CN102008454A

CN102008454A - 包载黄豆苷元的plga纳米颗粒及其制备方法

Info

Publication number: CN102008454A
Application number: CN2010105716236A
Authority: CN
Inventors: 沈琦; 赵心怡; 马依然; 于苏甫
Original assignee: Shanghai Jiaotong University
Current assignee: Shanghai Jiaotong University
Priority date: 2010-12-03
Filing date: 2010-12-03
Publication date: 2011-04-13
Anticipated expiration: 2030-12-03
Also published as: CN102008454B

Abstract

一种纳米药物技术领域的包载黄豆苷元的PLGA纳米颗粒及其制备方法，该颗粒的组分含量为：黄豆苷元0.1-45％、聚乳酸聚乙醇酸25-95％以及药用辅料1-65％，其中：PLGA为分子量8000-15000，聚乳酸聚乙醇酸为乳酸∶羟基乙酸50∶50的长链高分子，药用辅料为卵磷脂、环糊精或PVA；本方法制备得到的黄豆苷元PLGA纳米颗粒粒径为280～330nm，粒径分布集中，冻干粉复溶后不粘连，其载药量1～2％，包封率可达80～84％。

Description

包载黄豆苷元的PLGA纳米颗粒及其制备方法

技术领域

本发明涉及的是一种纳米药物技术领域的制剂及其制备方法，具体是一种包载黄豆苷元的PLGA纳米颗粒及其制备方法。

背景技术

对于很多药物而言，口服给药是一种经济、安全、顺应性好的给药途径。然而，许多药物因其溶解性差而导致生物利用度不佳，在一定程度上限制了药物的使用。

黄豆苷元属于黄酮类化合物，水溶性脂溶性均差，在胃肠道中的吸收量少，导致药物生物利用度不高，作用效果不明显。因此，如何能改善黄豆苷元的吸收，使其能够被身体利用，是黄豆苷元新剂型研发的宗旨所在。

纳米粒作为一种胶态药物载体，具有提高药物稳定性，控制药物释放等显著优点，已成为当前国内外药剂学的研究热点。聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)是一种可降解的高分子有机化合物，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能，被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域。在美国PLGA通过FDA认证，被正式作为药用辅料收录进美国药典。PLGA纳米颗粒成为纳米药物中最常见和最安全的剂型之一。

传统的PLGA纳米颗粒的制备方法主要有乳化-溶剂挥发法，溶剂扩散法、复乳法等。对于脂溶性药物，应用较多的是乳化-溶剂挥发法、溶剂扩散法等，对于水溶性药物则选用复乳法。黄豆苷元的结构使之既不能溶于复乳法的内水相，又不能溶于溶剂挥发法的有机相，故传统的纳米粒制备方法不能够有效的制备黄豆苷元纳米粒。

一直以来，研究人员们通过各种方法来改变黄豆苷元的溶解度。对现有技术进行检索，发现有通过改变黄豆苷元的结构，使其水溶性增加(姜铁夫，陈济民，张旭中国药物应用与监测，2004，3：41)的方法，或将黄豆苷元制成分散片(黄绮红，胡容融广东药学院学报，2001，17：87)、液体硬胶囊(宋扬，常笛，王东凯等，沈阳药科大学学报，2008，25：96)、微乳(Q.Shen，，X.Li.Chem.Pharm.Bull.，2010.58：639)或固体脂质纳米粒(Y.Gao，W.W.Gu，Y.P.Li et al.Biomaterials 2008，29：4129)。而对于黄豆苷元PLGA纳米颗粒这一剂型则未见报道。对黄豆苷元的剂型检索还发现，黄豆苷元磷脂复合物(Y.Huang，W.W.Gu，Z.W.Gao et al，ChineseJournal of Modern Applied Pharmacy，2010，27：620)和黄豆苷元环糊精包合物(Y.B.Ge，D.W.Chen，L.P.Xie et al，China Journal of Chinese Materia Medica，2006，31：2039)作为黄豆苷元的两种复合物，通过使黄豆苷元与其它分子相结合而改变了黄豆苷元的溶解性，分别使黄豆苷元可溶于脂性溶剂和水性溶剂中。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种包载黄豆苷元的PLGA纳米颗粒及其制备方法，制备得到的黄豆苷元PLGA纳米颗粒粒径为280～330nm，粒径分布集中，冻干粉复溶后不粘连，其载药量1～2％，包封率可达80～84％。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明涉及一种包载黄豆苷元的PLGA纳米颗粒，其组分及质量百分比含量为：黄豆苷元0.1-45％、聚乳酸聚乙醇酸25-95％以及药用辅料：1-65％，其中：PLGA为分子量8000-15000，聚乳酸聚乙醇酸为乳酸∶羟基乙酸50∶50的长链高分子，药用辅料为卵磷脂、环糊精或PVA。

本发明涉及上述纳米颗粒的制备，先将药物与卵磷脂或环糊精形成复合物，再制备PLGA纳米颗粒。

第一步、将黄豆苷元和药用辅料卵磷脂或环糊精溶解于二氯甲烷或甲醇中经恒温振摇制成黄豆苷元复合物，将得到的黄豆苷元符合物溶解于二氯甲烷。然后向黄豆苷元复合物中加入聚乳酸聚乙醇酸，作为有机相；

第二步、将有机相在超声状态下缓慢滴加到作为水相的聚乙烯醇(polyvinyl alcohol，PVA)水溶液中，经减压蒸馏除去二氯甲烷或三氯甲烷后，加入NaCl进行固化，得到带有蓝色乳光的溶液；

第三步、将第二步得到的溶液经低温离心后弃去上清，收集底部得到的黄豆苷元PLGA纳米颗粒并进一步分散于水中，加入冻干保护剂后经冷冻干燥，得到黄豆苷元PLGA纳米颗粒。

所述的黄豆苷元与卵磷脂或环糊精质量之比为1∶10～1∶50。

所述的恒温振摇条件为25～60℃，24-96小时。

所述的聚乳酸聚乙醇酸与黄豆苷元质量之比为1∶10～1∶50。

所述的PVA水溶液的浓度为质量百分比0.5～2％。

所述的超声状态是指：将溶液置于式超声波传导仪的超声探头下，工作功率500-700w。

所述的减压蒸馏是指：采用温度为10～40℃的水浴进行减压蒸馏。

所述的加入NaCl进行固化是指：加入相当于第二步所得纳米溶液的0.1～1％重量的NaCl后在冰浴状态下搅拌。

所述的低温离心是指：在0～4℃，8000～12000r/min下离心1～10分钟。

所述的冻干保护剂是指：相当于第三步所得纳米粒水溶液的0.5～10％重量的海藻糖。

附图说明

图1为黄豆苷元PLGA纳米颗粒粒径分布图；

图2为黄豆苷元PLGA纳米颗粒扫描电镜图

图3为实施例中黄豆苷元PLGA纳米颗粒载药量和包封率比较示意图。

图4为黄豆苷元PLGA纳米颗粒体外释放结果图

图5为黄豆苷元PLGA纳米颗粒大鼠尾静脉注射血药浓度变化图

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1：复合物法制备黄豆苷元PLGA纳米颗粒

(1)取黄豆苷元2mg和卵磷脂20mg置于样品瓶中，向瓶中加入2mL乙醇，密封，于40℃恒温振摇48小时，取出。

(2)将瓶中乙醇用氮气吹干，形成复合物。

(3)取PLGA60mg，溶于二氯甲烷2mL。

(4)复合物加入二氯甲烷中搅拌均匀，作为有机相。

(5)配制1％PVA水溶液60mL，为水相。

(6)将水相置于式超声波传导仪的超声探头下，工作功率600w，有机相在超声状态下缓慢滴加到水相中；滴毕继续超声2～5分钟。

(7)将超声形成的乳状液迅速转移至旋转蒸发仪，40℃水浴下减压蒸馏除去二氯甲烷。

(8)向上一步所得的纳米溶液中加0.6gNaCl，冰浴状态下磁力搅拌1h，得到带有蓝色乳光的纳米溶液。

(9)将此溶液在4℃，12000r/min下离心5分钟，弃去上清，收集底部黄豆苷元PLGA纳米颗粒。加水振摇使纳米粒重新分散，再于8000r/min下离心3分钟。收集底部黄豆苷元PLGA纳米颗粒，加5mL水振摇使纳米粒重新分散。

(10)向上述纳米溶液中加入50mg海藻糖，-50℃真空冷冻干燥24h，得到黄豆苷元PLGA纳米颗粒。

对以上方法制备得到的黄豆苷元纳米粒进行粒径测定，平均粒径为309.2nm，平均zeta电位-32.14mV。扫描电镜观察所得纳米粒形态。包封率81.9±5％，载药量1.27±0.53％。

实施例2：与实施例一步骤相同，但其中的卵磷脂20mg为羟丙基-β-环糊精140mg，乙醇为甲醇，复合物加入二氯甲烷中搅拌均匀为复合物用2％PVA水溶液0.5mL溶解后加入二氯甲烷中，10000转/分高速匀浆搅拌均匀。

实施例3：与实施例一步骤相同，但其中的卵磷脂质量为10mg。

实施例4：与实施例一步骤相同，但其中的PLGA质量为80mg。

实施例5：与实施例二步骤相同，但其中的羟丙基-β-环糊精140mg为2，6-二甲基-β-环糊精133mg。

实施例6：与实施例二步骤相同，但其中的羟丙基-β-环糊精140mg为α-环糊精97.3mg。

实施例7：黄豆苷元PLGA纳米颗粒的体外释放实验

黄豆苷元的纳米粒冻干粉100mg，用2mL释放液(25％的乙醇溶液)复溶，转移至透析袋(1000Da)内，扎紧袋口。将含药透析袋置于30mL释放液中，于37℃恒温水浴振荡器内振摇，分别于固定时间取样1mL，并补加等体积的释放液。用高效液相色谱法测定释放介质中黄豆苷元的含量，计算累积释放百分率。释放曲线见图3及图4。从体外释放曲线可以看出，与黄豆苷元原型药物相比，PLGA纳米颗粒中的黄豆苷元释放缓慢，速率稳定。累积释放百分率为80％以上。

实施例8：黄豆苷元PLGA纳米颗粒的体内药代动力学实验

将9只SD大鼠(雄性，220～250g)随机分为3组，尾静脉注射两种方法制备的黄豆苷元PLGA纳米颗粒或黄豆苷元混悬液，给药剂量10mg/kg。分别于给药后0.25，0.75，1.5，2，4，8，12，24，36和48小时眼眶取血0.3mL，全血经肝素抗凝，5000r/min分离血浆。乙腈沉淀处理后高效液相检测血浆中黄豆苷元的量。血药浓度-时间曲线如图5，体内药动学参数见表1.

表1大鼠尾静脉注射黄豆苷元纳米粒体内药动学参数(±S.D.，n＝3)

^＊p＜0.05，采用t检验对纳米粒给药组与黄豆苷元给药组进行统计学分析。

由表1可见，黄豆苷元PLGA纳米颗粒的主要药动学参数(AUC，MRT，Cmax T_1/2α和T_1/2β)和黄豆苷元混悬液相比均有显著差异。复合物法制备所得的黄豆苷元PLGA纳米颗粒的生物利用度是黄豆苷元原型药物的2.78倍。这一结果说明黄豆苷元PLGA纳米颗粒具有明显的提高生物利用度的作用，有着良好的开发前景。

复合物法制备的黄豆苷元PLGA纳米颗粒粒径为280～330nm，粒径分布集中(见图1)。冻干粉白色细腻，再分散性良好。冻干粉复溶后扫描电镜观察，可见纳米粒形态圆整，不粘连(见图2)。采用上述复合物法制备得到的黄豆苷元PLGA纳米颗粒载药量1～2％，包封率可达80～84％，与其它传统纳米粒制备方法相比较有了很大提高(见图3)。

Claims

1.一种包载黄豆苷元的PLGA纳米颗粒，其特征在于，其组分及质量百分比含量为：黄豆苷元0.1-45％、聚乳酸聚乙醇酸25-95％以及药用辅料：1-65％，其中：PLGA为分子量8000-15000，聚乳酸聚乙醇酸为乳酸∶羟基乙酸50∶50的长链高分子，药用辅料为卵磷脂、环糊精或PVA。

2.根据权利要求1所述纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步、将黄豆苷元和药用辅料卵磷脂或环糊精溶解于二氯甲烷或甲醇中经恒温振摇制成黄豆苷元复合物，将得到的黄豆苷元符合物溶解于二氯甲烷，然后向黄豆苷元复合物中加入聚乳酸聚乙醇酸，作为有机相；

第二步、将有机相在超声状态下缓慢滴加到作为水相的聚乙烯醇水溶液中，经减压蒸馏除去二氯甲烷或三氯甲烷后，加入氯化钠进行固化，得到带有蓝色乳光的溶液；

3.根据权利要求2所述的纳米颗粒的制备方法，其特征是，所述的黄豆苷元与卵磷脂或环糊精质量之比为1∶10～1∶50。

4.根据权利要求2所述的纳米颗粒的制备方法，其特征是，所述的恒温振摇条件为25～60℃，24-96小时。

5.根据权利要求2所述的纳米颗粒的制备方法，其特征是，所述的PVA水溶液的浓度为质量百分比0.5～2％。

6.根据权利要求2所述的纳米颗粒的制备方法，其特征是，所述的超声状态是指：将溶液置于式超声波传导仪的超声探头下，工作功率500-700w。

7.根据权利要求2所述的纳米颗粒的制备方法，其特征是，所述的减压蒸馏是指：采用温度为10～40℃的水浴进行减压蒸馏。

8.根据权利要求2所述的纳米颗粒的制备方法，其特征是，所述的加入氯化钠进行固化是指：加入相当于第二步所得纳米溶液的0.1～1％重量的氯化钠后在冰浴状态下搅拌。

9.根据权利要求2所述的纳米颗粒的制备方法，其特征是，所述的低温离心是指：在0～4℃，8000～12000r/min下离心1～10分钟。

10.根据权利要求2所述的纳米颗粒的制备方法，其特征是，所述的冻干保护剂是指：相当于第三步所得纳米粒水溶液的0.5～10％重量的海藻糖。