和得率检测
根据【农业行业标准】NY T 1676-2008检测多糖含量，单位含量在191.6mg/g。计算得到香菇多糖得率(多糖总量与原料之比)为9.02％。
3、水溶性测试
将所得粉状成品10g以1:20净水常温下搅拌稀释10分钟，待观察不到颗粒物，此溶液能一次通过中速定性滤纸。
实施例3本发明二步酶提取香菇多糖的方法(三)
1、香菇多糖的提取
按照以下步骤提取香菇多糖：
1)选用干净的香菇仔细清除杂物晒干，共100kg，粉碎至20目；
2)浸泡：用城市居民饮用水加工成纯净水，以1:10的料液比，在常温下浸泡4小时；
3)加酶提取：加入纤维素酶和食品级乙醇，纤维素酶加入量为600U/g，食品级乙醇的终体积浓度为10％，温度35℃，在酶反应器中反应12小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
4)渣液分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；
5)分离的渣料用纯净水二次提取，温度60℃，在酶反应器中反应8小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
6)渣液再分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；废渣另行处理；
7)提取液储于锥型储罐，pH值控制在6.8，温度45℃，静置聚合反应14小时，分离锥形储罐底部的溶解不完全的小颗粒以及不溶解的纤维素产生的絮凝沉淀；
8)减压浓缩：取锥形储罐内的上清液，经过减压浓缩器，调整蒸汽和上清液流量，使沸点控制在40℃以下，取样测定，得到比重1.20的浸膏分开存放，冷却后浸膏呈胶冻状；
9)中温干燥：将浸膏分盘后放入真空干燥箱，控制温度为55℃，至含水量≤5％，得到块状成品；
10)粉碎：将块状成品通过粉碎机粉碎，筛网选用100目不锈钢专用网，得到粉状成品。
2、多糖单位含量和得率检测
根据【农业行业标准】NY T 1676-2008检测多糖含量，单位含量在188.7mg/g。计算得到香菇多糖得率(多糖总量与原料之比)为9.15％。
3、水溶性测试
将所得粉状成品10g以1:20净水常温下搅拌稀释10分钟，待观察不到颗粒物，此溶液能一次通过中速定性滤纸。
实施例4本发明香菇多糖提取物对PC12细胞损伤的保护作用研究
将处于对数生长时期的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞，购于中国科学院昆明动物所)用0.25％胰酶消化，收集细胞，计数，将100μL浓度为1×106个/mL细胞悬液接种于96孔板中，孵育24小时，随机分为空白对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，低剂量组、中剂量组和高剂量组分别加入用无FBS的RPMI培养基稀释的10μg/ml、30μg/ml、60μg/ml香菇多糖提取物(按照实施例1中乙醇浓度6％的处理组的方法制备)，处理24小时后，各给药组和模型组均加入400μM 6-OHDA，处理6小时后，加入MTT，孵育3小时，加适量DMSO，测定490nm处吸光度，计算PC12细胞活力。每组做3个复孔。应用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，P<0.05表明差异有统计学意义。
各组细胞活力统计结果见表3，可见模型组PC12细胞活力相比于空白对照组出现显著下降，而各香菇多糖提取物预处理可以显著降低6-OHDA对PC12细胞的毒性，提高PC12细胞活力，表明香菇多糖对神经细胞具有保护作用。
表3各组PC12细胞活力
注：与模型组比较，*，P<0.05，**，P<0.01；与空白对照组比较，#，P<0.05，##，P<0.01。
实施例5本发明香菇多糖提取物对帕金森病的防治作用研究
将健康C57BL/6雄性小鼠(体重22～27g，购于北京维通利华动物繁殖中心)适应性饲养5天，随机分为5组，分别为空白对照组、模型组、阳性对照组、常规法香菇多糖组和本发明香菇多糖组，每组10只。模型组和各给药组于皮下注射MPTP 25mg/kg，每天一次，连续3天，第4天开始在皮下注射MPTP后30min，本发明香菇多糖组给予按照实施例1中乙醇浓度6％的处理组的方法制备的香菇多糖60mg/kg的水溶液灌胃，常规法香菇多糖组给予实施例1酶提取步骤不加乙醇的方法制备的香菇多糖提取物的水溶液灌胃，其中多糖含量与本发明香菇多糖组相等，阳性对照组给予左旋多巴20mg/kg，空白对照组和模型组给予同等体积的生理盐水灌胃。每天一次，连续给药7天，于第7天给药后2小时考察各组小鼠行为学情况。
转棒实验：各组小鼠在造模前接受3次转棍训练，使小鼠在棍上的表现达到稳定水平。转棍仪初始转速为10r/min，60s内速度增加到30r/min，从开始转棒计时，记录小鼠从转棒轴上掉下来的时间。
爬杆实验：将一直径为2.5cm的软木球固定于一根长50cm，直径1cm的木杆顶端，木杆上缠上纱布以防打滑，然后将被测小鼠放到小球上，记录小鼠爬完杆子所需要的时间。按以下标准记分：0-3秒内完成上述动作，记6分；3-6秒内完成上述动作，记5分；6-9秒内完成上述动作，记4分；9-12秒内上述动作，记3分；12-15秒内上述动作，记2分；15秒以上完成上述动作，记1分。
数据处理：应用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，P<0.05表明差异有统计学意义。
各组小鼠行为学检测结果见表4。结果表明，与空白对照组相比，模型组小鼠转棒停留时间和爬杆得分均显著减少，表明出现运动功能缺陷。与模型组相比，各给药组均能显著增加转棒停留时间和爬杆得分，表明香菇多糖能显著改善帕金森模型小鼠行为学缺陷，提高肢体运动协调能力。与阳性对照组比较，本发明香菇多糖组的小鼠转棒停留时间与爬杆得分均无显著性差异，表明其改善帕金森运动障碍的效果值得肯定，具有潜在的药用价值。
表4各组小鼠行为学检测结果
注：与模型组比较，*，P<0.05，**，P<0.01；与空白对照组比较，#，P<0.05，##，P<0.01；与阳性对照组比较，Δ，P<0.05，ΔΔ，P<0.01。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种二步酶提取香菇多糖的方法，其特征在于，所述方法的步骤为：
1)选用干净的香菇仔细清除杂物晒干，粉碎至20～40目；
2)浸泡：用城市居民饮用水加工成纯净水，以1:10的料液比，在常温下浸泡2～4小时；
3)加酶提取：加入纤维素酶和食品级乙醇，纤维素酶加入量为600～900U/g，食品级乙醇的终体积浓度为5％～10％，温度35～45℃，在酶反应器中反应8～12小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
4)渣液分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；
5)分离的渣料用纯净水二次提取，温度50～60℃，在酶反应器中反应8～12小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
6)渣液再分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；废渣另行处理；
7)提取液储于锥型储罐，pH值控制在6～6.8左右，温度40～50℃，静置聚合反应12小时后，分离锥形储罐底部的溶解不完全的小颗粒以及不溶解的纤维素产生的絮凝沉淀；
8)减压浓缩：取锥形储罐内的上清液，经过减压浓缩器，调整蒸汽和上清液流量，使沸点控制在40℃以下，取样测定，得到比重1.2～1.25的浸膏分开存放，冷却后浸膏呈胶冻状；
9)中温干燥：将浸膏分盘后放入真空干燥箱，控制温度上限≤60℃，下限≥50℃，至含水量≤5％，得到块状成品；
10)粉碎：将块状成品通过粉碎机粉碎，筛网选用100目不锈钢专用网，得到粉状成品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述粉状成品完全溶于水。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤7)中聚合反应时间为12-14小时。
4.一种香菇多糖提取物，其特征在于，所述香菇多糖提取物是按照以下方法制备的：
1)选用干净的香菇仔细清除杂物晒干，粉碎至20～40目；
2)浸泡：用城市居民饮用水加工成纯净水，以1:10的料液比，在常温下浸泡2～4小时；
3)加酶提取：加入纤维素酶和食品级乙醇，纤维素酶加入量为600～900U/g，食品级乙醇的终体积浓度为5％～10％，温度35～45℃，在酶反应器中反应8～12小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
4)渣液分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；
5)分离的渣料用纯净水二次提取，温度50～60℃，在酶反应器中反应8～12小时，反应过程需间歇搅拌，每分钟100转，停转比1:1；
6)渣液再分离：酶反应器中的提取液进入卧式卸料式离心机，分离的提取液输入锥型储罐；废渣另行处理；
7)提取液储于锥型储罐，pH值控制在6～6.8左右，温度40～50℃，静置聚合反应12小时后，分离锥形储罐底部的溶解不完全的小颗粒以及不溶解的纤维素产生的絮凝沉淀；
8)减压浓缩：取锥形储罐内的上清液，经过减压浓缩器，调整蒸汽和上清液流量，使沸点控制在40℃以下，取样测定，得到比重1.2～1.25的浸膏分开存放，冷却后浸膏呈胶冻状；
9)中温干燥：将浸膏分盘后放入真空干燥箱，控制温度上限≤60℃，下限≥50℃，至含水量≤5％，得到块状成品；
10)粉碎：将块状成品通过粉碎机粉碎，筛网选用100目不锈钢专用网，得到粉状成品。
5.根据权利要求4所述的香菇多糖提取物，其特征在于，所述粉状成品完全溶于水。
6.根据权利要求4所述的香菇多糖提取物，其特征在于，步骤7)中聚合反应时间为12-14小时。
7.权利要求4-6任一所述的香菇多糖提取物在制备防治帕金森病的药物中的应用。
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