CN110477368A - 一种高活性虫草粉及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高活性虫草粉及其制备方法与应用，该虫草粉是通过蛹虫草培养后，通过水提取使可溶性组分溶解到提取液中，该提取液通过精制、干燥、粉碎后获得，其主要活性组成成分包括虫草素、虫草酸、虫草腺苷、SOD、虫草多糖、虫草多肽及多种氨基酸。该虫草粉可用于制备多种保健食品，具有抗疲劳、提高免疫力、延缓衰老、护肝润肺、防治心血管疾病等作用，且尤其对性功能衰退有显著的调节作用，该提取物制备的保健食品有效成分远高于目前市售产品含量，产品活性高、质量优质且适于规模化生产。

Description

一种高活性虫草粉及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于保健食品领域，具体涉及一种高活性虫草粉及其制备方法与应用。
背景技术
近年来随着社会经济的发展和人们生活水平的提高，人们生活压力越来越大，高血压、糖尿病等“富贵病”越来越普遍。因此，人们开始注重身体健康，对保健类食品的需求也越来越多。
蛹虫草又称北冬虫夏草，是已报道的350余种虫草菌中唯一能大量形成虫草素的种，其虫草素含量远高于冬虫夏草，大约是天然冬虫夏草的70余倍，亚油酸和软脂酸含量则高达40％以上，此外，它还具有高度分枝结构的半乳甘露聚糖CM-1、分子量为2.7*104，其它活性物质的种类和含量与天然冬虫夏草基本相同(含虫草酸、尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、腺苷、胆甾醇、软脂酸酯、麦角甾醇、麦角甾醇过氧化物，以及蛋白质、脂肪、多种氨基酸、超氧化物歧化酶(SOD)、多糖等)。
蛹虫草具有抗氧化、抗衰老、清除体内自由基、降血压、舒张血管、抗动脉硬化、免疫调节、抗肿瘤、增强肺、肝、肾功能等作用，其中，虫草素除具有抗肿瘤作用外，还可延长接种艾腹水癌细胞水鼠存活时间，对人鼻咽癌细胞、人表皮样癌及Hela细胞均有抑制作用。虫草素对L5178Y细胞增殖有很强的抑制作用，半数有效量(ED50)为0.27HM，以上机制与虫草素的抗肿瘤作用相关。
综上所述，使用蛹虫草或其提取物作为主要原料制备的保健食品，未来将有广阔的市场，而现有技术中存在虫草素分离纯化过程复杂、虫草粉中虫草素含量低以及多糖分子量大，吸收慢等问题，因此，急需开发一种新的工艺方法以提高虫草素、虫草多糖等有效组分含量，并解决吸收慢的问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足，如虫草素分离纯化过程复杂、虫草粉中虫草素含量低以及多糖分子量大，吸收慢等问题，本发明提供了一种有效成分含量高的北虫草提取物。
本发明还要解决的技术问题是提供一种简单易于工业化生产蛹虫草虫草粉的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种高活性虫草粉，它包含如下有效成分，按重量比，各成分的含量如下：
虫草素：20～30％；
虫草酸：5～10％；
虫草腺苷：1～5％；
虫草多糖：30～40％；
虫草多肽：1～5％；
氨基酸：10～20％；
水分：0.1～4％；
以上组分中各物质的质量为100％，此外含有超氧化物岐化酶，其含量为12000～50000U/g虫草粉。
其中，优选各成分的含量如下：
虫草素：30％；
虫草酸：5％；
虫草腺苷：2％；
虫草多糖：40％；
虫草多肽：5％；
氨基酸：15％；
水分：3％。
其中，所述虫草粉中超氧化物岐化酶的含量为20000U/g虫草粉。
其中，所述超氧化物歧化酶的酶活定义为：以1毫升反应液每分钟抑制邻苯三酚自氧化速度50％酶量，为一个超氧化物歧化酶酶活力单位。本文就以上酶活定义稍作修改，以每克湿菌体每分钟抑制连苯三酚自氧化速度50％酶量，为一个超氧化物歧化酶酶活力单位。
上述高活性虫草粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)蛹虫草提取液的制备：将蛹虫草活化后接种到灭菌后培养基中，培养至菌丝体长满蛹虫草培养基表面，再将所得物料进行光培养与同步浸提，得到蛹虫草提取液；
(2)酶旋切处理：用柠檬酸水溶液调节步骤(1)得到的蛹虫草提取液的pH值至4.0～7.0，加入多糖水解酶进行多糖酶旋切，固液分离除去不溶物，收集分离后的上清液，即为酶旋切提取液；
(3)纳滤步骤(2)得到的酶旋切提取液，收集分离后的纳滤浓缩液；真空浓缩纳滤浓缩液至固含为20％～35％；
(4)将浓缩后的清液进行干燥后，进行气流粉碎，获得到高活性虫草粉。
步骤(1)中，所述的培养基为干蚕蛹粉20g/L、大米粉80g/L、玉米浆8g/L、大豆蛋白2g/L、KH2PO4 1g/L、K2HPO4·3H2O 1g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L，溶剂为纯水，pH5.5；所述的灭菌为，121℃灭菌20～40min。
步骤(1)中，所述培养的条件为24～27℃，暗培养3～5天；所述的光培养与同步浸提为25℃静置培养3周；其中，所述的光培养为白天光照12h，晚上避光12h；所述的同步浸提为白天浸提6h，晚上浸提6h。
步骤(1)中所述蛹虫草提取液的制备方法也可采用培养后提取的方法，即是将子实体粉碎后进行水逆流提取。
步骤(2)中，所述柠檬酸水的浓度为3mol/L；所述pH优选为4.5；所述多糖水解酶为纤维素酶和淀粉酶的混合酶，其中纤维素酶用量为10～50U/g，淀粉酶酶活用量为10～100U/g；所述的酶解指的是在转速为80～120rpm下进行酶解，酶解温度为45～50℃，酶解时间为60～300min，转速优选100rpm、酶解温度优选50℃，酶解时间优选1h；所述的固液分离为管式连续离心，离心转速为10000r/min。
其中，所述的纤维素酶酶活为200U/mL，淀粉酶酶活为10000U/mL，酶活定义为在测试条件(37℃；pH值5.0)，1小时生成1μmol葡萄糖定义为一个酶活单位。
步骤(2)中，采用复合酶处理，选择性切断糖苷键，降低多糖的聚合度，提高其水溶性。
步骤(3)中，所述纳滤为采用截留分子量为130～210D的纳滤膜进行纳滤，压力2.3～3.4MPa，流量25～37L/h。
其中，优选条件为纳滤为采用截留分子量为150D的纳滤膜进行纳滤，压力3MPa，流量30L/h；
其中，纳滤能有效除去无机盐等小分子物。
上述的高活性虫草粉在保健食品、食品中的应用也在本发明的保护范围内。
其中，所述的应用为在制备调节性功能衰退保健食品或食品中的应用；在制备保肝护心保健食品或食品中的应用；在制备提高免疫力保健食品或食品中的应用；在制备抗疲劳保健食品或食品中的应用。
其中，所述的保健食品、食品还具有抗疲劳、提高免疫力、延缓衰老、护肝润肺、防治心血管疾病等作用，且尤其对性功能衰退有显著的调节作用。
步骤(3)中，所述固含优选30％。
本发明中所用的水质量技术指标不低于中国国家饮用水要求标准(GB5749-2006)。
有益效果：
(1)本发明的蛹虫草虫草粉，采用先进提取技术获得，虫草素、虫草多糖等有效组分含量相对于单纯的虫草粉碎粉大幅提升，且单位质量有效成分远高于市面同类产品，且产生的多糖组分更易吸收。
(2)通过多糖水解酶处理，选择性切断糖苷键，相对于虫草中的多糖，其多糖水溶性和吸收效率也大幅提升。
(3)本发明产品具有抗疲劳、保肝护心、润肺益气、提高免疫力、延缓衰老、防治心血管疾病等作用，且尤其对前列腺疾病和性功能衰退有显著的调节作用。
附图说明
图1为虫草粉对雄性大鼠阴茎海绵体内压(ICP)的影响。
图2为虫草粉对雄性大鼠阴茎海绵体内压与平均动脉压比值。
图3为虫草粉对雄性大鼠睾丸及其附属性腺指数的影响。
图4为虫草粉对雄性大鼠睾酮的影响。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
(1)蛹虫草提取液制备：刮取改良PDA斜面蛹虫草孢子于装有121℃灭菌20min后的液体培养基中进行活化；将蛹虫草进行活化后接种到浅盘中灭过菌的培养基中，24～27℃，暗培养3～5天，至菌丝体长满蛹虫草培养基表面；进行光培养与同步浸提，其中白天光照12小时，晚上避光12小时，其中白天浸提6小时，晚上浸提6小时，该过程在25℃静置培养3周。其中，所述的培养基的配方为干蚕蛹粉20g/L、大米粉80g/L、玉米浆8g/L、大豆蛋白2g/L、KH2PO4 1g/L、K2HPO4·3H2O 1g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L，溶剂为纯水，pH5.5；
(2)高活性虫草粉的制备：首先，对提取液进行酶旋切，用3M柠檬酸水溶液调节上清液的pH至4.5，然后加入纤维素酶用量为20U/g，淀粉酶酶活用量为50U/g，在转速100r/min、50℃条件下水解时间120min；第二，对酶旋切后提取液进行管式连续离心，离心转速为10000r/min。
(3)用纳滤膜(截留分子量150D)除去无机盐等小分子物质，其中，纳滤条件为：压力3MPa，流量30L/h，收集分离后的纳滤浓缩液；真空浓缩膜分离后的料液，浓缩至固含30％；
(4)将浓缩后的清液在80℃条件下干燥，并进行气流粉碎获得高活性虫草粉(虫草素含量30wt％，虫草酸含量5wt％，虫草腺苷含量2wt％，虫草多糖40wt％，虫草多肽5wt％，氨基酸含量15wt％，水分3％)，其超氧化物岐化酶含量为20000U/g虫草粉。
实施例2
步骤(1)同实施例1，
(2)用3M柠檬酸水溶液调节上清液的pH至7.0，然后加入纤维素酶用量为40U/g，淀粉酶用量为70U/g，在转速80r/min、45℃条件下酶解180min；固液分离，收集上清液；
(3)用纳滤膜(截留分子量180D)除去无机盐等小分子物质，其中，纳滤条件为：压力3MPa，流量30L/h，收集分离后的纳滤浓缩液；
(4)真空浓缩膜分离后的料液，浓缩至固含35wt％，然后在80℃条件下干燥，并进行气流粉碎获得高活性虫草粉(虫草素含量25wt％，虫草酸含量6wt％，虫草腺苷含量5wt％，虫草多糖40wt％，虫草多肽5wt％，氨基酸含量17wt％，水分2％)，其超氧化物岐化酶含量为12000U/g虫草粉。
实施例3
步骤(1)同实施例1，
(2)用3M柠檬酸水溶液调节上清液的pH至4.0，然后加入纤维素酶用量为10U/g，淀粉酶用量为30U/g，在转速80r/min、45℃条件下酶解60min；固液分离，收集上清液；
(3)用纳滤膜(截留分子量200D)除去无机盐等小分子物质，其中，纳滤条件为：压力3MPa，流量30L/h，收集分离后的纳滤浓缩液；
(4)真空浓缩膜分离后的料液，浓缩至固含25wt％，然后在80℃条件下干燥，并进行气流粉碎获得高活性虫草粉(虫草素含量23wt％，虫草酸含量6wt％，虫草腺苷含量4wt％，虫草多糖38wt％，虫草多肽4wt％，氨基酸含量17wt％，水分8％)，其超氧化物岐化酶含量为20124U/g虫草粉。
实施例4
步骤(1)同实施例1，
(2)用3M柠檬酸水溶液调节上清液的pH至6.0，然后加入纤维素酶用量为40U/g，淀粉酶用量为40U/g，在转速80r/min、45℃条件下酶解100min；固液分离，收集上清液；
(3)用纳滤膜(截留分子量200D)除去无机盐等小分子物质，其中，纳滤条件为：压力3MPa，流量30L/h，收集分离后的纳滤浓缩液；
(4)真空浓缩膜分离后的料液，浓缩至固含20wt％，然后在100℃条件下干燥，并进行气流粉碎获得高活性虫草粉(虫草素含量24wt％，虫草酸含量6wt％，虫草腺苷含量2wt％，虫草多糖39wt％，虫草多肽5wt％，氨基酸含量18wt％，水分6％)，其超氧化物岐化酶含量为34009U/g虫草粉。
实施例5
抗疲劳功能试验：采用小鼠动物实验，将小鼠适应性喂养后，随机分组，实验期间采用无菌水和无菌饲料喂养。将小鼠随机分成4组，即空白对照组(灌胃生理盐水，连续灌胃30天)和本发明实施例1给药组，(给药参考文献及新食品原料食用量及使用范围，以人体推荐量为标准的1/2、1、2倍给药，分别为低剂量，中剂量，高剂量)连续灌胃30天，实验期间小鼠自由摄食和饮水。按照《保健食品检验与评价技术规范》分别进行负重游泳实验、血清尿素、肝糖原、血乳酸含量测定实验。
表1抗疲劳检测数据
由上表可知，实验组比空白对照组游泳时间明显延长，且随有效组分摄入的提高而延长，说明有效含量的增加，其抗疲劳的效果提高；本产品对对小鼠运动后血液中的尿素有一定的清除作用；肝糖原作为重要的能量来源，本发明产品能够提高肝糖原的含量，具有抗疲劳的效果；血乳酸作为肌肉运动的主要代谢产物，乳酸积累越多，疲劳程度越严重，运动过程中肌肉产生的乳酸渗透进入血液，而本发明产品相对于对照组能够明显降低乳酸在血液中的积累，加快乳酸的代谢，具有抗疲劳的效果。
实施例6
提高免疫力试验：采用小鼠动物实验，将小鼠适应性喂养后，随机分组，实验期间采用无菌水和无菌饲料喂养。将小鼠随机分成4组，即空白对照组(灌胃生理盐水，连续灌胃30天)和本发明实施例1给药组，(给药参考文献及新食品原料食用量及使用范围，以人体推荐量为标准的1/2、1、2倍给药，分别为低剂量，中剂量，高剂量)连续灌胃30天，实验期间小鼠自由摄食和饮水。按照《保健食品检验与评价技术规范》分别进行实验。
表2提高免疫力检测数据
由表2可知，食用本发明产品的小鼠淋巴细胞增值能力、空斑数、血清溶血素抗体以及NK细胞活性相对于对照组明显增强，说明本发明产品具有增强小鼠免疫力的效果，且随有效含量的增加，其免疫力有增强趋势。
实施例7
保肝护心实验：采用小鼠动物实验，将小鼠适应性喂养后，随机分组，实验期间采用无菌水和无菌饲料喂养。
建模，模型组灌胃头孢曲松液，空白对照组灌胃生理盐水，均0.2mL/次，2次/天，即每天灌胃100mg/只，连续5天，观察给药后动物模型是否建立成功。
实验在模型建立成功后进行。对模型组随机分组即：给药组(低、中、高剂量)、阴性对照组(自然恢复组)、阳性对照组(低聚甘露糖)，同时空白对照组伴随整个实验。给药参考文献及新资源食品食用量及使用范围，以人体推荐量的10倍、20倍、30倍分别为低剂量、中剂量、高剂量，对应的小鼠剂量分别为100g/kg、200g/kg、300g/kg。饲养期间小鼠自由摄食、饮水。依照表3的给药方案每天进行定时灌胃，每次每只小鼠灌胃相应浓度的蛹虫草提取物(CME)或无菌水，连续灌胃一个月。表3肝功检测数据。
表3试验小鼠分组和给药方案
通过分析发现ALP、GLU、CHOL、IBIL组间数据无显著性差异。分别观察给药组与对照组之间血清中蛋白指标、血脂指标、肝功指标以及其他指标的差异性。
(1)蛋白指标
对血清中ALB、GLB、TP、A/G进行检测，发现各组在蛋白方面都没有显著性差异(表4)。说明给药对血液中的蛋白影响不大。
表4血清中蛋白指标
ALB(g/L) TP(g/L) GLB(g/L) A/G
低剂量组 34.55±1.69 50.47±2.14 16.08±0.85 2.18±0.11
中剂量组 32.7±2.15 50.12±1.62 16.1±0.95 2.24±0.08
高剂量组 33.3±2.48 49.28±2.54 15.7±1.22 1.94±0.16
阳性对照组 34.36±1.59 49.9±1.29 15.54±1.23 2.23±0.24
阴性对照组 34.5±2.15 49.22±2.43 16.78±1.14 2.3±0.32
空白对照组 34.48±1.5 50.6±1.78 16.12±1.18 2.08±0.12
(2)血脂相关指标
对血清中TG、HDL-C、LDL-C进行检测，结果如表5所示。TG：与空白组相比，中剂量组、阴性组含量无差异，低、高剂量组含量均低于正常对照组，其中高剂量组有极显著差异，低剂量组有显著性差异。与阴性组对比，高剂量组有显著性差异。而HDL-C数据组间无差异性。LDL-C：与空白组比较，中剂量和阴性组有极显著差异。与阴性组对比，高剂量组有显著性差异。实验组小鼠同空白组小鼠相比，TG指标下降、LDL-C指标升高，说明蛹虫草提取物可能具有改善血脂的功能。
表5血脂相关指标
注：*代表与阴性对照显著，**代表与阴性对照极显著；#代表与空白对照显著，##代表与空白对照极显著。
(3)肝功相关指标
对血清中ALT、AST、LDH、α-HBDH进行检测，结果如表6所示。ALT：低、中、高剂量组、阳性组与空白组和阴性组都有极显著差异，阴性组较空白组有显著差异。AST：含量整体偏高，中、高剂量组与空白和阴性组都有极显著差异，阳性组与阴性组有极显著差异、与空白组有显著差异。LDH：与空白组相比，中剂量、阳性、阴性组具有极显著差异；与阴性组对比，低、中、高、阳性组有极显著差异。α-HBDH：中剂量组与空白和阴性组都有极显著差异。阳性组与阴性组和空白组有显著差异。由此可见ALT、AST、LDH、HBDH四项指标组间差异显著，且有阴性组较空白组差异显著，说明小鼠肠道菌群破坏可能对小鼠肝脏造成损伤。而给药后ALT、AST均显著降低，说明蛹虫草提取物有保护肝脏损伤的作用。
表6肝功相关指标
组别 ALT(U/L) AST(U/L) LDH(U/L) α-HBDH(U/L)
低剂量组 24.00±1.73<sup>**##</sup> 98.50±5.80 788.20±164.85<sup>**</sup> 244.50±40.78
中剂量组 24.00±5.10<sup>**##</sup> 73.00±8.04<sup>**##</sup> 456.00±56.07<sup>**##</sup> 138.25±16.64<sup>**##</sup>
高剂量组 22.50±1.73<sup>**##</sup> 68.00±3.16<sup>**##</sup> 632.40±108.83<sup>**</sup> 219.75±26.40
阳性对照组 26.33±1.53<sup>**##</sup> 84.00±5.35<sup>**#</sup> 535.50±98.31<sup>**##</sup> 185.50±36.60<sup>*#</sup>
阴性模型组 46.00±9.15<sup>#</sup> 103.64±6.15 1066.67±101.72<sup>##</sup> 244.00±85.07
空白对照组 35.50±7.55 96.00±3.61 791.50±104.78 255.25±36.61
注：*代表与阴性对照显著，**代表与阴性对照极显著；#代表与空白对照显著，##代表与空白对照极显著。
(4)其他指标
对CK、CK-MB、DBIL、TBIL进行了检测，如表7所示。CK：高剂量组、阳性组与阴性组有显著差异，阴性组与空白组有显著差异。CK-MB：高剂量组与阴性和空白均有极显著差异。DBIL：中剂量组与阴性和空白有极显著差异，低剂量和阳性组与空白组有显著性差异。TBIL：低、中剂量组与阴性组差异显著，与空白组差异极显著。CK和CK-MB与心肌有关，指数升高常被认为有可能是心肌损伤，有可能出现心肌梗塞。与阴性组比较，给药组CK指数均有所降低，说明蛹虫草提取物可能对心脏有保护功能。
表7其他指标
组别 CK(U/L) CK-MB(U/L) DBIL(μmol/L) TBIL(μmol/L)
低剂量组 575.00±32.61 157.75±23.00 0.80±0.11<sup>#</sup> 1.33±0.15<sup>*##</sup>
中剂量组 508.50±95.03 128.0±17.55 0.60±0.07<sup>**##</sup> 1.38±0.05<sup>*##</sup>
高剂量组 482.74±47.23<sup>*</sup> 102.20±33.72<sup>**##</sup> 0.88±0.15 1.89±0.05
阳性对照组 454.00±67.74<sup>*</sup> 101.75±28.09 0.80±0.12<sup>#</sup> 1.93±0.22
阴性对照组 678.35±265.93<sup>#</sup> 121.90±32.66 0.93±0.15 1.69±0.17
空白对照组 485.25±117.09 135.50±37.33 1.04±0.21 1.88±0.51
注：*代表与阴性对照显著，**代表与阴性对照极显著；#代表与空白对照显著，##代表与空白对照极显著。
通过对血清中一些指标的检测，我们可以得出，蛹虫草提取物对造模后小鼠有改善血脂、保护肝脏、保护心脏等作用。这与一些研究有类似的结果：有人通过合成虫草素对高血脂模型小鼠进行试验，发现虫草素有降血脂、对肝损伤有调节作用。有人提取蛹虫草多肽，对高脂饲料喂养的脂肪肝大鼠进行灌胃实验，发现蛹虫草多肽具有调节血脂、保护肝脏的作用。
实施例8
改善性功能衰退实验：建模，采用人工的干预的方式，用正常大鼠制造性功能障碍病理模型大鼠。
实验方法：40只雄性SD大鼠，适应性喂养3天。禁食12h后，随机取出10只作为正常对照组腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为对照。其余动物以65mg/kg的剂量一次性腹腔注射链脲佐菌素(溶剂为柠檬酸缓冲液，pH 4.5)。7天后血糖高于16.7mM提示糖尿病模型形成。若血糖低于16.7mM则再一次腹腔注射相同剂量的链脲佐菌素。
大鼠持续高血糖8周形成性功能障碍模型，将性功能障碍大鼠分为三组：模型对照组(给予生理盐水)、西地那非阳性对照组(10mg/kg·per day)，实施例1中虫草粉(100mg/kg·per day)。连续灌胃给药4周。
(1)虫草粉对雄性大鼠性行为的影响
实验方法：取若干鼠笼，每笼放入1只实例5中雄性大鼠，置暗光线下，使适应环境5min。然后放入1只雌性大鼠，并开始记录：自雌鼠投人至雄鼠第1次扑捉雌鼠的时间，即扑捉潜伏期；自雌鼠投入20min内雄鼠扑捉雌鼠的次数。
结果计算及统计分析：各实验组数据以均数±标准差表示，采用系统统计软件SPSS17.0进行方差齐性检验，方差齐的各组采用单因素方差分析，组间比较用LSD法。以P＜0.05为差异有统计学意义。具体实验结果参见表8。
表8虫草素对大鼠性行为的影响
分组 扑捉潜伏期 扑捉次数
正常组 129.6±24.8 23.0±3.5
模型组 500.1±29.70<sup>a**</sup> 1.8±0.9<sup>a**</sup>
西地那非组 188.6±24.1<sup>b**</sup> 12.2±1.3<sup>b**</sup>
虫草粉组 227.2±30.4<sup>b**</sup> 10.8±2.1<sup>b**</sup>
注：a表示与正常组相比，b表示与模型组相比；*：P＜0.05；**：P＜0.01
结果显示，糖尿病性功能障碍模型组相较于正常组扑捉潜伏期极大增长(P＜0.01)，扑捉次数显著下降(P＜0.01)，说明病理模型成功。西地那非和虫草粉组与模型对照组相比，扑捉潜伏期和扑捉次数都有显著改善(P＜0.01)。
(2)虫草粉对雄性大鼠阴茎海绵体内压(ICP)的影响
实验装置：信号采集处理器(易美，MedLab-U/4C501H)；40kPa压力换能器(YP100型，北京新航兴业科贸有限公司)
实验方法：
(1)大鼠腹腔注射戊巴比妥钠麻醉。仰卧位，四肢固定，剪去手术视野周围的毛发。
(2)待麻醉成功后，背位固定，腹部正中切口入腹，找到前列腺，仔细游离前列腺两侧叶后方，可暴露出盆腔星状神经节。
(3)沿盆腔星状神经节向周围仔细分离可识别出盆神经、腹下神经这两支主要的输入支以及沿尿道侧面走行的最大输出支海绵体神经。距盆腔星状神经节1～2mm处放置双极电极于海绵体神经上，正极位于神经的近侧端，两电极间1mm，电极的直径约0.2mm。
(4)切开阴茎包皮，将其剥离，充分暴露阴茎海绵体后向一侧海绵体内头皮针穿刺
(5)通过导管与信号采集处理器连接，导管内灌注肝素溶液(250U/ml)，排空导管内气泡。
(6)对海绵体神经进行电刺激，调整信号采集处理器，使其刺激参数为连续方波刺激、波宽5ms、频率15Hz、电压7.5V，每次刺激持续60s。
(7)记录电刺激全过程的ICP变化。
(8)平均动脉压(MAP)测定：颈部正中切口，暴露并切开左侧颈总动脉置入PE10管，后方通过PE50管连接压力换能器，直接法持续监测大鼠平均动脉压
结果计算及统计分析：各实验组数据以均数±标准差表示，采用系统统计软件SPSS17.0进行方差齐性检验，方差齐的各组采用单因素方差分析，组间比较用LSD法。以P＜0.05为差异有统计学意义。具体实验结果参见图1和图2。图1中a为正常组，b为模型组，c为西地那非组，d为虫草粉组；图2为海绵体内压与平均动脉压比值；图2中(a)表示与正常组相比，(b)表示与模型组相比；*：P＜0.05；**：P＜0.01。
结果显示，虫草粉对糖尿病模型组大鼠勃起功能的有良好的改善效果(P＜0.01)。与正常组大鼠相比，糖尿病性功能障碍大鼠海绵体内压与平均动脉压的比值(ICP/MAP)显著降低(P＜0.01)，说明模型组大鼠勃起功能严重受损。西地那非和虫草粉治疗组大鼠相较于模型组大鼠具有极显著的提高(P＜0.01)，即两者可有效改善大鼠勃起功能。
(3)虫草粉对雄性大鼠睾丸及其附属性腺指数的影响
实验方法：将各组大鼠称重后处死，取出睾丸、附睾、精囊腺、包皮腺，精密称重并计算脏器指数[脏器指数(％)＝脏器重(g)/体重(g)×100％]
结果计算及统计分析：各实验组数据以均数±标准差表示，采用系统统计软件SPSS17.0进行方差齐性检验，方差齐的各组采用单因素方差分析，组间比较用LSD法。以P＜0.05为差异有统计学意义。具体实验结果参见图3，图3中a表示与正常组相比，b表示与模型组相比；*：P＜0.05；**：P＜0.01。
结果显示，糖尿病性功能障碍模型组睾丸、附睾、精囊腺脏器指数相对于正常组均有下降，经虫草粉治疗后睾丸及精囊腺指数均明显改善(P<0.05)，附睾则无显著影响(P>0.05)。而各组间包皮腺差异均无显著性(P>0.05)。
(4)虫草粉对雄性大鼠血清睾酮的影响
实验方法：取大鼠血清，根据试剂盒说明书利用酶联免疫法检测各组大鼠血清中雄性激素睾酮的含量。
结果计算及统计分析：各实验组数据以均数±标准差表示，采用系统统计软件SPSS17.0进行方差齐性检验，方差齐的各组采用单因素方差分析，组间比较用LSD法。以P＜0.05为差异有统计学意义。具体实验结果参见图4，图中a表示与正常组相比，b表示与模型组相比；*：P＜0.05；**：P＜0.01。
结果显示，糖尿病性功能障碍组大鼠血清睾酮(T)水平较正常组有极显著下降(P＜0.01)。经过药物治疗，与病理模型组相比，西地那非组、虫草粉组血清睾酮显著提高(P＜0.05)。

Claims (13)

1.一种高活性虫草粉，其特征在于，包含如下有效成分，按重量比，各成分的含量如下：
虫草素：20～30％；
虫草酸：5～10％；
虫草腺苷：1～5％；
虫草多糖：30～40％；
虫草多肽：1～5％；
氨基酸：10～20％；
水分：0.1～4％；
以上组分中各物质的质量为100％，此外含有超氧化物岐化酶，其含量为12000～50000U/g虫草粉。
2.根据权利要求1所述的高活性虫草粉，其特征在于，按重量比，各成分的含量如下：
虫草素：30％；
虫草酸：5％；
虫草腺苷：2％；
虫草多糖：40％；
虫草多肽：5％；
氨基酸：15％；
水分：3％。
3.根据权利要求1所述的高活性虫草粉，其特征在于，所述虫草粉中超氧化物岐化酶的含量为20000U/g虫草粉。
4.权利要求1～3中任意一项所述高活性虫草粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)蛹虫草提取液的制备：将蛹虫草活化后接种到培养基中，培养至菌丝体长满蛹虫草培养基表面，再将所得物料进行光培养与同步浸提，得到蛹虫草提取液；
(2)酶旋切处理：用柠檬酸水溶液调节步骤(1)得到的蛹虫草提取液的pH值至4.0～7.0，加入多糖水解酶进行多糖酶旋切，固液分离除去不溶物，收集分离后的上清液，即为酶旋切提取液；
(3)纳滤步骤(2)得到的酶旋切提取液，收集分离后的纳滤浓缩液；真空浓缩纳滤浓缩液至固含为20％～35％；
(4)将浓缩后的清液进行干燥后，进行气流粉碎，获得到高活性虫草粉。
5.根据权利要求4所述的高活性虫草粉的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述培养的条件为24～27℃，暗培养3～5天。
6.根据权利要求4所述的高活性虫草粉的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的光培养与同步浸提为25℃静置培养3周；
其中，所述的光培养为白天光照12h，晚上避光12h；所述的同步浸提为白天浸提6h，晚上浸提6h。
7.根据权利要求4所述的高活性虫草粉的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述柠檬酸水的浓度为3mol/L。
8.根据权利要求4所述的高活性虫草粉的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述多糖水解酶为纤维素酶和淀粉酶的混合酶，其中纤维素酶用量为10～50U/g，淀粉酶酶活用量为10～100U/g；所述的酶解指的是在转速为80～120rpm下进行酶解，酶解温度为45～50℃，酶解时间为60～300min。
9.根据权利要求4所述的高活性虫草粉的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述纳滤为采用截留分子量为130～210D的纳滤膜进行纳滤，压力2.3～3.4MPa，流量25～37L/h。
10.权利要求1～3中任意一项所述的高活性虫草粉在制备调节性功能衰退保健食品或食品中的应用。
11.权利要求1～3中任意一项所述的高活性虫草粉在制备保肝护心保健食品或食品中的应用。
12.权利要求1～3中任意一项所述的高活性虫草粉在制备提高免疫力保健食品或食品中的应用。
13.权利要求1～3中任意一项所述的高活性虫草粉在制备抗疲劳保健食品或食品中的应用。
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