CN101337009B - 水葫芦提取物在制备降脂药中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及水葫芦提取物在制备降脂药中的应用，以及水葫芦提取物的制备方法。本发明所述的水葫芦提取物是雨久花科植物凤眼蓝Eichhorniacrassipes(Mart Solms)的茎、叶和/或根的提取物，所用的提取溶剂是水或中等极性至大极性的有机溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、正丁醇。水葫芦提取物也可以是水葫芦的茎、叶和/或根的鲜榨汁或鲜榨汁的干燥物。水葫芦提取物具有降血脂、抗脂肪肝作用。将水葫芦提取物制备成临床上可以接受的制剂用于各种疾病引起的血脂紊乱的降血脂治疗或脂肪肝患者的抗脂肪肝治疗，或将水葫芦提取物制备成保健品、食品或食品添加剂，用于特定人群的保健用途。
Description
技术领域
本发明涉及水葫芦提取物在制备降脂药中的应用，以及水葫芦提取物的制备方法。
背景技术
水葫芦又称凤眼莲、水浮莲，植物基源为雨久花科植物凤眼蓝Eichhorniacrassipes(Mart.Solms)的全草。50年前，粮食极度短缺的中国从南美引进水葫芦，广泛放养于南方乡村河塘，作为猪饲料。水葫芦的繁殖能力极强，以无性繁殖为主，在适宜条件下每5天就能繁殖一新植株，也能开花结实产生种子而进行有性繁殖，一支花大约结300粒种子。一公顷水面的水葫芦约有200万株，合300多吨。水葫芦过多会覆盖水面，堵塞河道，影响航运。如不及时清除，还会阻碍排灌，在汛期阻碍水流。浓密的水葫芦降低了光线对水体的穿透能力，影响水底生物的生长，并增加水中二氧化碳的浓度，降低水产品产量，因此有些学者将之列为“世界十大害草”之一。如何化害为利是目前研究的热点。
《中药大辞典》记载水葫芦“清凉解毒，除湿，祛风热”。未见水葫芦或其提取物有降脂作用的文献报道。
发明内容
本发明的目的之一是提供水葫芦提取物用于制备降脂药中的应用。
本发明的另一个目的是提供上述水葫芦提取物的制备方法。
本发明的另一个目的是提供水葫芦提取物用于制备降血脂的保健品、食品或食品添加剂的应用。
本发明所述的水葫芦提取物是雨久花科植物凤眼蓝Eichhornia crassipes(Mart.Solms)的茎、叶和/或根的提取物，所用的提取溶剂是水或中等极性至大极性的有机溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、正丁醇。水葫芦提取物也可以是水葫芦的茎、叶和/或根的鲜榨汁或鲜榨汁的干燥物。
所述水葫芦提取物是通过溶剂提取法或鲜榨汁法制备的，其中溶剂提取法包括：室温下浸泡提取、煎煮法提取、渗漉法提取、回流法提取。还可以采用一些新的提取方法，如超临界流体萃取提取法、微波提取法、超声波提取法、酶法提取法等制备。
本发明所述的应用可以将水葫芦提取物制备成临床上可以接受的制剂用于各种疾病引起的血脂紊乱的降血脂治疗或脂肪肝患者的抗脂肪肝治疗，或将水葫芦提取物制备成保健品、食品或食品添加剂，用于特定人群的保健用途。
本发明人通过给予高脂饲料、乙醇灌胃、CCl4葵花籽油溶液皮下注射的复合方式建立小鼠脂肪肝的模型，同时给予不同剂量的水葫芦提取物，给药后取血及肝组织，计算肝指数、检测血脂、肝脏内脂质及病理组织学检查。结果水葫芦提取物对于血清以及肝匀浆中的甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)、和低密度脂蛋白(LDL-C)的含量均有不同程度的降低，病理组织学检查也具有明显的改善，差别均具有统计学意义。动物实验结果显示，在一定剂量范围内，水葫芦提取物具有明显的降血脂、防治脂肪肝的作用，并呈一定的剂量依赖性。
具体实施方式
通过下面给出的具体实施例可以进一步理解本发明，但下述实施例不是对本发明的限制。
例1水葫芦提取物的制备
将采收的水葫芦的茎、叶和/或根洗净，甩干外表水份，用压榨机榨取鲜汁后，50℃干燥，干燥物加入等于干燥物重量3-8倍的30-95％的乙醇或甲醇或丙酮，室温浸泡2-3天，收集乙醇提取液，回收乙醇后提取液与鲜汁合并减压浓缩至比重1.1-1.2，再以同体积的氯仿多次萃取，直至氯仿萃取液颜色变成无色透明为止，合并氯仿萃取液，回收氯仿得到水葫芦的氯仿提取物。剩余的水相以上述方法，相继以乙酸乙酯或正丁醇萃取得到相应的提取物。最后剩余的水相过滤后，浓缩蒸干得到水提取物。各部分提取物合并为总提取物。
例2水葫芦总提取物的降血脂作用
将60只18-22g的雄性昆明种小鼠适应性喂养3天后，按体重随机分为6组，正常对照组，脂肪肝模型组(即模型对照组)，复方蛋氨酸胆碱片阳性对照，水葫芦乙酸乙酯提取物组剂量以含生药量计算，分别为3g/kg组6g/kg组，9g/kg组。除正常组给予普通饲料喂养外，其余各组每天均给予高脂饲料喂养，30％乙醇(0.15ml/10g)灌胃，从实验第一天开始，用40％CCl4葵花籽油溶液(0.05ml/10g)皮下注射，以后每隔3天注射一次，共4次。正常组同时注射同等剂量的生理盐水。每天下午除正常组和模型对照组给予生理盐水0.2ml/10g灌胃外，阳性对照组给予复方蛋氨酸胆碱片悬液(1.8g/kg)0.2ml/10g灌胃，其余3组分别给予3g/kg、6g/kg、9g/kg水葫芦提取物灌胃。实验周期为15天。实验期间实验动物自由饮水和进食。实验期间观察小鼠的一般情况，如体重、活动度、皮毛等；实验第15天下午给药后，从晚上8点开始禁食12小时，不禁水；实验第16天上午8点，小鼠称重，摘眼球取血，3000rpm/min，离心15分钟，取上清，并检测血脂：TG，CHO，LDL-C。
小鼠血清TG，CHO，LDL-C结果比较，见表1。模型组与正常组相比较，血清TG，CHO，LDL-C含量都有显著性增高。与模型对照组比较，水葫芦3g/kg组只有血清TG含量的下降有统计学意义(P＜0.01＝，而水葫芦6g/kg组对血清TG和CHO以及9g/kg组对TG、CHO和LDL-C均有明显的降低，差别有统计学意义。说明水葫芦提取物对于降低血清甘油三酯的作用最明显，其次分别为降低胆固醇和低密度脂蛋白的作用，且这些作用均具有一定的剂量依赖性。
表1各组血清TG，CHO，LDL-C结果比较(
mmol/L)
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与正常组比较 #P＜0.05，##P＜0.01。
例3水葫芦总提取物的抗脂肪肝作用
将60只18-22g的雄性昆明种小鼠适应性喂养3天后，按体重随机分为6组，正常对照组，脂肪肝模型组(即模型对照组)，复方蛋氨酸胆碱片阳性对照，水葫芦乙酸乙酯提取物组，剂量以含生药量计算，分别为3g/kg组6g/kg组，9g/kg组。除正常组给予普通饲料喂养外，其余各组每天均给予高脂饲料喂养，30％乙醇(0.15ml/10g)灌胃，从实验第一天开始，用40％CCl4葵花籽油溶液(0.05ml/10g)皮下注射，以后每隔3天注射一次，共4次。正常组同时注射同等剂量的生理盐水。每天下午除正常组和模型对照组给予生理盐水0.2ml/10g灌胃外，阳性对照组给予复方蛋氨酸胆碱片悬液(1.8g/kg)0.2ml/10g灌胃，其余3组分别给予3g/kg、6g/kg、9g/kg水葫芦提取物灌胃。实验周期为15天。实验期间实验动物自由饮水和进食。实验期间观察小鼠的一般情况，如体重、活动度、皮毛等；实验第15天下午给药后，从晚上8点开始禁食12小时，不禁水；实验第16天上午8点，小鼠称体重，颈椎脱臼处死，取肝脏，并称重，计算肝指数：肝指数＝肝重/体重×100％；取同一部位小鼠肝脏，用10％中性甲醛固定，脱水，包埋，切片，HE染色，在光镜下观察肝组织的脂肪变程度。剩余的肝脏组织取0.3g，在4℃下加入TMS液(Tris 6.05g，MgCl2609mg，蔗糖68.4g，加蒸馏水约500ml，用浓HCl调PH至7.5，补蒸馏水至1000ml)制成10％(W/V)肝匀浆，3000rpm/min，离心15分钟，取上清，并按试剂盒说明检测肝脏内脂质：TG，CHO，LDL-C。
肝湿重和肝指数的结果比较，见表2。与正常组比较，模型对照组肝脏湿重和肝指数显著的增加，P＜0.01。其余各组与模型组比较，肝脏重量和肝指数均有减轻。
表2各组肝湿重和肝指数结果的比较
注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与正常组比较 #P＜0.05，##P＜0.01。
小鼠肝脏TG，CHO，LDL-C结果比较，见表3。水葫芦各组肝匀浆TG，CHO，LDL-C与模型对照组比较都有明显的下降，水葫芦6g/kg和9g/kg组对肝匀浆TG、CHO和LDL-C的下降作用均具有显著性差异。说明水葫芦对肝脏甘油三酯，胆固醇和低密度脂蛋白具有比较明显的降低作用，且这种作用呈现出一定的剂量依赖性。
表3各组肝脏匀浆TG，CHO，LDL-C结果比较(
mmol/L)
注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与正常组比较 #P＜0.05，##P＜0.01。
肝脏肉眼及组织学观察 正常组的小鼠肝脏外观呈红褐色，质地软而富有弹性。模型对照组肝脏体积明显增大，重量增加，呈黄褐色，弹性减弱，切面油腻，甚至表面有明显的颗粒感。镜下观察，正常组肝窦清晰可见，肝索排列整齐，见附图1。模型对照组肝细胞体积明显增大，细胞浆内含有大量大小不一的脂肪空泡，肝细胞结构紊乱，有炎症细胞浸润，见附图2。水葫芦3g/kg组肝细胞内的脂肪空泡有所减少，且细胞内的脂肪空泡明显减小，见附图3。水葫芦6g/kg组细胞内脂肪空泡明显减少，部分肝小叶出现了正常的肝细胞和肝索结构，见附图4。水葫芦9g/kg组见附图5和阳性对照组见附图6，细胞内的脂肪空泡几乎消失，细胞结构也基本接近正常。
肝组织脂变程度比较结果见表4。表4表明，水葫芦提取物对改善小鼠的肝组织脂变程度具有较好的效果。
表4各组肝组织脂变程度比较
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与正常组比较 #P＜0.05，##P＜0.01。
例4水葫芦提取物用于制备降血脂药的不同剂型的制备
4.1片剂
水葫芦提取物加适量淀粉，压成片剂，每片含水葫芦提取物0.1g，基片重0.5g。
4.2胶囊
水葫芦提取物与辅料混合后直接填充入胶囊，每粒胶囊相当于0.1g-0.5g水葫芦提取物。
4.3口服液
水葫芦提取物加入适量的矫味剂、防腐剂，澄清、过滤、罐装后灭菌，制成每支5ml或10ml的口服液，每支口服液含水葫芦提取物0.1g-0.5g。
例5水葫芦提取物用于保健品、食品或食品添加剂的制备
5.1用于高血脂或脂肪肝人群的保健饮料
在10公斤纯净水中加入10g-1000g的水葫芦提取物及适量芒果、菠萝或橙汁、西番莲和添加剂，做成调血脂功能果汁饮料。
5.2用于高血脂或脂肪肝人群的的蛋糕
在10公斤面粉中加入10g-1000g的水葫芦提取物及1公斤鸡蛋和添加剂，做成具有调血脂功能的蛋糕。
5.3用于高血脂或脂肪肝人群的的饼干或馒头
在10公斤面粉中加入10g-1000g的水葫芦提取物和适量的添加剂，做成具有调血脂功能的的饼干或馒头。
Claims (4)
1.水葫芦乙酸乙酯提取物在制备降脂药中的应用，其特征在于，所述乙酸乙酯提取物通过以下方法制备：将采收的水葫芦的茎、叶和/或根洗净，甩干外表水份，用压榨机榨取鲜汁后，50℃干燥，干燥物加入等于干燥物重量3-8倍的30-95％的乙醇或甲醇或丙酮，室温浸泡2-3天，收集乙醇提取液，回收乙醇后提取液与鲜汁合并减压浓缩至比重1.1-1.2，再以同体积的氯仿多次萃取，直至氯仿萃取液颜色变成无色透明为止，合并氯仿萃取液，回收氯仿得到水葫芦的氯仿提取物，剩余的水相以上述方法，以乙酸乙酯萃取得到相应的乙酸乙酯提取物。
2.权利要求1所述的应用，其特征在于所述的水葫芦乙酸乙酯提取物是雨久花科植物凤眼蓝Eichhornia crassipes(Mart.Solms)的茎、叶和/或根的乙酸乙酯提取物。
3.权利要求1所述的应用，其特征在于能调节血脂使之恢复正常，并减少肝脏的脂肪沉积。
4.权利要求1所述的在制备降脂药中的应用，其特征在于水葫芦乙酸乙酯提取物可用于制备降血脂、抗脂肪肝的药品、保健品、食品或食品添加剂。
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