CN101307044A - 生松素化合物两种晶型和制备方法及在疾病治疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生松素(化学名：5，7－dihydroxy－2－phenyl－4－chromanone，5，7－二羟基－2－苯基－4－二氢色原酮；英文名：pinocembrin，包括：左旋体、右旋体及外消旋体)化合物的两种晶型和在生物利用度方面的差异和特点，含有生松素两种晶型原料药的制备方法和两种晶型在药物制备中的组合物。此外，本发明还涉及生松素晶型样品在治疗脑缺血性疾病中对神经血管单元的保护作用的应用，以及在治疗各种疾病过程中由于晶型作用而提高生物体内血药浓度发挥的治疗作用。

Description

生松素化合物两种晶型和制备方法及在疾病治疗中的应用

技术领域

本发明涉及生松素化合物的两种晶型和在生物利用度方面的差异和特点，含有生松素两种晶型原料药的制备方法和两种晶型在药物制备中的组合物。此外，本发明还涉及生松素晶型样品在治疗脑缺血性疾病中对神经血管单元的保护作用的应用，以及在治疗各种疾病过程中由于晶型作用而提高生物体内血药浓度发挥的治疗作用。

背景技术

生松素(化学名：5，7-dihydroxy-2-phenyl-4-chromanone，5，7-二羟基-2-苯基-4-二氢色原酮；英文名：pinocembrin)属于黄酮类化合物，在自然界中广泛存在，化学结构式如下：

具有左旋体、右旋体及外消旋体。

以前的药理实验表明其具有较强的抑菌、抗病毒、抗真菌活性。如中国传统的保健食品蜂蜜中就富含生松素，经常食用蜜糖，不只对牙齿无妨碍，还能在口腔内起到杀菌消毒的作用，可以缓解口腔溃疡，并加速伤口愈合。中国专利CN1695608A“生松素在制备防治神经细胞损伤相关疾病药物中的应用”^[1]公开了生松素化合物在制备预防或治疗脑缺血、脑缺血后遗症、神经细胞损伤和功能改变等相关疾病的药物应用。

本发明药物活性不同于该专利在于生松素对脑缺血性疾病保护作用主要是通过对神经血管单元的保护而发挥的，而生松素对神经血管单元的保护是其发挥治疗作用的基础。

发明内容

此外，本发明还发现了生松素存在有α与β两种不同晶型固体物质并发明了它们的制备方法，生松素两种晶型固体物质在生物体内的吸收存在显著差异，其中β晶型吸收率大于α晶型，β晶型的吸收率可比α晶型提高2倍以上，在发挥药物治疗作用中由于血药浓度的不同而产生生物活性作用差异。

本发明目的之一：是提供不含结晶水或其它有机溶剂的生松素固体α与β两种晶型物质。

本发明目的之二：是提供生松素α与β两种晶型固体物质样品的制备工艺方法。

本发明目的之三：是提供含有生松素α晶型纯品、β晶型纯品、或由α晶型加β晶型按不同比例配比混合而组成的固体药物组合物，包含片剂、胶囊、丸剂、针剂、缓释制剂、控释制剂等不同的药物制剂形式。

本发明目的之四：是提供含有生松素α晶型、β晶型、α晶型+β晶型混合物的固体晶型物质在发挥治疗作用过程中药物吸收的差异影响。

本发明目的之五：是生松素在治疗脑缺血性疾病中对神经血管单元的保护作用的应用，以及在治疗各种疾病过程中由于晶型作用而提高生物体内血药浓度发挥的治疗作用。

α晶型生松素样品的形态特征：

1.本发明获得的生松素α晶型样品在使用单晶X射线衍射结构分析时，其特征表现为具有单斜晶系对称性，空间群为P2₁/c，晶胞参数值在a＝5.189b＝24.149

c＝10.472

α＝90°，β＝102.31°，γ＝90°的晶态物质。图1所示为分子相对构型图，图2所示为分子立体结构投影图，图3所示为分子沿a轴方向的晶胞堆积图。表1为原子坐标参数及等价温度因子，表2为成键原子的键长值，表3为成键原子的键角值。由于B环上部分C原子呈取向无序状态，所以，其中的C_2′，C_3′，C_5′，C_6′等4个原子分别占有2个位置，其占有率各为0.5。

式1  α晶型生松素样品的分子相对构型

表1  α晶型生松素样品的原子坐标参数(相对坐标)

表2  α晶型生松素样品的成键原子键长值

n

表3  α晶型生松素样品的成键原子键角值(°)

备注：在表2、表3中仅给出B环C_2′，C_3′，C_5′，C_6′原子的一个位置键长值和键角值

2.本发明的生松素α晶型固体物质，其特征在于当使用粉末(多晶)X射线衍射分析时(CuK_α辐射)，表现为衍射峰位置：2-Theta值(°)或d值

和衍射峰相对强度：峰高值(Height％)或峰面积值(Area％)具有如下特征峰值时的晶态固体物质(见表4，图4)：

表4  α晶型生松素样品的粉末X射线衍射特征峰值

3.本发明的生松素α晶型固体物质在使用DSC分析时，其特征表现在DSC图谱(见图5)的吸热转变在206℃左右。

4.本发明的生松素α晶型固体物质，在使用KBr压片分析获得的红外吸收光谱(见图6)，其特征峰表现在：3090.6、3011.6、2889.1、2747.4、2636.2、1631.5、1602.5、1584.3、1487.7、1466.2、1454.5、1435.6、1354.9、1302.4、1257.0、1217.0、1168.2、1088.6、1064.9、1028.0、1014.6、1001.3、975.8、918.0、887.7、861.8、825.9、789.9、766.4、715.2、698.1、663.7、646.7、620.3、587.3、574.9、560.5、526.9、487.9cm^-1处有吸收峰，其中2891.1、2747.4、2636.2、1631.5、1354.9cm^-1峰为生松素α晶型固体物质的主要特征吸收峰。

β晶型生松素样品的形态特征：

1.本发明的生松素β晶型固体物质，其特征在于当使用粉末(多晶)X射线衍射分析时(CuK_α辐射)，表现为衍射峰位置：2-Theta值(°)或d值

和衍射峰相对强度：峰高值(Height％)或峰面积值(Area％)具有如下特征峰值时的晶态固体物质(见表5，图7)：

表5  β晶型生松素样品的粉末X射线衍射特征峰值

2.本发明的生松素β晶型固体物质在使用DSC分析时，其特征表现在DSC图谱(见图8)的吸热转变在204℃左右。

3.本发明的生松素β晶型固体物质，在使用KBr压片分析获得的红外吸收光谱(见图9)，其特征峰表现在：3090.8、2890.0、2748.9、2638.3、1633.5、1602.9、1585.0、1487.9、1466.1、1454.3、1344.4、1302.7、1216.7、1168.2、1088.4、1065.5、1028.8、1014.3、1001.5、975.8、917.8、888.2、861.8、826.6、789.1、766.6、741.1、715.4、698.0、663.7、646.0、620.5、587.9、574.8、560.9、527.2、488.4cm^-1处有吸收峰，其中2890.0、2748.9、2638.3、1633.5、1344.4cm^-1峰为生松素β晶型固体物质的主要特征吸收峰。

生松素样品的药效学特征：

本发明的生松素α晶型纯品、β晶型纯品、(α+β)晶型按任意比例组合得到的混混合晶型固体物质样品，其特征在于具有脑缺血性疾病的治疗作用，以及通过保护神经血管单元发挥防治脑缺血行疾病的作用。

本发明的生松素α晶型纯品与β晶型纯品在生物利用度方面存在差异，口服β晶型纯品的生物利用度比α晶型高2倍以上，两种晶型按任意比例组合得到的混晶固体物质样品存在有不同的生物利用度。

给药量与药物制剂特征：

本发明的药物制剂特征是含有生松素α晶型纯品、β晶型纯品、(α+β)晶型按任意比例组合得到的混合晶型固体样品，其每天给药剂量为5～250mg的药物组合物。这种药物组合物包含有片剂、胶囊、丸剂、针剂、缓释制剂、控释制剂等不同的药物制剂形式。

附图说明

图1α晶型生松素样品的分子相对构型图

图2α晶型生松素样品的分子立体结构投影图

图3α晶型生松素样品的分子晶胞堆积图(沿a轴)

图4α晶型生松素样品的粉末X射线衍射图谱

图5α晶型生松素样品的DSC图谱

图6α晶型生松素样品的红外吸收光谱

图7β晶型生松素样品的粉末X射线衍射图谱

图8β晶型生松素样品的DSC图谱

图9β晶型生松素样品的红外吸收光谱

具体实施方式

为更好的说明本发明的技术方案，特给出以下实施例，但本发明并不仅限于此。制备例1

生松素样品的合成：

在1000mL氢化反应釜中加入5g(19.7mmol)5，7-二羟基黄酮，650mL无水乙醇，氢气压力0.13MPa，钯炭(10％)1.5g，40℃下反应4h。反应结束，过滤除去钯炭，滤液浓缩，减压柱层析分离纯化(洗脱液∶V甲醇∶V乙酸乙酯∶V石油醚＝2∶10∶100)，蒸干溶剂，得白色无定型粉末状固体3.9g，收率52％^[2]。

生松素α晶型样品的制备

实施例1

生松素α晶型样品的制备方法1：

一种生松素α晶型样品的制备方法，其特征在于使用甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、95％乙醇、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲烷、甲苯、苯、正己烷、环己烷、二氧六环、DMF、石油醚、氨水、正丙醇等单一有机溶剂。先将样品完全溶解，放置在温度范围在4℃至50℃，相对湿度范围在10％至75％的环境内，经过重结晶生长时间在1天至60天内，最终制备获得的α晶型固体样品。

实施例2

生松素α晶型样品的制备方法2：

一种生松素α晶型样品的制备方法，其特征在于使用甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、95％乙醇、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲烷、甲苯、苯、正己烷、环己烷、二氧六环、DMF、石油醚、氨水、正丙醇等有机溶剂经不同组合(使用两种或两种以上溶剂)与不同配比制成的混合溶剂系统。先将样品完全溶解，放置在温度范围在4℃至50℃，相对湿度范围在10％至75％的环境内，经过重结晶生长时间在1天至60天内，最终制备获得的α晶型固体样品。

实施例3

生松素α晶型样品的制备方法3：

一种生松素α晶型样品的制备方法，其特征在于使用甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、95％乙醇、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲烷、甲苯、苯、正己烷、环己烷、二氧六环、DMF、石油醚、氨水、正丙醇等单一有机溶剂系统或使用由甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、95％乙醇、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲烷、甲苯、苯、正己烷、环己烷、二氧六环、DMF、石油醚、氨水、正丙醇等有机溶剂经不同组合(使用两种或两种以上溶剂)与不同配比制成的混合溶剂系统。先将样品完全溶解，通过加入不同比例水产生沉淀，采用减压抽滤、冷冻干燥、冷喷雾等方法制备获得的α晶型固体样品。

生松素β晶型样品的制备

实施例4

生松素β晶型样品的制备方法1：

一种生松素β晶型样品的制备方法，其特征在于使用α晶型固体样品作为原料，经过研磨转晶工艺方法制备获得的β晶型固体样品。

实施例5

生松素β晶型样品的制备方法2：

一种生松素β晶型样品的制备方法，其特征在于使用吡啶或DMSO溶剂将样品完全溶解，加入不同比例水产生沉淀，采用减压抽滤、冷冻干燥、冷喷雾等方法制备获得的β晶型固体样品。

制剂

实施例6

组合药物制剂的制备方法1(片剂)：

一种组合药物制剂的制备方法，其特征在于使用几种赋形剂将生松素α晶型纯品、β晶型纯品、或由(α+β)晶型按不同比例配比混合而成的固体物质作为组合药物的原料药，制成每片含药量在5～60mg的片剂，表6给出片剂配方：

表6生松素组合药物片剂的制备配方

将生松素α晶型纯品、β晶型纯品或由(α+β)晶型按不同比例配比混合而成的原料药制备成片剂制剂的方法是：将几种赋形剂与原料药混合均匀，加入1％羟甲基纤维素钠溶液适量，制成软料，过筛制粒，湿粒烘干，过筛整粒，加入硬脂酸镁和滑石粉混合均匀，压片，即得。

实施例7

组合药物制剂的制备方法2(胶囊)：

一种组合药物制剂的制备方法，其特征在于使用几种赋形剂将生松素α晶型纯品、β晶型纯品、或由(α+β)晶型按不同比例配比混合而成的固体物质作为组合药物的原料药，制成每粒含药量在5～60mg的胶囊，表7给出胶囊配方：

表7  生松素组合药物胶囊的制备配方

将生松素α晶型纯品、β晶型纯品、或由(α+β)晶型按不同比例配比混合而成的原料药制备成胶囊制剂的方法是：将几种赋形剂与原料药混合均匀，加入1％羟甲基纤维素钠溶液适量，制成湿粒，烘干，过筛整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，插入胶囊制得。或不使用制粒步骤，而直接将原料药与几种赋形剂混合均匀，过筛后，直接装入胶囊制得。

实施例8

组合药物制剂的制备方法3(注射液及冻干粉针剂)：

一种组合药物制剂的制备方法，其特征在于使用几种赋形剂将生松素α晶型纯品、β晶型纯品、或由(α+β)晶型按不同比例配比混合而成的固体物质作为组合药物的原料药，制成每瓶含药量在5～60mg的粉针剂，表8给出粉针剂配方：

表8  生松素组合药物粉针剂的制备配方

配方1：制备液体生松素水针剂

(1)称取40g羟丙基-β-环糊精，倒入400ml蒸馏水中，搅拌溶解；

(2)另称取生松素1g，加入20ml乙醇溶解，将该溶液倒入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

(3)混合液以磁力搅拌方法在40～50℃下搅拌20分钟，观察溶液至澄清透明，加入0.5g针用活性炭，搅拌加热至80℃，保温15分钟，过滤脱炭；按每安瓿4ml分装，121℃灭菌15分钟，即得生松素水针剂。

配方2：制备生松素冻干粉针剂

(1)在无菌操作室内，称取40g羟丙基-β-环糊精，加水溶解成150ml，加入0.1g活性炭，加热微沸15分钟，过滤脱炭。

(2)另称取生松素1g，加入20ml无水乙醇溶解，将该溶液倒入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

(3)混合液以磁力搅拌方法在40～50℃下搅拌20分钟，搅拌，观察溶液至澄清透明，得到松属素羟丙基-β-环糊精衍生物包合物溶液。

(4)包合物溶液补水至200ml，过0.22μm滤膜，分装于10ml的西林瓶中(2ml/瓶)，置入冻干机中，冷冻干燥，压盖，即得无菌粉针。

配方3：制备生松素氯化钠输液

(1)称取20g羟丙基-β-环糊精，倒入200ml蒸馏水中，搅拌溶解，加入0.5g输液用活性炭，搅拌加热至80℃，保温15分钟，过滤脱炭；

(2)另称取生松素1g，加入20ml无水乙醇溶解，将该溶液倒入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

(3)混合液以磁力搅拌方法在40～50℃下搅拌20分钟，观察溶液至澄清透明，得到生松素羟丙基-β-环糊精衍生物包合物溶液。

(4)包合物溶液补水至800ml，加入注射用氯化钠90g，调节pH8～9，补水至10000ml，加入10g针用活性炭，搅拌20分钟。

(5)溶液脱炭，按100ml/瓶灌装，121℃，30分钟热压灭菌即得。

配方4：制备生松素氯化钠输液

(1)称取20g羟丙基-β-环糊精，倒入200ml蒸馏水中，搅拌溶解，加入0.5g输液用活性炭，搅拌加热至80℃，保温15分钟，过滤脱炭；

(2)另称取生松素1g，加入20ml无水乙醇溶解，将该溶液倒入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

(3)混合液以磁力搅拌方法在40～50℃下搅拌20分钟，观察溶液至澄清透明，得到生松素羟丙基-β-环糊精衍生物包合物溶液。

(4)包合物溶液补水至800ml，加入注射用葡萄糖500g，调节pH8～9，补水至10000ml，加入10g针用活性炭，搅拌20分钟。

(5)溶液脱炭，按100ml/瓶灌装，121℃，30分钟热压灭菌即得。

实施例9

α晶型与β晶型的生松素固体原料药体内吸收特征和血药浓度特征：

对清洁级大鼠胃内给予α晶型、β晶型、(α+β)的混合晶型生松素固体原料药粉末，给药剂量为50mg/kg，在给药后不同时间内取动脉血测定生松素含量。结果证明：不同晶型的生松素原料药在口服同样剂量的条件下，血液中的浓度和达到高峰浓度的时间不同，其中α晶型的血药浓度明显低于β晶型的血药浓度。

表9  大鼠口服生松素不同晶型样品后不同时间的血药浓度(HPLC检测，峰面积值)

参考文献

1、中国专利，公开号CN1695608A

2、程永浩等，5，7-二羟基黄烷酮的合成，化学试剂，2006，28(7)：437。

Claims (17)

1.式(I)的生松素α晶型：

其特征在于，当使用单晶X射线衍射结构分析时，表现为具有单斜晶系对称性，空间群为P2₁/c，晶胞参数值为

α＝90°，β＝102.31°，γ＝90°，而且在晶态的固体样品中不含有结晶水或其它结晶溶剂物质。

2.式(I)的生松素α晶型：

其特征在于，当使用粉末(多晶)X射线衍射分析时(CuK_α辐射)，表现为衍射峰位置：2-Theta值(°)或d值

衍射峰相对强度：峰高值(Height％)或峰面积值(Area％)具有如下特征

3.根据权利要求1和2任一所述的生松素α晶型，其特征在于，其DSC图谱的吸热转变在206℃左右。

4.根据权利要求1和2任一所述的生松素α晶型，其特征在于，其红外吸收光谱在3090.6、3011.6、2889.1、2747.4、2636.2、1631.5、1602.5、1584.3、1487.7、1466.2、1454.5、1435.6、1354.9、1302.4、1257.0、1217.0、1168.2、1088.6、1064.9、1028.0、1014.6、1001.3、975.8、918.0、887.7、861.8、825.9、789.9、766.4、715.2、698.1、663.7、646.7、620.3、587.3、574.9、560.5、526.9、487.9cm^-1处有吸收峰，其中2891.1、2747.4、2636.2、1631.5、1354.9cm^-1峰为生松素α晶型固体物质的主要特征吸收峰。

5.式(I)的生松素β晶型：

其特征在于，晶态的固体样品中不含有结晶水或其它结晶溶剂物质，当使用粉末(多晶)X射线衍射分析时(CuK_α辐射)，表现为衍射峰位置：2-Theta值(°)或d值

和衍射峰相对强度：峰高值(Height％)或峰面积值(Area％)具有如下特征

6.如权利要求5所述的生松素β晶型固体物质，其特征在于，它的DSC图谱的吸热转变在204℃左右。

7.如权利要求5所述的生松素β晶型固体物质，其特征在于，它的红外吸收光谱在3090.8、2890.0、2748.9、2638.3、1633.5、1602.9、1585.0、1487.9、1466.1、1454.3、1344.4、1302.7、1216.7、1168.2、1088.4、1065.5、1028.8、1014.3、1001.5、975.8、917.8、888.2、861.8、826.6、789.1、766.6、741.1、715.4、698.0、663.7、646.0、620.5、587.9、574.8、560.9、527.2、488.4cm^-1处有吸收峰，其中2890.0、2748.9、2638.3、1633.5、1344.4cm^-1峰为生松素β晶型固体物质的主要特征吸收峰。

8.一种生松素的混晶固体，其含有任意比例的生松素两种晶型(α晶型+β晶型)按组合得到。

9.如权利要求1(α晶型)、权利要求2(α晶型)、权利要求5(β晶型)与权利要求8(α+β混合晶型)所述的生松素固体晶型原料药，其特征在于每日给药剂量在5～250mg范围内。

10.一种含有权利要求1(α晶型)、权利要求2(α晶型)、权利要求5(β晶型)与权利要求8(α+β混合晶型)所述的任意一项中所定义的生松素晶型固体物质，并混有一种或多种药用赋形剂的组合物，包括制成的片剂、胶囊、丸剂、针剂、缓释制剂、控释制剂等不同药物制剂形式。

11.一种由权利要求1、权利要求2、权利要求5与权利要求8中的晶型固体物质作为活性成分的药物原料，用于治疗脑缺血性疾病和通过保护神经血管单元功能防治脑缺血性疾病中的应用的各种药物及组合物。

12.一种生松素α晶型样品的制备方法，其特征在于，使用甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、95％乙醇、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲烷、甲苯、苯、正己烷、环己烷、二氧六环、DMF、石油醚、氨水、正丙醇等单一溶剂；先将样品完全溶解，放置在温度范围在4℃至50℃，相对湿度范围在10％至75％的环境内，经过重结晶生长时间在1天至60天内，最终制备获得的α晶型固体样品。

13.一种生松素α晶型样品的制备方法，其特征在于使用权利要求12中所包含的溶剂种类，经不同组合(两种或两种以上溶剂混合使用)与不同配比制成的混合溶剂。先将样品完全溶解，放置在温度范围在4℃至50℃，相对湿度范围在10％至75％的环境内，经过重结晶生长时间在1天至60天内，最终制备获得的α晶型固体样品。

14.一种生松素α晶型样品的制备方法，其特征在于，使用权利要求12或权利要求13中所包含的不同溶剂系统；先将样品完全溶解，通过加入不同比例水产生沉淀，采用减压抽滤、冷冻干燥、冷喷雾等方法制备获得的α晶型固体样品。

15.一种生松素β晶型样品的制备方法，其特征在于，使用α晶型固体样品作为原料，经过研磨转晶工艺方法制备获得的β晶型固体样品。

16.一种生松素β晶型样品的制备方法，其特征在于使用吡啶或DMSO溶剂将样品完全溶解，加入不同比例水产生沉淀，采用减压抽滤、冷冻干燥、冷喷雾等方法等制备获得的β晶型固体样品。

17、一种由权利要求1、权利要求2、权利要求5与权利要求8中的晶型固体物质作为活性成分的药物原料，在治疗各种疾病过程中由于晶型作用而提高生物体内血药浓度发挥的治疗作用。

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