CN101310717A

CN101310717A - 丹参酮iia聚乳酸纳米粒及其制备方法

Info

Publication number: CN101310717A
Application number: CNA2007100410275A
Authority: CN
Inventors: 李琦; 冯年平; 范忠泽; 孙珏; 王炎; 南艺蕾; 李先茜; 李绪林; 殷佩浩; 梅映昊; 刘宁宁; 刘昭林
Original assignee: Putuo Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM
Current assignee: Putuo Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM
Priority date: 2007-05-22
Filing date: 2007-05-22
Publication date: 2008-11-26
Anticipated expiration: 2027-05-22
Also published as: CN101310717B

Abstract

本发明属制药领域，涉及一种丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒制剂以及该制剂的制备方法。本发明的载药纳米粒的活性组分为丹参酮IIA，所用载药纳米材料为聚乳酸，纳米粒粒径范围为50nm～300nm，纳米粒载药量为1％～30％，纳米粒包封率为70％～90％。所述的载药纳米粒制成冻干粉针剂。本发明能提高药物在载体材料中的分散程度，改善药物的溶出，提高生物利用度，而且可以改变药物的体内过程，增加肝靶向性，于丹参酮的注射给药具有重要意义。同时能较好地解决脂质体、微乳等制剂中药物易泄露的问题。

Description

丹参酮IIA聚乳酸纳米粒及其制备方法

技术领域

本发明属制药领域，涉及一种丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒制剂以及该制剂的制备方法。

背景技术

丹参酮II A(Tashinones，TS)是从中药丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)中提取的脂溶性有效成分，为菲醌类化合物，临床多用于治疗心血管疾病，近年来研究表明，丹参酮IIA对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用，能抑制肿瘤细胞侵袭和转移，应用于白血病、原发性肝癌、胃癌等恶性肿瘤的治疗，可使病情改善、肿块缩小、生存期延长。有文献报道，0.25～1.0μg/ml丹参酮IIA对多种肿瘤细胞具有增殖抑制和细胞毒作用。对环磷酰胺、喜树碱等药物的抗肿瘤活性具有增效作用，对腹水癌细胞具有杀伤作用，并可抑制肉瘤S180细胞的DNA合成。

目前临床上用于治疗肝癌、肺癌的药物，绝大多数的毒副作用较强。其主要原因是因为这些药物在体内的分布没有选择性，除了对癌变的细胞有杀灭作用之外，对正常细胞的传谢也同样有影响，其结果是产生不必要副作用，使患者的治疗难以继续进行，导致癌症病人生存质量下降，死亡率增加。因此，进一步提高丹参酮IIA的生物利用度，尤其提高对特定部位靶向作用仍然是需要研究解决的问题。载药纳米粒一般是指粒径在1nm～1000nm之间的固态或胶态粒子。载药纳米粒由于尺寸效应，能够迅速使药物到达靶向部位，起到靶向作用，同时可以缓释药物，延长药物的作用时间。。

发明内容

本发明的目的是提供一种含丹参酮IIA的载药纳米粒。

本发明的另一目的是提供一种载药纳米粒的制备方法。

本发明所述的载药纳米粒的活性组分为丹参酮IIA，所用载药纳米材料为聚乳酸，所述纳米粒粒径范围为50nm～300nm。

本发明的含丹参酮IIA纳米粒，可以增加丹参酮的稳定性、提高其生物利用度。

所述的载药纳米粒制成丹参酮IIA聚乳酸纳米粒冻干粉针剂，其主要原料组成为：丹参酮IIA，乳化剂，丹参酮IIA纳米粒载体，冻干辅料。

上述丹参酮IIA聚乳酸纳米粒通过下述方法制备，包括以下步骤：

将聚乳酸和丹参酮IIA的二氯甲烷或丙酮溶液加入到含表面活性剂的水相溶液中，冰浴下探头超声，除掉有机溶剂后得到纳米粒混悬液，用微孔滤膜过滤后，加入支架剂，滤液进行冻干得到冻干粉针剂。

所述的表面活性剂选用PVA或F68；

所述的聚乳酸为丹参酮II A纳米粒载体；

所述的丹参酮II A纳米粒冻干辅料中的支架剂选用甘露醇、葡萄糖或乳糖；

所述的载药纳米粒包封率为70％～90％，载药量为1％～30％。

对制备得到的丹参酮II A聚乳酸载药纳米粒的粒径、包封率和载药量等指标进行如下评价：

1.丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒的透射电镜(TEM)照片

样品加适量蒸馏水稀释，滴加在覆盖碳膜的铜网上，用2.0％磷钨酸负染，于透射电镜下观察，拍摄透射电镜照片。

2.测定丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒的粒径和Zeta电位

将纳米粒混悬液以蒸馏水稀释，用激光粒度分析仪(Nicomp 380/ZLS)测定纳米混悬液的粒径。

3.测定丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒的包封率、载药量

采用超高速离心法(70000r/min)分离丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒和游离药物，HPLC法测定游离药物浓度，根据公式计算其包封率、载药量。

与现有技术比较，本发明具有以下优点：

丹参酮在较强的酸、碱环境中易于分解，水中溶解度小，普通制剂如片剂、胶囊等吸收慢，生物利用度小。将丹参酮制成具有适宜粒径的聚乳酸载药纳米粒，不仅能提高药物在载体材料中的分散程度，改善药物的溶出，提高生物利用度，而且可以改变药物的体内过程，增加肝靶向性。本发明于丹参酮的注射给药均具有重要意义。本发明固体脂质纳米粒对药物具有保护作用，能较好地解决脂质体、微乳等制剂中药物易泄露的问题。

附图说明

图1是丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒的电镜扫描图。

图2是丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒的粒径分布图。

图3是X射线衍射图，A为丹参酮IIA粉末，B为载体聚乳酸粉末，C为丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒。

图4丹参酮IIA聚乳酸纳米粒给药后各组小鼠肝癌瘤体体积的药效结果。

图5丹参酮IIA聚乳酸纳米粒对小鼠肝癌细胞凋亡的影响：图5-A生理盐水组；图5-B丹参酮组；图5-C丹参酮IIA聚乳酸纳米粒。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述。

实施例1

称取1.42mg丹参酮IIA、36.9mgPLA，80mg卵磷脂溶于4.5ml二氯甲烷和0.5ml丙酮的混合液中，构成有机相，加入到30ml浓度为1.0％的F68水相溶液，将有机相加入到水相中，冰浴下探头超声5min，形成O/W乳剂，然后室温磁力搅拌挥发完有机溶剂，得到丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒混悬液，用0.65μm微孔滤膜过滤除去聚集体及未包裹的药物，加入支架剂葡萄糖，冷冻干燥得到冻干纳米粒。

检测：丹参酮II A聚乳酸载药纳米粒的平均粒径为210nm，包封率为68％。

实施例2

称取2.58mg丹参酮IIA、36.9mgPLA、80mg卵磷脂溶于4.5ml二氯甲烷和0.5ml丙酮的混合液中，构成有机相，加入30ml浓度为2.0％的PVA水相溶液，将有机相加入到水相中，冰浴下探头超声5min，形成O/W乳剂，然后室温磁力搅拌挥发完有机溶剂，得到丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒混悬液，用0.65μm微孔滤膜过滤除去聚集体及未包裹的药物，加入支架剂乳糖，冷冻干燥得到冻干纳米粒。

检测：丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒的平均粒径为230nm，包封率为78％。

实施例3

称取1.5mg丹参酮IIA、100mgPLA，80mg卵磷脂溶于8ml二氯甲烷和1ml丙酮的混合液中，构成有机相，加入30ml浓度为1.5％的F68水相溶液，将有机相加入到水相中，冰浴下探头超声5min，形成O/W乳剂，然后室温磁力搅拌挥发完有机溶剂，得到丹参酮II A聚乳酸载药纳米粒混悬液，用0.65μm微孔滤膜过滤除去聚集体及未包裹的药物，加入支架剂甘露醇，冷冻干燥得到冻干纳米粒。

检测：丹参酮II A聚乳酸载药纳米粒的平均粒径为195nm，包封率为82％。

实施例4

称取1.0mg丹参酮IIA、75mgPLA、80mg卵磷脂溶于9ml二氯甲烷和1ml丙酮的混合液中，构成有机相，加入50ml浓度为2.5％的F68水相溶液，将有机相加入到水相中，冰浴下探头超声5min，形成O/W乳剂，然后室温磁力搅拌挥发完有机溶剂，得到丹参酮II A聚乳酸载药纳米粒混悬液，用0.65μm微孔滤膜过滤除去聚集体及未包裹的药物，加入支架剂甘露醇，冷冻干燥得到冻干纳米粒。

检测：丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒的平均粒径为134nm，包封率为81％。

实施例5

称取3.0mg丹参酮IIA、60mgPLA，80mg卵磷脂溶于8ml二氯甲烷和1ml丙酮的混合液中，构成有机相，加入浓度为30ml的3.0％的PVA水相溶液，将有机相加入到水相中，冰浴下探头超声5min，形成O/W乳剂，然后室温磁力搅拌挥发完有机溶剂，得到丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒混悬液，用0.65μm微孔滤膜过滤除去聚集体及未包裹的药物，加入支架剂甘露醇，冷冻干燥得到冻干纳米粒。

检测：丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒的平均粒径190nm，包封率为67.2％。

实施例6

称取2.0mg丹参酮IIA、40mgPLA，80mg卵磷脂溶于13.5ml二氯甲烷和1.5ml丙酮的混合液中，构成有机相，加入浓度为60ml的2.0％的PVA水相溶液，将有机相加入到水相中，冰浴下探头超声5min，形成O/W乳剂，然后室温磁力搅拌挥发完有机溶剂，得到丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒混悬液，用0.65μm微孔滤膜过滤除去聚集体及未包裹的药物，加入支架剂甘露醇，冷冻干燥得到冻干纳米粒。

检测：丹参酮IIA聚乳酸载药纳米粒平均粒径为120nm，包封率为88.4％。

实施例7

常规方法建立小鼠原位肝癌模型72只，随机分为生理盐水组(NS)、空白纳米组(B-NP)、丹参酮IIA组(TS IIA)、丹参酮IIA低剂量组(TS-NP L)、丹参酮IIA中剂量组(TS-NP M)、丹参酮IIA高剂量组(TS-NP H)，分别尾静脉给药，连续给药7天，治疗后每组取6只观察生存时间，余下小鼠处死，比较各组肿瘤体积，肿瘤坏死程度。结果：丹参酮IIA纳米高剂量组瘤体体积明显低于其他各组(P＜0.01)且肿瘤坏死程度显著重于其他各组(P＜0.01)。丹参酮IIA纳米中、高剂量组生存期(18.67±1.75，19.5±1.52)d明显长于其他各组。证实丹参酮IIA纳米微粒治疗肝癌的作用优于丹参酮IIA单体，且随剂量增加效果越明显。

实施例8

按实施例7方法分组给药，取肿瘤组织采用TUNEL标记法检测细胞凋亡指数，免疫组化SP法检测肝癌组织TGFβ1，p38MAPK的表达。结果显示：丹参酮IIA纳米中、高剂量两组间凋亡指数无明显差异(P＞0.05)，但显著高于其他各组(P＜0.01)。丹参酮IIA纳米高剂量组TGFβ1阳性率明显低于其他各组(P＜0.01)，p38MAPK阳性率明显高于其他各组(P＜0.01)。表明：丹参酮IIA纳米微粒治疗肝癌的机制与抑制TGFβ1的表达、上调p38MAPK表达，从而促进细胞凋亡有关。

Claims

1、丹参酮IIA聚乳酸纳米粒，其特征在于所述的载药纳米粒的活性组分为丹参酮IIA，所用载药纳米材料为聚乳酸，所述纳米粒粒径范围为50nm～300nm。

2、按权利要求1所述的丹参酮II A聚乳酸纳米粒，其特征在于所述的载药纳米粒载药量为1％～30％，所述的载药纳米粒包封率为70％～90％。

3、权利要求1所述的丹参酮IIA聚乳酸纳米粒的制备方法，其特征是：将聚乳酸和丹参酮II A的二氯甲烷或丙酮溶液加入到含表面活性剂的水相溶液中，冰浴下探头超声，搅拌除掉有机溶剂后得到纳米粒混悬液，用微孔滤膜过滤后，加入支架剂，滤液进行冻干得到冻干粉针剂。

4、按权利要求3所述的制备方法，其特征是，所述的表面活性剂选自PVA或F68。

5、按权利要求3所述的制备方法，其特征是，所述的支架剂选自甘露醇、葡萄糖或乳糖。

6、按权利要求3所述的制备方法，其特征是，所述的搅拌为磁力搅拌。

7、按权利要求3所述的制备方法，其特征是，所述的微孔滤膜孔径为0.65μm。