CN101288705B - 一种主要具有调节血脂作用的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种主要具有调节血脂作用的药物组合物及其制备方法，其特征在于通过量效关系实验、药效学筛选和验证实验、毒理学实验确定组合为：丹参丹酚酸A 1-10重量份，山楂总黄酮1-90重量份，优选丹参丹酚酸A 1-10重量份，山楂总黄酮40-90重量份；更进一步优选丹参丹酚酸A1-3重量份，山楂总黄酮40-50重量份；本申请还公开了药物组合物及其制剂的检测分析方法和用途；药理实验表明，本申请药物组合具有很好的药理作用。

Description

一种主要具有调节血脂作用的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种主要具有调节血脂作用的药物组合物及其制备方法，即包括丹参丹酚酸A和山楂总黄酮组合的药物组合物；

本发明山楂总黄酮为标准提取物；本发明山楂总黄酮化合物包括苯基色原酮为母核的化合物，主要包括槲皮素(quercetin)、金丝桃苷、牡荆素(Vitexin)、牡荆素2”—O—鼠李糖苷、芦丁、牡荆素乙酰鼠李糖苷、三萜酸、原花青素等中的一种或几种；本发明山楂总黄酮可以由山楂果或山楂叶提取纯化得到。

背景技术

心脑血管疾病正在吞噬着人类的健康，且发病率与死亡率存在上升趋势，研究报道心脑血管疾病的患者往往是因为血脂异常引起的，因此调节血脂药物的研发具有巨大的市场潜力。国内目前调节血脂的成方中药中，有81％的处方中使用山楂；山楂属于蔷薇科，是常见的中药之一，山楂中山楂总黄酮具有活血化瘀、宣通心肺、理气舒络的功效，临床用于治疗胸闷憋气、心悸健忘、眩晕耳眠及冠心病心绞痛、高血脂症及脑动脉供血不足等症，并具有安全无毒作用的特点，因此将山楂中总黄酮用于临床具有重大意义。但在临床使用山楂总黄酮制剂(益心酮片等)发现其服用时间较长、服用量大等缺点，不利于患者用药依从性，特别是中老年患者除具有高血脂外，还具有心脑血管疾病，常常需要联合用药，因为山楂制剂的用药时间长、服药次数多，常常忘记服药，或者忘记医嘱与其它药物同时服用，造成大量的不良反应产生，因此，将山楂总黄酮与其它药物进行药物组合是很多医药工作者继续解决的难题。

中国专利(CN1239159C)“降血脂药物组合物”公开了丹参总酚酸与山楂总三萜酸进行组合治疗高血脂的技术，但山楂中活性最强的成分是山楂总黄酮，丹参中活性最强的成分是丹酚酸A【salvianolic acid A】，丹参丹酚酸A具有很好的药理作用(杜冠华【基础医学与临床，2000，20(5)：10～14】、胡义扬【中药药理学报，1997，18(5)：478-480】)，可丹参丹酚酸A在丹参中含量很低，只有万分之五左右，即使通过一系列的工艺将其提取出，只能得到微量级的丹酚酸A，因此，无法将丹参丹酚酸A与其它中药组分有效部位或有效成分进行量效关系研究，虽然传统中药将丹参总酚酸与山楂进行配伍，其实质是与丹参其它相对作用较弱的成分(比如丹参酮、丹酚酸B等)的配伍，这种配伍在临床只能达到有效而没有发挥优效的作用，没有将丹参中发挥最大药效的有效成分应用于疾病的治疗中，造成了资源的巨大浪费。因此将丹酚酸A与中药有效成分或组分有效部位进行量效研究，得到优效的药物组合物应用于疾病的治疗是很多医药科研者的希望。

查阅文献和专利，未有丹参丹酚酸A与山楂总黄酮配伍的报道。

发明内容

基于上述原因，我们将得到的批量级的丹参丹酚酸A与山楂组分有效部位山楂总黄酮进行配伍，通过量效关系研究、剂量优选与配伍研究、药效筛选与系统药效、安全性评价等实验确定了丹参丹酚酸A与山楂总黄酮配伍的药物组合物通过系统的研究对配伍的有效成分重量份进行确定，研究中我们意外的发现一定量的丹参丹酚酸A与山楂总黄酮除了具有相加的作用外还具有协同作用，降低了临床联合用药的不良反应，达到了1+1大于2即增加疗效，降低不良反应的效果。

本申请通过下述方案实现的。

主要用于治疗心脑血管疾病的药物组合物，其中包括：丹参丹酚酸A1—10重量份，山楂总黄酮1—90重量份；

主要用于治疗心脑血管疾病的药物组合物，其中优选为：丹参丹酚酸A1—5重量份，山楂总黄酮40—90重量份；

主要用于治疗心脑血管疾病的药物组合物，其中优选为：丹参丹酚酸A1—3重量份，山楂总黄酮40—50重量份；

上述药物组合物还可以加入人参皂苷、黄芪皂苷、川芎嗪、银杏黄酮、银杏

内酯、丹皮酚、红花黄色素中的一种或几种。

其中山楂总黄酮含量以芦丁A计大于等于50％且小于100％；

其中丹参丹酚酸A的含量大于等于50％且小于100％；

主要用于治疗心脑血管疾病的药物组合物制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂、滴丸剂、口服液、水针剂、输液剂、粉针剂；

主要用于治疗心脑血管的药物组合物含有丹参丹酚酸A和山楂总黄酮外，还含有药剂学常规要求的药用辅料；

其中片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂、滴丸剂、口服液单位剂量为50mg—9000mg；其中优选单位剂量为100—6000mg；单位剂量低于50mg在临床使用中没有效果，单位剂量大于9000mg在临床使用会产生一定的毒副反应；

其中水针剂、输液剂、粉针剂单位剂量为10—4000mg，其中优选单位剂量40—2000mg；单位剂量低于10mg在临床使用中没有效果，单位剂量大于4000mg在临床使用会产生一定的毒副反应。

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

一.制备工艺

丹参丹酚酸A提取纯化：

丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至7.5—9.0、30—80℃温度、加热1—6小时或调PH值至3.5—6.0、110—130℃温度、表压0.05MPa—0.17MPa压强，加热1—6小时；溶液进行过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8，先用水、10—30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30—70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A；

或：

丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至7.5—9.0、30—80℃温度、加热1—6小时或调PH值至3.5—6.0、110—130℃温度、表压0.05MPa—0.17MPa压强，加热1—6小时；溶液进行过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8，先用水、10—30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30—70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20或聚酰胺柱层析分离，先用水、20—50％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用50—95％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A；

或：

丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至7.5—9.0、30—80℃温度、加热1—6小时或调PH值至3.5—6.0、110—130℃温度、表压0.05MPa—0.17MPa压强，加热1—6小时；溶液进行过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8，先用水、10—30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30—70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20或聚酰胺柱层析分离，先用水、20—50％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用50—95％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至2—5，经有机溶剂萃取，有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、异丙醇中的一种，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；

山楂总黄酮为现有技术制备，其中山楂总黄酮含量以芦丁计大于等于50％且小于100％(市售或根据文献方法提取纯化得到)；还可以是《中华人民共和国药典》(2005年，一部)576页规定的山楂叶提取物；

制剂制备：

制剂制备：取丹参丹酚酸A、山楂总黄酮，按照药剂学常规要求制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂、滴丸剂、口服液、水针剂、输液剂、粉针剂。

二.检测分析方法

1.丹参丹酚酸A检测分析方法：

色谱柱：C₁₈反相色谱柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS；

色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min；柱温35℃；检测波长286nm；以乙腈-0.2％醋酸水溶液为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱，运行90分钟；

0-15分钟时，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分钟时，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％；55-65分钟时，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分钟时，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分钟时，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分钟时，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分钟时，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10：90的比例进行洗脱；

对照品溶液的配制：精密称取丹酚酸A对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；

样品溶液的配制：精密称取丹酚酸A样品，加入甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；或精密量取或称取制剂，进行预处理，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和样品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，采用外标法以峰面积计算，即得；

2.山楂总黄酮检测分析：

根据《中华人民共和国药典》(2005年，一部)576页【含量测定】总黄酮的检测分析方法，进行含量测定(制剂进行检测时需要进行预处理)。

实验结果见表1、表2：

表1原料药的检测分析

实验结论：通过上述实验表明，本申请药物组合具有实际意义。

三.量效关系研究

丹参丹酚酸A与山楂总黄酮同是治疗心脑血管疾病的有效成分，二者是否存在一定的量效关系，通过下述实验，我们有了进一步的认识：

实验方案一：

方案1：丹参丹酚酸A0.2重量份；

方案2：丹参丹酚酸A0.4重量份；

方案3：丹参丹酚酸A0.8重量份；

方案4：丹参丹酚酸A1重量份；

方案5：丹参丹酚酸A2重量份；；

方案6：丹参丹酚酸A3重量份；

实验方法：雄性SD大鼠，适应性喂养一周以后，按体重随机分为：空白对照组、正常对照组、模型组、实验方案组。除空白对照组每天上午8点-9点灌胃1.0ml/100g的蒸馏水外，其余各组灌胃1.0ml/100g脂肪乳剂，组方为30％猪油、10％胆固醇、2％胆酸盐、0.2％丙基硫氧嘧啶、20％吐温80、20％丙二醇、10％蔗糖，用蒸馏水溶成100ml，连续10天。禁食12小时眶静脉丛取血，检测血清TC、TG、HDL-C及LDL-C含量，并按血清TC水平重新分组。调整分组后，各组大鼠每天上午按上述造模试验方法给予脂肪乳剂，乳剂配方变为：20％猪油、5％胆固醇、2％胆盐、0.2％丙基硫氧嘧啶、10％吐温、10％丙二醇、5％蔗糖用蒸馏水溶成100ml，下午1点-2点按各组给药剂量尾静脉或灌胃给药，连续给药4周，各方案组按照上述重量份尾静脉给药进行给药。给药4周结束后，禁食12小时，股动脉取血，一部分血液用1％肝素抗凝(约4ml)，用于血液流变学检测。另一部分血液分离血清用于生化指标的检测。试验期间每周称一次体重，按体重调整给药量，并测定摄食量。给药4周分别检测血清TC、TG水平，实验结果见表3：

实验方案二：

方案1：山楂总黄酮1重量份；

方案2：山楂总黄酮10重量份；

方案3：山楂总黄酮20重量份；

方案4：山楂总黄酮30重量份；

方案5：山楂总黄酮35重量份；

方案6：山楂总黄酮40重量份；

方案7：山楂总黄酮50重量份；

方案8：山楂总黄酮60重量份；

实验方法：按照实验方案一实验方法进行实验，实验结果见表4：

表3丹参丹酚酸A不同方案实验结果

表4山楂总黄酮不同方案实验结果

注：将上述实验方案进行灌胃给药，实验结果与上述实验结果相近。

实验小结：通过实验方案一可以发现丹参丹酚酸A在0.2—0.8重量份时，有一定的作用，但与模型组比较没有显著性差异，而当丹参丹酚酸A在1重量份时，与模型组比具有极显著差异，说明在这个剂量下丹参丹酚酸A起效，同样，通过实验方案二可以发现山楂总黄酮在1—30重量份时与模型组比较，没有显著性差异，山楂总黄酮起效是在40重量份；通过上述实验我们确定1重量份的丹参丹酚酸A与40重量份以上的山楂总黄酮的药效基本相同，说明等量的丹参丹酚酸A比山楂总黄酮药效更好，提示我们在进行配伍筛选时，当丹参丹酚酸重量份少时，需要更多重量份的山楂总黄酮进行补充，以达到很好的药理作用。

将上述实验方案进行心脑血管实验、器官纤维化、肿瘤等体外实验，同样发现1重量份的丹参丹酚酸A与40重量份以上的山楂总黄酮的药效基本相同。

四.配伍筛选实验

1.调节血脂作用的研究

实验方案：

方案1：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮30重量份；

方案2：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮40重量份；

方案3：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮44重量份；

方案4：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮48重量份；

方案5：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮95重量份；

方案6：丹参丹酚酸A10重量份，山楂总黄酮60重量份；

方案7：丹参丹酚酸A11重量份，山楂总黄酮1重量份；

方案8：丹参丹酚酸A12重量份，山楂总黄酮1重量份；

方案9：丹参丹酚酸A；

方案10：山楂总黄酮；

实验方法：雄性SD大鼠，适应性喂养一周以后，按体重随机分为正常对照组、模型组、实验方案组。除正常对照组每天上午8点-9点灌胃1.0ml/100g的蒸馏水外，其余各组灌胃1.0ml/100g脂肪乳剂，组方为30％猪油、10％胆固醇、2％胆酸盐、0.2％丙基硫氧嘧啶、20％吐温80、20％丙二醇、10％蔗糖，用蒸馏水溶成100ml，连续10天。禁食12小时眶静脉丛取血，检测血清TC、TG、HDL-C及LDL-C含量，并按血清TC水平重新分组。调整分组后，各组大鼠每天上午按上述造模试---验方法给予脂肪乳剂，乳剂配方变为：20％猪油、5％胆固醇、2％胆盐、0.2％丙基硫氧嘧啶、10％吐温、10％丙二醇、5％蔗糖用蒸馏水溶成100ml，下午1点-2点按各组给药剂量尾静脉给药，连续给药4周，给药量为20mg/kg。给药4周结束后，禁食12小时，股动脉取血，一部分血液用1％肝素抗凝(约4ml)，用于血液流变学检测。另一部分血液分离血清用于生化指标的检测。试验期间每周称一次体重，按体重调整给药量，并测定摄食量。给药4周分别检测血清TC、TG、LDL-C和HDL-C水平，实验结果见表4

表4给药4周对大鼠血脂的影响(X±S)

注：与对照组比较^**P<0.01，^*P<0.05；与方案9、10比较#P<0.05。

2.对大鼠静脉血栓形成的影响

实验方案：

方案1：丹参丹酚酸A2重量份，山楂总黄酮35重量份；

方案2：丹参丹酚酸A2重量份，山楂总黄酮40重量份；

方案3：丹参丹酚酸A2重量份，山楂总黄酮43重量份；

方案4：丹参丹酚酸A2重量份，山楂总黄酮45重量份；

方案5：丹参丹酚酸A2重量份，山楂总黄酮50重量份；

方案6：丹参丹酚酸A2重量份，山楂总黄酮95重量份；

方案7：丹参丹酚酸A7重量份，山楂总黄酮65重量份；

方案8：丹参丹酚酸A11重量份，山楂总黄酮1重量份；

方案9：丹参丹酚酸A；

方案10：山楂总黄酮；

实验方法：

取健康SD大鼠，体重240-260g，随机分组：模型对照组、实验方案组，各实验组给药量40mg/kg，灌胃给药。给药7天后，于末次给药1小时，水合氯醛(350mg/kg，ip)麻醉，开腹分离下腔静脉，于左肾静脉下方用粗丝线结扎下腔静脉，缝合腹部。6h后重新开腹，在结扎处下方2cm处夹闭血管，剖开管腔，取出血栓，称重。数据用x±s表示，组间t检验，结果见表5。

表5对大鼠静脉血栓形成的影响

注：与对照组比较^**P<0.01，^*P<0.05；与方案9、10比较#P<0.05。

3.对大鼠脑梗塞的影响

实验方案：

方案1：丹参丹酚酸A3重量份，山楂总黄酮35重量份；

方案2：丹参丹酚酸A3重量份，山楂总黄酮40重量份；

方案3：丹参丹酚酸A3重量份，山楂总黄酮44重量份；

方案4：丹参丹酚酸A3重量份，山楂总黄酮45重量份；

方案5：丹参丹酚酸A3重量份，山楂总黄酮50重量份；

方案6：丹参丹酚酸A3重量份，山楂总黄酮95重量份；

方案7：丹参丹酚酸A10重量份，山楂总黄酮1重量份；

方案8：丹参丹酚酸A11重量份，山楂总黄酮1重量份；

方案9：丹参丹酚酸A；

方案10：山楂总黄酮；

实验方法：取健康SD大鼠，体重240-260g，随机分组：模型对照组、实验方案组，各实验组给药量20mg/kg，尾静脉给药。给药3天后，于末次给药1小时，取大鼠，水合氯醛300mg/kg ip麻醉，颈部切口，分离并结扎右侧颈总动脉，缝合肌肉皮肤后，右侧位固定，在右耳和右眼外眦连线中点切开皮肤，分离颞肌，暴露颧突及颞骨，在颧突的头端1～2mm处开一约3×3mm的骨窗，暴露大脑中动脉(MCA)，将MCA灼断，缝合切口。参考Bederson法，处死动物，取右大脑半球，切成5片，置于2g/LNPT中37℃温育15min染色，仔细挖取并称重未被染成兰色的白色梗塞脑组织，实验结果见表6：

表6对大鼠脑梗塞保护情况

注：与对照组比较^**P<0.01，^*P<0.05；与方案9、10比较#P<0.05。

实验小结：通过上述实验表明，当丹参丹酚酸A与超过90重量份的山楂总黄酮进行配伍时，其与模型对照组没有显著性差异，药理效果与单用山楂总黄酮的药理效果基本相同，提示我们在进行配伍选择时，山楂总黄酮不能超过90重量份；同时通过上述实验表明，当丹参丹酚酸A1—10重量份、山楂总黄酮40—90重量份时，药理效果很好，其中当丹参丹酚酸A1—3重量份、山楂总黄酮40—50重量份，药理效果最好。

4.抗器官纤维化实验

方案1：丹参丹酚酸A10重量份，山楂总黄酮1重量份；

方案2：丹参丹酚酸A9重量份，山楂总黄酮1重量份；

方案3：丹参丹酚酸A9重量份，山楂总黄酮2重量份；

方案4：丹参丹酚酸A8重量份，山楂总黄酮5重量份；

方案5：丹参丹酚酸A7重量份，山楂总黄酮19重量份；

方案6：丹参丹酚酸A6重量份，山楂总黄酮22重量份；

方案7：丹参丹酚酸A5重量份，山楂总黄酮31重量份；

方案8：丹参丹酚酸A；

方案9：山楂总黄酮；

实验方法：用40％四氯化碳复合因素致大鼠肝纤维化模型。同时给与方案组治疗，方案组灌胃给药，给药量为40mg/kg，应用生理盐水作为阴性对照组。试验结束时检测肝功能、III型前胶原(pcIII)、透明质酸(HA)，分离肝组织检测肝羟脯氨酸含量及电镜观察肝组织病理变化。

实验结果：方案1—7组能明显改善肝纤维化大鼠的肝功能，降低血清pCIII、HA含量及使肝组织羟脯氨酸明显下降；明显减轻贮脂细胞增生及胶原的沉积。其它组效果不是太明显，与阴性对照组没有显著性差异。

5.微循环药理实验

实验方案：

方案1：丹参丹酚酸A10重量份，山楂总黄酮2重量份；

方案2：丹参丹酚酸A9重量份，山楂总黄酮2重量份；

方案3：丹参丹酚酸A8重量份，山楂总黄酮13重量份；

方案4：丹参丹酚酸A6重量份，山楂总黄酮27重量份；

方案5：丹参丹酚酸A5重量份，山楂总黄酮34重量份；

方案6：丹参丹酚酸A3重量份，山楂总黄酮40重量份；

方案7：丹参丹酚酸A2重量份，山楂总黄酮85重量份；

方案8：丹参丹酚酸A；

方案9：山楂总黄酮；

实验方法：显微电视放大系统定量观测方案组对正常及去甲肾上腺素(NA)所致耳廓微循环障碍小鼠耳廓微循环的影响；血浆复钙试验测定抗凝作用，方案组尾静脉给药，给药量为20mg/kg。

实验结果：方案1—7组能显著促进或改善正常及NA所致耳廓微循环障碍小鼠耳廓的微循环；亦可延长血浆复钙时间。

6.抗肿瘤实验

实验方案：

方案1：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮1重量份；

方案2：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮9重量份；

方案3：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮23重量份；

方案4：丹参丹酚酸A3重量份，山楂总黄酮58重量份；

方案5：丹参丹酚酸A6重量份，山楂总黄酮19重量份；

方案6：丹参丹酚酸A7重量份，山楂总黄酮11重量份；

方案7：丹参丹酚酸A10重量份，山楂总黄酮3重量份；

方案8：丹参丹酚酸A；

方案9：山楂总黄酮；

实验方法：以小鼠骨髓细胞微核实验和睾丸染色体畸变实验观察方案组的抗突变作用，以S-180和H-22移植性肿瘤观察方案组的抗肿瘤效果，方案组灌胃给药，给药量为40mg/kg。

实验结果：方案1—7组对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞微核发生和丝裂霉素诱发的小鼠睾丸细胞染色体畸变均有明显的抑制效果；对S-180和H-22小鼠移植性肿瘤生长也有明显的抑制作用。表明方案1—7组对体细胞和生殖细胞的DNA损伤均有保护作用，对小鼠移植性肿瘤也有一定的抑瘤作用。

药理实验小结：通过上述药理实验表明，在本申请范围内药物组合与对照组具有很好的药理作用(P<0.01)；与丹参丹酚酸A、山楂总黄酮比较具有显著性差异(P<0.05)，充分说明丹参丹酚酸A与山楂总黄酮组合除具有很好的互补作用外，还具有互相影响提高药理活性的作用。

五.毒理学研究

实验方案：

方案1：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮1重量份；

方案2：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮40重量份；

方案3：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮45重量份；

方案4：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮50重量份；

方案5：丹参丹酚酸A3重量份，山楂总黄酮45重量份；

方案6：丹参丹酚酸A7重量份，山楂总黄酮3重量份；

方案7：丹参丹酚酸A9重量份，山楂总黄酮2重量份；

方案8：丹参丹酚酸A10重量份，山楂总黄酮1重量份；

方案9：丹参丹酚酸A1重量份，山楂总黄酮90重量份；

方案10：丹参丹酚酸A；

方案11：山楂总黄酮；

实验方法：上述不同方案的药物组合物，进行毒理学实验，测定小鼠口服给药急性毒性的LD₅₀，实验结果见表7：

表7不同方案的LD₅₀值

实验结论：通过等效实验研究、时效关系研究、药效学筛选实验、药效学论证实验、毒理学实验，我们确定丹参丹酚酸A1—10重量份，山楂总黄酮1—90重量份；优选丹参丹酚酸A1—10重量份，山楂总黄酮40—90重量份；优选丹参丹酚酸A1—3重量份，山楂总黄酮40—50重量份。

六.制备实施例

实施例1

丹参丹酚酸A的制备：

丹参用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.5、120℃温度、表压0.10MPa压强，加热4小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-450大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用50％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为53.8％。

或

丹参用60％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.0、125℃温度、表压0.14MPa压强，加热2小时；溶液进行过滤，滤液经D101大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用35％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、25乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用55％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为79.7％。

或

丹参用65％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至5.5、130℃温度、表压0.17MPa压强，加热3小时；溶液进行过滤，滤液经1300-I大孔树脂柱层析分离，先用水、25％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、45％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用90％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至4.5，经有机溶剂乙酸丁酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A，含量为91.2％；

山楂总黄酮为现有技术制备，其含量以芦丁计为70.1％；(市售)

制剂制备：

口服制剂原料药为：丹参丹酚酸A10克，山楂总黄酮10克；药用辅料；

片剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照片剂药剂学常规要求制备成片剂1000片；

胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成胶囊剂1000粒；

颗粒剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成颗粒剂1000袋；

软胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成软胶囊剂1000粒；

微丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成微丸剂10000丸；

滴丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成滴丸剂10000丸；

口服液制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照口服液的药剂学常规要求制备成口服液1000瓶；

单位剂量为50mg。

注射剂原料药：丹参丹酚酸A5克，山楂总黄酮5克；药用辅料；

水针剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照水针剂的药剂学常规要求制备成水针剂1000瓶；

输液剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照输液剂的药剂学常规要求制备成输液剂1000瓶；

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照粉针剂的药剂学常规要求制备成粉针剂1000瓶；

单位剂量10mg；

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

实施例2

丹参丹酚酸A的制备：

丹参用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.5、120℃温度、表压0.10MPa压强，加热4小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-450大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用50％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为55.1％。

或

丹参用60％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.0、125℃温度、表压0.14MPa压强，加热2小时；溶液进行过滤，滤液经D101大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用35％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、25乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用55％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为80.1％。

或

丹参用65％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至5.5、130℃温度、表压0.17MPa压强，加热3小时；溶液进行过滤，滤液经1300-I大孔树脂柱层析分离，先用水、25％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、45％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用90％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至4.5，经有机溶剂乙酸丁酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A，含量为90.3％；

山楂总黄酮为现有技术制备，其含量以芦丁计为68.9％；(市售)

制剂制备：

口服制剂原料药为：丹参丹酚酸A100克，山楂总黄酮900克；

片剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照片剂药剂学常规要求制备成片剂1000片；

胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成胶囊剂1000粒；

颗粒剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成颗粒剂1000袋；

软胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成软胶囊剂1000粒；

微丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成微丸剂10000丸；

滴丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成滴丸剂10000丸；

口服液制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照口服液的药剂学常规要求制备成口服液1000瓶；

单位剂量为9000mg。

注射剂原料药：丹参丹酚酸A50克，山楂总黄酮450克；药用辅料；

水针剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照水针剂的药剂学常规要求制备成水针剂1000瓶；

输液剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照输液剂的药剂学常规要求制备成输液剂1000瓶；

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照粉针剂的药剂学常规要求制备成粉针剂1000瓶；

单位剂量4000mg；

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

实施例3

丹参丹酚酸A的制备：

丹参用85％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至9.0、80℃温度、加热6小时，溶液进行过滤，滤液经HPD-400大孔树脂柱层析分离，先用水、30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，丹参丹酚酸A含量59.3％。

或

丹参用水提取得到水提取液，调PH值至3.5、110℃温度、表压0.05MPa压强，加热6小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-400A大孔树脂柱层析分离，先用水、30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、50％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用95％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，丹参丹酚酸A含量89.7％

或

丹参用80％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至6.0、130℃温度、表压0.17MPa压强，加热6小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-450大孔树脂柱层析分离，先用水、30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、50％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用95％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至5，经有机溶剂乙酸丙酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A，丹参丹酚酸A含量99.4％。

山楂总黄酮为现有技术制备，其含量以芦丁计为99.1％；

制剂制备：

口服制剂原料药为：丹参丹酚酸A30克，山楂总黄酮400克；

片剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照片剂药剂学常规要求制备成片剂1000片；

胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成胶囊剂1000粒；

颗粒剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成颗粒剂1000袋；

软胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成软胶囊剂1000粒；

微丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成微丸剂10000丸；

滴丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成滴丸剂10000丸；

口服液制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照口服液的药剂学常规要求制备成口服液1000瓶；

单位剂量为8600mg。

注射剂原料药：丹参丹酚酸A15克，山楂总黄酮200克；药用辅料；

水针剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照水针剂的药剂学常规要求制备成水针剂1000瓶；

输液剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照输液剂的药剂学常规要求制备成输液剂1000瓶；

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照粉针剂的药剂学常规要求制备成粉针剂1000瓶；

单位剂量2150mg；

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

实施例4

丹参丹酚酸A的制备：

丹参35％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.0、115℃温度、表压0.07MPa压强，加热5小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-100大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用40％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为58.1％。

或

丹参用水提取得到水提取液，调PH值至4.5、120℃温度、表压0.10MPa压强，加热3.5小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-100A大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用45％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、30％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用70％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为69.7％。

或

丹参50％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.5、125℃温度、表压0.14MPa压强，加热6小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-300大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、35％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用60％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至2.5，经有机溶剂异丙醇萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A，含量91.2％；

山楂总黄酮为现有技术制备，其含量以芦丁计为55.2％；

制剂制备：

口服制剂原料药为：丹参丹酚酸A30克，山楂总黄酮500克；

片剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照片剂药剂学常规要求制备成片剂1000片；

胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成胶囊剂1000粒；

颗粒剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成颗粒剂1000袋；

软胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成软胶囊剂1000粒；

微丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成微丸剂10000丸；

滴丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成滴丸剂10000丸；

口服液制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照口服液的药剂学常规要求制备成口服液1000瓶；

单位剂量为5300mg。

注射剂原料药：丹参丹酚酸A15克，山楂总黄酮250克；药用辅料；

水针剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照水针剂的药剂学常规要求制备成水针剂1000瓶；

输液剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照输液剂的药剂学常规要求制备成输液剂1000瓶；

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照粉针剂的药剂学常规要求制备成粉针剂1000瓶；

单位剂量：2650mg

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

实施例5

丹参丹酚酸A的制备：

丹参用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.5、120℃温度、表压0.10MPa压强，加热4小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-450大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用50％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为55.1％。

或

丹参用60％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.0、130℃温度、表压0.17MPa压强，加热2小时；溶液进行过滤，滤液经D101大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用35％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、25乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用55％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为80.1％。

或

丹参用65％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至5.5、115℃温度、表压0.08MPa压强，加热3小时；溶液进行过滤，滤液经1300-I大孔树脂柱层析分离，先用水、25％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、45％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用90％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至4.5，经有机溶剂乙酸丁酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A，含量为90.3％；

山楂总黄酮为现有技术制备，其含量以芦丁计为64.3％；

制剂制备：

口服制剂原料药为：丹参丹酚酸A10克，山楂总黄酮400克；

片剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照片剂药剂学常规要求制备成片剂1000片；

胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成胶囊剂1000粒；

颗粒剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成颗粒剂1000袋；

软胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成软胶囊剂1000粒；

微丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成微丸剂10000丸；

滴丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成滴丸剂10000丸；

口服液制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照口服液的药剂学常规要求制备成口服液1000瓶；

单位剂量为410mg。

注射剂原料药：丹参丹酚酸A5克，山楂总黄酮200克；药用辅料；

水针剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照水针剂的药剂学常规要求制备成水针剂1000瓶；

输液剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照输液剂的药剂学常规要求制备成输液剂1000瓶；

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照粉针剂的药剂学常规要求制备成粉针剂1000瓶；

单位剂量2000mg；

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

实施例6

丹参丹酚酸A的制备：

丹参用水提取得到水提取液，调PH值至7.5、30℃温度、加热1小时，溶液进行过滤，滤液经HPD-100大孔树脂柱层析分离，先用水、10％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A。丹参丹酚酸A含量50.1％。

或

丹参用20％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至9.0、80℃温度、加热6小时，溶液进行过滤，滤液经HPD-100A大孔树脂柱层析分离，先用水、30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、20％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用50％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A。丹参丹酚酸A含量61.3％；

或

丹参用50％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至8.0、50℃温度、加热4小时，溶液进行过滤，滤液经HPD-300大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用50％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、35％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用75％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至2，经有机溶剂乙酸乙酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；丹参丹酚酸A含量90.03％；

山楂总黄酮为现有技术制备，其含量以芦丁计为50.01％；

制剂制备：

口服原料药为：丹参丹酚酸A50克，山楂总黄酮550克；

片剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照片剂药剂学常规要求制备成片剂1000片；

胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成胶囊剂1000粒；

颗粒剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成颗粒剂1000袋；

软胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成软胶囊剂1000粒；

微丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成微丸剂10000丸；

滴丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成滴丸剂10000丸；

口服液制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照口服液的药剂学常规要求制备成口服液1000瓶；

单位剂量为6000mg。

注射剂原料药：丹参丹酚酸A35克，山楂总黄酮265克；药用辅料；

水针剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照水针剂的药剂学常规要求制备成水针剂1000瓶；

输液剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照输液剂的药剂学常规要求制备成输液剂1000瓶；

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照粉针剂的药剂学常规要求制备成粉针剂1000瓶；

单位剂量30mg；

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

实施例7

丹参丹酚酸A的制备：

丹参用水提取得到水提取液，调PH值至8.5、50℃温度、加热4小时，加热3小时；溶液进行过滤，滤液经1300-I大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用55％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为52.9％。

或

丹参用50％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至8.0、75℃温度、加热2小时；溶液进行过滤，滤液经1400大孔树脂柱层析分离，先用水、25％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、25％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用60％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为84.1％。

或

丹参用水提取得到水提取液，调PH值至4.0、110℃温度、表压0.05MPa压强，加热5.5小时；溶液进行过滤，滤液经AB-8大孔树脂柱层析分离，先用水、25％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、30％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用80％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至3.5，经有机溶剂正丁醇萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A，含量为94.7％；

山楂总黄酮为现有技术制备，其含量以芦丁计为72.9％；

制剂制备：

口服原料药为：丹参丹酚酸A100克，山楂总黄酮400克；

片剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照片剂药剂学常规要求制备成片剂1000片；

胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成胶囊剂1000粒；

颗粒剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成颗粒剂1000袋；

软胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成软胶囊剂1000粒；

微丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成微丸剂10000丸；

滴丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成

丸剂10000丸；

口服液制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照口服液的药剂学常规要求制备成口服液1000瓶；

单位剂量为1000mg。

注射剂原料药：丹参丹酚酸A50克，山楂总黄酮200克；药用辅料；

水针剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照水针剂的药剂学常规要求制备成水针剂1000瓶；

输液剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照输液剂的药剂学常规要求制备成输液剂1000瓶；

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照粉针剂的药剂学常规要求制备成粉针剂1000瓶；

单位剂量1000mg；

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

实施例8

丹参丹酚酸A的制备：

丹参35％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.0、120℃温度、表压0.10MPa压强，加热5小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-100大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用40％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为58.1％。

或

丹参用水提取得到水提取液，调PH值至4.5、125℃温度、表压0.14MPa压强加热3.5小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-100A大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用45％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、30％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用70％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为69.7％。

或

丹参50％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.5、110℃温度、表压0.05MPa压强，加热6小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-300大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、35％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用60％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至2.5，经有机溶剂异丙醇萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A，含量91.2％；

山楂总黄酮为现有技术制备，其含量以芦丁计为87.3％；

制剂制备：

口服原料药为：丹参丹酚酸A30克，山楂总黄酮500克；

片剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照片剂药剂学常规要求制备成片剂1000片；

胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成胶囊剂1000粒；

颗粒剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成颗粒剂1000袋；

软胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成软胶囊剂1000粒；

微丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成微丸剂10000丸；

滴丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成滴丸剂10000丸；

口服液制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照口服液的药剂学常规要求制备成口服液1000瓶；

单位剂量为530mg。

注射剂原料药：丹参丹酚酸A15克，山楂总黄酮250克；药用辅料；

水针剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照水针剂的药剂学常规要求制备成水针剂1000瓶；

输液剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照输液剂的药剂学常规要求制备成输液剂1000瓶；

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照粉针剂的药剂学常规要求制备成粉针剂1000瓶；

单位剂量265mg；

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

实施例9

丹参丹酚酸A的制备：

丹参用水提取得到水提取液，调PH值至8.5、50℃温度、加热4小时，加热3小时；溶液进行过滤，滤液经1300-I大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用55％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为52.9％。

或

丹参用50％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至8.0、75℃温度、加热2小时；溶液进行过滤，滤液经1400大孔树脂柱层析分离，先用水、25％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、25％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用60％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为84.1％。

或

丹参用水提取得到水提取液，调PH值至4.0、125℃温度、表压0.14MPa压强，加热5.5小时；溶液进行过滤，滤液经AB-8大孔树脂柱层析分离，先用水、25％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、30％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用80％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至3.5，经有机溶剂正丁醇萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A，含量为94.7％；

山楂总黄酮为现有技术制备，其含量以芦丁计为93.8％；(文献方法)

制剂制备：

口服原料药为：丹参丹酚酸A20克，山楂总黄酮480克；

片剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照片剂药剂学常规要求制备成片剂1000片；

胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成胶囊剂1000粒；

颗粒剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成颗粒剂1000袋；

软胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成软胶囊剂1000粒；

微丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成微丸剂10000丸；

滴丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成滴丸剂10000丸；

口服液制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照口服液的药剂学常规要求制备成口服液1000瓶；

单位剂量为100mg。

注射剂原料药：丹参丹酚酸A10克，山楂总黄酮240克；药用辅料；

水针剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照水针剂的药剂学常规要求制备成水针剂1000瓶；

输液剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照输液剂的药剂学常规要求制备成输液剂1000瓶；

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照粉针剂的药剂学常规要求制备成粉针剂1000瓶；

单位剂量40mg；

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

实施例10

丹参丹酚酸A的制备：

丹参用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.5、120℃温度、表压0.10MPa压强，加热4小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-450大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用50％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为57.2％。

或

丹参用60％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至4.0、125℃温度、表压0.14MPa压强，加热2小时；溶液进行过滤，滤液经D101大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用35％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、25乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用55％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A，含量为82.3％。

或

丹参用65％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至5.5、130℃温度、表压0.17MPa压强，加热3小时；溶液进行过滤，滤液经1300-I大孔树脂柱层析分离，先用水、25％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、45％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用90％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调PH值至4.5，经有机溶剂乙酸丁酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A，含量为91.0％；

山楂总黄酮为现有技术制备，其含量以芦丁计为69.2％；(市售)

制剂制备：

口服原料药为：丹参丹酚酸A80克，山楂总黄酮15克；

片剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照片剂药剂学常规要求制备成片剂1000片；

胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成胶囊剂1000粒；

颗粒剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成颗粒剂1000袋；

软胶囊剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成软胶囊剂1000粒；

微丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成微丸剂10000丸；

滴丸剂制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成滴丸剂10000丸；

口服液制备：

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照口服液的药剂学常规要求制备成口服液1000瓶；

单位剂量为95mg。

注射剂原料药：丹参丹酚酸A45克，山楂总黄酮10克；药用辅料；

水针剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照水针剂的药剂学常规要求制备成水针剂1000瓶；

输液剂的制备：取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照输液剂的药剂学常规要求制备成输液剂1000瓶；

取丹参丹酚酸A和山楂总黄酮，按照粉针剂的药剂学常规要求制备成粉针剂1000瓶；

单位剂量55mg；

主要具有调节血脂作用的药物组合物在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤中的应用。

注：本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。

Claims (10)

1.一种具有调节血脂作用的药物组合物，其特征在于药物组合物包括：丹参丹酚酸A1-10重量份，山楂总黄酮1-90重量份；其中山楂总黄酮含量以芦丁计大于等于50％且小于100％，其中丹参丹酚酸A的含量大于等于50％且小于100％。

2.根据权利要求1所述的一种具有调节血脂作用的药物组合物，其中丹参丹酚酸A1-10重量份，山楂总黄酮40-90重量份。

3.根据权利要求1所述的一种具有调节血脂作用的药物组合物，其中丹参丹酚酸A1-3重量份，山楂总黄酮40-50重量份。

4.根据权利要求1、2或3所述的一种具有调节血脂作用的药物组合物，其中药物组合物制备成单位剂量的片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、滴丸剂、口服液、水针剂、输液剂、粉针剂。

5.根据权利要求4所述的一种具有调节血脂作用的药物组合物，其中片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、滴丸剂、口服液单位剂量为50mg-9000mg。

6.根据权利要求4所述的一种具有调节血脂作用的药物组合物，其中片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、滴丸剂、口服液单位剂量为100mg-6000mg。

7.根据权利要求4所述的一种具有调节血脂作用的药物组合物，其中水针剂、输液剂、粉针剂的单位剂量为10mg-4000mg。

8.根据权利要求4所述的一种具有调节血脂作用的药物组合物，其中水针剂、输液剂、粉针剂的单位剂量为40mg-2000mg。

9.根据权利要求4所述的一种具有调节血脂作用的药物组合物，其中片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、滴丸剂、口服液、水针剂、输液剂、粉针剂的原料药包括山楂总黄酮，其中丹参丹酚酸A的制备方法为：

丹参丹酚酸A提取纯化：

丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调pH值至7.5-9.0、30-80℃温度、加热1-6小时或调pH值至3.5-6.0、110-130℃温度、表压0.05MPa-0.17MPa压强，加热1-6小时；溶液进行过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8，先用水、10-30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30-70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A；

或：

丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调pH值至7.5-9.0、30-80℃温度、加热1-6小时或调pH值至3.5-6.0、110-130℃温度、表压0.05MPa-0.17MPa压强，加热1-6小时；溶液进行过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8，先用水、10-30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30-70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20或聚酰胺柱层析分离，先用水、20-50％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用50-95％乙醇溶液洗脱，浓缩，干燥，得到丹参丹酚酸A；

或：

丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调pH值至7.5-9.0、30-80℃温度、加热1-6小时或调pH值至3.5-6.0、110-130℃温度、表压0.05MPa-0.17MPa压强，加热1-6小时；溶液进行过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8，先用水、10-30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30-70％浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20或聚酰胺柱层析分离，先用水、20-50％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用50-95％乙醇溶液洗脱，回收乙醇至尽；浓缩液调pH值至2-5，经有机溶剂萃取，有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、异丙醇中的一种，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥，得丹参丹酚酸A。

10.根据权利要求1、2、3、9任一项所述的一种具有调节血脂作用的药物组合物，包括山楂总黄酮的检测分析方法，其特征在于丹参丹酚酸A的检测分析方法：

丹参丹酚酸A检测分析方法：

色谱柱：C₁₈反相色谱柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS；

色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min；柱温35℃；检测波长286nm；理论板数按丹酚酸A计应不低于60000；以乙腈-0.2％醋酸水溶液为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱，运行90分钟；

0-15分钟时，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分钟时，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％；55-65分钟时，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分钟时，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分钟时，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分钟时，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分钟时，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10∶90的比例进行洗脱；

对照品溶液的配制：精密称取丹酚酸A对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；

样品溶液的配制：精密称取丹酚酸A样品，加入甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；或精密量取或称取制剂，进行预处理，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和样品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，采用外标法以峰面积计算，即得。