CN101293016A - 肉苁蓉提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及肉苁蓉的提取物肉苁蓉总苷在制备治疗帕金森病药剂中的应用。所述肉苁蓉的提取物是由按下述方法制备的：肉苁蓉在切片后用70％乙醇回流两次，提取上清，并将提取液水浮后，得到上清液，将上清液过大孔树脂，先用水洗脱，再用甲醇洗脱，其中甲醇洗后的溶液进行蒸干，再用正丁醇溶解蒸干后的产物，得到水相和醇相，将醇相蒸干后用无水乙醇精制，可得到肉苁蓉总苷即为所述肉苁蓉的提取物。由于肉苁蓉提取物肉苁蓉总苷可以用来制备治疗帕金森病的药剂，能有效改善帕金森病患者的运动功能及延缓帕金森病病程进展，给中医药治疗帕金森病带来了新的希望。

Description

肉苁蓉提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用

技术领域

本发明涉及肉苁蓉提取物的用途，尤其涉及肉苁蓉提取物在在制药中的新的用途。

背景技术

肉苁蓉(Herba Cistanchis)是列当科肉苁蓉属植物，始载于《神农本草经》，属中医补益药物中的常用品种，具有补肾益精、润肠通便的功效。肉苁蓉主治：肾虚阳痿，遗精早泄，女子不孕，肝肾不足之筋骨痿弱，腰膝冷痛老年病后，产后，津液不足，肠燥便秘。目前从肉苁蓉中提取肉苁蓉总苷(苯乙醇苷类成分，又称苁蓉总苷)。而制成市售的肉苁蓉总苷药剂主要用来治疗老年性痴呆疾病。

帕金森病(PD)是中老年人神经系统常见疾病。其特征性病理改变是中脑黑质多巴胺能神经元变性减少，导致纹状体内多巴胺浓度明显下降，目前治疗主要依赖多巴胺替代疗法。直到目前，左旋多巴制剂治疗是最有效的治疗措施，然而，还是在本药开始临床应用的最初几年，人们就已经发现，该药在长期应用后，疗效会逐渐降低，并出现剂末现象、开关现象等副反应，且不能阻止病情的进展。多巴胺受体激动剂的应用也未能根本上改变这一状况。曾一度唤起人们巨大希望的神经保护药物，诸如司兰吉林等药物，经大规模的临床试验，也未发现能够显著起到延缓病情进展的作用。因此，进行天然药物的筛选，具有迫切的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供肉苁蓉提取物肉苁蓉总苷在制药中的新的应用。

实现本发明目的技术方案是：肉苁蓉总苷在制备治疗帕金森病药剂中的应用。

一种肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用，所述肉苁蓉的提取物是由按下述方法制备的：

肉苁蓉在切片后用70％乙醇回流两次，提取上清，并将提取液水浮后，得到上清液，将上清液过大孔树脂，先用水洗脱，再用甲醇洗脱，其中甲醇洗后的溶液进行蒸干，再用正丁醇溶解蒸干后的产物，得到水相和醇相，将醇相蒸干后用无水乙醇精制，可得到肉苁蓉总苷即为所述肉苁蓉的提取物。

一种肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用，所述肉苁蓉的提取物是由按下述方法制备的：

将1g肉苁蓉粉末加60ml甲醇进行超声波破碎浸提，浸提液过滤后得滤液和滤渣，滤液减压浓缩至膏状，用10ml水混悬后过大孔吸附树脂，先用水洗脱，然后再用甲醇洗脱，将甲醇洗脱液集中，减压浓缩后即得肉苁蓉总苷。

上述的肉苁蓉总苷的三种主要成分为：松果菊苷、异毛蕊花糖苷和毛蕊花糖苷。

上述的肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂的应用，其中，可在肉苁蓉总苷中加入矫味剂或溶剂制成口服液剂、片剂、丸剂、冲剂、胶囊剂、注射剂、滴丸剂、糖浆剂、膏剂。

由于肉苁蓉提取物肉苁蓉总苷可以用来制备治疗帕金森病的药剂，能有效改善帕金森病患者的运动功能及延缓帕金森病病程进展，给中医药治疗帕金森病带来了新的希望。

附图说明

图1为苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠纹状体酪氨酸羟化酶阳性纤维的影响；

图2为苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元数量的影响的试验中各试验组阳性神经元照片；

图3为苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元数量的影响；

图4为苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元α-突触核蛋白表达的影响的试验中各试验组的黑质神经元α-突触核蛋白的免疫染色照片；

图5苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元α-突触核蛋白表达的影响。

具体实施方式

下面对本发明作进一步的说明。

一、制备方法

为当前的提取肉苁蓉总苷的常规方法。

制备方法1：肉苁蓉在切片后用70％乙醇回流两次，提取上清，并将提取液水浮后，得到上清液，将上清液过大孔树脂DM-130，先用水洗脱，再用甲醇洗脱，其中甲醇洗后的溶液进行蒸干，再用正丁醇溶解蒸干后的产物，得到水相和醇相，将醇相蒸干后用无水乙醇精制，即可得到肉苁蓉总苷。该肉苁蓉总苷的三种主要成分为：松果菊苷、异毛蕊花糖苷和毛蕊花糖苷。

制备方法2：将1g肉苁蓉粉末加60ml甲醇进行超声波破碎浸提(600W破碎20min)浸提液过滤后得滤液和滤渣，滤液减压浓缩至膏状，用10ml水混悬后过大孔吸附树脂(AB-8)，先用水洗脱，然后再用甲醇洗脱。将甲醇洗脱液集中，减压浓缩后即得肉苁蓉总苷。

二、使用方法

市售杏辉天力(杭州)药业的天力再生牌苁蓉总苷胶囊用于治疗帕金森病临床推荐用量是1日3次，2粒/次，0.3g/粒。小鼠62.5mg/kg-100mg/kg，成人按60kg计算，3.75g-6g。

三、实施例

肉苁蓉的提取物肉苁蓉总苷可制成口服液剂、片剂、丸剂、冲剂、胶囊剂、注射剂、滴丸剂、糖浆剂、膏剂。上述这些剂型中的主要成分为肉苁蓉总苷。

实施例1

制成片剂、丸剂、冲剂、糖浆剂、膏剂。除肉苁蓉总苷外可根据需要添加矫味剂。该片剂、丸剂、冲剂、糖浆剂、膏剂成分为包括：

肉苁蓉总苷5％-90％(重量比)

矫味剂0.1-1％(重量比)

上述矫味剂可选自α-环糊精(α-CD)、β-环糊精(β-CD)、N-LOK变性淀粉、蔗糖、木糖醇、高果糖、甜蜜素、甜菊糖和蛋白糖中的一种或多种。

实施例2制成胶囊剂。该胶囊剂成分为包括：

肉苁蓉总苷    15％-30％(重量比)

矫味剂        0.5-10％(重量比)

上述矫味剂主要有：羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚乙二醇(PEG)、丙烯酸树脂等。

实施例3制成注射剂、滴丸剂。该注射剂、滴丸剂成分包括：

肉苁蓉总苷    20％-30％(重量比)

溶剂          适量

四、治疗机理

肉苁蓉提取物在制备治疗帕金森病药剂中的治疗机理

当代中医学者通常采用“辨证求因”的传统方法来推知帕金森病的中医机理。多数学者认为帕金森病的病机特点为：本虚标实。导致本虚的原因繁多，择其要者大致有：(1)年龄因素：帕金森病多发于老年人，周氏^[1，2]认为中年以后阴气自半，会出现肝肾自虚的生理性虚衰，兼加劳顿、色欲之消耗，而致阴精虚少，形体衰败。(2)情志因素：有作者^[3]指出，五志过激皆能化火，五志化火，灼伤阴津，能够使人出现精血暗耗。(3)久病及肾，高年多病重叠，致使肝肾交亏^[2]。以上诸因素导致患者的肝肾阴虚、气血两虚作为本病最根本的病理基础，也是形成内风痰火瘀的基本根源。周氏指出肝风之起，乃由肝肾亏虚所致，在肝肾亏虚的基础上，痰瘀内生，阻滞脑络，更加剧了内风暗动^[2]。王氏认为：肝肾阴虚，可致虚火内生兼加痰湿内蕴、五志化火等热邪因素，从而形成风火、痰火、瘀火等，进一步加重病情^[4]。王永炎等依据自己的临床观察，强调筋脉失养，血瘀阻络的重要性^[5]。潘氏根据对3例伴有意识迟钝的老年患者的辨治经验^[6]，提出了帕金森病与老年性痴呆有一定内在联系的命题，认为帕金森病一病存在心营虚损、内风煽动的病理表现。王坤山等认为脾阳虚弱，气血生化乏源又加脾虚湿聚痰生，也能导致震颤^[3]。总之，中医认为帕金森病一病的病理实质在于肝肾阴虚，也涉及心脾两脏。表现为颤振、僵直、行动徐缓等症状的原因是由于本虚基础上形成了内风痰火瘀等病理改变的结果。内风痰火瘀是相互影响的病理因素，其相互影响的共同通路是经脉，其最终的病理结局是筋脉失养。

近年来，越来越多的研究表明肉苁蓉及其所含有的一些化学成分具有神经保护作用。蒲小平等^[7]发现肉苁蓉内提取的单体Campneoside II预先孵育大鼠小脑颗粒细胞，可以对抗MPP+(化学名：1-甲基-4-苯基吡啶)诱导的细胞凋亡。邓敏等^[8]发现运用肉苁蓉另一有效成分松果菊苷处理的神经细胞，其存活率提高，凋亡发生率显著降低降，并且caspase-3活性不断降低，呈现出与松果菊苷的剂量依赖性关系。迄今，约有近70种化合物从肉苁蓉属植物中分离出来，主要包括苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素及其苷类、以及生物碱和糖类等成分。

研究发现，MPTP可以在体或离体导致选择性的多巴胺能神经元的丧失^[9，10]。因此，目前MPTP诱导的帕金森模型被公认为是最好的模型。MPTPHCL是人工合成的化合物，具有较高的脂溶性，容易透过血脑屏障，给动物腹腔注射MPTP后，会被转移到脑内，在神经胶质细胞内被单胺氧化酶B(monoamine oxidase B)代谢转化为1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)^[11，12]。MPP+是真正的的神经毒剂，可以被多巴胺能神经元选择性的摄取^[13]，并进而导致多巴胺能神经元的死亡。慢性MPTP小鼠模型会出现运动迟缓、肢体抖动等神经行为^[14]、以及黑质和纹状体的病理改变^[15]。这样建立的慢性MPTP小鼠模型在行为学、以及黑质和纹状体病理改变都与国内外的研究一致，能部分模拟人类帕金森病的病理生理变化，可用作筛选和发现对帕金森病有潜在治疗价值的药物及研究其治疗机理。α-突触核蛋白是一个由140个氨基酸组成的酸性蛋白^[9]，研究发现α-突触核蛋白的改变可是导致帕金森病的重要因素。

为了观察肉苁蓉提取物能否在体内(in vivo)抑制MPTP诱导的多巴胺能神经细胞的死亡，在慢性MPTP(化学名：甲基-苯基四氢吡啶)模型上观察了该提取物的作用和影响。

材料与方法：

1、材料

1.1实验动物：

雄性C57BL小鼠，8周龄，体重20-25g，有中国科学院上海实验动物中心提供。小鼠每笼3只，均侍养于室温22-25℃的环境中，12h昼夜节律，自由进食和饮水。

1.2主要试剂：

兔抗细胞色素c氧化酶亚单位IV抗体(cytochrome c oxidase subunit IV，COX IV)(Cell Signaling，Danvers，MA，U.S.A)；

绵羊抗α-突触核蛋白抗体(识别α-突触核蛋白的第108-120位氨基酸，专供免疫组化分析用，Chemicon，Temecula，CA，U.S.A)；

兔抗酪氨酸羟化酶抗体(Chemicon，Temecula，CA，U.S.A.)；

辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG抗体((Zymed，South San Francisco，CA，U.S.A.)；

荧光素标记的山羊抗兔IgG抗体(Rockland，Gilbertsville，PA，U.S.A)；

罗丹明标记的驴抗绵羊IgG抗体(Rockland，Gilbertsville，PA，U.S.A)；

苁蓉总苷(杏辉公司，中国)该苁蓉总苷的三种主要成分为：松果菊苷、异毛蕊花糖苷和毛蕊花糖苷。或按上述2中制备方法提取的苁蓉总苷。

1.3主要仪器：

自制爬杆架：选择长85cm，直径1.5cm的不锈钢钢管，外紧裹棉纱防滑，上端覆以直径2cm的球形突起，试验时作为小鼠的附着点，然后将其固定于木制地座，放置在鼠笼中，底座用锯末覆盖。

Leica冰冻切片机        德国Leica公司

低温台式离心机         德国Eppendorf公司

低温高速离心机         德国Beckman公司

Leica激光共聚焦显微镜  德国Leica公司

Leica图像分析系统      德国Leica公司

电子天平               Mettler Toledo上海有限公司

pH计                   Mettler Toledo上海有限公司

2、方法

2.1小鼠帕金森病模型的建立及动物分组：

首先对即将入组的小鼠进行爬杆试验训练4天，剔除具有行动障碍的小鼠。然后将筛选入组的小鼠随机分为，模型组、苁蓉总苷高剂量组、苁蓉总苷中剂量组、苁蓉总苷低剂量组和正常对造组。

模型组、苁蓉总苷高剂量组、苁蓉总苷中剂量组和苁蓉总苷低剂量组采用MPTP慢性模型，模型的建立方法同第一部分。对照组小鼠仅接受生理盐水腹腔注射。

苁蓉总苷高剂量组、苁蓉总苷中剂量组和苁蓉总苷低剂量组在腹腔注射MPTP之前的3天开始苁蓉总苷灌胃，计量参照文献[1]分别为：高剂量组苁蓉总苷400mg/kg/日；中剂量组苁蓉总苷200mg/kg/日和低剂量组苁蓉总苷100mg/kg/日。模型组和正常对造组小鼠每日灌胃同样体积的生理盐水。

2.2行为学试验：

试验采用爬杆法，运用计时的方法进行评价。试验时首先手持小鼠尾巴，令其倒立于爬杆的顶端，用秒表记录小鼠自杆顶爬至杆底(前爪触底)所用时间。小鼠适应训练4天，记录第一次MPTP注射前1天，第一次MPTP注射后7、14天的爬杆时间。每次记录前，先让小鼠适应爬行2次后进行测量，一般测量3次，记录连续爬行时间最短的一次进行统计；如遇小鼠出现中途停顿或返向攀爬，则重新测量，时间计数包括小鼠在爬杆顶端的运动启动时间。

2.3冰冻组织切片制备

2.4酪氨酸羟化酶的免疫组织化学染色

2.5α-突触核蛋白的免疫组织化学染色

1)从原位杂交保护液中选取脑片用0.01M PBS漂洗3次，每次5min。

2)在0.3％H2O2中室温孵育30min。取出后用0.01M PBS漂洗3次，每次5min。

3)在含10％小牛血清，0.2％Triton的0.01M PBS溶液孵育1h

4)在含1％小牛血清，0.2％Triton的0.01M PBS溶液中加入绵羊抗α-突触核蛋白一抗(1∶200)，37℃温箱中孵育2小时，然后移至4℃冰箱中过夜。取出后用0.01M PBS漂洗3次，每次5min。

5)在含1％小牛血清，0.2％Triton的0.01M PBS溶液中加入HRP标记的抗绵羊IgG抗体孵育，37℃温箱中孵育1小时。取出后用0.01M PBS漂洗3次，每次5min。

6)0.1M Tris-HCl pH7.5漂洗5min。

7)DAB显色10分钟。DAB配制按照中杉公司DAB显色试剂盒的操作步骤进行。

8)贴片，晾干，常规脱水，中性树胶封片。

2.6免疫组织化学阴性对照

不加一抗，其余步骤同相应各组免疫组织化学染色。

2.7图像分析及定量

2.8统计分析

所有数据均用平均数±标准差表示。两组数据的比较用t检验。多组数据用方差分析(ANOVA)，有显著性意义是再用Q检验。数据用SPSS10.0软件处理。P＜0.05定为有显著性差异。

3、实验结果

3.1小鼠神经行为学的试验结果

3.11对自主活动的影响

小鼠在注射MPTP前后的行为学变化。小鼠在MPTP腹腔注射后0.5h，各组小鼠均出现不同程度的运动障碍，表现为动作迟缓、震颤、竖毛、竖尾和活动减少等，但苁蓉总苷干预的各组这种现象明显减轻，而腹腔注射生理盐水的正常对照组则不存在上述改变。部分模型组小鼠在MPTP腹腔注射后0.5h内出现全身震颤、静止不动的现象，一般持续0.5h后方能缓解，而苁蓉总苷干预的各组均未出现上述现象。与模型组比较，苁蓉总苷干预的各组小鼠毛色光亮，模型组小鼠的毛发则变的杂乱并失去光泽。

3.12爬杆试验结果

各组小鼠爬杆时间数值见表1。本数据为各组建模后不同时间点爬杆时间减去建模前爬杆时间，即得一差值(建模后变化值)，其中建模后爬杆时间延长用正值表示，缩短用负值表示。结果显示在MPTP第一次注射后7天和14天测试，模型组小鼠爬杆时间明显延长，与正常组相比统计有显著意义(P＜0.01)。与模型组相比，苁蓉总苷各组的爬杆时间均有改善；但只有苁蓉总苷高剂量组与模型组相比，统计有显著差异(P＜0.01)。并且在MPTP第一次注射后7天，苁蓉总苷低剂量组与正常对照组相比，爬杆时间延长，统计有显著意义(P＜0.05)，在MPTP第一次注射后14天，苁蓉总苷中、低两个剂量组与正常对照组相比，爬杆时间均显著延长(P＜0.01)。

表1.

苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠建模前后爬杆时间变化的影响

^**P＜0.01和^*P＜0.05对控制组；

P＜0.01对在MPTP第一次注射后7天的模型组；

P＜0.01和P＜0.05对控制组；▲▲P＜0.01对在MPTP第一次注射后14天的模型组。

3.13小鼠神经行为学的试验结论

在MPTP第一次注射后7天和14天测试，模型组小鼠爬杆时间明显延长，与正常组相比统计有显著意义(P＜0.01)。与模型组相比，苁蓉总苷各组的爬杆时间均有改善；但只有苁蓉总苷高剂量组与模型组相比，统计有显著差异(P＜0.01)。

3.2对纹状体酪氨酸羟化酶阳性纤维的影响

分别于第一次MPTP注射后的7和14天，运用免疫组织化学的方法观察了苁蓉总苷对纹状体酪氨酸羟化酶阳性纤维的影响(n＝5)，结果显示3个剂量组的苁蓉总苷在两个时间点上均能明显提高纹状体酪氨酸羟化酶的表达(P＜0.05)。

图1MPTP注射后纹状体酪氨酸羟化酶(TH-IR IOD of striatum)的表达的影响。^**P＜0.01对控制组，▲▲P＜0.01对在MPTP第一次注射后7天的模型组；P＜0.01对在MPTP第一次注射后14天的模型组。A：正常组；B：模型组(MPTP第一次注射后7天)；C模型组(MPTP第一次注射后14天)；D：400mg/kg/d TCM组(即苁蓉总苷干预组)(MPTP第一次注射后7天)；E：200mg/kg/d TCM组(MPTP第一次注射后7天)，F：100mg/kg/d TCMgroup(MPTP第一次注射后7天)，G：400mg/kg/d TCM组(MPTP第一次注射后14天)：H：200mg/kg/d TCM组(MPTP第一次注射后14天)；I：100mg/kg/dTCM组(MPTP第一次注射后14天)。

3.3肉苁蓉苯乙醇苷类提取物对黑质致密部多巴胺能神经元数量的影响

分别于第一次MPTP注射后的7和14天，运用免疫组织化学的方法观察了苁蓉总苷对黑质致密部的酪氨酸羟化酶阳性神经元数量的影响，脑片的选择以过脚间核平面为核心，前后隔5取一，共得三张脑片，脑片初选后经认真比对，解剖结构完全匹配后进行研究，以三张脑片阳性神经元数的平均值进行统计。结果显示，模型组的MPTP第一次注射后7和14天酪氨酸羟化酶阳性神经元数量与正常对照组相比下降，统计有显著意义(P＜0.01)，模型组在MPTP第一次注射后14天酪氨酸羟化酶阳性神经元的数量比7天略有减少，但两者的差别没有统计学意义(P＞0.05)。尽管三个剂量组苁蓉总苷的干预均能对抗MPTP导致的酪氨酸羟化酶阳性神经元的数量的下降，但只有苁蓉总苷高剂量组在两个时间点上与模型组比较差别有显著性(P＜0.05)。并且与正常对照组相比，差别不显著(P＞0.05)。

图2-3，苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元数量的影响。^**P＜0.01对控制组，▲P＜0.05对MPTP第一次注射后7天后的模型组，P＜0.05对MPTP第一次注射后7天后的模型组。A：正常组；B：模型组(MPTP 7d)；C模型组(MPTP 14d)；D：400mg/kg/d TCM组(MPTP 7d)；E：400mg/kg/d TCM组(MPTP 14d)。

3.4苁蓉总苷对α-突触核蛋白表达的影响

选择MPTP第一次注射后的4天作为观察的时间点，主要考虑Westernblot分析以及系列的激光共聚焦观察均证实在该时间点上，线粒体上α-突触核蛋白的表达明显上调，而多巴胺能神经元尚未大量死亡。根据病理学研究中常用的半定量原则，将黑质神经元α-突触核蛋白的免疫染色强度分为三个等级：弱阳性(淡黄)；中度阳性(黄色)；强阳性(棕黄)三个等级。可在正常小鼠中见到大量弱阳性(淡黄)；中度阳性(黄色)的神经元，在100倍镜下，统计各组黑质致密部所有细胞形态完整的α-突触核蛋白强阳性神经元。结果发现，小鼠经MPTP处理后，黑质致密部α-突触核蛋白的免疫反应明显增强，呈强阳性的神经元明显增多(P＜0.01)，统计显示，经高剂量苁蓉总苷干预的模型小鼠，其α-突触核蛋白强阳性的神经元与模型组小鼠相比明显减少(P＜0.01)。图像经高倍放大后可以看到，正常小鼠黑质致密部的大部分神经元染色较浅，分布均匀；而模型小鼠黑质致密部的大部分神经元染色较深，并且呈聚集状；经高剂量苁蓉总苷干预的模型小鼠，与模型组相比，其黑质致密部的神经元染色变浅，分布均匀。

以上实验表明MPTP可以诱导在正常小鼠黑质神经元的线粒体膜上存在α-突触核蛋白的表达的升高。MPTP小鼠模型中可能存在标志线粒体凋亡的聚集现象。并且可能线粒体上增高的α-突触核蛋白的表达促进了这种聚集现象。苁蓉总苷可以有效的改善MPTP小鼠模型的神经行为，抑制MPTP诱导的小鼠死亡。这种干预作用可能与其抑制了线粒体上增高的α-突触核蛋白的表达有关。

图4-5，苁蓉总苷干预治疗对MPTP小鼠黑质多巴胺能神经元α-突触核蛋白表达的影响。^**P＜0.01对控制组，▲▲P＜0.01对初次注射MPTP后4天的模型组，(A，D)：正常组；(B，E)：模型组(MPTP 4d)；(C，F)：400mg/kg/dTCM组(MPTP 4d)。

以上实施例仅供说明本发明之用，而非对本发明的限制，有关技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以作出各种变换或变型，因此所有等同的技术方案也应该属于本发明的范畴，应由各权利要求所限定。

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Claims (5)

1、肉苁蓉总苷在制备治疗帕金森病药剂中的应用。

2、一种肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用，所述肉苁蓉的提取物是由按下述方法制备的：

肉苁蓉在切片后用70％乙醇回流两次，提取上清，并将提取液水浮后，得到上清液，将上清液过大孔树脂，先用水洗脱，再用甲醇洗脱，其中甲醇洗后的溶液进行蒸干，再用正丁醇溶解蒸干后的产物，得到水相和醇相，将醇相蒸干后用无水乙醇精制，可得到肉苁蓉总苷即为所述肉苁蓉的提取物。

3、一种肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂中的应用，所述肉苁蓉的提取物是由按下述方法制备的：

将1g肉苁蓉粉末加60ml甲醇进行超声波破碎浸提，浸提液过滤后得滤液和滤渣，滤液减压浓缩至膏状，用10ml水混悬后过大孔吸附树脂，先用水洗脱，然后再用甲醇洗脱，将甲醇洗脱液集中，减压浓缩后即得肉苁蓉总苷。

4、如权利要求1-3任一项权利要求所述的肉苁蓉总苷的三种主要成分为：松果菊苷、异毛蕊花糖苷和毛蕊花糖苷。

5、如权利要求1-3任一项权利要求所述的肉苁蓉的提取物在制备治疗帕金森病药剂的应用，其中，可在肉苁蓉总苷中加入矫味剂或溶剂制成口服液剂、片剂、丸剂、冲剂、胶囊剂、注射剂、滴丸剂、糖浆剂、膏剂。

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