CN112716990A - 一种葵花盘提取物、含有葵花盘提取物的药物及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种葵花盘提取物、含有葵花盘提取物的药物及制备方法和应用，属于生物医药技术领域；所述葵花盘提取物的制备方法包括以下步骤：将葵花盘粉碎物和水混合，浸提，得到的水提液中加入纤维素酶，进行水解，得到水解液，对所述水解液进行固液分离，收集液体组分，得到葵花盘提取物。本发明制备得到的葵花盘提取物能够显著抑制酒精急性肝损伤所引起的MDA含量、肝脏指数、ALT和AST活性的升高，有效地抑制肝脏中SOD活性的降低，能减轻小鼠的肝组织损伤程度，HE染色说明葵花盘提取物能够缓解肝细胞炎症浸润现象。葵花盘提取物对酒精诱导的小鼠急性肝损伤有明显的修复作用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种葵花盘提取物、含有葵花盘提取物的药物及制备方法和应用。
背景技术
向日葵花盘为菊科植物向日葵(Helianthus annuuss L.)的花盘，亦称向日葵花托、向日葵饼和葵房，其性平、味甘淡、无毒、归肝经，主要功能有清热平肝、止痛、止血，用于治疗关节炎、乳腺炎、头晕、耳鸣、脘腹痛等。向日葵盘水煎液具有治疗肿瘤作用，向日葵花盘乙醇提取物有一定的降压作用，民间也用其作为调治萎缩性胃炎药膳。CN 108354956 A中公开了葵花盘粉及其有效成分在制备修复受损肝细胞药物中的应用，具体是用于修复由高尿酸血症引起的肝细胞损伤。但是目前还没有关于葵花盘提取物用于修复由酒精引起的肝损伤的记载和报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种葵花盘提取物、含有葵花盘提取物的药物及制备方法和应用，本发明的葵花盘提取物能够显著抑制酒精急性肝损伤所引起的MDA含量、肝脏指数、ALT和AST活性的升高，有效地抑制肝脏中SOD活性的降低，能减轻肝组织损伤程度，缓解肝细胞炎症浸润现象，对酒精诱导的急性肝损伤有明显的修复作用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种葵花盘提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)对葵花盘粉进行水提，得到水提液；
2)将所述水提液与纤维素酶混合进行水解，得到的水解液为葵花盘提取物。
优选的，步骤1)中所述葵花盘粉的粒径为100～200目。
优选的，步骤1)中所述水提为水浸提，所述水浸提的温度为45～50℃；所述浸提的时间为120～240min。
优选的，步骤2)中所述水提液和纤维素酶的质量比为100：(0.05～0.15)。
优选的，步骤2)中所述水解的温度为45～55℃；所述水解的时间为2～4h。
优选的，所述水解后还包括：将得到的水解体系进行固液分离，得到液体组分；所述液体组分进行浓缩和干燥，得到葵花盘提取物的粉剂。
本发明还提供了一种用于修复酒精诱导的急性肝损伤的药物，所述药物包括上述方案所述制备方法得到的葵花盘提取物和药学上可接受的辅料。
本发明还提供了上述方案所述制备方法得到的葵花盘提取物在制备急性肝损伤的药物中的应用。
优选的，所述急性肝损伤包括由酒精诱导的急性肝损伤。
优选的，所述药物的剂型包括粉剂、颗粒或片剂。
本发明提供了一种葵花盘提取物的制备方法，包括以下步骤：将葵花盘粉碎物和水混合，浸提，得到的水提液中加入纤维素酶，进行水解，得到水解液，对所述水解液进行固液分离，收集液体组分，得到葵花盘提取物。本发明利用纤维素酶处理能够改变细胞壁的通透性，有利于壁内的药效成分溶出，从而提高葵花盘中活性成分的提取率。本发明制备得到的葵花盘提取物能够显著抑制酒精急性肝损伤所引起的MDA含量、肝脏指数、ALT和AST活性的升高(P＜0.01)，有效地抑制肝脏中SOD活性的降低(P＜0.01)，能减轻小鼠的肝组织损伤程度，HE染色说明葵花盘提取物能够缓解肝细胞炎症浸润现象。葵花盘提取物对酒精诱导的小鼠急性肝损伤有明显的修复作用。
附图说明
图1表示葵花盘提取物对酒精致急性肝损伤小鼠体质量的影响；
图2表示葵花盘提取物对急性肝损伤小鼠肝组织炎症因子的影响；
图3表示葵花盘粉提取物对急性肝损伤小鼠肝组织HE染色的影响，其中A为正常对照组小鼠肝组织HE染色结果，B为模型组小鼠肝组织HE染色结果，C为实施例1葵花盘提取物给药组小鼠肝组织HE染色结果，D为实施例2葵花盘提取物给药组小鼠肝组织HE染色结果。
具体实施方式
本发明提供了一种葵花盘提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)对葵花盘粉进行水提，得到水提液；
2)将所述水提液与纤维素酶混合进行水解，得到的水解液为葵花盘提取物。
本发明首先对葵花盘粉进行水提，得到水提液。在本发明中，所述葵花盘粉是将葵花盘粉碎后制备得到的；所述葵花盘优选的来自于白城产的油葵，白城产的油葵中含有特有的生物碱、黄酮及小分子肽等生物活性物质；所述葵花盘粉的粒径优选为100～200目，进一步优选为150目。在本发明中，所述水提优选为水浸提，所述水浸提的温度优选为45～50℃；所述浸提的时间优选为120～240min，进一步优选为150～200min。在本发明中，所述葵花盘粉和水的质量比优选为1：(6～10)，进一步优选为1：(7～8)；所述水优选为去离子水。
得到水提液后，本发明将所述水提液与纤维素酶混合进行水解，得到的水解液为葵花盘提取物。在所述水提液中加入纤维素酶前，还包括将所述水提液加热至85～90℃，搅拌1h，冷却至45～55℃，再在所述冷却后的水提液中加入纤维素酶。在本发明中，所述水提液和纤维素酶的质量比为100：(0.05～0.15)，进一步优选为100：0.1。在本发明中，所述水解的温度优选为45～55℃；所述水解的时间优选为2～4h，进一步优选为3h。
在本发明中，将所述水提液加热至85～90℃能够起到杀菌的作用，所述45～55℃是纤维素酶的反应最适温度。在本发明中，所述纤维素酶的作用是破坏植物细胞的细胞壁，使内容物释放，这种破壁的方法反应条件比较温和，可降低对活性成分的破坏。
本发明在所述水解后优选的还包括：将得到的水解体系进行固液分离，得到液体组分；所述液体组分进行浓缩和干燥，得到葵花盘提取物的粉剂。
在本发明中，所述固液分离的方式优选为离心；所述离心的转速优选为5000～8000rpm，进一步优选为7000rpm；所述离心的时间优选为30～50min，进一步优选为40min。
在本发明中，所述浓缩的方式优选为悬蒸浓缩；所述浓缩的时间以体积浓缩至液体组分的五分之一为准；所述旋蒸浓缩的条件优选的包括：减压至400～600毫米汞柱，转速100转/分，电加热；所述干燥的方式优选为喷雾干燥；所述喷雾干燥的条件优选的包括：入口温度达到180℃，出口温度达到75℃，加热器表面温度达到245℃时开始进料，雾化器转速调至18000rpm。
本发明还提供了一种用于修复酒精诱导的急性肝损伤的药物，所述药物包括上述方案所述制备方法得到的葵花盘提取物和药学上可接受的辅料。
本发明还提供了上述方案所述制备方法得到的葵花盘提取物在制备急性肝损伤的药物中的应用。在本发明中，所述急性肝损伤优选的包括由酒精诱导的急性肝损伤。
在本发明中，所述药物的剂型优选的包括粉剂、颗粒或片剂；所述药物的给药方式优选为口服；以葵花盘提取物计，所述药物的给药剂量优选为100～200mg/kg(体重)。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
1)将葵花盘粉碎至100目，加入6倍质量的去离子水，在45℃充分搅拌120min，得到水提液；
2)将葵花盘水提液加热至85℃，搅拌1h，冷却至45℃，加入葵花盘水浸液总质量的0.1％的纤维素酶，水解3h，得到水解液；
3)将步骤2)的水解液在7000rpm的转速下离心20min，收集上清液，得葵花盘粗提液；
4)将步骤3)的葵花盘粗提液，使其体积悬蒸浓缩至原来的五分之一，喷雾干燥，即得葵花盘粉。旋蒸浓缩参数：减压至400～600毫米汞柱，转速100转/分，电加热。喷雾干燥参数：入口温度达到180℃，出口温度达到75℃，加热器表面温度达到245℃时开始进料，雾化器转速调至18000rpm。
实施例2
1)将葵花盘粉碎至200目，加入10倍质量的去离子水，在50℃充分搅拌240min，得到水提液；
2)将葵花盘水提液加热至90℃，搅拌1h，冷却至55℃，加入葵花盘水浸液总体积的0.1％的纤维素酶，水解3h，得到水解液；
3)将步骤2)的水解液在7000rpm的转速下离心20min，收集上清液，得葵花盘粗提液；
4)将步骤3)的葵花盘粗提液，使其体积悬蒸浓缩至原来的五分之一，喷雾干燥，即得葵花盘粉。旋蒸浓缩参数：减压至400～600毫米汞柱，转速100转/分，电加热。喷雾干燥参数：入口温度达到180℃，出口温度达到75℃，加热器表面温度达到245℃时开始进料，雾化器转速调至18000rpm。
实施例3
1.1实验动物SPF级昆明小鼠，8周，雄性，体重为20g左右，由牡丹江医学院动物中心提供。
1.2酒精诱导小鼠急性肝损伤模型的建立
小鼠正常饲养5d后，常规照射日光，随机分成正常对照组，酒精模型组，实施例1制备的葵花盘提取物给药组(200mg/kg)、实施例2制备的葵花盘提取物给药组(200mg/kg)，每组分小鼠10只。其中正常对照组和酒精模型组小鼠每天灌胃生理盐水，实验组小鼠每天灌胃等剂量的葵花盘提取物，连续灌胃给药20d。在末次给药2h后，除正常对照组灌胃等量生理盐水外，各组灌胃56°红星二锅头15m L/kg 1次。各组均于末次给药后禁食不禁水。
1.3生化指标检测各组小鼠禁食16h后，摘除眼球取血，分离血清备测；同时，颈椎脱臼处死小鼠，立即破腹取肝脏，用4℃生理盐水洗尽残血、除去结缔组织、滤纸拭干，称质量，计算肝脏指数(肝指数＝肝脏质量/体质量)；称取0.5g肝脏，加入一定量的生理盐水，匀浆后，按试剂盒说明书方法测定肝组织中MDA、蛋白质含量和活力，血清中SOD酶、A LT、A ST活力。
1.4肝组织病理切片
取不同组的小鼠肝组织，用4℃生理盐水冲尽残血，滤纸拭干，10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片，苏木素-伊红(HE)染色后，显微镜下观察肝组织切片的病理形态学变化。
1.5统计学分析数据应用SPSS 13.0统计软件进行分析。各项数据以x±s表示，用单因素方差分析及t检验比较组间差异的显著性。
2结果
2.1葵花盘提取物对酒精致急性肝损伤小鼠体质量的影响
模型组小鼠的肝脏指数显著高于空白组(P＜0.01)，说明模型组小鼠肝脏发生肿胀。葵花盘提取物的给药组能显著降低小鼠的肝脏指数，说明葵花盘提取物对小鼠肝脏肿胀有一定的缓解作用。
2.2葵花盘提取物对酒精致急性肝损伤小鼠肝脏SOD、MDA的影响
与正常组比较，模型组小鼠肝脏中SOD活性降低，而MDA含量明显升高，有极显著的统计学差异(P＜0.01)，说明酒精致小鼠急性肝损伤模型建立成功。结果显示，与模型组比较，葵花盘提取物给药组能显著提高小鼠酒精肝损伤的肝脏SOD活性，其中高浓度给药组与模型组比较具有差异显著性(P＜0.01)；葵花盘提取物给药组中MDA的含量与模型组相比下降较明显(P＜0.05或P＜0.01)，且随着给药浓度的提高MDA的含量也降低，具有剂量依赖性。
表1葵花盘提取物对酒精致急性肝损伤小鼠肝脏SOD、MDA的影响
注：与模型组相比，*表示P＜0.05；**表示P＜0.01。
2.3葵花盘提取物对酒精致急性肝损伤小鼠血清生化指标的影响
结果表明，与正常组相比，酒精致急性肝损伤模型组小鼠血清中的AST和ALT水平显著升高(P＜0.01)。与模型组相比，葵花盘提取物给药组中小鼠血清中的AST和ALT水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，AST活力分别下降到129.42和107.82(U/L)，ALT活力分别下降到148.54和127.42(U/L)。碱性磷酸酶(ALP)是肝脏炎症反应的重要指标，与模型组相比，葵花盘提取物给药组中小鼠血清中的ALP水平明显降低(P＜0.01)，随着给药剂量的增加，葵花盘提取物各剂量组呈现出ALP水平逐渐下降的趋势，具有剂量依赖性。
表2葵花盘提取物对酒精致急性肝损伤小鼠血清生化指标的影响
注：与模型组相比，*表示P＜0.05；**表示P＜0.01。
2.4葵花盘提取物对急性肝损伤小鼠肝组织炎症因子的影响
与空白对照组比较，模型组大鼠肝组织中TNF-α含量显著升高。与模型组比较，葵花盘提取物给药组小鼠肝脏组织中TNF-α含量显著降低，其中高浓度给药组下降较明显(P＜0.01)，说明葵花盘提取物对改善肝损伤的炎症水平有一定的作用效果。
2.5葵花盘提取物对急性肝损伤小鼠肝组织HE染色的影响
葵花盘提取物对酒精致急性肝损伤小鼠肝脏病理改变的影响正常对照组肝脏组织结构正常，肝细胞圆润、饱满、完整，排列整齐，中央静脉正常完整，没有严重的炎症细胞浸润现象，肝细胞胞浆均匀，肝细胞核仁清晰(图3中的A)。模型组小鼠的肝脏切片中肝组织破坏严重，具有肝细胞肿大现象，胞浆疏松，肝细胞排列紊乱，汇管区炎症细胞浸润等现象(图3中的B)；实施例1葵花盘提取物给药组小鼠肝组织细胞破坏现象有所缓解，细胞浸润现象得到很大程度减轻(图3中的C)，实施例2葵花盘提取物给药组小鼠肝细胞排列较整齐，除少量炎症细胞之外，与正常组基本一致(图3中的D)，说明葵花盘提取物对酒精导致的急性肝损伤有一定的修复作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种葵花盘提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)对葵花盘粉进行水提，得到水提液；
2)将所述水提液与纤维素酶混合进行水解，得到的水解液为葵花盘提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述葵花盘粉的粒径为100～200目。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述水提为水浸提，所述水浸提的温度为45～50℃；所述浸提的时间为120～240min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述水提液和纤维素酶的质量比为100：(0.05～0.15)。
5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述水解的温度为45～55℃；所述水解的时间为2～4h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述水解后还包括：
将得到的水解体系进行固液分离，得到液体组分；
所述液体组分进行浓缩和干燥，得到葵花盘提取物的粉剂。
7.一种用于修复酒精诱导的急性肝损伤的药物，所述药物包括权利要求1～6任意一项所述制备方法得到的葵花盘提取物和药学上可接受的辅料。
8.权利要求1～6任意一项所述制备方法得到的葵花盘提取物在制备急性肝损伤的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述急性肝损伤包括由酒精诱导的急性肝损伤。
10.根据权利要求7所述的药物或者权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括粉剂、颗粒或片剂。
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| CN114377050A (zh) * | 2022-02-15 | 2022-04-22 | 吉林大学 | 一种含葵花盘小分子的抗痛风组合物 |
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| CN108354956A (zh) * | 2018-03-08 | 2018-08-03 | 吉林大学 | 葵花盘粉及其有效成分在制备修复受损肝细胞药物中的应用 |
| CN109045224A (zh) * | 2018-10-29 | 2018-12-21 | 吉林大学 | 一种葵花盘薏苡仁复方组合物及在治疗肝损伤中的用途 |
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