CN106749742B

CN106749742B - 蛹虫草多糖、提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用

Info

Publication number: CN106749742B
Application number: CN201710033639.3A
Authority: CN
Inventors: 康文艺; 卓宝松; 辛昕; 王学标
Original assignee: Henan University
Current assignee: Henan University
Priority date: 2017-01-18
Filing date: 2017-01-18
Publication date: 2019-03-15
Anticipated expiration: 2037-01-18
Also published as: CN106749742A

Abstract

本发明公开了一种蛹虫草多糖的提取方法，其将蛹虫草用水煎煮，过滤，滤液中加入无水乙醇至乙醇终浓度为70±5V%，静置，固液分离，所得沉淀即为蛹虫草多糖。本发明还公开了所述蛹虫草多糖在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。本发明经试验发现：蛹虫草多糖能显著升高血清中的胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）及P物质含量，改善功能性便秘。说明：蛹虫草多糖是治疗功能性便秘的理想药物。

Description

蛹虫草多糖、提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用

技术领域

本发明属于多糖药物技术领域，具体涉及一种蛹虫草多糖、提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。

背景技术

功能性便秘（functional constipation,FC）是一种功能性肠病，是指症状起源于中、下胃肠道的功能性胃肠病。由于生活规律改变、情绪抑郁、饮食因素、排便习惯不良、药物作用等因素所致的便秘，例如，外出旅行的人，由于生活规律、周围环境的改变，以及劳累等因素的影响，多会出现便秘，这种便秘则属于功能性便秘。

一般来讲，功能性便秘多表现为持续的排便困难、排便频率减少或排便不尽感，同时不符合肠易激综合征的诊断标准，并且满足一定的时间条件。功能性便秘的病人，除肠道易激综合征外，均可通过生活规律化、合理饮食、调畅情志、养成良好排便习惯以及去除其他病因等手段达到治愈便秘的目的。而患有肠道易激综合征的病人，其发生的便秘虽属功能性便秘，但必须去医院做进一步的检查。目前，市场上用于治疗功能性便秘的药物多存在疗效不佳、有毒副作用等缺陷。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种可用于治疗功能性便秘的蛹虫草多糖，其治疗效果显著，且无毒副作用，不会引起耐药性。

本发明还提供了上述蛹虫草多糖的提取方法及其在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种蛹虫草多糖的提取方法，其将蛹虫草用水煎煮，过滤，滤液中加入无水乙醇至乙醇终浓度为70±5V%，静置，固液分离，所得沉淀即为蛹虫草多糖。

进一步优选的，可将蛹虫草用水煎煮2次，第一次煎煮1h，第二次煎煮0.5h，合并两次滤液，并加入无水乙醇至乙醇终浓度为70V%，冰箱中静置过夜，离心分离，所得沉淀经冷冻干燥后即为蛹虫草多糖。

采用上述提取方法制备得到的蛹虫草多糖。

上述蛹虫草多糖在制备治疗功能性便秘药物方面的应用。蛹虫草多糖具体用量可以是： 800mg/kg、400mg/kg等。

蛹虫草 Cordyceps militaris L. Link，又名北冬虫夏草、北虫草，是虫草菌寄生在鳞翅目、鞘翅目、双翅目等昆虫蛹体及幼虫形成的虫菌复合体，其与冬虫夏草属于同一属。蛹虫草生长在我国较低海拔的平原流域，国外分布在北美、德国、加拿大、意大利、日本和俄罗斯等。迄今已检测或分离到的活性物质有虫草素、虫草酸、蛹虫草多糖和超氧化物歧化酶等，此外，蛹虫草中还含有丰富的蛋白质、氨基酸、微量元素等成分。文献报道发现蛹虫草具有免疫、调节血脂、保护心血管、抗疲劳等功能。多糖是蛹虫草中重要的活性物质之一，具有抗氧化等功效。

目前，尚无中药蛹虫草多糖对大鼠功能性便秘治疗的报道。本发明通过测定中药蛹虫草多糖对大鼠功能性便秘各项生化指标，考察其治疗功能性便秘的效果。试验结果证明：其疗效显著，且无毒副作用。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。

实施例1

所述蛹虫草多糖经下述步骤获得：取蛹虫草样品1920g，加水至淹没药材，用水煎煮（共煎煮2次，第一次1h，第二次0.5h），合并两次滤液并加入无水乙醇至乙醇终浓度为70V%，冰箱中静置过夜（12h），离心分离，所得沉淀经冷冻干燥（-40℃冰箱冷冻12h，在干燥机中烘干）后即为蛹虫草多糖，约50g。

应用试验

一、大鼠功能性便秘模型的建立

（1）试验动物

SPF级的Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠，体重200-220g。动物购买于河南省实验动物中心，许可证号：SCXK（豫）2015-0004。

（2）试验试剂

氯化钠注射液（辰欣药业股份有限公司，批号：1611032707）；盐酸洛哌丁胺（Imodium,西安杨森制药有限公司，批号：160729316）；麻仁丸（湖北诺得胜制药有限公司，批号：151003）；大鼠胃动素（MTL）ELISA试剂盒（批号：2016Z0121），大鼠胃泌素（GAS）ELISA试剂盒（批号：2016Z0122），大鼠P物质（SP）ELISA试剂盒（批号：2016Z0123），大鼠生长激素（SS）ELISA试剂盒（批号：2016Z0124），大鼠一氧化氮（NO）ELISA试剂盒（批号：2016Z0125），均由深圳子科生物科技有限公司提供。

（3）试验方法

SPF级的Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠适应性饲养一周（温度25±2℃，光照12h/d，湿度40-45%），喂养标准饲料，自由饮水。给药前一天称量每只大鼠的体重，按体重随机分组，共分为8组，即：空白组一10只，空白组二10只，模型组一10只，模型组二10只，阳性对照组10只，蛹虫草多糖高剂量组10只，蛹虫草多糖中剂量组10只，蛹虫草多糖低剂量组10只。以1.5mg·Kg·d的盐酸洛哌丁胺与生理盐水配制成2ml的悬浮液。

空白组以2mL/只灌胃生理盐水，模型组以1.5mg·Kg·d的盐酸洛哌丁胺与生理盐水配制成2ml的悬浮液给大鼠进行灌胃10天。造模10天后，空白组一与模型组一禁食不禁水12h后，全部以2ml灌胃活性炭悬浮液，灌胃1h后，用10%水合氯醛对大鼠进行麻醉，将大鼠剪取幽门至下端盲肠处的小肠轻拉平铺至直线。测量剪取的小肠长度（即小肠全长）及其幽门一直到活性炭运动前端的长度（即墨汁推进长度），计算小肠推进率。腹主动脉取血，3000转离心10min，离心得到血清并检测大鼠胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）、P物质的含量。

小肠推进率（%）=（墨汁推进长度/小肠全长）×100%。

结果显示：空白组一的小肠推进率（82.27±5.75%）、胃动素（242.17±14.17ｐg/ml）、胃泌素（160.18±14.85ｐg/ml）、生长抑素SS（38.42±4.19ｐg/ml）、P物质（56.53±2.47ｐg/ml）；

模型组一的小肠推动率（71.22±9.30%）、胃动素（230.22±8.46ｐg/ml）、胃泌素（145.39±16.74ｐg/ml）、生长抑素SS（45.89±3.81ｐg/ml）、P物质（53.73±3.58ｐg/ml）。

结果经过算术平均值和标准差表示，数值统计采用SPSS19.0软件单因素方差分析法(One-Way ANOVA)比较，模型组一的大鼠小肠蠕动率与空白组一相比极显著降低（0.01﹤P﹤0.05）。模型组一的大鼠胃动素、胃泌素和P物质的含量与空白组一的相比均显著降低（P﹤0.05）。模型组一的大鼠生长激素含量与空白组一的相比显著升高（P﹤0.05），说明盐酸洛哌丁胺诱导的大鼠功能性便秘的模型是成功的。

二、药物治疗

大鼠功能性便秘模型建立成功后，将造模成功的大鼠进行给药治疗，空白组二与模型组二每天以1ml/kg灌胃生理盐水，阳性对照组每天以3mg麻仁丸/kg灌胃给药，蛹虫草多糖高剂量组每天以800mg/kg灌胃给药，蛹虫草多糖中剂量组每天以400mg/kg灌胃给药，蛹虫草多糖低剂量组每天以200mg/kg灌胃给药，连续给药一周。禁食不禁水12小时后，全部以2ml灌胃活性炭悬浮液，灌胃1h后，用10%水合氯醛对大鼠进行麻醉，将大鼠剪取幽门至下端盲肠处的小肠轻拉平铺至直线。测量剪取的小肠长度（即小肠全长）及其幽门一直到活性炭运动前端的长度（即墨汁推进长度），计算小肠推进率。腹主动脉取血，3000转离心10min，离心得到血清并检测大鼠胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、生长抑素SS及P物质的含量。

数据处理：结果采用算术平均值和标准差表示，数值统计采用SPSS19.0软件单因素方差分析法(One-Way ANOVA)比较其显著性差异。测定结果见下表。

此外，将空白组二、模型组二、阳性对照组、蛹虫草多糖高剂量组、蛹虫草多糖中剂量组及蛹虫草多糖低剂量组与空白组一、模型组一进行对比，观察大鼠便秘重量、大鼠活动、毛色等指标，进一步证明造模成功。在整个实验过程中，模型组一、模型组二、阳性对照组、蛹虫草多糖高剂量组、蛹虫草多糖中剂量组及蛹虫草多糖低剂量组与空白组一、空白二相比，大鼠活动均减少，毛色都变暗。表1中可以看出，与空白组一、空白组二相比，模型组一、模型组二、阳性对照组、虫草多糖高剂量组、虫草多糖中剂量组、虫草多糖低剂量组的24h便粒重量均极显著降低（0.01﹤**P﹤0.05）。

表1 造模药物对24h便粒重量的影响

表2 多糖药物对肠蠕动的影响

表2中可以看出：模型组二与空白组二相比，模型组二的大鼠肠蠕动显著降低（*P﹤0.05）。与模型组二相比，阳性对照组及蛹虫草多糖高、中剂量组的大鼠肠蠕动显著提升（#P﹤0.05），说明其均具有不错的疗效。

表3 多糖药物对6h便粒重量的影响

表3中可以看出：模型组二与空白组二相比，模型组二大鼠6h便粒重量显著性降低（*P﹤0.05）。阳性对照组、蛹虫草多糖高、中、低剂量组与模型组二相比，阳性对照组、蛹虫草多糖高剂量组大鼠的6h便粒重量有显著性增加（#P﹤0.05），蛹虫草多糖中剂量组大鼠的6h便粒重量虽然高于模型组二，但是不具有显著性。

表4 多糖药物对大鼠胃动素含量的影响

表4中可以看出：模型组二与空白组二相比，模型组二大鼠胃动素含量显著降低（*P﹤0.05）。阳性对照组、蛹虫草多糖高、中、低剂量组与模型组二相比，阳性对照组、蛹虫草多糖高剂量组的大鼠胃动素含量有显著性增加（#P﹤0.05），蛹虫草多糖中剂量组的大鼠胃动素含量虽高于模型组二，但是不具有显著性。

表5 多糖药物对大鼠胃泌素含量的影响

表5中可以看出：模型组二与空白组二相比，模型组二大鼠胃泌素含量显著降低（*P﹤0.05）。阳性对照组、蛹虫草多糖高、中、低剂量组与模型组二相比，阳性对照组的大鼠胃泌素含量有显著性增加（#P﹤0.05），蛹虫草多糖高剂量组与蛹虫草多糖中剂量组的大鼠胃泌素含量虽高于模型组二，但是不具有显著性。

表6 多糖药物对大鼠P物质含量的影响

表6中可以看出：模型组二与空白组二相比，模型组二大鼠P物质含量显著降低（*P﹤0.05）。阳性对照组、蛹虫草多糖高、中、低剂量组与模型组二相比，阳性对照组、蛹虫草多糖高剂量组的大鼠P物质含量有显著性增加（#P﹤0.05），蛹虫草多糖中剂量组的大鼠P物质含量虽高于模型组二，但是不具有显著性。

表7 多糖药物对大鼠生长抑素SS含量的影响

表7中可以看出：模型组二与空白组二相比，模型组二大鼠生长抑素SS含量显著升高（*P﹤0.05）。阳性对照组、蛹虫草多糖高、中、低剂量组与模型组二相比，阳性对照组、蛹虫草多糖高剂量组的大鼠生长抑素SS含量有显著性降低（#P﹤0.05），蛹虫草多糖中、低剂量组的大鼠生长抑素SS含量没有显著的效果。

结论：蛹虫草多糖能显著升高血清中的胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）及P物质含量，改善功能性便秘，其中蛹虫草多糖高剂量组效果最显著。说明：蛹虫草多糖具有显著治疗功能性便秘的作用，是治疗功能性便秘的理想药物。

Claims

1.蛹虫草多糖在制备治疗功能性便秘药物方面的应用，其特征在于，将蛹虫草用水煎煮，过滤，滤液中加入无水乙醇至乙醇终浓度为70±5V%，静置，固液分离，所得沉淀即为蛹虫草多糖。

2.如权利要求1所述蛹虫草多糖在制备治疗功能性便秘药物方面的应用，其特征在于，将蛹虫草用水煎煮2次，第一次煎煮1h，第二次煎煮0.5h，合并两次滤液，并加入无水乙醇至乙醇终浓度为70V%，冰箱中静置过夜，离心分离，所得沉淀经冷冻干燥后即为蛹虫草多糖。