CN104435465A - 一种治疗帕金森病的中药组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗帕金森病的中药组合物，是以肉苁蓉6-15g，石菖蒲6-12g为药材配方，利用肉苁蓉减轻机体氧化应激损伤、清除自由基的作用，配合石菖蒲挥发油提高血脑屏障通透性的作用，制备成的治疗帕金森病的散剂、颗粒剂、冲剂或其他中药剂型。经实验证明，本发明中药组合物可修复受损的多巴胺能神经细胞，有效提高黑质-纹状体中多巴胺含量，上调多巴胺能神经细胞TH的表达，降低脑组织过氧脂质化程度，增强脑内抗氧化水平，减轻MPP+诱导帕金森病模型MES23.5多巴胺能神经细胞的凋亡，且无明显毒性。

Description

一种治疗帕金森病的中药组合物
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种治疗帕金森病的中药组合物。
背景技术
帕金森病(Parkinson Disease，PD)是一种以中脑黑质纹状体部多巴胺能神经元的变性或消失，以及细胞内α-突触核蛋白的异常蓄积引起路易小体的形成为病理特征，从而产生静止性震颤、肌强直、运动迟缓、姿势步态障碍等临床表现的神经系统退行性疾病。PD常见于中老年人，流行病学调查显示，我国PD患病总人数已达170多万人，其中65岁以上人群的患病率约为1.7%；随着人口的老龄化，发病率显著增加已成为当前老年医学面临的最严峻课题之一。迄今为止，PD的确切病因及发病机制尚不清楚,但已有足够的证据表明氧化应激引起的细胞凋亡增多与多巴胺能神经细胞退行性病变是密切相关的。
目前，帕金森病的治疗仍然是针对其症状进行控制，尚无有效延缓疾病进程的手段。临床上以多巴胺替代治疗为主，其中，以左旋多巴为代表，虽然其治疗起效迅速，但随之带来的诸多副作用日益引起人们的注意，诸如“开关现象”、“剂末现象”、运动障碍、精神异常等问题；并且左旋多巴本身不仅无法阻止或延缓多巴胺能神经元的进行性死亡，还可以通过自身氧化产物诱导神经细胞凋亡。这些都极大地影响了患者的治疗效果和生活质量。因此，寻找一种能够预防和延缓疾病进程的治疗方法已成为迫切需要，而保护及修复已损伤的多巴胺神经元是治疗PD病的核心问题。
中医典籍对PD多有记载，明·王肯堂在《证治准绳》中记载:“此病壮年鲜,中年以后乃有之”。中医又言“肾为先天之本，……肾生髓，充脑，脑为髓海。”《灵枢·海论》曰:“髓海有余，则轻劲多力……髓海不足，则脑转耳鸣,胫痉眩冒,目无所见,懈怠安卧。”帕金森病主要表现为肢体活动失调、运动迟缓，且发病年龄在进入肾气衰退的中老年时期，故肾虚髓空是导致帕金森病发生的内在条件。目前中医药治疗PD还不能处于主导地位，但无论古代医药典籍记载的方药还是近年提出的以中医本草为原料的治疗PD的可能新药，在临床上都有一定疗效；而且现代药理研究也证实中医方药可以不同程度地减轻机体的氧化应激损伤，清除自由基，提高脑内DA水平，提高机体抗氧化和抗细胞凋亡，延缓PD过程，增效减毒，改善PD患者的生活质量，说明中药在PD黑质细胞保护性治疗和恢复性治疗中可以发挥其不可替代的优势。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗帕金森病的中药组合物，以肉苁蓉和石菖蒲进行药物组方，使药物有效成分可通过血脑屏障，从而在脑内发挥功效。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种治疗帕金森病的中药组合物，其以肉苁蓉和石菖蒲药材配方，所述配方中含肉苁蓉6-15g，石菖蒲6-12g，或肉苁蓉8-12g，石菖蒲6-10g，优选肉苁蓉10g，石菖蒲6g。
所述治疗帕金森病中药组合物的应用，是用于制成治疗帕金森病的散剂、颗粒剂、冲剂或其他中药剂型。
所述颗粒剂的制备是将肉苁蓉和石菖蒲加药材重量2-3倍的水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，过滤，滤液浓缩至50℃时相对密度为1.20；加乙醇使溶液中含醇量为60％，静置沉淀，取上清液，回收乙醇并浓缩至稠膏状；取稠膏，加入辅料制成含糖型颗粒或无糖型颗粒。
所述含糖型颗粒的辅料为蔗糖、糊精；所述无糖型颗粒的辅料为糊精、甜味剂；辅料的加入量为药材重量的3-4倍。
所述颗粒剂的用法是按每次9g，每日2-3次，以100-200mL沸水冲泡15-20分钟后温服，或直接口服，以温开水送下。
肉苁蓉味甘、咸，性温；归肾、大肠经；具有补肾阳、益精血、润肠道的功效，主治肾阳虚衰。石菖蒲味辛、苦，性温；归心、胃经；具有化湿开胃、开窍豁痰、醒神益智的功效，用于神昏癫痫、健忘耳聋。
本发明的显著优点在于：本发明组方中肉苁蓉的有效成分具有减轻机体氧化应激损伤，清除自由基的作用。石菖蒲所含挥发油可提高血脑屏障的通透性，有利于组方中有效成分通过血脑屏障，进入脑内发挥作用。
经实验证明，本发明中药组合物可修复受损的多巴胺能神经细胞，有效提高黑质-纹状体中多巴胺含量，上调多巴胺能神经细胞TH的表达，降低脑组织过氧脂质化程度，增强脑内抗氧化水平，减轻MPP+诱导帕金森病模型MES23.5多巴胺能神经细胞的凋亡，且无明显毒性。
附图说明
图1为实施例1中各实验组小鼠神经细胞形态的电镜图。
图2为实施例3中不同处理对小鼠脑黑质中酪氨酸羟化酶表达的影响，其中，图A为TH免疫染色阳性细胞的显微图像；图B为各组TH免疫染色阳性细胞平均积分光密度值的对比。
图3为实施例4中不同处理对小鼠中脑/多巴胺能神经细胞中抗氧化蛋白GPx-1、CAT、HO-1表达的影响。
图4为实施例4中不同处理对小鼠中脑/多巴胺能神经细胞抗氧化蛋白GPx-1、CAT、HO-1 mRNA表达的影响。
图5为实施例5中本发明中药组合物对PD模型小鼠多巴胺能神经细胞凋亡的影响，其中，图A为不同浓度MPP+和不同干预时间对多巴胺能神经细胞存活率的影响；图B为不同浓度药液分别干预24h和48h对正常多巴胺能神经细胞存活率的影响；图C为不同浓度药液分别干预24h和48h对PD模型多巴胺能神经细胞存活率的影响；图D为低、中、高剂量处理后倒置显微镜观察的各组多巴胺能神经细胞的形态；图E为低、中、高剂量处理后各组多巴胺能神经细胞飞凋亡情况；图F为各组多巴胺能神经细胞中Bcl-2和Bax凋亡调控蛋白表达的对比。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施例1 本发明中药组合物对帕金森病（PD）模型小鼠中脑黑质-纹状体神经细胞形态的影响
1. 药液制备：将肉苁蓉1kg和石菖蒲0.6kg加3.2kg水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，过滤，滤液浓缩至50℃时相对密度为1.20；加乙醇使溶液中含醇量为60％，静置沉淀，取上清液，回收乙醇并浓缩至稠膏状，取稠膏加水配制成不同浓度的药液。
2. 造模：取6周龄SPF级C57BL/6J品系雄性小鼠，用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）腹腔注射法（40 mg·kg-1·d-1，1次/d，连续7天）建立PD小鼠模型。每次注射至少4 h后检测小鼠的自主活动次数和转棒时间，选自主活动次数和转棒时间均下降小鼠为造模成功小鼠。
3. 给药：将造模成功小鼠随机分为模型组、低剂量组（1mg/kg）、高剂量组（4mg/kg），每组10只，另取同周龄同品系小鼠10只作为正常对照组。正常组、模型组给予蒸馏水灌胃，各剂量组给予相应浓度的药液灌胃，连续给药7天。
4. 取材：给药结束后，将小鼠快速断头取脑，冰浴下切取中脑黑质-纹状体1×1×1mm3，经3%戊二醛-1.5%多聚甲醛-0.1M PBS（7.2）前固定8h，换液后4℃静置固定7天；用0.1M PBS漂洗并保存过夜；2%锇酸-3%亚铁氰化钾水溶液后固定2h；0.1M PBS漂洗并保存过午；酒精-丙酮梯度脱水；环氧树脂618包埋剂包埋；超薄切片80nm，醋酸双氧铀/柠檬酸铅双染色。采用日立H7650型透射电镜80KV观察，SIS400万像素电镜CCD相机进行拍摄，结果见图1。
图1可见，电镜下观察到正常组小鼠中脑黑质-纹状体神经元的胞膜和细胞器完整，线粒体、高尔基复合体丰富，有少量溶酶体，染色质散在于核的中部，着色浅；模型组小鼠中脑黑质-纹状体神经元的胞体缩小，核浆比例缩小，胞核固缩，染色质边集，内质网扩张呈空泡状等凋亡表现；低剂量组和高剂量组小鼠中脑黑质-纹状体神经元核内胞核固缩及染色质边聚表现较模型组有减轻，内质网扩张状态不明显，以高剂量组减轻更为明显。
实施例2 本发明中药组合物对PD模型小鼠黑质-纹状体多巴胺（DA）及其代谢产物的含量的影响
药液制备、造模和给药方法同实施例1。
取材：给药结束后，快速断头取脑，冰浴下分离黑质-纹状体，立即于-80℃冰箱内保存待测。采用高效液相色谱法检测多巴胺（DA）及其代谢产物高香草酸（HVA）的含量。结果见表1。
表1 各组模型大鼠用药后DA及其代谢产物的含量(x±s，n=10)
从表1结果可以看出，模型组DA含量显著低于正常组（p<0.01），给药组DA含量较模型组显著升高（p<0.01），与正常组无差异。
模型组HVA含量显著低于正常组（p<0.01），给药组HVA含量较模型组显著升高（p<0.01），但与正常组相比仍较低（p<0.01）。
DA/HVA比值反应了多巴胺的代谢情况，从表1中可见各组小鼠多巴胺的代谢是基本一致的。说明本发明中药组合物能有效提高PD模型小鼠黑质-纹状体多巴胺DA含量。
实施例3 本发明中药组合物对PD模型小鼠/MES23.5多巴胺能神经细胞酪氨酸羟化酶（TH）表达的影响
药液制备、造模和给药方法同实施例1。
取材：给药结束后，将各组小鼠快速断头取脑，并按编号逐一加以标记，用多聚甲醛水溶液灌流固定脑组织，取出脑黑质，用含蔗糖的磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡，常规石蜡包埋，连续冠状切片（片厚5um），按过氧化物酶标记的链霉卵白素（SP）两步法进行免疫组化染色，脱脂、水化后，经过热修复，滴加兔抗鼠TH单克隆抗体（一抗，1：400），4℃过夜；加羊抗兔IgG（二抗），37℃孵育15 min（各步骤间均以PBS冲洗）；3,3’-二氨基联苯胺（DAB）显色5min；镜检，脱水，透明，封固。每只大鼠随机选取5张切片，镜下（×400）观察，用图像分析系统进行TH免疫染色阳性细胞平均积分光密度分析，结果见图2。
酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）是儿茶酚胺类活性物质生物合成的限速酶，在DA生物合成的调节中发挥重要作用。所以该酶在生物体内，尤其是在黑质纹状体系统中质(活性)和量(表达)的变化会直接影响到L-多巴胺的生物合成，进而影响PD病情的变化。
图2免疫组化结果显示，模型组TH阳性细胞的平均积分光密度较正常组显著减少（P<0.01），高剂量组TH阳性细胞的平均积分光密度较模型组显著增加（P<0.01），低剂量组虽然较模型组无统计学意义（P<0.05），但是仍然高于模型组。本实验证明本发明中药组方能上调帕金森病模型小鼠/MES23.5多巴胺能神经细胞TH的表达。
实施例4 本发明中药组合物对PD模型小鼠中脑及MES23.5多巴胺能神经细胞内抗氧化酶的影响
1．对PD模型小鼠中脑SOD、CAT、GSH、MDA的影响
药液制备、造模和给药方法同实施例1。
取材：给药结束后，快速断头取脑，冰浴下分离黑质-纹状体后，在冰浴下按1：9（即1g组织加0.9％氯化钠溶液9ml）加入冰冷的0.9％氯化钠溶液，用超声细胞破碎仪破碎成10％的匀浆，3000g 4℃低温离心10min，取上清分装置于-80℃冰箱保存备用。检测时取适量上清液，按ELISA试剂盒要求测定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛（MDA）的活性，测定结果见表2。
表2 各组小鼠给药后SOD、CAT、GSH、MDA的变化
从表2可见，模型组MDA含量显著高于正常组（p<0.01），给药组MDA含量较模型组降低，尤以高剂量组降低显著（p<0.01），低、高剂量组MDA含量与正常组无差异。模型组SOD、CAT、GSH含量显著低于正常组（p<0.01），给药组SOD、CAT、GSH含量较模型组升高，尤以高剂量组升高显著（p<0.01）。说明本发明中药组合物能有效降低PD模型大鼠中脑MDA的含量，降低脑组织过氧脂质化程度，同时提高PD模型大鼠中脑抗氧化酶的含量，增强脑内抗氧化水平。
 2.对PD模型小鼠中脑/多巴胺能神经细胞抗氧化蛋白及mRNA表达的影响
药液制备、造模和给药方法同实施例1。
取材：分别提取小鼠中脑及多巴胺能神经细胞蛋白，5×电泳上样缓冲液(预染Maker取5μL)，沸水浴5min，离心，去除不溶性蛋白后上样，电泳，转膜，脱脂奶粉室温封闭，加一抗过夜，洗膜，加二抗，洗膜后加入ECL化学发光试剂，X光片记录结果，结果见图3。
分别提取小鼠中脑及多巴胺能神经细胞总RNA，并分别逆转录成cDNA后进行PCR反应，PCR反应体系为：PCR Master Mix 10μL、上游引物和下游引物各1μL、cDNA 1μL、补去离子水至20μL体积；PCR反应条件：CAT、β-actin （预变性94℃ 3min，变性94℃ 30s、退火CAT 58℃ 30s、延伸72℃ 30s，共进行35个循环数，最后72℃延伸 10min）；HO-1、GPx-1（预变性94℃ 4min，变性94℃ 1 min、退火HO-1 58℃/GPx-1 65℃ 1 min、延伸72℃ 1 min，共进行23个循环数，最后72℃延伸 10min）。PCR扩增产物5μL于1.5％琼脂糖凝胶电泳；EB染色，用图像分析处理系统进行灰度扫描，以β-actin作为内参照，作扫描面积积分半定量分析，结果见图4。
从图3可以看出，模型组小鼠中脑及MES23.5多巴胺能神经细胞内谷胱甘肽过氧化物酶-1（GPx-1）、CAT、人血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白的表达较正常组均显著降低，本发明中药组合物给药后GPx-1、CAT、HO-1蛋白的表达较模型组升高，尤以高剂量组升高显著。
从图4可以看出，模型组小鼠中脑及MES23.5多巴胺能神经细胞内GPx-1、CAT、HO-1 mRNA的表达较正常组均显著降低，本发明中药组合物给药后GPx-1、CAT、HO-1 mRNA的表达较模型组升高，尤以高剂量组升高显著。
综上所述，本发明中药组合物能有效增加PD模型小鼠中脑及MES23.5多巴胺能神经细胞GPx-1、CAT、HO-1等抗氧化酶的蛋白及mRNA的表达，增强动物脑内及多巴胺能神经细胞内的抗氧化能力。
实施例5 本发明中药组合物对PD模型MES23.5多巴胺能神经细胞凋亡的影响
取正常组小鼠MES23.5多巴胺能神经细胞接种于含5%胎牛血清（Gibco公司，Carlsbad，CA，USA）、1%谷氨酰胺（Sigma，St. Louis，MO，USA）、2% 50×Sato’s溶液和2%青/链霉素的DMEM/F12培养基，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中培养，用0.25%的胰酶消化传代，待细胞进入对数生长期时进行实验。
1. 取对数生长期的MES23.5神经细胞，以5×104的浓度接种至96孔板中，培养24h后分别加入浓度为6.25、12.5、25、50、100、200、400、600μmol/L的MPP+干预24h和48h，MTT法选取最佳的浓度和干预时间建立PD细胞模型，结果见图5A。
2. 另取对数生长期的MES23.5神经细胞以5×104的浓度接种至96孔板中，建立PD模型细胞后，在正常神经细胞和PD模型细胞中分别加入剂量为10、50、100、200、250、500、1000μg/mL的药液作为培养液干预24h和48h，结果对比见图5B、5C。
3. MTT法选取效果最好的3个浓度分别设为低、中、高剂量；将MES23.5多巴胺能神经细胞随机分为正常组、模型组、低、中、高剂量组。除正常组外，模型组和各治疗组均给予MPP+制备帕金森病细胞模型后，正常组及模型组更换正常新鲜培养液，低、中、高剂量组更换成剂量为100、200、250μg/mL药液培养液，干预24 h。倒置显微镜观察细胞形态，结果见图5D；流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况，结果见图5E；Western blot检测Bcl-2，Bax凋亡相关蛋白表达情况，结果见图5F。
从图5可以看出：
（1）从图5A对比可见，MPP+浓度在12.5-800μmol/L范围内，MES23.5多巴胺能神经细胞的存活率显著下降且呈现剂量、时间依赖关系，表现出明显的细胞毒性；其中100μmol/L MPP+干预24h后细胞的存活率已降低为62.87%；干预48h后细胞的存活率已降低为38.22%，与空白对照组比较差异具有统计学意义。因此，选择100μmol/L MPP+干预24h作为实验的干预条件。
（2）从图5B对比可见，单独加入不同浓度的本发明药液（10-500μg/mL）均对细胞无毒性作用；但加入1000μg/mL的本发明药液后，对细胞开始出现明显的毒性作用。
（3）从图5C对比可见，不同剂量的本发明药液能减轻MPP+引起的MES23.5细胞的毒性，降低MPP+诱导的细胞凋亡，且在10-250μg/mL的剂量范围内，这种作用呈现时间、剂量依赖关系；而从500μg/mL开始这种作用开始减弱，并出现细胞存活率下降现象。根据MTT结果提示，选择100、200、250μg/mL作用24h进行进一步后续实验研究。
（4）采用倒置显微镜观察细胞形态学的变化。从图5D结果可见，正常的MES23.5细胞贴壁状态良好，细胞呈梭形，边界轮廓清楚，突触清晰；MPP+损伤模型细胞贴壁不良，细胞皱缩，可见许多悬浮状细胞，突触收缩，细胞聚集，形态缩小变圆呈空泡，细胞核崩解或皱缩；本发明药液各给药组可不同程度改善模型细胞形态，增强细胞贴壁状态，突触较模型组清晰，尤以药液浓度为250μg/mL时细胞形态更接近正常组。
（5）利用流式细胞仪检测各处理组细胞凋亡率。从图5E结果可见，MPP+组细胞的凋亡率明显升高，与正常组相比较有显著性差异(P﹤0.01)，而本发明药液给药的各剂量组细胞凋亡率均有不同程度的下降，其中200μg/mL和250μg/mL组与MPP+组相比较有显著性差异(P﹤0.05)。
（6）应用免疫印迹法检测各组细胞中Bcl-2、Bax凋亡调控蛋白表达情况时发现。从图5F结果可见，与正常组相比较，MPP+组Bcl-2蛋白表达明显降低，而Bax蛋白表达明显升高，Bcl-2/Bax的比值显著降低；与MPP+组相比较，本发明药液各剂量组能不同程度的提高MPP+干预后MES23.5细胞中Bcl-2蛋白的表达，降低Bax蛋白的表达，不同程度的增高Bcl-2/Bax的比值，差异有统计学意义（P﹤0.05）。与药液浓度100μg/mL组相比较，药液浓度200μg/mL和250μg/mL组中Bcl-2蛋白的表达水平明显增高，Bcl-2/Bax的比值明显增高，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。
综上所述，本发明中药组合物能减轻MPP+诱导帕金森病模型MES23.5多巴胺能神经细胞的凋亡。
实施例6 药物急性毒性试验
药物悬浮液的制备：将肉苁蓉1kg和石菖蒲0.6kg加3.2kg水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50℃时的相对密度为1.20；加乙醇使溶液中含醇量为60％，静置沉淀，取上清液，回收乙醇并浓缩至稠膏状，取稠膏加糊精制成颗粒剂。将所得颗粒剂加水冲泡成混悬液。
动物分组：SPF级昆明种小鼠40只，20-22g，雌雄各半，随机分为空白对照组20只和给药组20只。空白对照组常规饲养；给药组小鼠自由饮水，禁食12小时后灌服药物混悬液l0g/kg，间隔8小时，共2次，日累积量为20g/kg（相当于60kg的人每公斤体重日用量的600倍）。
给药24小时后（第3天）处死10只小鼠，观察以下指标：
（1）对小鼠体重的影响，结果见表3。
表3 对小鼠体重的影响(X±SD，g)
从表3可见，给药组与空白对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。
（2）对血液生化学指标（总蛋白、总胆红素、谷丙转氨酶、碱性磷酸酯酶、总胆固醇、血糖、尿素氮、肌苷）的影响，结果见表4。
表4 对小鼠血液生化指标的影响(X±SD) (第3天 n=10；第10天 n=l0)
从表4可见，给药组与空白对照组比较，各生化指标均无显著性差异(P＞0.05)。
（3）对心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、胸腺及子宫、睾丸的脏器系数的影响，结果见表5。
表5 对小鼠主要脏器系数的影响(X±SD，mg/g)
从表5可见，给药组与空白对照组比较，各脏器指数均无显著性差异(P＞0.05)，表明本发明给药后小鼠各脏器病理组织学检查未见明显的病理性组织改变。
（4）其他反应：给药后产生的主要不良反应为活动减少、聚群，持续时间1-2小时（大约是药物在胃肠道消化时间），余无异常，动物无一例死亡。两组剩余小鼠常规饲养一周后，小鼠活动正常，体重增加，无异常反应。
实施例7 动物的慢性毒性试验
药物悬浮液的制备同实施例6。
动物分组：选用8～9周、体重为20±5g的SPF级SD大鼠80只，雌雄各半，随机分为低剂量组、中剂量组、高剂量组和空白对照组，每组20只大鼠。空白对照组常规饲养；低剂量组、中剂量组、高剂量组分别灌胃给予药液混悬液0.324，3.24，8.1g/kg（分别相当于人常用量的1、10和25倍），每天2次，连续30天(第30天)；停药后再常规饲养15天（第45天），观察如下制备，以确定药物是否有延迟性毒性反应。
（1）对大鼠体重的影响，结果见表6。
表6 对大鼠体重的影响(X±SD，g)
从表6可见，各剂量组与空白对照组比较，体重变化无显著性差异(P>0.05)。
（2）对血糖、总胆固醇、肝肾功能（血糖、总胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌苷）的影响，结果见表7。
表7 对大鼠对血糖、总胆固醇、肝肾功能的影响(X±SD)
从表7可见，给药后各剂量组与空白对照组比较，血糖、总胆固醇、肝功能、肾功能等指标均无显著性差异(P＞0.05)。
（3）对心、肝、脾、肺、肾、脑、子宫、睾丸等脏器系数的影响，结果见表8。
表8 对大鼠主要脏器系数的影响(X±SD，mg/g)
从表8可见，本发明各剂量组与空白对照组比较，各脏器指数均无显著性差异(P＞0.05)，说明各脏器没有明显的病理性组织改变。
（4）其他反应。给药后无明显不良影响；用药及停药期间大鼠生长良好，饮食饮水、排泄及对外界反应等精神行为活动正常，未见毒性。
实施例8 临床应用实例
8.1 病例1
患者魏某，男，60岁，于2012年4月15日首次就诊，门诊号：103567。主诉：双上肢震颤半年余。病史：于2012年11月始发病，症见双上肢震颤，不能控制，以伸手或取物时明显，未予治疗。现患者情绪激动或精神紧张时震颤明显，双手掌僵硬，活动后肌肉酸痛，四肢肌力正常，双上肢肌张力齿轮样增高，行走正常无拖步，小便清长，夜尿频，大便正常，舌淡紫苔薄白，脉沉弱。因患者无法平躺，故未行MRI检查。中医诊断：颤证；中医证型：肾阳不足，瘀血阻络；西医诊断：帕金森病。处方为：肉苁蓉12g，石菖蒲6g。药后一周症状改善明显，双上肢肌强直明显减轻，震颤亦有所改善。继续以上治疗，患者肌张力正常，无肌强直，震颤显著改善，病情稳定。
8.2 病例2
患者许某，男，54岁，于2013年3月14日首次就诊，门诊号：87641。主诉：上肢震颤一年余。病史：于2011年开始发病，症见腰膝酸软、下肢麻痹、上肢震颤，不能控制。2012年11月17日入住某省级三甲医院，确诊为帕金森病。在该医院予“脑复康0.8 一天三次，维生素E50mg一天三次，金刚烷胺0.1一天二次”治疗。药后数日内病情稍有好转，但2周后症状波动，震颤程度恢复到未服药时。改“金刚烷胺0.1一天二次”为“美多巴 125mg一天二次”治疗1个月后症状又有所反复，该医院接诊医师建议美巴胺加量治疗，患者及家属担心加量后副作用大并且影响后续治疗因而要求中药配合治疗。刻下：左上肢震颤，不能自主，尤以有目的的左上肢活动时明显。纳可寐安，二便调。舌暗红，苔厚腻，脉弦重按无力。中医诊断：颤证；中医证型：肾气不足，兼有血瘀；西医诊断：帕金森病。处方为：肉苁蓉10g，石菖蒲6g，药后两周症状改善明显，双上肢肌强直明显减轻，震颤亦有所改善。继续以上治疗，患者肌张力正常，无肌强直，震颤显著改善，现患者坚持服用中药，病情稳定。
8.3 病例3
患者陈某，男，72岁，于2013年07月17日初诊，门诊号：267935。2010年患“脑梗塞”后，出现左踝及左趾关节无法活动，1年前出现四肢震颤，在厦门某医院诊断为“帕金森综合征”， 5天后症状加剧，偶见喝水呛咳，口干，纳可寐安，二便正常。舌暗红，裂纹舌苔剥，言语不利，脉革。西医诊断：脑梗塞后遗症，帕金森综合征。中医诊断：颤证，证属阴阳两虚；治以补肾阳，滋肾阴，活血开窍。处方为：肉苁蓉10g，石菖蒲6g加味，药后两周震颤有所改善。继续以上治疗，震颤显著改善，患者坚持服用中药，病情稳定。随诊半年，症状明显改善。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (7)

1. 一种治疗帕金森病的中药组合物，其特征在于：配方中所含药材为肉苁蓉和石菖蒲。
2. 根据权利要求1所述治疗帕金森病的中药组合物，其特征在于：所述配方中含肉苁蓉6-15g，石菖蒲6-12g。
3. 根据权利要求1所述治疗帕金森病的中药组合物，其特征在于：所述配方中含肉苁蓉8-12g，石菖蒲6-10g。
4. 一种如权利要求1所述治疗帕金森病中药组合物的应用，其特征在于：用于制成治疗帕金森病的散剂、颗粒剂、冲剂或其他中药剂型。
5. 根据权利要求4所述治疗帕金森病中药组合物的应用，其特征在于：所述颗粒剂的制备是将肉苁蓉和石菖蒲加药材重量2-3倍的水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，过滤，滤液浓缩至50℃时相对密度为1.20；加乙醇使溶液中含醇量为60％，静置沉淀，取上清液，回收乙醇并浓缩至稠膏状；取稠膏，加入辅料制成含糖型颗粒或无糖型颗粒。
6. 根据权利要求4所述治疗帕金森病中药组合物的应用，其特征在于：所述含糖型颗粒的辅料为蔗糖、糊精；所述无糖型颗粒的辅料为糊精、甜味剂；辅料的加入量为药材重量的3-4倍。
7. 根据权利要求4所述治疗帕金森病中药组合物的应用，其特征在于：所述颗粒剂的用法是按每次9g，每日2-3次，以100-200mL沸水冲泡15-20分钟后温服，或直接口服，以温开水送下。
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