CN101310718A - 减肥降血脂的含儿茶素的组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了儿茶素在降低血脂、治疗、和/或预防肥胖中的应用，它可通过促进脂肪细胞线粒体的生成来实现。本发明还公开了儿茶素在促进脂肪细胞线粒体生成中的应用，并由此产生降血脂、治疗、和/或预防肥胖的功效。

Description

减肥降血脂的含儿茶素的组合物及其用途

技术领域

本发明涉及减肥降血脂，尤其涉及绿茶提取物在该领域的应用。

背景技术

据调查我国至少有7000万肥胖症患者，而肥胖症是导致高血压、高血脂、糖尿病、冠心病、脑卒中等疾病的元凶，肥胖已越来越多受到普遍关注。近年来各种减肥品也相继问世，面对众多的减肥产品，消费者往往无所适从，传统的减肥产品一般通过腹泻和抑制人体食欲等方式达到减肥目的，对人体有所伤害，易反弹，过度节食也易导致营养不良。因此，寻求开发新的安全的预防和治疗肥胖的方法迫在眉捷。

过氧化物增殖物激活受体(PPARs)家族(PPARα、γ和δ)属于核受体超家族成员。PPARs家族的每个成员显示了在脂质代谢过程中重要的作用和组织特异选择性。PPARα，在肝脏中主要表达，以促进肝脏，肾脏，心和骨骼肌线粒体，过氧化物酶体β-氧化，而降低高脂血症。PPARγ主要调控成脂过程促进脂肪细胞中脂肪储存。PPARδ主要在肌肉和棕色脂肪中表达，诱导脂肪酸氧化和能量消耗的基因表达可促使脂肪重新分配和减肥效应。

近期研究亦显示糖尿病和肥胖患者不同组织中线粒体数目和功能明显下降。高脂饮食可诱导骨骼肌中线粒体氧化磷酸化基因的下调。急性的脂质输注可导致人线粒体蛋白的下降。降低PGC-1α(线粒体生成的调控的转录因子)与肥胖和糖尿病前期骨骼肌的病变有关。在病态的肥胖患者中的脂肪组织PGC-1α表达下降。腺病毒感染正常大鼠所致的高瘦素血症可降低体脂但并未引起游离脂肪酸和酮体的增高，显示了脂肪细胞中储存的脂肪被氧化。研究机理表明高瘦素可上调PGC-1α(线粒体生成的调节者，在正常白色脂肪中并不表达)继而上调UCP-1和UCP-2，下调了脂质合成的酶，上调了ACC和AMPK的表达(增加脂肪酸氧化相应的激酶)。

已有报道称，绿茶中的成份多酚和苯氧乙酸类药物非诺贝特可显著上调HepG2细胞株中PPARα的表达(Jiao，H.L.，Ye，P.& Zhao，B.L.(2003)Free Radic BiolMed 35，1121-8)。Lee等也报道绿茶中的主要成份EGCG可增加PPARα的活性(Lee，K.(2004)J Vet Sci 5，325-30)。儿茶酸也发现可抑制脂肪细胞分化，高浓度通过下调PPARγ和C/EBPα的表达(超过10μM)(Mori，M.& Hasegawa，N.(2003)PhytotherRes 17，566-7和Furuyashiki，T.，Nagayasu，H.，Aoki，Y.，Bessho，H.，Hashimoto，T.，Kanazawa，K.& Ashida，H.(2004)Biosci Biotechnol Biochem 68，2353-9)。Ashida等报道绿茶在内脏脂肪中通过抑制PPARγ的表达，降低GLUT4的转位和抑制SREBP-1的活化(Ashida，H.，Furuyashiki，T.，Nagayasu，H.，Bessho，H.，Sakakibara，H.，Hashimoto，T.& Kanazawa，K.(2004)Biofactors 22，135-40)。但至今PPARs参与绿茶减肥效应的机制仍然不明。而且目前相关研究大多仅限于绿茶粗提物或单一成份的应用。

因此，本领域迫切需要提供儿茶素四种高活性成分单体，表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和/或表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的混合物根据较明确的作用机制进行降血脂或减肥的应用；从而得到效果佳、副作用小的降血脂或减肥产品。

发明内容

本发明旨在提供一种具有明显降血脂或减肥功效的新物质。

在本发明的第一方面，提供了一种儿茶素或含儿茶素的提取物的用途，所述的儿茶素或含儿茶素的提取物可用于制备促进脂肪细胞线粒体生成的组合物。

在另一优选例中，所述的组合物用于降血脂、治疗肥胖、和/或预防肥胖。

在另一优选例中，所述的组合物还用于调节过氧化物增殖物激活受体(PPARs)通路；和/或促进脂肪酸氧化。

在另一优选例中，所述的调节过氧化物增殖物激活受体(PPARs)通路包括升高肝脏中PPARα的表达、改变不同部位白色脂肪中PPARγ的表达、和/或增加PPARδ的表达。

在另一优选例中，所述的组合物包括表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)。

在另一优选例中，组合物中EGCG的浓度为0.2-50μM；较佳地为0.5-25μM，更佳地为1-10μM。

在另一优选例中，所述的组合物还包括表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)和/或表儿茶素没食子酸酯(ECG)。

在另一优选例中，所述的组合物是药物组合物、食物组合物或保健品组合物。

在另一优选例中，所述的组合物含有：

(i)治疗有效量的儿茶素，和

(ii)药学上或食品学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的组合物包括选自下组的额外组分：芦荟、天然辣椒素、L-肉碱、咖啡因、膳食纤维或其组合。

在另一优选例中，所述的组合物选自：

(i)粉剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、酊剂、口服液或片剂；

(ii)饮料。

在另一优选例中，所述的含儿茶素的提取物包括绿茶提取物。

在本发明的第二方面，提供了一种儿茶素或含儿茶素的提取物在制备用于降血脂、治疗和/或预防肥胖的组合物中的用途。

在另一优选例中，所述的组合物还可以用于促进脂肪细胞线粒体的生成。

在另一优选例中，所述的组合物可调节过氧化物增殖物激活受体(PPARs)通路、和/或促进脂肪酸氧化。

在另一优选例中，所述的组合物可增加肝脏中PPARα的表达、改变不同部位白色脂肪中PPARγ的表达、和/或增加PPARδ的表达。

在另一优选例中，所述的组合物可提高棕色脂肪的功能和/或促使白色脂肪向棕色脂肪分化。

在另一优选例中，所述的组合物可刺激脂肪细胞分化，诱导分化成小脂肪细胞。

在另一优选例中，所述的组合物可用于治疗或预防脂肪肝。

在另一优选例中，所述的组合物可用于治疗或预防动脉粥样硬化。

在另一优选例中，所述的组合物可用于治疗或预防II型糖尿病。

在本发明的第三方面，提供了一种减肥方法，包括步骤：给需要的对象施用茶提取物儿茶素。

在本发明的第四方面，提供了一种降低血脂的方法，包括步骤：给需要的对象施用茶提取物儿茶素。

在本发明的第五方面，提供了一种改变过氧化物增殖物激活受体(PPARs)通路的方法，包括步骤：给需要的对象施用茶提取物儿茶素。

在本发明的第六方面，提供了一种促进脂肪细胞线粒体生成的方法，包括步骤：给需要的对象施用茶提取物儿茶素。

在本发明的第七方面，提供了一种促进脂肪酸氧化的方法，包括步骤：给需要的对象施用茶提取物儿茶素。

在另一优选例中，本发明所述的施用对象是哺乳动物，更佳地为人。

据此，本发明提供了儿茶素四种高活性成分单体，表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和/或表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的混合物根据较明确的作用机制进行降血脂或减肥的应用；从而得到了效果佳、副作用小的降血脂或减肥产品。

附图说明

在各附图中HF+GTCs表示高脂+GTCs组、HF表示高脂饮食对照组、CHOW+GTCs表示普通饮食+GTCs组、CHOW表示普通饮食组。

图1显示了GTCs对于SD大鼠体重指数的效应；其中

A是高脂饮食组添加或不添加GTCs45天后的大鼠背部图片，左为高脂饮食组添加GTCs，右为高脂饮食组不添加GTCs；

-B是高脂饮食组添加或不添加GTCs45天后的大鼠肝组织图片，左为高脂饮食组添加GTCs，右为高脂饮食组不添加GTCs；

C，D表示当GTCs的添加剂量为100mg/kg(体重)/天时，在干预30或45天天后，HF+GTCs、HF、CHOW+GTCs和CHOW所呈现的不同的体重，其中C中N＝8，与高脂饮食组对照有差异(#p＜0.05)，D中N＝8，与高脂饮食组对照有差异(#p＜0.05)，与普通饮食组对照有差异(*p＜0.05)；

E显示GTCs降低了肝脏中甘油三脂的含量，#与HF组对照(p＜0.05)，*与CHOW组对照(p＜0.05)；

F显示GTCs降低了肝脏/体重比，#与HF组对照(P＜0.05)，*与CHOW组对照(p＜0.05)；

G显示了GTCs降低了血甘油三脂的含量，#与HF组对照(p＜0.05)，*与CHOW组对照(p＜0.05)；

H显示了GTCs降低了MDA(丙二醛)的水平，#与HF组对照(p＜0.05)，*与CHOW组对照(p＜0.05)。

图2是免疫印迹分析结果，显示了GTCs对于皮下和内脏白色脂肪组织PPARγ的表达(N＝6)的影响，数值以相对于对照组的倍数表示，取3次试验的平均数±标准差表示，β-肌动蛋白作为内参。

A是GTCs对皮下脂肪组织中PPARγ(p＜0.05)的表达的影响；

B是GTCs对内脏白色脂肪组织中PPARγ(p＜0.05)的表达的影响。

图3是蛋白印迹和RT-PCR分析结果，显示GTCs增加了脂肪组织PPARδ的表达，激活了PPARδ相关的脂肪酸氧化和解偶联蛋白(N＝6)，数值以相对于对照组的倍数表示，取3次试验的平均数±标准差表示，其中

A、B和C分别显示GTCs增加了PPARδ在棕色脂肪(A，p＜0.05)、在皮下白色脂肪(B，p＜0.05)和在内脏白色脂肪中(C，p＜0.05)的表达；

D和E显示了GTCs增加了皮下白色脂肪和内脏白色脂肪中UCP1 mRNA的表达；

F、G和H显示了GTCs增加了棕色脂肪CPT-1(F，p＜0.05)、AOX(G，p＜0.05)和UCP-1(H，p＜0.05)mRNA的表达。

图4显示了EGCG影响PPARγ、C/EBPα、β和CHOP-10的表达，数值以相对于对照组的倍数表示，取3次试验的平均数±标准差表示，其中

A显示EGCG处理或未处理的细胞油红染色结果，A1作为对照是未经EGCG处理的，A2是经EGCG处理的；

B显示细胞中甘油三酯含量分析结果；

C显示上清中甘油含量分析结果；

D显示游离脂肪酸含量分析结果；

E显示EGCG干预或未干预组的Hoechst33258核染色结果，E1作为对照是未经EGCG干预的，E2是经2.5μM EGCG处理的，E3是经25μM EGCG处理的，E4是经50μM EGCG处理的，E5是经100μM EGCG处理的；

F显示EGCG干预或未干预组C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ、CHOP-10和PPARδ蛋白免疫印迹分析结果；

G、H、I，J和K为上述蛋白印迹灰度分析结果；

L显示EGCG干预或未干预组组织中AOX，UCP-1，FAS和FAT RT-PCR的分析结果；

M、N，O和P显示EGCG干预或未干预组关于AOX、UCP-1、FAS和FAT RT-PCR灰度分析结果。

图5显示了EGCG刺激3T3-L1脂肪细胞线粒体生成的结果，数值以相对于对照组的倍数表示，取3次试验的平均数±标准差表示，其中

A是线粒体体积应用MitoTracker染色进行分析的结果；

B是线粒体耗氧的测定结果；

C是线粒体蛋白表达分析结果；

D是线粒体DNA含量分析结果

E是免疫蛋白印迹分析PGC-1α的表达的结果。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现EGCG、或儿茶素、或含有儿茶素的提取物可以有效地降血脂和减肥。它可以通过刺激线粒体生成而降低脂肪的异常堆积；具体地，它调节PPAR的通路、和/或促进脂肪酸的氧化。

术语

如本文所用，术语“含有”或“包括”包括了“包含”、“基本上由……构成”、和“由……构成”。

如本文所用，术语“基本上由……构成”指在组合物中，除了含有必要成分或必要组份之外，还可含有少量的且不影响有效成分的次要成分和/或杂质。例如，可以含有甜味剂以改善口味、抗氧化剂以防止氧化，以及其他本领域常用的添加剂。

如本文所用，“茶提取物儿茶素”或“茶儿茶素”或“儿茶素”是指包含黄烷醇类的一种或多种儿茶素(catechins)的混合物。以儿茶素总量计，它含有30-100％的EGCG；较佳地，含有50-100％EGCG，更佳地，含有60-100％EGCG。它还可以含有EGC、ECG、中的一种或其组合；较佳地，含有10-40％ECG、10-35％EGC，和/或3-20％EC；更佳地，含有15-30％ECG、12-25％EGC，和/或6-15％EC。其中优选绿茶儿茶素(Green TeaCatechins，简称GTCs)。

如本文所用，术语“必要成分”指作为活性成分的必要的化学物质，即EGCG、EGC、ECG和EC等儿茶素。

如本文所用，术语“组合物”或“本发明的组合物”或“本发明提供的组合物”包括药物组合物、食物组合物、保健品和/或膳食添加剂，只要它们含有或基本上由儿茶素组成。

如本文所用，术语“组合物”或“本发明的组合物”或“本发明提供的组合物”包括(a)降低血脂的组合物，(b)治疗、预防肥胖的组合物，(c)通过调节PPAR通路的组合物，(d)促进脂肪细胞线粒体生成的组合物，和/或(e)促进脂肪酸氧化的组合物。

如本文所用，茶(Camellia sinensis(L.)Kuntze)指山茶科(Theaceae)茶(Camellia)属植物。可用于本发明的茶包括绿茶、黄茶、白茶、青茶、黑茶和红茶，更佳地为绿茶。

本发明提供的儿茶素可以用本领域熟知的方法从茶中提取，其提取纯度为50-98％，较佳地为80-98％，更佳地为90-98％。

如本文所用，术语“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。

如本文所用，术语“药学上或食品学上可接受的载体”指用于治疗剂给药或保健品食用的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。来自于EGCG、EGC、ECG和EC等儿茶素之外的非必要成分，以及其他非必要成分(例如其他辅助性药材或食材)，也包括在药学上或食品学上可接受的载体的定义中。

用途

本发明提供的儿茶素可用于制备治疗高脂血症的药物。本发明提供的儿茶素可用于制备治疗或预防肥胖的药物。

发明人通过应用高脂饮食诱导肥胖大鼠模型和3T3-L1脂肪细胞的模型，从大鼠体重及血脂的改变；脂肪细胞线粒体生成及功能的变化，发现儿茶素具有使大鼠减肥、降脂的作用；还具有调节PPARs通路，改变细胞线粒体形态，数目及功能的作用。

一、儿茶素具有减肥和降血脂的效应

应用大鼠模型，发现儿茶素可以使大鼠体重显著降低，还可以显著降低肝重，肝脏甘油三脂和血甘油三脂。

血和肝脏中的脂肪与脂肪肝和动脉粥样硬化的发病有关，本发明提供的儿茶素还可以用于制备治疗或预防脂肪肝和/或动脉粥样硬化。

二、儿茶素刺激3T3-L1脂肪细胞线粒体的生成

EGCG刺激了脂肪细胞线粒体的体积。EGCG在2.0和5.0μM时，显著刺激了线粒体体积的增加。EGCG在1.0-5.0μM显著增加了脂肪细胞的耗氧。EGCG增加了脂肪细胞线粒体复合物蛋白I，II，V的表达。EGCG还增加了线粒体D-loop区DNA的拷贝数，D-loop区是启动线粒体DNA重链和轻链转录的起始部位。EGCG增加了脂肪细胞中PGC-1α(过氧化物增殖物激活受体γ辅激活蛋白-1α，peroxisome proliferatoractivated-receptor γ coactivator-1α)蛋白水平的表达。

三、儿茶素在皮下脂肪和内脏脂肪中显示了对PPARγ表达的不同效应

儿茶素增加了皮下白色脂肪组织PPARγ的表达，而降低了PPARγ在内脏白色脂肪(肠系膜)中的表达。儿茶素可减少内脏、肝脏和血液中的脂肪，还可用于制备治疗II型糖尿病的药物。

四、儿茶素上调脂肪组织中PPARδ及其下游基因的表达

儿茶素可增加内脏白色脂肪组织和棕色脂肪组织中PPARδ的表达。儿茶素还可使PPARδ的下游基因靶基因，包括CPT-1(肉碱脂酰转移酶-1，carnitinepalmitoyltransferases-1)，AOX(乙酰辅酶A氧化酶，acyl-CoA oxidase)和UCP-1(解耦联蛋白，uncoupling protein)在皮下和内脏白色脂肪组织中表达，这进一步确定了儿茶素使PPARδ上调的效应；而UCP-1是棕色脂肪组织的特征性标记表达。

五、儿茶素改善了3T3-L1脂肪细胞中PPARγ，C/EBPα、β(CCAAT/增强结合蛋白α、β，CCAAT/enhancer-binding proteinα、β)和CHOP-10(C/EBP同源蛋白-10，C/EBP-homologous protein-10)的表达，通过PPARδ的通路改善了脂肪细胞的脂质氧化

EGCG(1-5μM)显著降低了3T3-L1脂肪细胞的甘油三脂的含量。EGCG增加了上清中甘油的分泌但没有增加脂肪酸的含量。EGCG上调了C/EBPα和C/EBPβ的表达，同时降低了CHOP-10的表达。生理剂量的EGCG上调了PPARδ的表达和涉及到能量消耗的酶包括AOX和UCP-1的表达。EGCG增加了FAT(脂肪酸转运体，fatty acidtransporter)的表达。

组合物

在本发明中，各种组合物可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式，可以将活性成分与常规的赋形剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、粘合剂、溶剂、增稠剂或增溶剂等药物辅料混合，制成任何一种适合于临床使用的剂型，如粉剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、口服液体制剂等，优选缓释剂型，可以使必要成分缓慢而稳定、持续地释放。所述的缓释剂型可以通过常规的方法制得。

所述的组合物可以是保健饮料等。

本发明提供的用作治疗或预防肥胖的组合物以其中所含的活性成分(儿茶素)计，其有效剂量为每日0.01-5克/60千克体重，更佳地为0.1-2.0克/60千克体重。

本发明提供的用于降低血脂的组合物中还可包括但并不限于下述一种或多种代表性的降血脂物质：芦荟、天然辣椒素、L-肉碱、咖啡因、膳食纤维或其组合。

本发明提供的用于预防和/或治疗肥胖的组合物中还可包括但并不限于下述一种或多种代表性的减肥物质：芦荟、天然辣椒素、L-肉碱、咖啡因、膳食纤维或其组合。

本发明提供的促进脂肪细胞线粒体生成的组合物中还可包括但并不限于下述一种或多种代表性的减肥物质：芦荟、天然辣椒素、L-肉碱、咖啡因、膳食纤维或其组合。

本发明提供的调节PPARs通路的组合物中还可包括但并不限于下述一种或多种代表性的减肥物质：芦荟、天然辣椒素、L-肉碱、咖啡因、膳食纤维或其组合。

本发明提供的促进脂肪酸氧化的组合物中还可包括但并不限于下述一种或多种代表性的减肥物质：芦荟、天然辣椒素、L-肉碱、咖啡因、膳食纤维或其组合。

当用于制备药物组合物或食物组合物时，所用的儿茶素的有效剂量可随施用的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。

在本发明的另一优选方式中，所述的组合物作为一种膳食添加剂，添加到水、饮料、固体食品、烹饪菜肴中。

在本发明的另一优选方式中，所述的食品上学可接受的载体或赋形剂选自：填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、矫味剂、包覆材料、膳食制品、或缓/控释剂。

应理解，本发明的组合物中还可含有其它人体所必需的或对人体有益但不影响或不产生直接的药效的成分。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。

本发明的主要优点在于：

1、儿茶素具有明显的减肥功效；

2、儿茶素具有明显降血脂功效；

3、儿茶素具有明显刺激线粒体生成的功能；

4、儿茶素具有有效调节PPARs通路的功能；

5、儿茶素具有有效促进脂肪酸氧化的功能；

6、儿茶素是天然产物没有副作用。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分比和份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1

一、材料

动物

30天雄性Sprague-Dawley大鼠重量180-200克(购自Vital Active公司)。饲养条件SPF级，环境温度22℃，12小时昼夜交替。

药品

绿茶儿茶素(Green Tea Catechins，简称GTCs)纯度为98％，含50％EGCG；22％ECG；18％EGC和10％EC(HPLC分析)；GTCs购自Fullgreen生物公司(中国四川绵阳)。

其它材料

PGC-1α(sc-5816)，PPAR-γ-2(sc-7273)，PPARδ(sc-7197)，PPARγ(sc-7196)，PPARα(sc-1985)，CHOP-10(sc-7351)，C/EBPα(sc-61)，C/EBPβ(sc-150)和β-Actin(β-肌动蛋白)(sc-1616-R)的抗体购自Santa Cruz公司；

Tubulin(微管蛋白)和EGCG的抗体购自Sigma公司；

Mito-Tracker Green FM(线粒体绿色示踪剂)，complex I，II，III，和V(线粒体电子传递链复合物I，II，III，和V)的抗体购自Invitrogen公司；

GREEN PCR Master Mix购自ABI(Warrington，UK)公司；

BD Oxygen Biosensor System plate购自BD Biosciences公司(California，USA)；

线粒体D-loop and 18SRNA引物购自赛百盛公司；

其他细胞培养试剂均购自于Invitrogen公司。

二、方法

动物喂养及分组

所有动物适应性喂养三天后随机分为两组。一组应用普通饮食；另一组应用高脂饮食(含15％饱和脂肪，1％胆固醇)。

大鼠高脂喂养30天后称重确定肥胖模型，再随机分为普通饮食对照组，高脂饮食组，普通饮食+GTCs组和高脂饮食+GTCs组(每组10只)。

GTCs的剂量为20mg/kg体重/天。每天观察大鼠体重和记录每天的消耗食物量。添加GTCs喂养后30或45天，大鼠被处死，肝脏和脂肪组织被收集并保存在-75℃。

细胞培养

3T3-L1前脂肪细胞用完全培养液(DMEM+10％FBS+100u/ml青、链霉素)，在37℃孵箱(5％二氧化碳，95％空气)中培养，每2天换液1次。待细胞生长至完全融合后2天(第0天)，开始诱导分化。

具体步骤为：将培养液换成含0.5mM异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)、0.25μM地塞米松和1μM胰岛素的完全培养液48h后，撤去IBMX和地塞米松，使完全培养液中只含有1μM胰岛素；2天后换液，撤去胰岛素，使用不含有任何诱导剂的完全培养基；以后每2天换液1次，直至第8天95％以上细胞已分化为成熟的脂肪细胞。EGCG溶解于PBS(PH7.4)中，所用实验中EGCG再溶解于培养基中。

甘油三脂测定

甘油三脂和甘油的测定按照Shimabukuro等报道的方法(Shimabukuro，M.，Koyama，K.，Chen，G.，Wang，M.Y.，Trieu，F.，Lee，Y.，Newgard，C.B. & Unger，R.H.(1997)Proc Natl Acad Sci USA 94，4637-41)。

50mg肝组织匀浆后加入1ml细胞裂解液(含5％)Triton X-100。

甘油三脂的含量应用测定样品中甘油的方法(Shimabukuro，M.，Koyama，K.，Chen，G.，Wang，M.Y.，Trieu，F.，Lee，Y.，Newgard，C.B.& Unger，R.H.(1997)Proc Natl Acad Sci USA 94，4637-41)。

血甘油三脂的含量应用日立自动生化分析仪测定。

3T3-L11脂肪细胞中甘油三脂的含量应用甘油三脂的测定试剂盒测定(GPO-Trinder；购自Sigma。

蛋白定量应用BCA^TM蛋白分析试剂盒(购自PIERCE，USA)。

脂肪酸和甘油的测定

成熟的3T3-L1脂肪细胞应用不同浓度的EGCG孵育48小时后，应用含1％BSAD-Hank氏液洗两次。

测定上清中甘油和脂肪酸的含量(购自Roche的试剂盒)。

RT-PCR

大鼠脂肪组织和3T3-L1脂肪细胞中RNA应用TRIzol试剂进行抽提(购自Invitrogen，USA)。

应用SuperScript First-Strand Synthesis System逆转录酶为CDNA。引物和基因Gene-bank的序列号具体如下：

基因	上游序列5’-3’	下游序列5’-3’	Tm℃	GeneBank序列号
					β-actin(rat)AOX(rat)CPT-1(rat)UCP-1(rat)β-actin(cell)FAS(cell)AOX(cell)UCP-1(cell)FAT(cell)	TACAA CCTCC TTGCA GCTCCGCCCTCAGCTATGGTATTACTATGTGAGGATGCTGCTTCCCTCACCTT TGAGCTCCTCCCAGGGTGTGATGGTGGGAATGTGCTCCCAGCTGCAGGCCTTGTTCGCGCAAGTGAGGAGATCCAAGGTGAAGGCCAGAGTTTTGGATCTTTGATGTGC	GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTCAGGAACTGCTCTCACAATGCCTCGGAGAGCTAAGCTTGTCTGATTTGCCTCTGGATGCGCACGATTTCCCTCTCAGCTGGCCCGGTAGCTCTGGTGTACAGGATCCGACTGTTTACCTCGGTCCTTCCTTGGTGTACTTCAATAGGTTCTGAAACATC	586364585860545458	J00691J02752L07736M11814X03672MMFASCAF006688U63419NM007643

RT反应1ug总RNA合成cDNA。总体积20ul，42℃反应60min，95℃反应5min。合成的cDNA，使用Takara公司的DDR305A Ex Taq(Hot start version)进行PCR扩增。

PCR扩增反应总体积50ul，变性95℃，1min；退火58℃1min；延伸72℃1min；共进行27次循环，末次循环后延伸8min。

取扩增反应液10ul进行2％琼脂糖凝胶电泳，紫外检测仪下观察并拍照记录。

Western blot

大鼠脂肪组织匀浆应用裂解液(含有100mM NaCl，10mM TrisCl，1mMEDTA，pH8.0，1μg/ml抑蛋白酶肽(Aprotinnin)，100μg/ml苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF)，10μg/ml亮抑酶肽(leupeptin)12000g 4℃离心5分钟收集上清。

应用BCA方法(购自Pierce，USA)测定蛋白浓度。

细胞各种处理因素作用后，弃去培养液，用PBS充分清洗，加入细胞裂解液，用细胞刮匙刮下细胞，冰上孵育30分钟，13000r/min 4℃离心10分钟，收集上清即为细胞蛋白提取液。

应用Bradford法进行总蛋白定量，-80℃保存。

蛋白用SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离后，转移至固相支持体硝酸纤维素膜上，室温下封闭1小时，加入一抗PPARδ(1∶500)，PPARα(1∶500)，CHOP-10(1∶400)，C/EBPα(1∶500)，C/EBPβ(1∶500)，PPARγ(1∶1000)，PGC-1α(1∶1000)，β-Actin(1∶500)，α-tubulin(1∶10000)，复合物I(ComplexI)(1∶2000)，复合物II(Complex II)(1∶2000)，复合物III(Complex III)(1∶2000)和复合物V(ComplexV)(1∶2000)，4℃孵育过夜，洗膜，加入二抗(辣根过氧化物酶标记的抗体)，室温孵育1小时，ECL发光，X线胶片感光。应用NIH Image图像分析软件对蛋白条带的密度进行半定量分析。

油红染色

成熟脂肪细胞的油红染色方法见报道(Balasubramanian，S.& Eckert，R.L.(2004)J Biol Chem 279，24007-14)。

细胞应用PBS洗三次再用含10％甲醛的PBS固定30分钟。固定后，细胞应用油红染液染30分钟接着移去过多的染液，显微镜观察仅有分化成熟的脂肪细胞甘油三脂着色。过饱和前脂肪细胞经应用分化诱导剂刺激48小时后，5μMEGCG添加入培养基中孵育8天，第10天油红染色。仅分化的脂肪细胞被着色，完全成熟的脂肪细胞应用EGCG孵育48小时，应用甘油三脂的定量试剂盒进行定量分析。

Hoechest 33258核染色

细胞应用EGCG处理48小时后用Carnoy’s固定液固定。固定后的细胞应用DNA的荧光染料Hoechst 33258(3μg/ml)(购自北京鼎国公司)染30分钟。

核的形态应用荧光显微镜观察。镜下观察到细胞核明显缩小，染色质固缩，核碎裂判断为凋亡细胞。

丙二醛(MDA)的检测

肝脏脂质过氧化水平测定TBARS。肝脏匀浆液与1ml 20％三氯乙酸混合，0.8ml水，1ml 0.67％(w/v)2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid)和0.1ml 0.2％(w/v)丁基化羟基甲苯(butylated hydroxytoluene，BHT)。混旋后加热至100℃60分钟。TBARS应用3ml正丁醇抽提，离心4400×g 10分钟。丁醇层的吸光度波长532nm读取，值以MDA nmol数/g组织湿重表示。水解的1，1，3，3-四乙氧基丙烷(Hydrolyzed1，1，3，3-tetraethoxypropane)作为MDA的标准。

线粒体体积的测定

荧光探针Mito-Tracker Green FM(线粒体绿色示踪剂)可以特异性用于线粒体的染色，测定线粒体的体积。脂肪细胞应用EGCG作用24小时，胰酶消化，收集细胞，重悬于KRB缓冲液，再于Mito-Tracker Green FM(100nM)孵育30分钟，离心收集细胞，悬于KRB缓冲液中，流式细胞仪(购自FACS Calibur Becton Dickinson)分析荧光强度。(Goss，G.G.，Adamia，S.& Galvez，F.(2001)Am J Physiol Regul IntegrComp Physiol 281，R1718-25)。

线粒体呼吸耗氧的测定

完整细胞的耗氧指标反映线粒体的呼吸功能。BDTM Oxygen Biosensor System是氧敏感的荧光探针(三氯1，7-二苯-1，10-菲咯啉钌)氧能够灭活该探针的荧光呈现剂量依赖效应。荧光的强度直接反映了氧消耗的速率，间接反映了细胞的耗氧。这种独特的技术能够反映瞬间氧的水平。EGCG刺激后，脂肪细胞被接种在BD OxygenBiosensor System 96孔板内，应用荧光酶标仪读值，激发波长为485nm，发射波长为630nm，60分钟观察，间隔1分钟读值(Wilson-Fritch，L.，Nicoloro，S.，Chouinard，M.，Lazar，M.A.，Chui，P.C.，Leszyk，J.，Straubhaar，J.，Czech，M.P.& Corvera，S.(2004)J Clin Invest 114，1281-9)。

线粒体DNA含量的测定

细胞DNA使用ABI公司的SYBR-Green Master Mix，进行PCR扩增(Stratagene定量PCR仪)。PCR产物通过SYBR Green I染料荧光检测定量。引物序列的设计参考文献，引物由上海赛百盛公司合成。引物序列为线粒体mitochondrial D-loop上游，5’-AATCTACCATCCTCCGTG-3’，下游5’-GACTAATGATTCTTCACCGT；18SRNA上游：5’-CATTCGAACGTCTGCCCTATC-3’和下游5’-CCTGCTGCCTTCCTTGGA-3’。实验结果以线粒体D-loop相对于18sRNA基因的比值表示(Kuroda，Y.，Mitsui，T.，Kunishige，M.，Shono，M.，Akaike，M.，Azuma，H.& Matsumoto，T.(2006)Hum Mol Genet 15，883-95.)。

三、统计学处理

两组数据比较采用t检验，多组数据采用ANOVA作统计学处理，结果用平均值±标准差表示，以P＜0.05表示差异显著性。

四、结果

GTCs具有减肥和降血脂的效应

高脂饮食的大鼠体重较普通饮食的大鼠体重有显著性差异。

GTCs添加组体重显著性降低(见图1A)；

添加GTCs组30天大鼠体重较对照组明显降低(分别降低约9.4％和6.3％)(见图1C)。此种效应在应用GTCs喂养45天后更加显著(分别下降约11.8％和8.2％)(见图1D)。

GTCs添加组显著降低了肝重/体重％(见图1B，F)，肝脏甘油三脂和血甘油三脂(见图1 E，G)。

GTCs添加组显著降低了肝脏中MDA的含量(见图1H)。

结果表明，长期应用GTCs会更加降低体重。短期内GTCs的添加能使超重的体重得到控制，将有助于改善2型糖尿病的预后。

另外，GTCs不仅降低体重而且可降低血和肝脏中的脂肪，二者与脂肪肝和动脉粥样硬化发病有关。通过服用GTCs可以降低肝脏中的储存脂肪和循环中的脂肪可能抑制这类疾病的进程。

GTCs在皮下脂肪和内脏脂肪中显示了对PPARγ表达的不同效应

GTCs对于不同部位的脂肪组织PPARγ的表达显示出不同的效应。

GTCs增加了皮下白色脂肪组织PPARγ的表达，较普通饮食组增加约39.8％(见图2A)；较高脂饮食组增加约50.2％(见图2A)。

GTCs降低了PPARγ在内脏白色脂肪(肠系膜)中的表达，较高脂饮食组降低约23.1％(见图2B)；较普通饮食组降低约18.7％(见图2B)。

结果表明，GTCs参与PPARs的调控是GTCs减肥的机制。

在脂肪组织中GTCs显示其独特的效应。GTCs增加了大鼠腹壁白色脂肪组织PPARγ的水平，而降低了内脏白色脂肪组织PPARγ的水平。

在内脏白色脂肪组织中降低的PPARγ的水平和脂肪组织的重量，表明应用GTCs治疗可以抑制脂肪在该部位的异常堆积。在腹壁白色脂肪组织，增加的PPARγ的水平促使了成脂过程和促进脂肪在腹壁沉积，减少在内脏和肝脏和血液中。

提升腹壁白色脂肪组织中脂质的代谢功能是治疗2型糖尿病的重要策略，因此，应用绿茶或添加GTCs有助于改善疾病。

GTCs上调了脂肪组织中PPARδ及其下游基因的表达

GTCs添加组增加了大鼠脂肪组织中PPARδ的表达。

棕色脂肪组织中，GTCs添加组较高脂饮食组增加约23.2％；较普通饮食组增加约19.7％(见图3A)。

皮下白色脂肪组织中，GTCs添加组较高脂饮食组增加约80.1％；较普通饮食组增加约39.6％(见图3B)。

内脏白色脂肪组织中，GTCs添加组较高脂饮食组增加约52.4％；较普通饮食组增加约37.3％(见图3C)。

棕色脂肪组织的特征性表达UCP-1蛋白标记，在GTCs添加组的皮下(见图3D)及内脏(见图3E)白色脂肪组织中均有表达。

结果表明，GTCs对PPARδ的上调效应。

在棕色脂肪中，GTCs添加组显著增加了CPT-1的表达，较高脂饮食组增加约27.4％；较普通饮食组增加约50.8％(见图3F)。

在棕色脂肪中，GTCs添加组显著增加了AOX的表达，较高脂饮食组增加约42.7％；较普通饮食组增加约62.9％(见图3G)。

在棕色脂肪中，GTCs添加组显著增加了UCP-1的表达，较高脂饮食组增加约19.7％；较普通饮食组增加约21.1％(见图3H)。

结果表明，GTCs添加组调整不同脂肪组织中脂肪的分布和整个体脂的水平。它增加了白色和棕色脂肪组织中PPARδ的表达。特别是增加了PPARδ下游的基因AOX，CPT-1和UCP-1的表达。

棕色脂肪是机体产热的主要组织(Lowell，B.B.& Spiegelman，B.M.(2000)Nature 404，652-60)，由GTCs诱导棕色脂肪组织中PPARδ蛋白水平的表达提升了棕色脂肪氧化的功能。

UCP-1是棕色脂肪组织中特征性的标记，结果表明，应用GTCs可促进腹壁脂肪和内脏脂肪组织中UCP1的表达，使得白色脂肪细胞具有棕色脂肪的特点。当白色脂肪具有棕色脂肪的特征时，增加了白色脂肪的脂肪酸氧化和解耦联。

结果表明，GTCs治疗可以增加整个机体能量的消耗和减少脂肪的体积是由于提高了棕色脂肪的功能和促使白色脂肪向棕色脂肪分化。

EGCG改善了3T3-L1脂肪细胞中PPARγ，C/EBPα，β和CHOP-10的表达

应用油红染色显示，EGCG(1-5μM)显著降低了3T3-L1脂肪细胞的甘油三脂的含量(见图4A)。

甘油三脂的定量分析显示EGCG降低3T3-L1脂肪细胞甘油的沉积呈现剂量依赖关系(分别在1μM时使降低约8％，在2μM时使降低约20％，和在5μM时使降低约35％(见图4B)。

EGCG增加了上清中甘油的分泌(见图4C)，但没有增加脂肪酸的含量(见图4D)。

EGCG仅在100μM浓度时引起细胞凋亡(见图4E)。

F显示C/EBPα，C/EBPβ，PPARγ，CHOP-10和PPARδ蛋白免疫印迹图；L显示了AOX，UCP-1，FAS和FAT的RT-PCR图；

EGCG上调了C/EBPα(见图4G)和C/EBPβ(见图4H)的表达，同时降低了CHOP-10(见图4J)的表达。

EGCG也上调了转录因子PPARγ的表达。(见图4I).

EGCG上调了PPARδ(见图4K)的表达和涉及到能量消耗的酶包括AOX(见图4M)和UCP-1(图4N)。

EGCG增加了脂肪酸转运体(fatty acid transporter，FAT)(见图40)的表达，在较低的浓度也降低了游离脂肪酸(free fatty acids，FAS)(见图4P)的表达。

结果表明，EGCG通过PPARδ的通路改善了脂肪细胞的脂质氧化。

EGCG可以显著降低3T3-L1脂肪细胞中脂肪的堆积。低剂量EGCG甚至1μM也能够提高脂肪细胞的功能。

EGCG降血脂的主要原因上调成熟脂肪细胞PPARγ、转录因子C/EBPα和β的表达，促进脂肪酸的代谢和能量的消耗。

EGCG可以通过抑制CHOP-10的表达上调PPARγ，C/EBPβ和C/EBPα的表达。

生理剂量EGCG不但不抑制，而且还能够提高脂肪细胞的功能。EGCG可以刺激脂肪细胞分化，诱导分化成小脂肪细胞。特别是EGCG可以增加线粒体的生成，增加脂肪酸氧化，以抵消脂肪细胞的肥大。

只有浓度超过100μM时，EGCG能够诱导细胞凋亡。这个浓度远远超过生理剂量的EGCG。

EGCG通过抑制脂肪细胞脂质的堆积而不是诱导凋亡。胞浆内的甘油三脂浓度直接与脂肪细胞的体积有关。结果表明，成熟脂肪细胞经EGCG处理后可降低甘油三脂的含量。显示EGCG能提高脂肪分解或脂质氧化，减少脂肪细胞中的脂滴是由于促使了脂质氧化。

EGCG刺激3T3-L1脂肪细胞线粒体的生成

应用不同浓度的EGCG 0.1，1.0，2.0，5.0和10.0μM刺激脂肪细胞，结果显示处理48小时后导致mito-tracker green染色的荧光强度的增加(见图5A)。EGCG在2.0和5.0μM时，显著刺激了线粒体体积的增加。

脂肪细胞经EGCG处理后，在1.0-5.0μM显著增加了脂肪细胞的耗氧(见图5B)。

EGCG增加了脂肪细胞线粒体复合物蛋白I，II，V的表达(见图5C)，EGCG在5.0μM时增加了复合物蛋白I的表达(131±5.9％，p＜0.05相对于对照组)，增加了复合物蛋白II的表达(172±14％，p＜0.05相对于对照组)和复合物蛋白V(276±8.5％，p＜0.01相对于对照组)。EGCG在10.0μM时增加了复合物蛋白V的表达(227±9.0％，p＜0.01相对于对照组)。EGCG对复合物蛋白III的表达并无影响。

EGCG增加了线粒体D-loop区DNA的拷贝数，D-loop区是启动线粒体DNA重链和轻链转录的起始部位。应用EGCG处理后mt D-loop/18SRNA的比例在2.0-5.0μM时显著增加(见图5D)。

EGCG增加了脂肪细胞中PGC-1α蛋白水平的表达(见图5E)。EGCG在0.1-10.0μM浓度时增加PGC-1α蛋白呈现钟形曲线，在2.0μM时(154±9.6％，p＜0.05 vs.control)有显著性差异。

结果表明，EGCG在2-5μM可以显著增加线粒体的体积，可以促使线粒体生成，增加了线粒体耗氧，增加了线粒体复合物蛋白I，II，V的表达和增加了线粒体DNA的表达。

结果显示EGCG能够通过调控与肥胖有关的线粒体重塑，增加脂肪酸氧化以保护脂肪细胞避免由PPARs激活导致脂肪酸由血或其他脏器的再分布。

EGCG可能通过提高PPARδ和PGC-1α的相互作用而提高脂质的氧化。

讨论

PPARα提升了肝脏组织中脂质的消耗是通过提高了与β-氧化氧化基因的表达。先前的研究表明GTCs可增加COS-1细胞株表达PPARα(Lee，K.(2004)J Vet Sci 5，325-30)。本发明的结果表明应用GTCs治疗大鼠组与对照组相比PPARα在肝脏中表达下降。PPARα的下降与GTCs治疗大鼠组脂肪下降有关。

肥胖与脂肪细胞数目和体积相关，依赖于脂质合成和脂质分解(Spiegelman，B.M.& Flier，J.S.(1996)Cell 87，377-89)。PPAR-γ导致循环中和其他器官中的脂肪酸进入脂肪细胞。尽管其他报道指出E GCG能够抑制前脂肪细胞的分化，但通常是在EGCG的浓度超过10μM(Ashida，H.，Furuyashiki，T.，Nagayasu，H.，Bessho，H.，Sakakibara，H.，Hashimoto，T.& Kanazawa，K.(2004)Biofactors 22，135-40，Mori，M.& Hasegawa，N.(2003) Phytother Res 17，566-7，Furuyashiki，T.，Nagayasu，H.，Aoki，Y.，Bessho，H.，Hashimoto，T.，Kanazawa，K.& Ashida，H.(2004)BiosciBiotechnol Biochem 68，2353-9)。饮茶后，血中EGCG的浓度不超过2.5μM(Lee，M.J.，Maliakal，P.，Chen，L.，Meng，X.，Bondoc，F.Y.，Prabhu，S.，Lambert，G.，Mohr，S.& Yang，C.S.(2002)Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 11，1025-32)。本发明的结果显示在生理剂量EGCG不但不抑制，而且还能够提高脂肪细胞的功能。治疗2型糖尿病的药物噻唑唍二酮类(thiazolidinediones，TZDs)，据报道能够激活腹壁白色脂肪组织PPAR-γ的表达(Fonseca，V.(2003)Am J Med 115 Suppl 8A，42S-48S，Bogacka，I.，Xie，H.，Bray，G.A.& Smith，S.R.(2004)Diabetes Care 27，1660-7)，因此腹壁白色脂肪组织能够储藏糖和脂肪。TZDs对于腹壁脂肪组织的效应，同时能够降低血脂和内脏其他脏器脂肪的堆积(Bogacka，I.，Xie，H.，Bray，G.A.& Smith，S.R.(2004)Diabetes Care 27，1660-7，Mori，Y.，Murakawa，Y.，Okada，K.，Horikoshi，H.，Yokoyama，J.，Tajima，N.& Ikeda，Y.(1999)Diabetes Care 22，908-12)。因此，比较EGCG和TZDs药物对于腹壁和内脏脂肪组织产生相似的效果。但是这样可能导致脂肪细胞体积的增大，但像EGCG可以刺激脂肪细胞分化，诱导分化成小脂肪细胞。特别是EGCG可以增加线粒体的生成，增加脂肪酸氧化，以抵消脂肪细胞的肥大。因此，关键点是脂肪细胞是否能够将血循环中多余的脂肪燃烧，发明人进一步来探讨GTCs对于线粒体生成的作用。

激活PPAsR通路的药理效应为促进线粒体的生成，通过改善脂肪代谢或减少脂质的堆积而治疗肥胖及相关疾病。PGC-1α为调控线粒体生成，在肥胖症患者的脂肪组织中下调(Semple，R.K.，Crowley，V.C.，Sewter，C.P.，Laudes，M.，Christodoulides，C.，Considine，R.V.，Vidal-Puig，A.& O′Rahilly，S.(2004)Int JObes Relat Metab Disord 28，176-9)。TZDs药物如匹格列酮，能够上调PGC-1α的表达增加线粒体DNA的拷贝数，增加白色脂肪组织的氧化磷酸化从而增加胰岛素的敏感性。(Wilson-Fritch，L.，Nicoloro，S.，Chouinard，M.，Lazar，M.A.，Chui，P.C.，Leszyk，J.，Straubhaar，J.，Czech，M.P.& Corvera，S.(2004)J Clin Invest 114，1281-9，Bogacka，I.，Xie，H.，Bray，G.A.& Smith，S.R.(2005)Diabetes 54，1392-9)。海产品中多聚不饱和脂肪酸forskolin，PPARα和γ的激动剂同样被发现可以促进线粒体生成和诱导脂肪酸氧化(Bogacka，I.，Ukropcova，B.，McNeil，M.，Gimble，J.M.& Smith，S.R.(2005)J Clin Endocrinol Metab 90，6650-6，Flachs，P.，Horakova，O.，Brauner，P.，Rossmeisl，M.，Pecina，P.，Franssen-van Hal，N..(2005)Diabetologia 48，2365-75)。发明人研究了E G C G对于3T3-L1脂肪细胞线粒体生成的作用显示了EGCG在2-5μM可以显著增加线粒体的体积表明可以促使线粒体生成，增加了线粒体耗氧，增加了线粒体复合物蛋白I，II，V的表达和增加了线粒体DNA的表达。

结果显示EGCG能够通过调控与肥胖有关的线粒体重塑，增加脂肪酸氧化以保护脂肪细胞避免由PPARs激活导致脂肪酸由血或其他脏器的再分布。

转录因子PGC-1α在脂肪组织和肌肉组织线粒体生成中扮演着重要的角色。PPARδ和PGC-1α的相互作用可以提高脂肪细胞中脂质的氧化(Wang，Y.X.，Lee，C.H.，Tiep，S.，Yu，R.T.，Ham，J.，Kang，H.& Evans，R.M.(2003)Cell 113，159-70)。发明人发现EGCG能够提高PGC-1α和PPARδ的表达，推测EGCG可能通过提高PPARδ和PGC-1α的相互作用而提高脂质的氧化。

总之，GTCs的减肥效应通过调控PPARs相关的通路，比如对于PPARγ和 的不同调控在棕色脂肪，腹壁脂肪，内脏脂肪增加了由脂质在脂肪细胞中的再分布及脂肪细胞中脂肪的氧化从而控制了体重。习惯性饮茶可能是控制肥胖与体重的很好的策略。由于是天然产物没有副作用，对于肥胖患者来说GTCs可能成为更好的替代TZDs的药品如匹格列酮。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种儿茶素或含儿茶素的提取物的用途，其特征在于，用于制备促进脂肪细胞线粒体生成的组合物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物用于降血脂、治疗肥胖、和/或预防肥胖。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物还用于调节过氧化物增殖物激活受体通路；和/或促进脂肪酸氧化。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的提取物包括绿茶提取物。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物包括表没食子儿茶素没食子酸酯。

6.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的组合物还包括表儿茶素、表没食子儿茶素和/或表儿茶素没食子酸酯。

7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物是药物组合物、食物组合物或保健品组合物。

8.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物含有：

(i)治疗有效量的儿茶素，和

(ii)药学上或食品学上可接受的载体。

9.一种儿茶素或含儿茶素的提取物在制备用于降血脂、治疗和/或预防肥胖的组合物中的用途。

10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述的组合物还可以用于促进脂肪细胞线粒体的生成。

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