CN105272919A - 一种从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素的方法，所述方法以肉苁蓉低聚糖浆溶液为原料，经活性炭吸附、水解吸、醇沉和结晶，将结晶后的上清液干燥，得到所述尿囊素。本发明通过用水洗脱活性炭，再将得到的洗脱液进行浓缩、醇沉，并将上清液浓缩、结晶，结晶后的上清液干燥后，即可得到本发明的尿囊素。本发明所提供的方法摒弃了以往采用乙醇洗脱的方式，通过用水解吸，使得工艺更加简单，降低了成本，实现了资源的最大化利用，易于工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于天然产物分离纯化技术领域，尤其涉及一种从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素的方法。
背景技术
尿囊素又名5-尿基乙内酰胺、脲基醋酸内酰胺、脲基海因、脲咪唑二酮，是一种乙内酰脲衍生物。是一种重要的精细化工产品，广泛用于医药、化妆品、农业和工业防腐剂生产。
在医药方面：尿囊素具有促进细胞生长，加快伤口愈合，软化角质蛋白等生理功能，是皮肤创伤的良好愈合剂和抗溃疡药剂。可用作缓解和治疗皮肤干燥症、鳞屑性肤疾患、皮肤溃疡、消化道溃疡及炎症，对骨髓炎、糖尿病、肝硬化、痤疮均有较好疗效。
在化妆品方面：由于尿囊素是一种两性化合物，能结合多种物质形成复盐，具有避光、杀菌防腐、止痛、抗氧化作用，能使皮肤保持水分，滋润和柔软，是美容美发等化妆品的特效添加剂，广泛用于雀斑霜、粉刺液、香波、香皂、牙膏、刮脸洗剂、护发剂、收敛剂、抗汗除臭洗剂等的添加剂。添加尿囊素的化妆品具有保护组织、亲水、吸水和防止水分散发等作用；添加尿囊素的发乳、发膏、洗发露，对头发有保护作用，可使头发不分叉、不断发；添加尿囊素的唇膏、面霜能使皮肤、嘴唇柔软且富有弹性，并有美丽的光泽。
在农业上：尿囊素是优良的植物生长调节剂，可刺激植物生长，对小麦、柑桔、水稻、蔬菜、大豆等均有显著增产效果，并有固果，早熟作用。
目前，尿囊素的合成方法有：(1)尿酸高锰酸钾氧化法：该法应用高锰酸钾作为氧化剂，反应属于强氧化反应，不易控制，不适合大规模生产，而且尿酸成本高并且不易得到。(2)乙醛酸钙盐酸溶解法：该法分两步进行，先制备乙醛酸钙，再用盐酸酸化与尿素缩合生成尿囊素，该法在反应过程中需要强酸强碱，不易操作，而且产率低，不适合大规模生产。(3)尿素二氯乙酸加热法：该法一步生产尿囊素，但是反应需要甲醇作为溶剂，并需加热40-50℃，使反应过程存在爆炸危险，而且该反应需要减压蒸馏，操作复杂，而且产率低，不适合大规模生产。(4)尿素乙醛酸缩合法：该法是当前尿囊素生产厂家普遍采用的方法，该法通过尿素与乙醛酸一步缩合生产尿囊素，应用传统的质子酸如硫酸、磷酸、盐酸等强酸以及不同比例质子酸的混合酸作为催化剂，可以得到相对产率较高的尿囊素，而且具有操作简单，原料易得，产率相对较高的优点，但是这些路线也存在着合成母液酸性高，三废处理困难的问题。
因此，如何研发一种操作简单、原料易得、产率较高的尿囊素的生产方法已成为目前亟待解决的问题。
CN1861581A公开了从肉苁蓉中制备尿囊素和尿囊素提取物的方法，其制备过程包括：以肉从蓉为原料，经水或任何比例的醇-水混合溶剂提取，提取液经浓缩，加乙醇沉淀杂质后或不经乙醇沉淀杂质直接通过大孔吸附树脂分离，收集水洗脱部分，其中含尿囊素的组份再通过颗粒活性炭吸附分离，先以水洗脱，再以10-50％的乙醇洗脱，收集含尿囊素的流份，冷冻干燥，得含尿囊素的提取物，用乙醇或甲醇重结晶得尿囊素。然而该方法中，由于还含有多种其它化合物，导致尿囊素的纯度不高。
目前也有研究将含尿囊素的洗脱液进行细化提取，例如张慧文研究了盐生肉苁蓉的化学成分及指纹图谱，其采用盐生肉苁蓉药材，粉碎后，用甲醇依次用7倍量和5倍量回流提取3次，合并滤液，减压回收甲醇至有白色针尖结晶析出，用甲醇和水反复结晶得甘露醇化合物，再用温水分散均匀，装入大孔吸附树脂柱，依次以水、乙醇洗脱，减压回收乙醇，水洗脱部分，以1:1比例拌入硅胶中硅胶柱层析，以CHCl3-CH3OH为洗脱剂梯度洗脱，将其中部分流份合并后浓缩有白色固体析出，用甲醇结晶，得白色针状结晶，即尿囊素(参见张慧文，“盐生肉苁蓉的化学成分及指纹图谱研究”，内蒙古医学院硕士学位论文，2008年)。尽管其对尿囊素进行了提纯，然而，由于其仍用到有机溶剂，不仅使尿囊素不纯，而且工艺复杂，成本较高。
肉苁蓉低聚糖浆溶液是将肉苁蓉原料粉碎，乙醇溶液提取，大孔吸附树脂吸附苯乙醇苷，经水洗脱树脂而得的以低聚糖为主，同时含有其他小分子化合物(甘露醇、尿囊素)的糖浆。CN104262414A公开了一种从肉苁蓉中同时制备苯乙醇苷、甘露醇、低聚糖浆及多糖的方法，其试剂仅用乙醇，可操作性强，降低了肉苁蓉生产成本，缩短了生产周期，提高了肉苁蓉中主要成分的利用率，也为其后续产物例如尿囊素的分离提供了可能。
发明内容
为了克服现有技术的上述不足，本发明提供了一种工艺简单、生产成本低、可以快速实现尿囊素与肉苁蓉低聚糖、甘露醇的分离、得到高纯度尿囊素、便于工业化应用的一种从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素的方法。
为达此目的，本发明采用了以下技术方案：
本发明提供了一种从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素的方法，所述方法以肉苁蓉低聚糖浆溶液为原料，经活性炭吸附、水解吸、醇沉和结晶，将结晶后的上清液干燥，得到所述尿囊素。
本发明中是以肉苁蓉低聚糖浆溶液为原料进行尿囊素的制备，采用肉苁蓉低聚糖浆溶液作为原料时，相比直接采用粉碎的肉苁蓉药材本身，能够减少肉苁蓉中其他成分(如多糖，苯乙醇糖苷)对分离尿囊素的影响，从而提高尿囊素的纯度，并降低分离纯化的成本核算；同时，提高了肉苁蓉低聚糖的综合利用价值。
本发明所述肉苁蓉低聚糖浆溶液的制备方法在CN104262414A中已公开，制备方法为利用乙醇溶液对肉苁蓉原料进行提取，提取液浓缩，而后将浓缩液加入大孔吸附树脂柱中，以去离子水洗脱，洗脱液浓缩，所得浓缩液即为低聚糖浆溶液。具体包括以下步骤：
a、将肉苁蓉原料粉碎至10～60目，利用含量为20～70％的乙醇溶液在20～80℃提取30～180min，乙醇溶液与肉苁蓉的液固比为8:1～40:1，提取液浓缩，得到浓缩液I和残渣II，其中，浓缩液I中主要含有单糖、低聚糖及苯乙醇苷；
b、将步骤a得到的浓缩液I加入到大孔吸附树脂柱中，大孔吸附树脂柱层析介质的高径比为5:1～8:1，上样体积为1～2倍柱体积，以2～10倍柱体积的去离子水洗脱，流速控制在每小时0.2～1.5倍柱体积，收集水洗脱液，减压浓缩，得到浓缩液III，即为低聚糖浆溶液。
本发明摒弃了以往采用乙醇进行解吸、洗脱的方式，直接采用水进行解吸，利用尿囊素易溶于热水的特性，可以在提取尿囊素的过程中，减少乙醇的用量，从而大大降低分离纯化尿囊素的成本。
本发明中，所述肉苁蓉低聚糖浆来自于肉苁蓉的肉质茎。
本发明所述肉苁蓉优选为荒漠肉苁蓉、盐生肉苁蓉、兰州肉苁蓉或沙苁蓉中的任意一种或至少两种的组合，但不局限于此。
作为优选的技术方案，本发明所述方法包括以下步骤：
(1)采用活性炭对肉苁蓉低聚糖浆溶液进行吸附；
(2)用水洗脱步骤(1)中的活性炭，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)得到的洗脱液浓缩，醇沉，收集上清液；
(4)将步骤(3)的上清液浓缩，结晶，将结晶后的上清液干燥，得到所述尿囊素。
本发明中，步骤(1)所述活性炭为颗粒状活性炭。
优选地，相对于100mL肉苁蓉低聚糖浆溶液，活性炭的用量为5-20g，例如5g、8g、10g、12g、14g、15g、16g、18g或20g。
优选地，所述活性炭吸附的吸附方式为动态吸附和/或静态吸附，例如，静态吸附可以采用浸泡方式，动态吸附可以采用搅拌下或振荡下吸附的方式。
优选地，所述活性炭吸附在10-60℃下进行，例如在10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、36℃、40℃、45℃、50℃、55℃或60℃下进行。
优选地，所述活性炭吸附的时间为1-3h，例如1h、1.2h、1.4h、1.6h、1.8h、2h、2.2h、2.4h、2.6h、2.8h或3h。
在本发明中，利用活性炭对肉苁蓉低聚糖浆溶液进行吸附可以将肉苁蓉低聚糖浆溶液含有的低聚糖和甘露醇以及尿囊素吸附至活性炭上，由于低聚糖的分子量较大(2000以上)，其大多数吸附在活性炭的表面，而甘露醇分子量仅为182，尿囊素分子量为158，其大多数吸附在活性炭的内孔中。
本发明中，所述步骤(2)包括：先用冷水冲洗活性炭，再用热水洗脱活性炭，收集得到的洗脱液。
在本发明中首先用少量冷水洗脱活性炭目的是将活性炭表面吸附的大多数低聚糖除去，而后采用分子筛原理，利用大量的热水冲洗活性炭，将吸附在活性炭内孔中的甘露醇和尿囊素洗脱下来，从而使得目标洗脱液中尿囊素的含量大大提高，最后根据甘露醇和尿囊素结晶性质的不同，将两种成分得以分离开。
优选地，所述冷水的温度为0-25℃，例如可以是0℃、2℃、4℃、5℃、8℃、10℃、12℃、15℃、18℃、20℃、25℃，优选为0-10℃。
优选地，所述热水的温度为50-80℃，例如可以是50℃、52℃、55℃、60℃、62℃、65℃、70℃、75℃、75℃、78℃、80℃，优选为60-80℃。
本发明中，步骤(3)所述醇沉采用乙醇。
本发明中，所述乙醇的终浓度优选为70-95％(V/V)。
本发明中，随着乙醇浓度的逐级提高，会使得低聚糖得以沉淀充分，醇沉后的上清液中低聚糖含量大大降低，从而更有利于尿囊素的提纯。
优选地，所述醇沉的次数为2-5次，例如可以是2次、3次、4次、5次，优选为3-4次。多次醇沉的目的是将低聚糖浆中的不同低聚糖分多次进行醇沉，使得上清液中尿囊素的含量得以提高。
优选地，所述醇沉的时间为3-7.5h，例如可以是3h、3.5h、4h、4.5h、5h、5.5h、6h、6.5h、7h、7.5h，优选为6-7.5h。本发明优选在该醇沉时间内，可以使低聚糖浆中的低聚糖醇沉最充分，从而利于尿囊素的分离纯化，并使工艺时间大大缩短。
本发明中，步骤(4)所述结晶的温度为-20-25℃，例如可以是-20℃、0℃、4℃、8℃、10℃、12℃、15℃、18℃、20℃、22℃、25℃，优选为4-25℃。结晶温度过低，会增加工艺成本；结晶温度过高，则不利于甘露醇结晶的析出。
优选地，所述上清液干燥的方式为自然干燥、鼓风干燥、真空干燥、冷冻干燥、微波干燥、喷雾干燥、沸腾干燥或超声干燥中的任意一种或至少两种的组合。
作为本发明进一步优选的技术方案，所述方法包括以下步骤：
(1)采用颗粒状活性炭对肉苁蓉低聚糖浆溶液进行动态吸附和/或静态吸附；
(2)先用温度为0-25℃的冷水冲洗步骤(1)中的活性炭，去除活性炭表面吸附的低聚糖，再用温度为50-80℃的热水洗脱活性炭上吸附的甘露醇，得到含有甘露醇的洗脱液；
(3)将含有甘露醇的洗脱液浓缩，加入乙醇溶液进行2-5次醇沉，至乙醇的终浓度为70-95％(V/V)，得到含有甘露醇的上清液；
(4)将含有甘露醇的上清液浓缩，静置，在-20-25℃下结晶，将结晶后的上清液鼓风干燥，得到所述尿囊素。
本发明还提供了如上所述的方法制备得到的尿囊素。
与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：
本发明先采用活性炭对肉苁蓉低聚糖浆溶液中的甘露醇和尿囊素进行吸附，解吸之后的活性炭可以再生，重复利用；且洗脱溶液为水，对环境无污染。整个工艺中所用有机溶剂为乙醇，可以回收后进行重复利用，实现了资源的最大化利用。尿囊素的制备过程工艺简单，易于放大，实现工业化生产，并且通过此方法无需进行重结晶，便可得到纯度高达98％的尿囊素晶体。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
在本实施例中，通过以下方法从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素：
(1)将荒漠肉苁蓉原料粉碎，过60目筛，利用含量为70％的乙醇溶液在20℃提取30min，乙醇溶液与肉苁蓉的液固比为8:1，提取液浓缩，得到浓缩液I和残渣II，将浓缩液I加入到大孔吸附树脂柱中，大孔吸附树脂柱层析介质的高径比为5：1，上样体积为1倍柱体积，以10倍柱体积的去离子水洗脱，流速控制在每小时1.5倍柱体积，收集水洗脱液，减压浓缩，得到浓缩液III，即为低聚糖浆溶液提取液浓缩，称取30g不定型颗料活性炭，加入到200mL肉苁蓉低聚糖浆溶液中，25℃浸泡3h；
(2)将含有活性炭的肉苁蓉低聚糖浆溶液进行过滤，得到活性炭，先用60mL蒸馏水(25℃)冲洗活性炭表面，去除低聚糖成分，再用800mL50℃热水冲洗活性炭，得到含有甘露醇和尿囊素的洗脱液；
(3)将含有甘露醇和尿囊素的洗脱液浓缩，加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为95％，醇沉1h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为70％，醇沉2h；
(4)将含有甘露醇和尿囊素的上清液浓缩，-20℃静置结晶，得到甘露醇晶体。
将甘露醇晶体析出后的上清液进行鼓风干燥，得到尿囊素。
采用HPLC法对本实施例得到的尿囊素进行纯度测定，具体测定条件如下：
色谱柱：WatersC18柱(4.6×250mm,5mm)；
柱温：30℃；进样量：10μL；检测波长：225nm
流动相：乙腈：水＝8:92；流速：0.6mL/min；
经测定，尿囊素的纯度为90％。
实施例2
在本实施例中，通过以下方法从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素：
(1)将荒漠肉苁蓉原料粉碎，过20目筛，利用含量为20％的乙醇溶液在50℃提取180min，乙醇溶液与肉苁蓉的液固比为40:1，提取液浓缩，得到浓缩液I和残渣II；浓缩液I加入到大孔吸附树脂柱中，大孔吸附树脂柱层析介质的高径比为8:1，上样体积为2倍柱体积，以5倍柱体积的去离子水洗脱，流速控制在每小时1倍柱体积，收集水洗脱液，减压浓缩，得到浓缩液III，即为低聚糖浆溶液，称取30g圆柱形活性炭，加入到300mL肉苁蓉低聚糖浆溶液中，10℃搅拌2h；
(2)将含有活性炭的肉苁蓉低聚糖浆溶液进行过滤，得到活性炭，先用40mL蒸馏水(20℃)冲洗活性炭表面，去除低聚糖成分，再用1000mL90℃热水冲洗活性炭，得到含有甘露醇和尿囊素的洗脱液；
(3)将含有甘露醇和尿囊素的洗脱液浓缩，加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为70％，醇沉2h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为95％，醇沉3h；
(4)将含有甘露醇和尿囊素的上清液浓缩，0℃静置结晶，得到甘露醇晶体。
将甘露醇晶体析出后的上清液进行真空干燥，得到尿囊素。
采用与实施例1相同的纯度测定方法以及测定条件对本实施例得到的尿囊素进行纯度测定，结果表明，尿囊素的纯度为95％。
实施例3
在本实施例中，通过以下方法从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素：
(1)将盐生肉苁蓉原料粉碎，过40目筛，利用含量为50％的乙醇溶液在80℃提取60min，乙醇溶液与肉苁蓉的液固比为10:1，提取液浓缩，得到浓缩液I和残渣II；浓缩液I加入到大孔吸附树脂柱中，大孔吸附树脂柱层析介质的高径比为6:1，上样体积为2倍柱体积，以2倍柱体积的去离子水洗脱，流速控制在每小时0.2倍柱体积，收集水洗脱液，减压浓缩，得到浓缩液III，即为低聚糖浆溶液，称取50g球形活性炭，加入到750mL肉苁蓉低聚糖浆溶液中，60℃水浴下振荡吸附1.5h；
(2)将含有活性炭的肉苁蓉低聚糖浆溶液进行过滤，得到活性炭，先用60mL蒸馏水(25℃)冲洗活性炭表面，去除低聚糖成分，再用2500mL70℃热水冲洗活性炭，得到含有甘露醇和尿囊素的洗脱液；
(3)将含有甘露醇和尿囊素的洗脱液浓缩，加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为80％，醇沉2h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为80％，醇沉1h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为90％，醇沉3h；
(4)将含有甘露醇和尿囊素的上清液浓缩，4℃静置结晶，得到甘露醇晶体。
将甘露醇晶体析出后的上清液进行冷冻干燥，得到尿囊素。
采用与实施例1相同的纯度测定方法以及测定条件对本实施例得到的尿囊素进行纯度测定，结果表明，尿囊素的纯度为92％。
实施例4
在本实施例中，通过以下方法从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素：
(1)将兰州肉苁蓉原料粉碎，过10目筛，利用含量为40％的乙醇溶液在40℃提取100min，乙醇溶液与肉苁蓉的液固比为20:1，提取液浓缩，得到浓缩液I和残渣II，浓缩液I加入到大孔吸附树脂柱中，大孔吸附树脂柱层析介质的高径比为7:1，上样体积为1倍柱体积，以4倍柱体积的去离子水洗脱，流速控制在每小时0.8倍柱体积，收集水洗脱液，减压浓缩，得到浓缩液III，即为低聚糖浆溶液，称取20g球形活性炭填装至柱中，将100mL肉苁蓉低聚糖浆溶液上样至活性炭柱中，30℃吸附2h；
(2)先用30mL蒸馏水(0℃)蒸馏水洗脱活性炭柱，去除低聚糖成分，再用400mL65℃热水洗脱，得到含有甘露醇和尿囊素的洗脱液；
(3)将含有甘露醇和尿囊素的洗脱液浓缩，加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为80％，醇沉1.5h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为90％，醇沉2h，而后再重复醇沉3次(每次加入乙醇后使得乙醇在体系中的终浓度为90％，醇沉2h)；
(4)将含有甘露醇和尿囊素的上清液浓缩，25℃静置结晶，得到甘露醇晶体。
将甘露醇晶体析出后的上清液进行超声干燥，得到尿囊素。
采用与实施例1相同的纯度测定方法以及测定条件对本实施例得到的尿囊素进行纯度测定，结果表明，尿囊素的纯度为97％。
实施例5
在本实施例中，通过以下方法从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素：
(1)将沙苁蓉原料粉碎，过60目筛，利用含量为30％的乙醇溶液在30℃提取120min，乙醇溶液与肉苁蓉的液固比为30:1，提取液浓缩，得到浓缩液I和残渣II，浓缩液I加入到大孔吸附树脂柱中，大孔吸附树脂柱层析介质的高径比为5:1，上样体积为2倍柱体积，以6倍柱体积的去离子水洗脱，流速控制在每小时1.2倍柱体积，收集水洗脱液，减压浓缩，得到浓缩液III，即为低聚糖浆溶液，称取80g不定型颗料活性炭填装至柱中，将960mL肉苁蓉低聚糖浆溶液上样至活性炭柱中，40℃吸附3h；
(2)先用100mL蒸馏水(10℃)洗脱活性炭柱，去除低聚糖成分，再用5L80℃热水洗脱，得到含有甘露醇和尿囊素的洗脱液；
(3)将含有甘露醇和尿囊素的洗脱液浓缩，加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为75％，醇沉1.5h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为80％，醇沉2h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为90％，醇沉1h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为95％，醇沉3h；
(4)将含有甘露醇和尿囊素的上清液浓缩，20℃静置结晶，得到甘露醇晶体。
将甘露醇晶体析出后的上清液进行微波干燥，得到尿囊素。
采用与实施例1相同的纯度测定方法以及测定条件对本实施例得到的尿囊素进行纯度测定，结果表明，尿囊素的纯度为98％。
实施例6
在本实施例中，通过以下方法从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素：
(1)将荒漠肉苁蓉原料粉碎，过40目筛，利用含量为60％的乙醇溶液在80℃提取90min，乙醇溶液与肉苁蓉的液固比为25:1，提取液浓缩，得到浓缩液I和残渣II；浓缩液I加入到大孔吸附树脂柱中，大孔吸附树脂柱层析介质的高径比为8:1，上样体积为2倍柱体积，以2倍柱体积的去离子水洗脱，流速控制在每小时0.5倍柱体积，收集水洗脱液，减压浓缩，得到浓缩液III，即为低聚糖浆溶液，称取70g圆柱形活性炭填装至柱中，将1400mL肉苁蓉低聚糖浆溶液上样至活性炭柱中，50℃吸附1h；
(2)先用70mL蒸馏水(4℃)洗脱活性炭柱，去除低聚糖成分，再用10.5L60℃热水洗脱，得到含有甘露醇和尿囊素的洗脱液；
(3)将含有甘露醇和尿囊素的洗脱液浓缩，加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为70％，醇沉1h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为85％，醇沉2h；
(4)将含有甘露醇和尿囊素的上清液浓缩，4℃静置结晶，得到甘露醇晶体。
将甘露醇晶体析出后的上清液进行沸腾干燥，得到尿囊素。
采用与实施例1相同的纯度测定方法以及测定条件对本实施例得到的尿囊素进行纯度测定，结果表明，尿囊素的纯度为96％。
对比例1
在本对比例中，通过以下方法从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素：
(1)该步骤与实施例1相同；
(2)将含有活性炭的肉苁蓉低聚糖浆溶液进行过滤，得到活性炭，先用60mL蒸馏水(25℃)冲洗活性炭表面，去除低聚糖成分，再用800mL10％乙醇冲洗活性炭，得到洗脱液；
(3)将洗脱液浓缩，加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为95％，醇沉1h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为70％，醇沉2h；
(4)将上清液浓缩，-20℃静置结晶，得到甘露醇晶体。
将甘露醇晶体析出后的上清液进行鼓风干燥，得到尿囊素。
采用与实施例1相同的纯度测定方法以及测定条件对本对比例得到的尿囊素进行纯度测定，结果表明，尿囊素的纯度为88％。
对比例2
在本对比例中，通过以下方法从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素：
(1)直接采用肉苁蓉为原料，替代实施例1中的肉苁蓉低聚糖浆溶液；
(2)将含有活性炭的肉苁蓉溶液进行过滤，得到活性炭，先用60mL蒸馏水(25℃)冲洗活性炭表面，去除低聚糖成分，再用800mL50℃热水冲洗活性炭，得到洗脱液；
(3)将洗脱液浓缩，加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为95％，醇沉1h，将醇沉后的上清液浓缩，再次加入乙醇溶液，至乙醇溶液的终浓度为70％，醇沉2h；
(4)将上清液浓缩，-20℃静置结晶，得到甘露醇晶体。
将甘露醇晶体析出后的上清液进行鼓风干燥，得到尿囊素。
采用与实施例1相同的纯度测定方法以及测定条件对本对比例得到的尿囊素进行纯度测定，结果表明，尿囊素的纯度为80％。
对比例3
按照CN200510072549.2的方法制备尿囊素，其具体方法为：盐生肉苁蓉Cistanchesalsa(C.A.Mey)G.Beck160g，分别以10倍、8倍量水加热80℃条件下提取2次，合并提取液，减压浓缩至稠膏状(50℃密度约为1.1g/ml)，加乙醇至含醇量60％，静置过夜，醇液浓缩，加水溶解。水液通过大孔吸附树脂SP825柱(体积约500ml)，以3倍柱床体积水洗脱，收集其中含尿囊素的流份，再通过颗粒活性炭(约300g)，先以3倍柱床体积的水洗脱，再用3倍柱床体积30％乙醇洗脱，收集含尿囊素的流份，减压浓缩至稠膏，再经冷冻干燥得尿囊素提取物，用乙醇重结晶可得无色结晶状尿囊素。
采用与实施例1相同的纯度测定方法以及测定条件对本对比例得到的尿囊素进行纯度测定，结果表明，尿囊素的纯度为85％。
通过以上实施例和对比例可以看出，本发明提供的从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素，相比现有技术的制备方法，能够提高尿囊素的纯度至98％，从而实现了高纯度尿囊素的生产。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (9)
1.一种从肉苁蓉低聚糖浆中制备尿囊素的方法，其特征在于，所述方法以肉苁蓉低聚糖浆溶液为原料，经活性炭吸附、水解吸、醇沉和结晶，将结晶后的上清液干燥，得到所述尿囊素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肉苁蓉低聚糖浆来自于肉苁蓉的肉质茎；所述肉苁蓉优选为荒漠肉苁蓉、盐生肉苁蓉、兰州肉苁蓉或沙苁蓉中的任意一种或至少两种的组合。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)采用活性炭对肉苁蓉低聚糖浆溶液进行吸附；
(2)用水洗脱步骤(1)中的活性炭，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)得到的洗脱液浓缩，醇沉，收集上清液；
(4)将步骤(3)的上清液浓缩，结晶，将结晶后的上清液干燥，得到所述尿囊素。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述活性炭为颗粒状活性炭；所述吸附的方式优选为动态吸附和/或静态吸附。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)包括：先用冷水冲洗活性炭，再用热水洗脱活性炭，收集得到的洗脱液；
优选地，所述冷水的温度为0-25℃，优选为0-10℃；
优选地，所述热水的温度为50-80℃，优选为60-80℃。
6.根据权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述醇沉采用乙醇；所述乙醇的终浓度优选为70-95％(V/V)；
优选地，所述醇沉的次数为2-5次，优选为3-4次；
优选地，所述醇沉的时间为3-7.5h，优选为6-7.5h。
7.根据权利要求3-6任一项所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述结晶的温度为-20-25℃，优选为4-25℃；
优选地，所述上清液干燥的方式为自然干燥、鼓风干燥、真空干燥、冷冻干燥、微波干燥、喷雾干燥、沸腾干燥或超声干燥中的任意一种或至少两种的组合。
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)采用颗粒状活性炭对肉苁蓉低聚糖浆溶液进行动态吸附和/或静态吸附；
(2)先用温度为0-25℃的冷水冲洗步骤(1)中的活性炭，去除活性炭表面吸附的低聚糖，再用温度为50-80℃的热水洗脱活性炭上吸附的甘露醇，得到含有甘露醇的洗脱液；
(3)将含有甘露醇的洗脱液浓缩，加入乙醇溶液进行2-5次醇沉，至乙醇的终浓度为70-95％(V/V)，得到含有甘露醇的上清液；
(4)将含有甘露醇的上清液浓缩，静置，在-20-25℃下结晶，将结晶后的上清液鼓风干燥，得到所述尿囊素。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法制备得到的尿囊素。
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