CN101265503A - 检测间充质干细胞的标记和采用该标记识别间充质干细胞的方法 - Google Patents

检测间充质干细胞的标记和采用该标记识别间充质干细胞的方法 Download PDF

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加藤幸夫
辻纮一郎
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Abstract

本发明提供一种用于检测、分离识别间充质干细胞的标记以及采用该标记检测、分离识别间充质干细胞的方法。序列表所示基因在间充质干细胞中特异表达。该基因构成作为检测间充质干细胞的标记。尤其是，本发明含有用于检测该间充质干细胞标记基因的探针，以及在检测该间充质干细胞基因标记时扩增被检细胞所述基因的PCR所使用的引物，还含有本发明的间充质干细胞标记基因表达的多肽构成的用于检测间充质干细胞的多肽标记、用于检测该多肽标记的与该多肽标记特异结合的抗体，尤其是含有一种采用用于检测间充质干细胞标记基因的探针、与多肽标记特异结合的抗体对间充质干细胞进行识别、分离的方法。

Description

检测间充质干细胞的标记和采用该标记识别间充质干细胞的方法
本申请是以下申请的分案申请：
原案申请号：200480007550.0(国际申请号：PCT/JP2004/002457)；
原案申请日：2004年02月27日；
原案发明创造名称：检测间充质干细胞的标记和采用该标记识别间充质干细胞的方法
技术领域
本发明涉及检测、分离识别间充质干细胞、尤其是涉及在检测、分离识别间充质干细胞中使用的用于检测间充质干细胞的基因标记和多肽标记，以及用所述标记检测、识别间充质干细胞的方法。
背景技术
众所周知，间充质干细胞是存在于哺乳类的骨髓等处，分化为脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞的多能性干细胞。由于其分化的多能性，间充质干细胞作为以再生医疗为的目的多种组织的移植材料正受到人们关注(《基因医学》第4卷第2期(2000)p58-61)。最近，发表了关于间充质干细胞研究现状与展望的综述，作出了关于间充质干细胞的收集与培养的报告(实验医学、第19卷第3期(2月号)2001、p350-356)。此外，已有报道间充质干细胞也存在于脂肪组织中(Tissue Engineering，P.A.Zuk et al.，Multilineage cells from human adipose tissue：implications for cell-based therapies.7：211-228，2001)。
近年，一些专利申请公开了关于间充质干细胞的培养、分化等内容。例如，特表平11-506610号公报中公开了关于在无血清环境下维持人间充质前体细胞生存的组和物及其方法，在特表平10-512756号公报中公开了关于为了诱导间充质干细胞的分化将其与由前列腺素、抗坏血酸、胶原细胞外基质等组成的骨诱导因子、分化付随因子、软骨诱导因子等生物活性因子相接触的方法，在特开2000-217576号公报中公开了关于在催乳激素或其等效物共存下培养多能性间充质细胞，使间充质细胞分化成脂肪细胞的方法。
首先，本发明人公开了一种通过在基底膜细胞外基质存在条件下或是在含有成纤维细胞增殖因子(FGF)等物质的培养基中培养间充质干细胞，使得间充质干细胞得以显著的增殖，并且发现能够维持其分化能力，与以前的培养方法相比获得了效果显著的间充质干细胞的培养方法(特开2003-52360号公报)。并且，公开了一种为了在采集间充质干细胞时在采集母体以安全并且容易方式进行采集，从口腔组织中分离采集间充质干细胞的方法(特开2003-52365号公报)。
近年，随着再生医疗的进展，由于其分化多能性，人们正关注于将间充质干细胞作为骨、软骨、肌肉、脂肪、齿周组织等多种组织的再生医疗性的移植材料。为了在组织的再生医疗中利用间充质细胞，首先，从活体组织中采集所述干细胞，使其增殖，尤其是必需使其分化增殖，从而进行组织的制备。间充质干细胞存在于骨髓或骨膜中，为了能在组织再生医疗中实现实用化，首先，必须要开发出能够安全地从所述组织中采集间充质干细胞的方法。而且，为了间充质干细胞在组织再生医疗中实现实用化，必须要开发出足以确保干细胞数量的技术。为了实现上述目的，重要的是开发出仍能维持所采集的间充质干细胞的分化能力的培养增殖技术。
通过上述内容，本发明人开发出一种实现在采集间充质干细胞时从采集母体中以安全且容易的方式采集的分离采集的方法。尤其是，本发明人开发了一种通过在基底膜细胞外基质存在条件下或是在含有成纤维细胞增殖因子(FGF)等物质的培养基中培养间充质干细胞，以维持其的分化能力的形式大量增殖间充质干细胞的方法(特开2003-52360号公報)。但是，为了使增殖培养的间充质干细胞在再生医疗中实用化，必须确认所培养的细胞是间充质干细胞，必须开发出检测、识别该间充质干细胞的方法。以前，在间充质干细胞中，无法对该细胞的特征标记基因进行鉴定。因此、为了使间充质干细胞在再生医疗中实现实用化解决的重要课题是必须要开发出鉴定间充质干细胞的标记基因，从而检测分离识别间充质干细胞的方法。
本发明提供了用于检测识别间充质干细胞的间充质干细胞检测用基因标记和间充质干细胞检测用多肽标记，用于检测该基因标记的PCR扩增用引物，以及采用该标记和该引物检测、识别间充质干细胞的方法。本发明人为了发现检测间充质干细胞用的标记基因，对间充质干细胞中的各种基因的表达进行了比较，对构成标记的基因进行研究，结果发现，与序列表所示的13个基因相关的间充质干细胞与成纤维细胞之间的表达量存在差异，间充质干细胞中
特异表达，发现这些基因是间充质干细胞检测用的标记，从而完成本发明。本发明含有用于检测该间充质干细胞标记基因的探针，和在检测该间充质干细胞标记基因时用于扩增被检细胞的该基因子的PCR所用引物。此外，本发明还含有本发明的间充质干细胞标记基因表达的多肽构成的用于检测间充质干细胞的多肽标记、用于检测该多肽标记的与该多肽标记特异结合的抗体。更优选本发明含有一种采用用于检测间充质干细胞标记基因的探针、与多肽标记特异结合的抗体的间充质干细胞识别方法和分离方法。
下面对完成本发明的过程进行说明，在各种干细胞中，间充质干细胞在骨、软骨、肌肉、脂肪、骨骼肌、心肌、血管、神经等许多组织中保持了分化能力，因此间充质干细胞作为再生用细胞有很大前景。但是，迄今为止未有过对间充质干细胞特征标记基因鉴定的描述。因此，本发明人为了确定间充质干细胞的特征标记基因，进行了积极地研究。也就是，本发明人首次开发，通过在FGF等存在下培养间充质干细胞，采用仍维持其分化能力的快速增殖方法，增殖间充质干细胞，在FGF等存在下培养由该方法获得的间充质干细胞与人成纤维细胞，从培养细胞中抽提mRNA，以该mRNA为模板，以DNA芯片(インサイト社insit公司)作为探针，通过DNA微阵列法对人源间充质干细胞与成纤维细胞中表达的基因进行比较。
9400个基因中有63个基因在间充质干细胞中显著高表达，141个基因显著低表达。其中87个基因表达差别达3倍以上(29个基因在间充质干细胞中高表达、58个基因低表达)。从来源于三个个体的间充质干细胞以及来源于三个个体的成纤维细胞中抽提全RNA，以它们为模板，通过半定量的RT-PCR法对上述87个基因的表达量进行调查。其结果是大多数基因的表达量未发现差异。此外，由于不同个体的间充质干细胞，或成纤维细胞之间也存在表达量的差异，认为由个体差异引起表达差异的情形也是很多的。
根据RT-PCR，经确认间充质干细胞中高表达的是3个基因(组织因子途径抑制剂2(tissue factor pathway inhibitor 2)，2类主要组织相容性复合体DR β3(majorhistocompatibility complex class2 DR beta 3)，丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制剂)、经确认低表达的基因有10种(基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease)1，XV-α型胶原酶(collagenase type XV alpha)，CUG三联体重叠RNA结合蛋白(CUG triplet repeat RNAbinding protein)，皮肤桥蛋白，蛋白质酪氨酸激酶7(蛋白tyrosine激酶7)，异柠檬酸脱氢酶2，Sam68样磷酸酪氨酸蛋白(Sam68样phosphotyrosine protein)，C-型凝集素超家族成员2，肾上腺髓质素，载脂蛋白D)。通过测定这13个基因的表达量，使得在短时间内便宜地对难以识别的间充质干细胞进行鉴定成为可能。尤其是，本发明中，进行基因检索的结果是，确认了在间充质干细胞或成纤维细胞中表达量存在差异的许多基因。由于这些基因构成了用于检测间充质干细胞的基因表记物，其通过构建成检测基因用探针，以微阵列或DNA芯片等形式能够用于检测间充质干细胞。
发明内容
本发明具体的是由下列物质构成的：用于检测间充质干细胞的基因标记，特征在于其具有序列表1、2、4、6、7、9、10、11、12、14、15、17、19或46所示的碱基序列的基因、和用于检测间充质干细胞的基因标记，其特征在于其为整联蛋白，ALPHA6(ITGA6)基因，MRNA(NM_000210)；溶质载体家族20(PHOSPHATE TRANSPORTER)、成员1(NM_005415)基因；核糖核苷酸还原酶M2多肽(RRM2)，MRNA(NM_001034)基因；滤泡素抑制素(FOLLISTATIN)(FST)，转录变异体FST317，MRNA基因(NM_006350)；SPROUTY(DROSOPHILA)HOMOLOG2(SPRY2)，MRNA(NM_005842)；RAB3B，成员RAS ONCOGENE FAMILY(RAB3B)，MRNA(NM_002867)基因；溶质载体家族2(FACILITATED GLUCOSE TRANSPORTER)(NM_006516)基因；白介素13受体，ALPHA2(IL13RA2)，MRNA(NM_000640)基因；丝氨酸/苏氨酸激酶12(STK12)，MRNA(NM_004217)基因；MINICHROMOSOME MAINTENANCE DEFICIENT(S.CEREVISIAE)5(CE)(NM_006739)基因；甲状腺激素受体中间子INTERACTOR 13(TRIP13)，MRNA(NM_004237)基因；类驱动蛋白6(有丝分裂着丝粒相关驱动蛋白)(K)(NM_006845)基因；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(CDK2-ASSOCIATEDDUAL(NM_005192)基因；染色体凝缩蛋白G(HCAP-G)，MRNA(NM_022346)基因；CDC28蛋白激酶1(CKS1)，MRNA(NM_001826)基因；胞质分裂蛋白质调节子1(PRC1)，MRNA(NM_003981)基因；细胞增殖周期2，G1→S→G2→M(CDC2)，MRNA(NM_001786)基因；CDC20(细胞增殖周期20，酿酒酵母，同源基因)(CD)(NM_001255)基因；LIKELY ORTHOLOG OF MATERNAL EMBRYONICLEUCINE ZIPPER KINAS(NM_014791)基因；微染色体维持缺陷蛋白(酿酒酵母)7(M)(NM_005916)基因；细胞周期蛋白A2(CCNA2)，MRNA(NM_001237)基因；胸苷激酶1，SOLUBLE(TK1)，MRNA(NM_003258)基因；和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A(黑色素瘤，p16，抑制CDK4)(CDKN2A)，mRNA基因(NM_000077)(权利要求2)、和用于检测间充质干细胞的基因标记，其特征在于其为EGF-containing fibulin-like细胞外基质蛋白1(NM_018894)基因；人胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)mRNA(AU132011)基因；人克隆24775 mRNA序列(AA402981)基因；蛋白聚糖1，分泌颗粒(AV734015)基因；人胰岛素样生长因子结合蛋白5(AA374325)基因；溶质载体家族21(有机阴离子转运蛋白)，成员3(AF085224)基因；谷氨酰胺转移酶2(C多肽，蛋白质-谷氨酰胺-γ-谷酰基转移酶)(AL552373)基因；抗血友病因子II(凝血酶)受体(M62424)；纤维蛋白溶酶原活化因子，鸟激酶(NM_002658)基因；金属蛋白酶3组织抑制剂(Sorsby fundus dystrophy，pseudoinflammatory)(W96324)基因；基质Gla蛋白(BF668572)基因；B-cell CLL/淋巴瘤1(Z23022)基因；CD74抗原(主要组织相容性复合体的不变多肽，II类相关抗原)(BG333618)基因；内收蛋白(adducin)3(γ)(AL135243)基因；溶质载体家族16(一元羧酸传送子)，成员4(NM_004696)基因；S蛋白(α)(NM_000313)基因；磷脂酰肌醇(4，5)二磷酸5-磷酸酶同系物；磷脂酰肌醇多聚磷酸5-磷酸酶IV型(AF187891)基因；孕酮膜结合蛋白质(BE858855)基因；脑源性神经营养因子(X60201)基因；或者载脂蛋白E(BF967316)基因(权利要求3)、和用于检测间充质干细胞的基因标记，特征在于其是人WNT抑制因子-1(WIF-1)，MRNA(NM_007191)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ11175(FLJ11175)，MRNA(NM_018349)基因；人RHO GDP解离抑止剂(GDI)β(ARHGDIB)，MRNA(NM_001175)基因；人钾中间体/少量电导的钙活化(SMALL CONDUCTANCECALCIUM-ACTIVATE)(NM_021614)基因；人核因子(红细胞衍生物2)-类似物3(NFE2L3)，MRNA(NM_004289基因；人GS3955蛋白(GS3955)，MRNA(NM_021643)基因；人CDNA3′端与糖蛋白相类似的MUC18(AA302605)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ21841(FLJ21841)，MRNA(NM_024609)基因；人锌指蛋白185(LIM区域)(ZNF185)，MRNA(NM_007150)基因；细胞周期控制中涉及的SC1＝假定的转移-活化因子[人，MRNA，24](S53374)基因；人NADH酶(辅酶Q)1α子复合体，8(19K)(NM_014222)基因；酵母YEAST MCM10的人同系物；假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)PRO2249(PRRO2)(NM_018518)基因；人胶原，VII型，α1(大疱性表皮松解症，DYSTRO(NM_000094)基因；人自分泌运动因子受体(AMFR)，MRNA(NM_001144)基因；人克隆24421 MRNA序列/CDS＝未知/GB＝AF070641/GI＝3283914/UG＝(AF070641)基因；人MRNA基因；CDNA DKFZP586E1621(源自DKFZP586E1621克隆)/CDS＝未知/GB(AL080235)基因(权利要求4)、和用于检测间充质干细胞的基因标记，特征在于其是人RESERVED(KCNK12)，MRNA(NM_022055)基因；人泛素结合酶E2C(UBE2C)，MRNA(NM_007019)基因；人CDNA FLJ10517 FIS，克隆NT2RP2000812/CDS＝(61，918)/GB＝AK001379/G(AK001379)基因；人软骨连接蛋白1(CRTL1)，MRNA(NM_001884)基因；人MRNA基因；CDNA DKFZP434F2322(由克隆DKFZP434F2322获得)/CDS＝未知/GB(AL133105)；人，克隆MGC：9549IMAGE：3857382，MRNA，完整CDS/CDS＝(92，1285)/G(BC012453)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)DKFZP586J1119(DKFZP586J1119)，MRNA(NM_032270)基因；人GLIA成熟因子，γ(GMFG)，MRNA(NM_004877)基因人CDNA：FLJ23095 FIS，克隆LNG07413/CDS＝未知/GB＝AK026748/GI＝10(AK026748)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)DKFZP762E1312(DKFZP762E1312)，MRNA(NM_018410)基因；人IROQUOIS类同源域蛋白(IRX-2A)，MRNA(NM_005853)基因；或者人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ10540(FLJ10540)，MRNA(NM_018131)基因(权利要求5)、和用于检测间充质干细胞的基因标记，特征在于其是人MRNA；CDNA DKFZP434C1915(由克隆DKFZP434C1915获得)基因；PARTIAL CDS/C(AL137698)；人微染色体维持缺陷型(酿酒酵母(S.CEREVISIAE))7(M)(NM_005916)基因；人动力蛋白，细胞质的，中间体多肽1(DNCI1)，M(NM_004411)基因；蛋白质基因产物的人MRNA(PGP)9.5.(X04741)基因；人RAD51-相互作用蛋白(PIR51)，MRNA(NM_006479)基因；人含有杆状病毒IAP重复序列的5(SURVIVIN)(BIRC5)，MR(NM_001168)基因；人UDP-N-乙酰基-ALPHA-D-半乳糖胺：多肽N-乙酰基GAL(NM 004482)基因；人细胞周期蛋白B1(CCNB1)，MRNA(NM_031966)基因；人FLAP结构特异性内切酶1(FEN1)，MRNA基因(NM_004111)；人丝氨酸/苏氨酸激酶15(STK15)，MRNA基因(NM_003600)；人MAD2(有丝分裂抑止缺陷型，酵母，同系物)-类似物1(MA)基因(NM_002358)；人核仁蛋白ANKT(ANKT)，MRNA基因(NM_018454)；人与泛素结合酶类似的HSPC150蛋白(H)基因(NM_014176)；人细胞色素P450类维生素A代谢蛋白(P450RAI-2)基因，(NM_019885)；人NIMA(从未有丝分裂基因A)相关激酶2(NEK2)，MR基因(NM_002497)；人骨形态生成蛋白4(BMP4)，MRNA基因(NM_001202)；人CDNAFLJ10674 FIS，克隆NT2RP2006436/CDS＝未知/GB＝AK001536/GI(AK001536)基因；或者人着丝粒蛋白A(17KD)(CENPA)，MRNA(NM_001809)基因(权利要求6)、和用于检测间充质干细胞的基因标记基因，特征在于其是人MRNA；CDNA DKFZP564P116(FROM克隆DKFZP564P116)/CDS＝未知/GB＝A(AL049338)；人TTK蛋白质激酶(TTK)，MRNA(NM_003318)基因；人KARYOPHERINα2(RAG COHORT1，IMPORTINα1)基因(KPNA(NM_002266)；人聚合酶(DNA导向的)，θ(POLQ)，MRNA(NM_006596)基因；人ETS变异体基因5(ETS相关分子)(ETV5)，MRNA基因(NM_004454)；人含转化酸性卷曲螺旋蛋白(TRANSFORMING，ACIDIC COILED-COILCONTAINING蛋白)3(TAC)(NM_006342)基因；人驱动蛋白类似物1(KNSL1)，MRNA基因(NM_004523)；人着丝粒蛋白E(312KD)(CENPE)，MRNA基因(NM_001813)；人CDNA，3′END/克隆＝IMAGE：1651289/克隆_END＝3′/GB＝AI12(AI123815)基因；人DISTAL-LESS HOMEO BOX 5(DLX5)，MRNA基因(NM_005221)；人V-MYB禽成髓细胞性白血病病毒癌基因同系物类似物2基因(NM_002466)；或者人血清剥夺反应(磷脂酰丝氨酸结合PRO(NM_004657)基因(权利要求7)、和用于检测间充质干细胞的基因标记，特征在于其是人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ10604(FLJ10604)，MRNA基因(NM_018154)；人核糖核酸酶HI基因，大亚基(RNASEHI)，MRNA(NM_006397)；人ANILLIN(果蝇SCRAPS同系物)，肌动蛋白结合蛋白基因(NM_018685)；人H4组蛋白家族，成员G(H4FG)基因，MRNA(NM_003542)；人G蛋白连结受体37(内皮缩血管肽受体B型-(NM_005302)人泛素载体蛋白(E2-EPF)，MRNA基因(NM_014501)；人，类似于肿瘤差别表达1，克隆IMAGE：3639252，(BC007375)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICALPROTEIN)MGC2577(MGC2577)，MRNA(NM_031299)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ13912(FLJ13912)，MRNA基因(NM_022770)；人ANNEXIN A3(ANXA3)，MRNA(NM_005139)基因；人STATHMIN 1/ONCO蛋白18(STMN1)，MRNA基因(NM_005563)人，与核糖体蛋白L39类似，克隆MGC：20168IMAGE：4555759，M(BC012328)；人POLO(果蝇)类似物激酶(PLK)，MRNA基因(NM_005030)(权利要求8)、和用于检测间充质干细胞的基因标记，特征在于其是人蛋白酶复合体(PROSOME，MACROPAIN)26S亚基，ATP酶，5(PS)基因(NM_002805)；人真核翻译起始因子4γ，2(EIF4G)基因(NM_001418)；人二氢嘧啶酶-LIKE 3(DPYSL3)基因，MRNA)(NM_001387)；人ADAPTOR相关蛋白复合体1，SIGMA 2亚基(AP1S2)基因(NM_003916)；人网蛋白1，中间丝结合蛋白，500KD(P)基因(NM_000445)；人异种核蛋白U(SCAFFOLD ATTAC(NM_031844)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)MGC5306(MGC5306)，MRNA基因(NM_024116)；人MHC I类多肽相关序列A(MICA)，MRNA基因(NM_000247)；人PRK1相关蛋白(AWP1)，MRNA基因(NM_019006)；人孕酮受体膜成分2(PGRMC2)，MRNA基因(NM_006320)；人多聚谷氨酸结合蛋白1(PQBP1)，MRNA基因(NM_005710)；人S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶1(AMD1)，MRNA基因(NM_001634)；人干扰素诱导的C型肝炎相关MICROTUBULARAG(NM_006417)基因；人蛋白激酶，AMP-活化的，γ1非催化性亚基(NON-CATALYTIC SUBUN)基因(NM_002733)；人前胶原-脯氨酸，2-OXOGLUTARATE 4-DIOXYGENASE(脯氨酸(NM_004199)；人血管内皮分化，溶血磷脂酸G-PROTE基因(NM 012152)；或人KIAA0127基因产物(KIAA0127)，MRNA基因(NM_014755)(权利要求9)、和具有与权利要求1-9中任一记载的用于检测间充质干细胞的基因标记在严谨条件下杂交的D N A序列的用于检测间充质干细胞基因标记的探针(权利要求10)、和由上述任一记载的碱基序列的反义链的全部或者部分构成的权利要求10记载的用于检测间充质干细胞基因标记的探针(权利要求11)、和用于检测间充质干细胞基因标记的微阵列或D N A芯片，特征在于其固定有至少一个及一个以上的权利要求10或11记载的D N A(权利要求12)、和上述的用于检测间充质干细胞标记基因的微阵列或D N A芯片，特征在于其固定有具有序列表序列号1、2、4、6、7、9、10、11、12、14、15、17、19或46所示碱基序列基因组、和检测出权利要求2-9中任一记载的基因组的2个以上基因的探针(权利要求13)、和用于检测间充质干细胞的多肽标记，特征在于其是具有序列表的序列3、5、8、13、16或18所示的氨基酸序列的多肽(权利要求14)、和一种抗体，特征在于其受权利要求14记载的多肽诱导、与该多肽特异性结合(权利要求15)、和权利要求15记载的抗体，其特征在于抗体是单克隆抗体(权利要求16)和权利要求15记载的抗体，其特征在于抗体是多克隆抗体(权利要求17)。
此外，本发明还由下列物质组成：识别间充质干细胞的方法，特征在于从被检细胞中检测出权利要求1-9中任一项记载的间充质干细胞标记基因表达(权利要求18)、和权利要求18记载的间充质干细胞的识别方法，其特征是采用RNA印迹法检测间充质干细胞标记基因的表达(权利要求19)、和权利要求18记载的间充质干细胞的识别方法，其特征是采用用于检测权利要求10或11记载的间充质干细胞标记基因的探针对间充质干细胞标记基因的表达进行检测(权利要求20)、和权利要求18记载的间充质干细胞的识别方法，其特征是采用用于检测权利要求12或13记载的间充质干细胞标记基因的微阵列或DNA芯片对间充质干细胞标记基因的表达进行检测(权利要求21)、和识别间充质干细胞的方法，其特征是权利要求18-21中任一记载的间充质干细胞标记基因表达的检测包括定量或半定量的PCR的使用(权利要求22)、和权利要求22记载的间充质干细胞的识别方法，其特征是其使用的定量的或半定量的PCR是RT-PCR法(权利要求23)。
此外，本发明还由以下物质组成：由具有序列表的序列号20所示的碱基序列的正义引物以及具有序列表的序列号21所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号22所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号23所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号24所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号25所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号26所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号27所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号28所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号29所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号30所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号31所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号32所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号33所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号34所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号35所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号36所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号37所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号38所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号39所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号40所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号41所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号42所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号43所示的碱基序列的反义引物、或具有序列表的序列号44所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号45所示的碱基序列的反义引物构成的用于扩增间充质干细胞的RT-PCR用引物(权利要求24)、和由具有序列表的序列号47所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号48所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号49所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号50所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号51所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号52所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号53所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号54所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号55所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号56所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号57所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号58所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号59所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号60所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号61所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号62所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号63所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号64所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号65所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号66所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号67所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号68所示的碱基序列的反义引物、或具有序列表的序列号69所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号70所示的碱基序列的反义引物构成的扩增间充质干细胞标记基因的实时P C R所使用的引物(权利要求25)、和具有序列表的序列号71所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号72所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号73所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号74所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号75所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号76所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号77所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号78所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号79所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号80所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号81所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号82所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号83所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号84所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号85所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号86所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号87所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号88所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号89所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号90所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号91所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号92所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号93所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号94所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号95所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号96所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号97所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号98所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号99所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号100所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号101所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号102所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号103所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号104所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号105所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号106所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号107所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号108所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号109所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号110所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号111所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号112所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号113所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号114所示的碱基序列的反义引物、或具有序列表的序列号115所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号116所示的碱基序列的反义引物构成的用于扩增间充质干细胞标记基因的RT-PCR所使用的引物(权利要求26)。
此外，本发明还由以下物质组成：权利要求1-8记载的间充质干细胞的识别方法，其特征是采用权利要求10或11中记载的间充质干细胞标记基因检测用探针对被检细胞中的基因、用权利要求24-26其中之一记载的正义引物以及反义引物中至少一对以上的引物扩增的基因进行检测(权利要求27)、和间充质干细胞的识别方法，其特征是采用权利要求15-17其中之一记载的抗体对被检细胞中的间充质干细胞标记多肽的表达进行检测(权利要求28)、和间充质干细胞的识别方法，其特征是将被检细胞中由序列表的序列号1、11和19构成的间充质干细胞标记基因组成的组中一个以上基因的表达以及由序列表的序列号2、4、6、7、9、10、12、14、15和17构成的间充质干细胞标记基因组成的组中一个以上基因的表达组合起来，进行评价(权利要求29)、和间充质干细胞的识别分离方法，其特征是采用权利要求10或权利要求11记载的间充质干细胞标记基因检测用探针和/或权利要求15-17中任一记载的抗体对被检细胞中间充质干细胞检测用标记基因和/或间充质干细胞检测用标记多肽的表达进行检测、对识别出的间充质干细胞进行分离(权利要求30)、和权利要求30记载的间充质干细胞的识别分离方法，其特征是通过采用权利要求15-17中任一记载的抗体的荧光抗体法将被检细胞中的间充质干细胞进行标识、分离经标识的间充质干细胞(权利要求31)、和用于识别间充质干细胞的试剂盒，其中装备有权利要求10或11记载的用于检测间充质干细胞标记基因的探针、固定有该探针的权利要求12或13记载的用于检测间充质干细胞标记基因的微阵列或D N A芯片、和权利要求15-17中任一记载的抗体中至少一个以上的抗体(权利要求32)。
附图说明
图1.表示的是本发明的实施例中，由半定量RT-PCR法获得的人间充质干细胞或人成纤维细胞间由个体(的不同)产生差异很大的基因。
图2.表示的是本发明的实施例中，由半定量RT-PCR法获得的MSC中高表达的基因。
图3.表示的是本发明的实施例中，由半定量RT-PCR法获得的MSC中低表达的基因。
图4.表示的是对于确认了间充质干细胞中高/低表达的13个基因，从来源于7个个体的间充质干细胞和来源于4个个体的成纤维细胞中抽提全部RNA，以其为模板通过RT-PCR法，对它们的表达量进行确认的结果。
图5.表示的是本发明的实施例中，间充质干细胞和成纤维细胞中本发明的标记基因表达状况的试验结果。
图6.表示的是本发明的实施例中，间充质干细胞和成骨细胞中各标记基因的差别基因表达的状况。
图7.表示的是本发明的实施例中，间充质干细胞和成骨细胞中各标记基因的差别基因表达的状况。
图8.表示的是本发明的实施例中，间充质干细胞和成骨细胞中各标记基因的差别基因表达的状况。
图9.表示的是本发明的实施例中，各个标记基因在间充质干细胞和人成纤维细胞中基因的表达状况。
图10.表示的是本发明的实施例中，各个标记基因在间充质干细胞和人成纤维细胞中基因的表达状况。
图11.表示的是本发明的实施例中，采用流式细胞仪对人细胞中间充质干细胞DR的表达的测定结果。
图12.表示的是本发明的实施例中，对在间充质干细胞向成骨细胞分化诱导中各个基因的表达状况的测定结果。
图13.表示的是本发明的实施例中，各标记基因在骨分化诱导的第4天-28天之间基因表达的变化。
图14表示的是本发明的实施例中，各标记基因在骨分化诱导的第4天-28天之间基因表达的变化。
图15.表示的是本发明的实施例中，各标记基因在骨分化诱导的第4天-28天之间基因表达的变化。
图16.表示的是本发明的实施例中，各标记基因在骨分化诱导的第4天-28天之间基因表达的变化。
具体实施方式
本发明由对间充质干细胞中的特异性表达的用于检测间充质干细胞的标记基因或用于检测间充质干细胞的标记多肽的表达进行检测，识别间充质干细胞构成。本发明中，用于检测间充质干细胞的基因标记构成的基因是具有序列表中序列号1、2、4、6、7、9、10、11、12、14、15、17或19所示的碱基序列的基因。
此外，在本发明中用于检测间充质干细胞的多肽标记构成的多肽是具有序列表中序列号3、5、8、13、16或18所示氨基酸序列的多肽。
序列表中序列号1所示的基因是“丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制剂”基因，序列表中序列号2所示的基因是“肾上腺髓质素”基因，序列表中序列号4所示的基因是“载脂蛋白D(apolopoprotein D)”基因，序列表中序列号6所示的基因是“XV-α1型胶原酶(collagenase type XV alpha 1)”基因，序列表中序列号7所示的基因是“CUG三联体重复RNA结合蛋白2(CUG triplet repeat RNA binding protein2)”基因，序列表中序列号9所示的基因是“皮肤桥蛋白”基因，序列表中序列号10所示的基因是“异柠檬酸脱氢酶2”基因，序列表中序列号11所示的基因是“2类主要组织相容性复合体DRβ3(majorhistocompatibility complex class2，DR beta 3)”基因，序列表中序列号12所示的基因是“蛋白质酪氨酸激酶7(protein tyrosine kinase 7)”基因，序列表中序列号14所示的基因是“Sam68样磷酸酪氨酸蛋白(Sam68-like phosphotyrosine protein)”基因，序列表中序列号15所示的基因是“C-型凝集素超家族(C-type lectin superfamily)成员2”基因，序列表中序列号17所示的基因是“基质金属酶1(matrix metalloprotease 1)”基因，和序列表中序列号19所示的基因是“组织因子途径抑制剂2(tissue factor pathway inhibitor2)”基因，序列表中序列号46所示的基因是“主要组织相容性复合体DRα(major histocompatibilitycomplex DR alpha)”基因。
可以通过NCBI的基因数据库中、各个登陆号：AI133613(序列号1)、NM_001124(序列号2)、NM_001647(序列号4)、L01697(序列号6)、U69546(序列号7)、AW016451(序列号9)、AL545953(序列号10)、BF732822(序列号11)、AL157486(序列号12)、AA112001(序列号14)、XM_006626(序列号15)、NM_002421(序列号17)、AL550357(序列号19)、和BF795929(序列号46)获得本发明的用于检测间充质干细胞的标记基因的DNA序列的信息。
进而，经确认本发明中，与成纤维细胞相比在间充质干细胞中表达量更多的基因列举为如下基因：整联蛋白，α6(ITGA6)，MRNA基因(NM_000210)；溶质载体家族20(PHOSPHATE TRANSPORTER)、成员1基因(NM_005415)；核苷酸还原酶M2多肽(RRM2)，MRNA基因(NM_001034)；卵泡抑制素(FST)，转录变异型FST317，MRNA基因(NM_006350)；SPROUTY(果蝇)同源基因2(SPRY2)，MRNA基因(NM_005842)；RAB3B，成员RAS癌基因家族成员(RAB3B)，MRNA基因(NM_002867)；溶质载体家族2(FACILITATED GLUCOSE TRANSPORTER)基因(NM_006516)；白介素13受体，ALPHA 2(IL13RA2)，MRNA基因(NM_000640)；丝氨酸(或苏氨酸)蛋白酶抑制剂12(STK12)，MRNA基因(NM_004217)；微染色体维持缺陷蛋白(酿酒酵母)5(CE)基因(NM_006739)；甲状腺激素受体中间子13(TRIP13)，MRNA基因(NM_004237)；类驱动蛋白6(MITOTIC CENTROMERE-ASSOCIATED KINESIN)(K)基因(NM_006845)；细胞周期蛋白依赖性抑止剂3(细胞周期蛋白依赖性抑止剂3(CYCLIN-DEPENDENT KINASE INHIBITOR 3))(CDK2-ASSOCIATED DUAL基因(NM_005192)；染色体凝集蛋白G(HCAP-G)，MRNA基因(NM_022346)；CDC28蛋白激酶(CKS1)，MRNA基因(NM_001826)；胞质分裂的蛋白质调节子1(PRC1)，MRNA基因(NM_003981)；细胞分裂周期2，G1→S→G2→M(CDC2)，MRNA基因(NM_001786)；CDC20(CDC20细胞分裂周期20，酿酒酵母同源基因)(CD)基因(NM_001255)；LIKELY ORTHOLOG OF MATERNAL EMBRYONIC LEUCINEZIPPER KINAS基因(NM_014791)；微染色体维持缺陷蛋白(酿酒酵母)7(M)基因(NM_005916)；细胞周期蛋白A2(CCNA2)，MRNA基因(NM_001237)；胸苷激酶1，可溶性(TK1)，MRNA基因(NM_003258)；或细胞周期蛋白依赖性激酶抑止剂2A(cyclin-dependent kinase inhibitor 2A)(黑色素瘤，p16，抑止CDK4)(CDKN2A)，mRNA基因(NM_000077)。
含EGF的细胞微丝(fibulin)样细胞外基质蛋白1基因(NM_018894)；人胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)mRNA基因(AU132011)；人克隆24775 mRNA序列基因(AA402981)；蛋白聚糖1，分泌颗粒(AV734015)；胰岛素样生长因子结合蛋白质5(insulin-like growth factor binding protein 5)基因(AA374325)；基因溶质载体家族21(有机阴离子转运蛋白)，成员3(AF085224)；谷氨酰胺转移酶2(C多肽，蛋白质-谷氨酰胺-γ-谷酰基转移酶)(AL552373)基因；血友病因子II(凝血酶)受体基因(M62424)；纤维蛋白溶酶原活化因子，鸟激酶(NM_002658)基因；金属蛋白酶组织抑制因子3(Sorsby fundus dystrophy，pseudoinflammatory)(W96324)基因；基质Gla蛋白(BF668572)基因；B-cell CLL/淋巴瘤1(Z23022)基因；CD74抗原(主要组织相容性复合体的不变多肽，II类相关抗原)(BG333618)基因；内收蛋白3(γ)(AL135243)基因；溶质载体家族16(一元羧酸传送子)，成员4(NM_004696)基因；S蛋白(α)(NM_000313)基因；磷脂酰肌醇(4，5)二磷酸5-磷酸酶同系物；磷脂酰肌醇多聚磷酸5-磷酸酶IV型(AF187891)基因；孕酮膜结合蛋白质(BE858855)基因；脑源性神经营养因子(X60201)基因；或者载脂蛋白E(BF967316)基因。
人WNT抑止因子-1(WIF-1)，MRNA(NM_007191)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ11175(FLJ11175)，MRNA基因(NM_018349)；人RHO GDP解离抑止剂(GDI)β(ARHGDIB)，MRNA基因(NM_001175)；人钾中间体/少量电导的钙活化(SMALL CONDUCTANCE CALCIUM-ACTIVATE)基因(NM_021614)；人核因子(红细胞衍生物2)-类似物3(NFE2L3)，MRNA基因(NM_004289)；人GS3955蛋白(GS3955)，MRNA基因(NM_021643)；人CDNA 3′END与糖蛋白相类似的MUC18基因(AA302605)；人假拟蛋白(HYPOTHETICALPROTEIN)FLJ21841(FLJ21841)，MRNA基因(NM_024609)；人ZINC FINGER蛋白185(LIM域)(ZNF185)，MRNA基因(NM_007150)；SC1＝假定的转移-活化因子，细胞周期控制中涉及的[人，MRNA，24](S53374)基因；人NADH脱氢酶(辅酶Q)1α子复合体，8(19K)基因(NM_014222)；人酵母MCM10的同系物基因；假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)PRO2249(PRO2)(NM_018518)；人XV-α1型胶原酶(COLLAGEN，TYPE VII，ALPHA1)(大疱性表皮松解症，DYSTRO基因(NM_000094)；人自分泌运动因子受体(AMFR)，MRNA基因(NM_001144)；人克隆24421 MRNA序列/CDS＝未知/GB＝AF070641/GI＝3283914/UG＝(AF070641)基因；人MRNA基因；CDNA DKFZP586E1621(FROM克隆DKFZP586E1621)/CDS＝未知/GB(AL080235)基因。
人保留(KCNK12)，MRNA(NM_022055)基因；人泛素结合酶E2C(UBE2C)，MRNA基因(NM_007019)；人CDNA FLJ10517 FIS，克隆NT2RP2000812/CDS＝(61，918)/GB＝AK001379/G基因(AK001379)；人骨连接蛋白1(CRTL1)，MRNA基因(NM_001884)；人MRNA；CDNA DKFZP434F2322(FROM克隆DKFZP434F2322)/CDS＝未知/GB(AL133105)基因；人，克隆MGC：9549IMAGE：3857382，MRNA，完整CDS/CDS＝(92，1285)/G(BC012453)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)DKFZP586J1119(DKFZP586J1119)，MRNA(NM_032270)基因；人神经胶质成熟因子，γ(GMFG)，MRNA基因(NM_004877)；人CDNA：FLJ23095 FIS，克隆LNG07413/CDS＝未知/GB＝AK026748/GI＝10(AK026748)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)DKFZP762E1312(DKFZP762E1312)，MRNA基因(NM_018410)；人IROQUOIS类同源域蛋白(IRX-2A)，MRNA基因(NM_005853)；或人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ10540(FLJ10540)，MRNA基因(NM_018131)。
人MRNA基因；CDNA DKFZP434C1915(FROM克隆DKFZP434C1915)；PARTIAL CDS/C(AL137698)；人微染色体维持缺陷型(酿酒酵母(S.CEREVISIAE))7(M)(NM_005916)基因；人动力蛋白，细胞质的，中间体多肽1(DNCI1)，M基因(NM_004411)；蛋白质基因产物的人MRNA(PGP)9.5.(X04741)基因；人RAD51-相互作用蛋白(PIR51)，MRNA基因(NM_006479)；人含有杆状病毒IAP重复序列的5(SURVIVIN)(BIRC5)，MR基因(NM_001168)；人UDP-N-乙酰基-ALPHA-D-半乳糖胺：多肽N-乙酰基GAL基因(NM_004482)；人细胞周期蛋白B1(CCNB1)，MRNA基因(NM_031966)；人FLAP结构特异性内切酶1(FEN1)，MRNA基因(NM_004111)；人丝氨酸/苏氨酸激酶15(STK15)，MRNA基因(NM_003600)；人MAD2(有丝分裂抑止缺陷型，酵母，同系物)-类似物1(MA)基因(NM_002358)；人核仁蛋白ANKT(ANKT)，MRNA基因(NM_018454)；人与泛素结合酶类似的HSPC150蛋白(H)基因(NM_014176)；人细胞色素P450类维生素A代谢蛋白(P450RAI-2)，(NM_019885)基因；人NIMA(从未有丝分裂基因A)相关激酶2(NEK2)，MR基因(NM_002497)；人骨形态生成蛋白4(BMP4)，MRNA基因(NM_001202)；人CDNA FLJ10674 FIS，克隆NT2RP2006436/CDS＝未知/GB＝AK001536/G基因I(AK001536)；或人着丝粒蛋白A(17KD)(CENPA)，MRNA基因(NM_001809)。
人MRNA基因；CDNADKFZP564P116(来自克隆DKFZP564P116)/CDS＝未知/GB＝A(AL049338)；人TTK蛋白质激酶(TTK)，MRNA基因(NM_003318)；人KARYOPHERINα2(RAG COHORT1，IMPORTINα1)(KPNA基因(NM_002266)；人聚合酶(DNA导向的)，θ(POLQ)，MRNA基因(NM_006596)；人ETS变异体基因5(ETS相关分子)(ETV5)，MRNA基因(NM_004454)；人含转化酸性卷曲螺旋蛋白(TRANSFORMING，ACIDIC COILED-COIL CONTAINING蛋白)3(TAC)基因(NM_006342)；人驱动蛋白类似物1(KNSL1)，MRNA基因(NM_004523)；人着丝粒蛋白E(312KD)(CENPE)，MRNA基因(NM_001813)；人CDNA，3′END/克隆＝IMAGE：1651289/克隆END＝3′/GB＝AI12(AI123815)；基因人DISTAL-LESSHOMEO BOX 5(DLX5)，MRNA基因(NM_005221)；人V-MYB禽成髓细胞性白血病病毒癌基因同系物类似物2基因(NM_002466)；或人血清剥夺反应(磷脂酰丝氨酸结合PRO(NM_004657)基因。
用于检测间充质干细胞的基因标记，特征在于其是人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ10604(FLJ10604)，MRNA基因(NM_018154)；人核糖核酸酶HI，大亚基(RNASEHI)，MRNA(NM_006397)基因；人ANILLIN(果蝇SCRAPS同系物)，肌动蛋白结合蛋白基因(NM_018685)；人H4组蛋白家族，成员G(H4FG)，MRNA基因(NM_003542)；人G蛋白连结受体37(内皮缩血管肽受体B型-(NM_005302)人泛素载体蛋白(E2-EPF)，MRNA(NM_014501)基因；人，类似于肿瘤差别表达1，克隆IMAGE：3639252，(BC007375)基因；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)MGC2577(MGC2577)，MRNA基因(NM_031299)；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ13912(FLJ13912)，MRNA基因(NM_022770)；人ANNEXIN A3(ANXA3)，MRNA基因NM_005139)；人STATHMIN 1/ONCO蛋白18(STMN1)，MRNA基因(NM_005563)人，与核糖体蛋白L39类似，克隆MGC：20168 IMAGE：4555759，M(BC012328)；人POLO(果蝇)类似物激酶(PLK)，MRNA基因(NM_005030)。
同时，本发明中经确认的、与纤维母细胞相比较、在间充质细胞中不表达或表达量的基因是，如下列举的基因：
用于检测间充质干细胞的基因标记，特征在于人蛋白酶体(PROSOME，MACROPAIN)26S亚基，ATP酶，5(PS)基因(NM_002805)；人真核翻译起始因子4γ，2(EIF4G)基因(NM_001418)；人二氢嘧啶酶类似物3(DPYSL3)，MRNA)基因(NM_001387)；人ADAPTOR相关蛋白复合体1，σ2亚基(AP1S2)基因(NM_003916)；人网蛋白1，中间丝结合蛋白，500KD(P)基因(NM_000445)；人异种核蛋白U基因(SCAFFOLD ATTAC(NM_031844)；人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)MGC5306(MGC5306)，MRNA基因(NM_024116)；人MHCI类多肽相关序列A(MICA)，MRNA基因(NM_000247)；人PRK1相关蛋白(AWP1)，MRNA基因(NM_019006)；人孕酮受体膜成分2(PGRMC2)，MRNA基因(NM_006320)；人多聚谷氨酸结合蛋白1(PQBP1)，MRNA基因(NM_005710)；人S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶1(AMD1)，MRNA基因(NM_001634)；人干扰素诱导的C型肝炎相关MICROTUBULAR AG基因(NM_006417)；人蛋白质激酶，AMP-活化的，γ1非催化性亚基(NON-CATALYTIC SUBUN)基因(NM_002733)；人前胶原-脯氨酸，2-氧代戊二酸盐4-加双氧酶(脯氨酸(NM_004199)基因；人血管内皮分化，溶血磷脂酸G-PROTE基因(NM_012152)；或人KIAA0127基因产物(KIAA0127)，MRNA基因(NM_014755)
本发明中，对本发明的间充质干细胞标记基因表达进行的检测中可以采用公知的基因表达检测方法。例如，为了检测本发明的间充质干细胞标记基因的表达，可以采用RNA印迹法(northern blot)。此外，为了通过本发明的基因标记，检测识别间充质干细胞，可以采用具有与本发明的间充质干细胞基因标记的DNA序列在严谨条件下杂交的DNA序列的探针。在采用该探针检测间充质干细胞中，可采用公知方法采取相应措施。例如，由序列表所示基因标记DNA序列制备出适应长度的DNA探针，给探针加上合适的荧光标记等标记，通过将其与被检体杂交，从而对间充质干细胞进行检测。该DNA探针可以采用由序列表所示的本发明的基因标记的碱基序列的反义链的全部或部分构成的用于检测间充质干细胞标记基因的探针。或者，也可以采用固定有至少1个以上所述探针的用于检测标记基因的微阵列或DNA芯片。
此外，在制备上述DNA探针时，本发明的碱基序列中，所谓“与用于检测间充质干细胞的标记基因的DNA序列在严谨条件下杂交”是指，例如42℃下的杂交，以及在42℃下通过含有1×SSC(0.15M NaCl、0.015M柠檬酸钠)、0.1％SDS(十二烷基硫酸钠)的缓冲液进行冲洗，最为理想的是65℃下的杂交，以及在65℃下通过含有1×SSC、0.1％SDS的缓冲液进行冲洗。此外，影响杂交的严谨度的因素除上述温度条件以外还存在各种因素，如果本领域技术人员对各种因素进行组合，就可能实现与上述列举的杂交的严谨性等同的严谨度。
尤其是，本发明中检测本发明的用于检测间充质干细胞的多肽标记时，可以使用由该蛋白质的多肽诱导，与该多肽特异性结合的抗体。该抗体可以是例如多克隆抗体和单克隆抗体。作为本发明的多肽标记的抗体，该抗体可以通过常规方法制得。采用本发明的抗体，在对被检细胞中用于检测间充质干细胞的标记多肽的表达进行检测中，可以实施采用公知抗体的免疫学测定法。所述免疫学测定法可以是例如RIA法、ELISA法、荧光抗体发等公知的免疫学测定法。
本发明可通过采用本发明的用于检测间充质干细胞的探针和/或本发明的用于检测间充质干细胞的抗体，对被检细胞中用于检测间充质干细胞的标记基因和/或用于检测间充质干细胞的标记多肽的表达进行检测，对识别出的间充质干细胞进行分离得以实现。在对被检细胞中用于检测间充质干细胞的标记基因检测时，为了扩增被检细胞的基因，可采用定量或半定量的PCR。所述PCR可采用RT-PCR(逆转录PCR)。进行所述PCR时，采用用于扩增用于检测间充质干细胞的标记基因的正义引物和反义引物组成的引物。
用于扩增本发明的用于检测间充质干细胞的标记基因的引物举例如下：具有序列表的序列号20所示的碱基序列的正义引物以及具有序列表的序列号21所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号22所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号23所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号24所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号25所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号26所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号27所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号28所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号29所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号30所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号31所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号32所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号33所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号34所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号35所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号36所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号37所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号38所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号39所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号40所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号41所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号42所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号43所示的碱基序列的反义引物、或具有序列表的序列号44所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号45所示的碱基序列的反义引物。
尤其是，用于扩增本发明的用于检测间充质干细胞的标记基因的引物举例如下：由具有序列表的序列号47所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号48所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号49所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号50所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号51所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号52所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号53所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号54所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号55所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号56所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号57所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号58所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号59所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号60所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号61所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号62所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号63所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号64所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号65所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号66所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号67所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号68所示的碱基序列的反义引物、或具有序列表的序列号69所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号70所示的碱基序列的反义引物构成的扩增间充质干细胞标记基因的实时P C R所使用的引物。
进而，用于扩增本发明的用于检测间充质干细胞的标记基因的引物列举如下：由具有序列表的序列号71所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号72所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号73所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号74所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号75所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号76所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号77所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号78所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号79所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号80所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号81所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号82所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号83所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号84所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号85所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号86所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号87所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号88所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号89所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号90所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号91所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号92所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号93所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号94所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号95所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号96所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号97所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号98所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号99所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号100所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号101所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号102所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号103所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号104所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号105所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号106所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号107所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号108所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号109所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号110所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号111所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号112所示的碱基序列的反义引物、具有序列表的序列号113所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号114所示的碱基序列的反义引物、或具有序列表的序列号115所示的碱基序列的正义引物和具有序列表的序列号116所示的碱基序列的反义引物构成的用于扩增间充质干细胞标记基因的RT-PCR所使用的引物。
本发明中，对间充质干细胞的识别是以下述方式进行：在被检细胞中以上述正义引物和反义引物的至少一对以上的引物进行扩增，采用用于检测本发明的间充质干细胞的标记基因的探针对扩增出的基因进行检测。
本发明的用于检测间充质干细胞的标记基因是在间充质干细胞中特异性高表达的基因和特异性低表达的基因，通过以组合方式检测这些基因表达，能够提高间充质干细胞检测的精确度。因此，作为在间充质干细胞中特异性高表达的基因，可例举为序列表的序列号1、11和19构成的间充质干细胞标记基因，作为在间充质干细胞中特异性低表达的基因，可例举为序列号2、4、6、7、9、10、12、14、15、17和46构成的间充质干细胞标记基因。进而，可以列举出本发明中经证实的间充质干细胞标记基因。因此，通过对各个基因的组合中的一个以上基因的表达进行组合，可以以更高的检测精确度对间充质干细胞进行识别。
在通过采用利用本发明的抗体的荧光抗体法，对被检细胞中的间充质干细胞标记多肽的表达进行检测，从而识别分离间充质干细胞的过程中可通过公知的方法对间充质干细胞进行标记、分离。所述标记方法，可举例为如荧光抗体法。在通过荧光抗体法对未分化的造血细胞进行标记中，对与本发明的用于检测间充质干细胞的多肽标记特异性结合的抗体进行荧光标记，通过与表达所述抗原的间充质干细胞结合，标记间充质干细胞(直接荧光抗体法)，或在表达抗原的间充质干细胞与未标记的本发明的特异抗体结合后，对与标记的二次抗体结合的间充质干细胞标记(间接荧光抗体法)、对所述经标记的间充质干细胞分离，收集。
本发明的间充质干细胞的检测识别中所使用的用于检测间充质干细胞标记基因的探针，固定有该探针的用于检测间充质干细胞标记基因的微阵列或DNA芯片以及本发明的用于检测间充质干细胞的抗体可以以装备有上述物质的用于识别间充质干细胞的试剂盒制品化形式存放。
下面，通过实施例更为具体地对本发明进行说明，本发明的技术范围不受其实施例所举例的内容限制。
实施例1【材料和方法】
(细胞)
在Dalbecco’s modified Eagle’s medium(低葡萄糖)(Sigma公司制造)中添加了10％胎牛血清、1ng/ml bFGF的培养基中在37℃对人间充质干细胞(human mesenchymal stemcell)和人成纤维细胞(human fibroblast)进行培养。
(DNA微阵列)
用TRIZOL试剂(Invitrogen公司制造)从一个10cm皿的各个细胞中抽提全部RNA，用micro poly(A)purist(Ambion公司制造)提取mRNA，进行DNA微阵列(IncyteGenomics公司：Kurabo Life Array analysis servis；Lot.No.KL01081)。并且，DNA微阵列分析委托Kurabo公司进行。
(半定量RT-PCR)
用TRIZOL试剂(Invitrogen公司制造)从各个细胞中抽提全部RNA后，以各个1mg全部RNA为模板，采用用于RT-PCR的SuperScript first-strand合成系统(Invitrogen公司)，42℃下进行50分钟逆转录反应从而合成cDNA。以合成的cDNA为模板采用Advantage 2 PCR enzyme system(Clontech公司制造)对各个基因进行扩增。94℃下变性30秒，68℃下1分钟内退火30个循环。用于扩增各个基因的引物序列汇集在表1中。通过采用1％琼脂糖凝胶的电泳分离扩增出的基因，通过溴乙锭染色进行检测。
实施例2【检测结果】
(DNA微阵列)
DNA微阵列的结果表明，9400个基因中，与在成纤维细胞中相比63个基因在间充质干细胞中的显著表达更高，141个基因表达较低。此外，还看出了除这些基因之外的其它基因的显著差异。其中，发现存在3倍以上差异的87个基因中，在间充质干细胞中高表达的基因为29个基因，低表达的基因为58个基因。
(半定量RT-PCR)
从源于3个个体的间充质干细胞和源于3个个体的成纤维细胞中抽提全长RNA，以其为模板，通过半定量RT-PCR法就上述87个基因的表达量进行调查。其结果是表达量未发现差异的基因最多。此外，不同个体的间充质干细胞或成纤维细胞间表达量存在差异，认为由个体不同产生的表达差异也很大(图1)。
经RT-PCR证实在间充质干细胞中高表达的基因是丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑止剂(序列表的序列号1)、2类主要组织相容性复合体DR β3(序列号11)、和组织因子途径抑制物2(序列号19)这三个基因(图2)。
此外，经证实低表达的基因是(序列号2)、载脂蛋白D(序列号4)、XV-α型胶原酶(collagenase type XV alpha 1)(序列号6)、CUG三联体重叠RNA结合蛋白(CUGtriplet repeat RNA binding protein)(序列号7)、皮肤桥蛋白(序列号9)、异柠檬酸脱氢酶2(序列号10)、酪氨酸激酶7(序列号12)、Sam68样磷酸酪氨酸蛋白(序列号14)、C-型凝集素超家族成员2(序列号15)、和基质金属酶1(matrix metalloprotease 1)(序列号17)这10个基因(图3)。并且，通过半定量RT-PCR法对这13个基因的表达量进行证实，所述半定量RT-PCR法是以从源于7个个体的间充质干细胞和4个个体成纤维细胞中抽提的全长RNA作为模板的(图4)。
实施例3【间充质干细胞中各个基因的表达量的测定I】
以与实施例1相同方法，对本发明的基因标记在人间充质干细胞和人成纤维细胞中的表达进行测定。所使用的RT-PCR和实时PCR的引物和实时PCR所用探针示于表2中。
Figure A20081008130400281
间充质干细胞和成纤维细胞中的mRNA水平的表达状况示于图5。此外，间充质干细胞和成纤维细胞中相对的mRNA水平的表达状况示于图6、7、8。
实施例4【间充质干细胞中各个基因的表达量的测定II】
以与实施例1相同方法，对本发明的各个基因标记在人间充质干细胞和人成纤维细胞中的表达进行测定。所使用的RT-PCR的正义及反义引物如序列表的序列号71-116的序列所示。间充质干细胞和成纤维细胞中的mRNA的表达状况示于图9和图10。此外，间充质干细胞/成纤维细胞的表达之比示于表3。
表3
 MSC/成纤维细胞 基因名称
 11.6 NTEGRIN，ALPHA 6(ITGA6)，MRNA
 8.7 溶质载体家族20(磷酸盐转运蛋白)，成员1
 7.8 核苷酸还原酶M2多肽(RRM2)，MRNA
 7.6 滤泡素抑制素(FOLLISTATIN)  (FST)，转录物变异体FST317，MRNA
 7.3 SPROUTY(果蝇)同系物2(SPRY2)，MRNA
 6.9 RAB3B，成员RAS癌基因家族(RAB3B)，MRNA
 6.5 溶质载体家族2(促进葡萄糖转运蛋白(FACILITATEDGLUCOSE TRANSPORTER))
 6.1 白介素13受体，ALPHA 2(IL13RA2)，MRNA
 5.9 丝氨酸/苏氨酸激酶12(STK12)，MRNA
 5.7 微染色体维持缺陷型(酿酒酵母(S.CEREVISIAE))
 5.6 甲状腺激素受体中间子13(TRIP13)，MRNA
 5.5 驱动蛋白类似物6(有丝分裂着丝粒相关驱动蛋白(MITOTIC CENTROMERE相关KINESIN))
 5.5 细胞周期蛋白依赖性抑止剂3(细胞周期蛋白依赖性激酶抑止剂3)
 5.4 染色体凝缩蛋白G(HCAP-G)，MRNA
 5.2 CDC28蛋白质激酶1(CKS1)，MRNA
 5.2 胞质分裂蛋白调节子1(PRC1)，MRNA
 5.2 细胞分裂周期2，G1→S→G2→M(CDC2)，MRNA
 5.2 CDC20(细胞分裂周期20，酿酒酵母(S.CEREVISIAE)，同系物)(CD
 5.1 LIKELY ORTHOLOG OF MATERNAL EMBRYONICLEUCINE ZIPPER KINAS
 5.1 微染色体维持缺陷型(酿酒酵母(S.CEREVISIAE))7
 4.9 YCLIN A2(CCNA2)，MRNA
 3.6 胸苷激酶1，可溶性(TK1)，MRNA
 0.6 细胞周期蛋白依赖性激酶抑止剂2A(黑色素瘤，p16，抑止CDK4)(CDKN2A)，mRNA
实施例5【间充质干细胞中各个基因的表达量的测定III】
以与实施例1相同方法，对本发明的各个基因标记在人源间充质干细胞和人成纤维细胞中的表达进行测定。间充质干细胞/成纤维细胞的表达之比示于表4。
(表4)
(间充质干细胞/成纤维细胞)    (基因名称)
8.9    含EGF的fibulin样细胞外基质蛋白1
8.4    人胰岛素样生长因子结合蛋白质5(IGFBP5)mRNA
7.7    人克隆24775 mRNA序列
7      ″蛋白聚糖1，分泌颗粒″
6.8    人胰岛素样生长因子结合蛋白质5
6.7    ″溶质载体家族21(有机阴离子转运蛋白)，成员3″
6.5    ″转谷氨酰胺酶2(C多肽，蛋白质氨酰胺酶-γ-氨酰胺酶  转移酶)″
5.8    凝集因子II(凝血酶)受体
5.6    ″纤溶酶原激活物，uro激酶″
5.5    ″金属蛋白酶3组织抑止剂(Sorsby fundus dystrophy，
       pseudoinflammatory)″
5.1    基质Gla蛋白
4.6    B-cell CLL/淋巴瘤1
4.6    ″CD74抗原(主要组织相容性复合体的不变多肽，II类抗原相
       关)″
4.2    内收蛋白3(γ)
4.2    ″溶质载体家族16(一元羧酸转运蛋白)，成员4″
3.4    蛋白S(α)
3.3    ″磷脂酰肌醇(4，5)二磷酸5-磷酸酶同系物；磷脂酰肌醇多聚磷
       酸5-磷酸酶IV型″
3.2    孕酮膜结合蛋白质
3.2    脑源性神经营养因子
3      载脂蛋白E
38.5   ″GI|6005949|REF|NM_007191.1|人WNT抑止因子-1(WIF-1)，
       MRNA″
12.7   ″GI|8922916|REF|NM_018349.1|人假拟蛋白(HYPOTHETICAL
       PROTEIN)FLJ11175(FLJ11175)，MRNA″
11.2    ″GI|10835001|REF|NM_001175.1|人RHO GDP解离抑止剂
        (GDI)β(ARHGDIB)，MRNA″
10.3    ″GI|11055973|REF|NM_021614.1|人钾中间体/少量电导的钙活
        化(SMALL CONDUCTANCE CALCIUM-ACTIVATE)″
8.7     ″GI|5731346|REF|NM_004289.3|人核因子(红细胞衍生物2)-类
        似物3(NFE2L3)，MRNA″
7.6     ″GI|11056053|REF|NM_021643.1|人GS3955蛋白(GS3955)，
        MRNA″
7.5    ″EST10324脂肪组织，白色I人CDNA 3′端与糖蛋白相类似
       的MUC18，″
6.6    ″GI|13375818|REF|NM_024609.1|人假拟蛋白(HYPOTHETICAL
       PROTEIN)FLJ21841(FLJ21841)，MRNA″
6.5    ″GI|6005971|REF|NM_007150.1|人ZINC FINGER
       蛋白185(LIM域)(ZNF185)，MRNA″
6.5    ″细胞周期控制中涉及的GNL|UG|HS#S2334464 SC1＝假定的转
       移-活化因子[人，MRNA，24″
6.4    ″GI|7657368|REF|NM_014222.1 |人NADH脱氢酶(辅酶Q)1α
       子复合体，8(19K″
6.3    ″GI|8924142|REF|NM_018518.1|F酵母MCM10的人同系物；假
       拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)PRO2249(PRO2″
6.2    ″GI|4502960|REF|NM_000094.1|人VII-α1型胶原蛋白1(大疱性
       表皮松解症，DYSTRO″
6.2    ″GI|4502074|REF|NM_001144.1|人自分泌运动因子受体
       (AMFR)，MRNA″
6.2    GNL|UG|HS#S1090551人克隆24421 MRNA序列/CDS＝未知
       /GB＝AF070641/GI＝3283914/UG＝
6.2    GNL|UG|HS#S1570341人MRNA；CDNA DKFZP586E1621(源自
       克隆DKFZP586E1621)/CDS＝未知/GB
6.1    ″GI|11545760|REF|NM_022055.1|人保性(KCNK12)，MRNA″
6.0    ″GI|5902145|REF|NM_007019.1|人泛素结合酶E2C(UBE2C)，
       MRNA″
5.9    ″GNL|UG|HS#S1970614人  CDNA FLJ10517 FIS，克隆
       NT2RP2000812/CDS＝(61，918)/GB＝AK001379/G″
5.8    ″GI|4503052|REF|NM_001884.1|人软骨连接蛋白1(CRTL1)，
       MRNA″
5.8    GNL|UG|HS#S1972520人  MRNA；CDNA DKFZP434F2322
       (FROM克隆DKFZP434F2322)/CDS＝未知/GB
5.7    ″GNL|UG|HS#S3837475人，克隆MGC：9549 IMAGE：3857382，
       MRNA，完整CDS/CDS＝(92，1285)/G″
5.4    ″GI|14150008|REF|NM_032270.1|人    假  拟  蛋  白
       (HYPOTHETICAL             PROTEIN)    DKFZP586J1119
       (DKFZP586J1119)，MRNA″
5.4    ″GI|4758439|REF|NM_004877.1|人神经胶质成熟因子，γ(GMFG)，
       MRNA″
5.4    ″GNL|UG|HS#S2654530人  CDNA：FLJ23095 FIS，克隆
       LNG07413/CDS＝未知/GB＝AK026748/GI＝10″
5.3    ″GI|8922180|REF|NM_018410.1|人假拟蛋白(HYPOTHETICAL
       PROTEIN)DKFZP762E1312(DKFZP762E1312)，MRNA″
5.3    ″GI|5031806|REF|NM_005853.1|人IROQUOIS类同源域蛋白
       (IRX-2A)，MRNA″
5.2    ″GI|8922501|REF|NM_018131.1|人假拟蛋白(HYPOTHETICAL
       PROTEIN)FLJ10540(FLJ10540)，MRNA″
5.1    ″GNL|UG|HS#S1972896人MRNA；CDNA DKFZP434C1915
       (FROM克隆DKFZP434C1915)；PARTIAL CDS/C″
5.1    ″GI|14149622|REF|NM_005916.1|人微染色体维持缺陷型(酿
       酒酵母(S.CEREVISIAE))7(M″
5.0    ″GI|4758177|REF|NM_004411.1|人动力蛋白，细胞质的，中间
       体多肽1(DNCI1)，M″
5.0    蛋白质基因产物的人MRNA(PGP)9.5.
5.0    ″GI|5453903|REF|NM_006479.1|人RAD51-相互作用蛋白
       (PIR51)，MRNA″
4.9    ″GI|4502144|REF|NM_001168.1|人含有杆状病毒IAP重复序列
       的5(SURVIVIN)(BIRC5)，MR″
4.9    ″GI|9945386|REF|NM_004482.2|人UDP-N-乙酰基-ALPHA
       -D-半乳糖胺：多肽N-乙酰基GAL″
4.9    ″GI|14327895|REF|NM_031966.1|人细胞周期蛋白B1
       (CCNB1)，MRNA″
4.8    ″GI|6325465|REF|NM_004111.3|人FLAP结构特异性内切酶1
       (FEN1)，MRNA″
4.8    ″GI|4507274|REF|NM_003600.1|人丝氨酸/苏氨酸激酶15
       (STK15)，MRNA″
4.8    ″GI|6466452|REF|NM_002358.2|人MAD2(有丝分裂抑止缺陷
       型，酵母，同系物)-类似物1(MA″
4.7    ″GI|15421859|REF|NM_018454.2|人核仁蛋白ANKT(ANKT)，
       MRNA″
4.7    ″GI|7661807|REF|NM_014176.1|人与泛素结合酶类似的
       HSPC150蛋白(H″
4.7    ″GI|9845284|REF|NM_019885.1|人细胞色素P450类维生素A
       代谢蛋白(P450RAI-2)，″
4.7    ″GI|4505372|REF|NM_002497.1|人NIMA(从未有丝分裂基因A)
       相关激酶2(NEK2)，MR″
4.7    ″GI|4502422|REF|NM_001202.1|人骨形态生成蛋白4(BMP4)，
       MRNA″
4.7    ″GNL|UG|HS#S1970775人  CDNA FLJ10674 FIS，克隆
       NT2RP2006436/CDS＝未知/GB＝AK001536/GI″
4.7    ″GI|4585861|REF|NM_001809.2|人着丝粒蛋白A(17KD)
       (CENPA)，MRNA″
4.6    GNL|UG|HS#S1368141人  MRNA；CDNA DKFZP564P116
       (FROM克隆DKFZP564P116)/CDS＝未知/GB＝A
4.6    ″GI|4507718|REF|NM_003318.1|人TTK蛋白质激酶(TTK)，
       MRNA″
4.6    ″GI|4504896|REF|NM_002266.1|人KARYOPHERIN ALPHA 2
       (RAG COHORT1，IMPORTIN ALPHA1)(KPNA″
4.6    ″GI|5729983|REF|NM_006596.1|人聚合酶(DNA导向的)，
       THETA(POLQ)，MRNA″
4.5    ″GI|4758315|REF|NM_004454.1|人ETS变异体基因5(ETS相
       关分子)(ETV5)，MRNA″
4.5    ″人含转化酸性卷曲螺旋蛋白(TRANSFORMING，ACIDIC
       COILED-COIL CONTAINING PROTEIN)3(TAC″
4.5    ″人驱动蛋白类似物1(KNSL1)，MRNA″
4.5    ″人着丝粒蛋白E(312KD)(CENPE)，MRNA″
4.5    ″人CDNA，3′END/克隆＝IMAGE：1651289/克隆_END＝3′
       /GB＝AI12″
4.4    ″人DISTAL-LESS HOMEO BOX 5(DLX5)，MRNA″
4.4    ″人V-MYB禽成髓细胞性白血病病毒癌基因同系物类似物2″
4.4    ″人血清剥夺反应(磷脂酰丝氨酸结合PRO″
4.4    ″人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ10604(FLJ10604)，
       MRNA″
4.4    ″人核糖核酸酶HI，大亚基(RNASEHI)，MRNA
4.4    ″人ANILLIN(果蝇SCRAPS同系物)，肌动蛋白结合蛋白″
4.4    ″人H4组蛋白家族，成员G(H4FG)，MRNA″
4.3    ″人G蛋白连结受体37(内皮缩血管肽受体B型-″
4.3    ″人泛素载体蛋白(E2-EPF)，MRNA″
4.3    ″人，类似于肿瘤差别表达1，克隆IMAGE：3639252，″
4.2    ″人  假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)MGC2577
       (MGC2577)，MRNA″
4.2    ″人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)FLJ13912(FLJ13912)，
       MRNA″
4.2    ″人ANNEXIN A3(ANXA3)，MRNA″
4.2    ″人STATHMIN1/ONCO蛋白18(STMN1)，MRNA″
4.2    ″GNL|UG|HS#S3837587人，与核糖体蛋白L39类似，克隆
       MGC：20168 IMAGE：4555759，M″
4.2    ″人POLO(果蝇)类似物激酶(PLK)，MRNA″
实施例6【间充质干细胞中各个基因的表达量的测定IV】
以与实施例1相同方法，对本发明的各个基因标记在人源间充质干细胞和人成纤维细胞中的表达进行测定。间充质干细胞/成纤维细胞的表达之比示于表5。表中的-表示的是在间充质干细胞中基因不表达或极少量表达。
表5
(间充质干细胞/成纤维细胞)    (基因名称)
-53.576    ″人蛋白酶复合体(PROSOME，MACROPAIN)26S亚基，ATP
           酶，5(PS″
-45.692    ″人真核翻译起始因子4γ，2(EIF4G″
-27.6354   ″人二氢嘧啶酶类似物3(DPYSL3)，MRNA″
-20.5446   ″人ADAPTOR相关蛋白复合体1，SIGMA2亚基(AP1S2)″
-19.5809    ″人网蛋白1，中间丝结合蛋白，500KD P″
-16.9025    ″人异种核蛋白U(SCAFFOLD ATTAC″
-14.97      ″人假拟蛋白(HYPOTHETICAL PROTEIN)MGC5306
            (MGC5306)，MRNA″
-14.6106    ″人MHCI类多肽相关序列A(MICA)，MRNA″
-13.8886    ″人PRK1相关蛋白(AWP1)，MRNA″
-13.6578    ″人孕酮受体膜成分2(PGRMC2)，MRNA″
-11.4783    ″人多聚谷氨酸结合蛋白1(PQBP1)，MRNA″
-10.2392    ″人S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶1(AMD1)，MRNA″
-9.9506     ″人干扰素诱导的C型肝炎相关MICROTUBULAR AG″
-9.2594     ″人蛋白激酶，AMP-活化的，γ1非催化性亚基
            (NON-CATALYTIC SUBUN)″
-7.518      ″人前胶原-脯氨酸，2-OXOGLUTARATE 4-DIOXYGENASE(脯
            氨酸″
-6.0365    ″人血管内皮分化，溶血磷脂酸G-PROTE″
-5.4442    ″人KIAA0127基因产物(KIAA0127)，MRNA″″″
实施例7【人细胞中间充质干细胞DR的表达的测定】
采用流式细胞仪测定人细胞中间充质干细胞DR的表达。结果示于图11中。
实施例8【在间充质干细胞的分化诱导中个基因的表达的变化】
以与实施例1相同方式进行RT-PCR，测定间充质干细胞的分化诱导中各基因表达的表化。成骨细胞的分化诱导中各基因的表达示于图12-16中。
产业上利用的可能性
近年来，随着再生医疗的发展，间充质干细胞作为可用于多种组织的再生医疗的移植材料受到人们关注。为了将间充质干细胞利用于组织的再生医疗中，必须要开发出确保间充质干细胞有足够数量的技术，同时还必须证实所培养的细胞是间充质干细胞，重要的是检测、分离该间充质干细胞的方法。此外，采用抗体等从多种类型的细胞集团中分离间充质干细胞也是有用的。根据本发明，通过对间充质细胞的特征标记基因进行指示，就可能容易且确实地检测识别间充质干细胞，故而可期待为将间充质干细胞在再生医疗中实用化作出重大贡献。
序列表
<110>独立行政法人科学技术振兴机构(Japan Science and Technology Agency)
     加藤幸夫(Yukio KATO)
     智再如股份公司(Two Cells Co.，Ltd.)
<120>检测间充质干细胞的标记和采用该标记识别间充质干细胞的方法
<130>V320P006US(PCT)
<150>JP2003-63077
<151>2000-03-10
<160>116
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>652
<212>DNA
<213>人
<400>1
gaattgccaa ttccttgttt gtgcaaaatg gatttcatgt caatgaggag tttttgcaaa   60
tgatgaaaaa atattttaat gcagcagtaa atcatgtgga cttcagtcaa aatgtagccg  120
tggccaacta catcaataag tgggtggaga ataacacaaa caatctggtg aaagatttgg    180
tatccccaag ggattttgat gctgccactt atctggccct cattaatgct gtctatttca    240
aggggaactg gaagtcgcag tttaggcctg aaaatactag aaccttttct ttcactaaag    300
atgatgaaag tgaagtccaa attccaatga tgtatcagca aggagaattt tattatgggg    360
aatttagtga tggctccaat gaagctggtg gtatctacca agtcctagaa ataccatatg    420
aaggagatga aataagcatg atgctggtgc tgtccagaca ggaagttcct cttgctactc    480
tggagccatt agtcaaagca cagctggttg aagaatgggc aaactctgtg aagaagcaaa    540
aagtagaagt atacctgccc aggttcacag tggaacagga aattgattta aaagatgttt    600
tgaaggctct tggaataact gaaaattttc atcaaagatg caaattttga ca            652
<210>2
<211>1450
<212>DNA
<213>人
<400>2
ctggatagaa cagctcaagc cttgccactt cgggcttctc actgcagctg ggcttggact     60
tcggagtttt gccattgcca gtgggacgtc tgagactttc tccttcaagt acttggcaga    120
tcactctctt agcagggtct gcgcttcgca gccgggatga agctggtttc cgtcgccctg    180
atgtacctgg gttcgctcgc cttcctaggc gctgacaccg ctcggttgga tgtcgcgtcg    240
gagtttcgaa agaagtggaa taagtgggct ctgagtcgtg ggaagaggga actgcggatg    300
tccagcagct accccaccgg gctcgctgac gtgaaggccg ggcctgccca gacccttatt    360
cggccccagg acatgaaggg tgcctctcga agccccgaag acagcagtcc ggatgccgcc    420
cgcatccgag tcaagcgcta ccgccagagc atgaacaact tccagggcct ccggagcttt    480
ggctgccgct tcgggacgtg cacggtgcag aagctggcac accagatcta ccagttcaca    540
gataaggaca aggacaacgt cgcccccagg agcaagatca gcccccaggg ctacggccgc    600
cggcgccggc gctccctgcc cgaggccggc ccgggtcgga ctctggtgtc ttctaagcca    660
caagcacacg gggctccagc ccccccgagt ggaagtgctc cccactttct ttaggattta    720
ggcgcccatg gtacaaggaa tagtcgcgca agcatcccgc tggtgcctcc cgggacgaag    780
gacttcccga gcggtgtggg gaccgggctc tgacagccct gcggagaccc tgagtccggg    840
aggcaccgtc cggcggcgag ctctggcttt gcaagggccc ctccttctgg gggcttcgct    900
tccttagcct tgctcaggtg caagtgcccc agggggcggg gtgcagaaga atccgagtgt     960
ttgccaggct taaggagagg agaaactgag aaatgaatgc tgagaccccc ggagcagggg    1020
tctgagccac agccgtgctc gcccacaaac tgatttctca cggcgtgtca ccccaccagg    1080
gcgcaagcct cactattact tgaactttcc aaaacctaaa gaggaaaagt gcaatgcgtg    1140
ttgtacatac agaggtaact atcaatattt aagtttgttg ctgtcaagat tttttttgta    1200
acttcaaata tagagatatt tttgtacgtt atatattgta ttaagggcat tttaaaagca    1260
attatattgt cctcccccta ttttaagacg tgaatgtctc agcgaggtgt aaagttgttc    1320
gccgcgtgga atgtgagtgt gtttgtgtgc atgaaagaga aagactgatt acctcctgtg    1380
tggaagaagg aaacaccgag tctctgtata atctatttac ataaaatggg tgatatgcga    1440
acagcaaacc                                                           1450
<210>3
<211>185
<212>PRT
<213>人
<400>3
Met Lys Leu Val Ser Val Ala Leu Met Tyr Leu Gly Ser Leu Ala Phe
  1               5                  10                  15
Leu Gly Ala Asp Thr Ala Arg Leu Asp Val Ala Ser Glu Phe Arg Lys
             20                  25                  30
Lys Trp Asn Lys Trp Ala Leu Ser Arg Gly Lys Arg Glu Leu Arg Met
         35                  40                  45
Ser Ser Ser Tyr Pro Thr Gly Leu Ala Asp Val Lys Ala Gly Pro Ala
     50                  55                  60
Gln Thr Leu Ile Arg Pro Gln Asp Met Lys Gly Ala Ser Arg Ser Pro
 65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ser Pro Asp Ala Ala Arg Ile Arg Val Lys Arg Tyr Arg
                 85                  90                  95
Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys Arg Phe
            100                 105                 110
Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln Phe Thr
        115                 120                 125
Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser Pro Gln
    130                 135                 140
Gly Tyr Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser Leu Pro Glu Ala Gly Pro Gly
145                 150                 155                 160
Arg Thr Leu Val Ser Ser Lys Pro Gln Ala His Gly Ala Pro Ala Pro
                165                 170                 175
Pro Ser Gly Ser Ala Pro His Phe Leu
            180                 185
<210>4
<211>809
<212>DNA
<213>人
<400>4
atgcctgtct tcatcttgaa agaaaagctc caggtccctt ctccagccac ccagccccaa     60
gatggtgatg ctgctgctgc tgctttccgc actggctggc ctcttcggtg cggcagaggg    120
acaagcattt catcttggga agtgccccaa tcctccggtg caggagaatt ttgacgtgaa    180
taagtatctc ggaagatggt acgaaattga gaagatccca acaacctttg agaatggacg    240
ctgcatccag gccaactact cactaatgga aaacggaaag atcaaagtgt taaaccagga    300
gttgagagct gatggaactg tgaatcaaat cgaaggtgaa gccaccccag ttaacctcac    360
agagcctgcc aagctggaag ttaagttttc ctggtttatg ccatcggcac cgtactggat    420
cctggccacc gactatgaga actatgccct cgtgtattcc tgtacctgca tcatccaact    480
ttttcacgtg gattttgctt ggatcttggc aagaaaccct aatctccctc cagaaacagt    540
ggactctcta aaaaatatcc tgacttctaa taacattgat gtcaagaaaa tgacggtcac    600
agaccaggtg aactgcccca agctctcgta accaggttct acagggaggc tgcacccact    660
ccatgttact tctgcttcgc tttcccctac cccacccccc cccataaaga caaaccaatc    720
aaccacgaca aaggaagttg acctaaacat gtaaccatgc cctaccctgt taccttgcta    780
gctgcaaaat aaacttgttg ctgacctgc                                      809
<210>5
<211>189
<212>PRT
<213>人
<400>5
Met Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Ser Ala Leu Ala Gly Leu Phe Gly
 1                5                  10                  15
Ala Ala Glu Gly Gln Ala Phe His Leu Gly Lys Cys Pro Asn Pro Pro
             20                  25                  30
Val Gln Glu Asn Phe Asp Val Asn Lys Tyr Leu Gly Arg Trp Tyr Glu
         35                  40                  45
Ile Glu Lys Ile Pro Thr Thr Phe Glu Asn Gly Arg Cys Ile Gln Ala
     50                  55                  60
Asn Tyr Ser Leu Met Glu Asn Gly Lys Ile Lys Val Leu Asn Gln Glu
 65                  70                  75                  80
Leu Arg Ala Asp Gly Thr Val Asn Gln Ile Glu Gly Glu Ala Thr Pro
                 85                  90                  95
Val Asn Leu Thr Glu Pro Ala Lys Leu Glu Val Lys Phe Ser Trp Phe
            100                 105                 110
Met Pro Ser Ala Pro Tyr Trp Ile Leu Ala Thr Asp Tyr Glu Asn Tyr
        115                 120                 125
Ala Leu Val Tyr Ser Cys Thr Cys Ile Ile Gln Leu Phe His Val Asp
    130                 135                 140
Phe Ala Trp Ile Leu Ala Arg Asn Pro Asn Leu Pro Pro Glu Thr Val
145                 150                 155                 160
Asp Ser Leu Lys Asn Ile Leu Thr Ser Asn Asn Ile Asp Val Lys Lys
                165                 170                 175
Met Thr Val Thr Asp Gln Val Asn Cys Pro Lys Leu Ser
            180                 185
<210>6
<211>2127
<212>DNA
<213>人
<400>6
gaaagatgga tcactccagc tcaaagagaa catgtgggaa tgaaaggaca ggctgggccc     60
aaaggagaaa agggtgatgc tggggaggag cttcctggcc ctcctgaacc ttctgggcct    120
gttggaccca cggcaggagc agaagcagag ggctctggcc taggctgggg ctcggacgtc    180
ggctctggct ctggtgacct ggtgggcagt gagcagctgc tgagaggtcc tccaggaccc    240
ccagggccac ctggcttacc tgggattcca ggaaaaccag gaactgatgt tttcatggga    300
ccccctggat ctcctggaga ggatggacct gctggtgaac ctgggccccc gggccctgag    360
ggacagcctg gagttgatgg agccaccggc cttcccggga tgaaagggga gaagggagca    420
agagggccta atggctcagt tggtgaaaag ggtgaccctg gcaacagagg cttacctgga    480
cccccgggga aaaagggaca agctggccct cctggggtca tgggaccccc agggcctcct    540
ggaccccctg ggcccccagg ccctggatgc acaatgggac ttggattcga ggataccgaa    600
ggctctggaa gcacccagct attgaatgaa cccaaactct ccagaccaac ggctgcaatt    660
ggtctcaaag gagagaaagg agaccgggga cccaagggag aaagggggat ggatggagcc    720
agtattgtgg gaccccctgg gccgagaggg ccacctgggc acatcaaggt cttgtctaat    780
tccttgatca atatcaccca tggattcatg aatttctcgg acattcctga gctggtgggg    840
cctccggggc cggacgggtt gcctgggctg ccaggatttc caggtcctag aggaccaaaa    900
ggtgacactg gtttacctgg ctttccagga ctaaaaggag aacagggcga gaagggagag    960
ccgggtgcca tcctgacaga ggacattcct ctggaaaggc tgatggggaa aaagggtgaa   1020
cctggaatgc atggagcccc aggaccaatg gggcccaaag gaccaccagg acataaagga   1080
gaatttggcc ttcccgggcg acctggtcgc ccaggactga atggcctcaa gggtaccaaa    1140
ggagdtccag gggtcattat gcagggccca cctggcttac ctggccctcc aggcccccct    1200
gggccacctg gagctgtgat taacatcaaa ggagccattt tcccaatacc cgtccgacca    1260
cactgcaaaa tgccagttga tactgctcat cctgggagtc cagagctcat cacttttcac    1320
ggtgttaaag gagagaaagg atcctggggt cttcctggct caaagggaga aaaaggcgac    1380
cagggagccc agggaccacc aggtcctcca cttgatctag cttacctgag acactttctg    1440
aacaacttga agggggagaa tggagacaag gggttcaaag gtgaaaaagg agaaaaagga    1500
gacattaatg gcagcttcct tatgtctggg cctccaggcc tgcccggaaa tccaggcccg    1560
gctggccaaa aaggggagac agtcgttggg ccccaaggac ccccaggtgc tcctggtctg    1620
cctgggccac ctggctttgg aagacctggt gatcctgggc caccggggcc cccggggcca    1680
ccaggacctc cagctatcct gggagcagct gtggcccttc caggtccccc tggccctcca    1740
ggacagccag ggcttcccgg atccagaaac ctggtcacag cattcagcaa catggatgac    1800
atgctgcaga aagcgcattt ggttatagaa ggaacattca tctacctgag ggacagcact    1860
gagtttttca ttcgtgttag agatggctgg aaaaaattac agctgggaga actgatcccc    1920
attcctgccg acagccctcc accccctgcg ctttccagca acccacatca gcttctgcct    1980
ccaccaaacc ctatttcaag tgccaattat gagaagcctg ctctgcattt ggctgctctg    2040
aacatgccat tttctgggga cattcgagct gattttcagt gcttcaagca ggccagagct    2100
gcaggactgt tgtccaccta ccgagca                                        2127
<210>7
<211>2384
<212>DNA
<213>人
<400>7
cctgctcgtt cctgacagaa ttaacggcac agccaacaag atgaacggag ctttggatca     60
ctcagaccaa ccagacccag atgccattaa gatgtttgtc ggacagatcc cccggtcatg    120
gtcggaaaag gagctgaaag aactttttga gccttacgga gccgtctacc agatcaacgt    180
cctccgggac cggagtcaga accctccgca gagtaaaggt tgttgtttcg taacatttta    240
tacaagaaaa gctgcacttg aggcccagaa tgcactgcac aatattaaaa ctttacctgg    300
gatgcatcat cccattcaga tgaaacctgc agatagtgaa aagtccaacg ctgtggaaga    360
cagaaaattg ttcataggaa tggtttcgaa gaaatgtaat gagaacgaca tcagggtgat    420
gttctctcca tttggccaga tagaagaatg ccggatcctc cggggacctg atgggctgag    480
tcgaggctgt gcgtttgtca cattttctac aagggcaatg gcacagaatg caatcaaagc    540
catgcatcag tctcagacca tggagggctg ctcttcacct atcgtggtga agtttgctga    600
cactcagaag gacaaagagc aaaggcgcct ccagcagcag ctcgctcagc agatgcagca    660
gctcaacact gccacctggg ggaacctgac agggctgggc ggactgaccc cacagtatct    720
ggcgctcctg cagcaggcca cctcctccag caacctgggt gcgttcagcg gcattcaaca    780
aatggcaggc atgaatgctt tacagttgca gaacctggcg acgctggctg ctgctgcagc    840
tgcggcccag acctcagcca ccagcaccaa tgcaaaccct ctctctacca cgagcagcgc    900
cctgggagcc ctcacgagtc ccgtggctgc ttcaaccccc aactccactg ctggtgcagc    960
catgaactcc ttgacctctc tcgggactct gcaaggactg gctggagcca ctgttggact   1020
gaataatatt aatgcactag cagttgctca aatgctctca ggtatggcgg ctctgaatgg   1080
aggacttggc gccacaggct tgacgaatgg cacggctggc accatggacg ccctcaccca   1140
ggcctactca ggaattcaac agtacgcagc cgccgcgctg cccactctgt acagccagag    1200
cctgctgcag cagcagagcg ctgcaggcag ccagaaggaa ggtccagagg gggcaaacct    1260
ctttatttac caccttccac aggaatttgg agaccagcac attctgcaga tgttcatgcc    1320
ttttggaaat gttatctctg ctaaagtctt cattgacaaa cagaccaatc tgagcaagtg    1380
ctttggtttt gttagctacg acaatccagt ctctgcacaa gctgctatcc aagctatgaa    1440
tggctttcag atcggcatga aacgcttgaa ggtgcagctg aagcgttcca aaaacgacag    1500
caaaccttac tgatcctaac cccagaggct ccctgctctc attttagctt tcttaggaca    1560
tcttcatgcc cgttagttca tcgtttgcct agcatgtccc tgtggcgtct caaaaaaaag    1620
tttcatcgtc ccgtcattgt ttctgatgtc tttctgacct cacatcatat ttggttctcc    1680
tactgacctt tgatctagtt tgacctttga aatttgcatg tgacctcatc tagctatgaa    1740
ttctgggaag tcaatgtgaa aaacattgct gcattcatgc aagactgaaa tttattatta    1800
gacaaattca ttatagaaaa aacctgtggc aaaaacgttt ctttcttatt ttttttcttt    1860
tcctaaaaca gacttgaaag tattatacag ggattggcat tcttcccggt cactggtaac    1920
aatagcaata tgtgtccagg gacacagaat gttggtttct aacagactac ttccaaaaac    1980
agtttgagaa aaaaactgtc tgattttaag tctctagagg tctgtaatag tttttacatt    2040
tttcaggcag tgtaaagttt tttgataagg ccattttagg tggctcactt tctcattaag    2100
atatatatat agaaccactt tttgtagatt agtataagaa aaatatttac cctgttttgg    2160
ggcaaatgct acctatttgt gtcacctttt gctgaactca cagttagaca atccatggtt    2220
taatgcacat gaaattacct atattttata ctgtttcaat gtacaggaga aaggttactg    2280
taaactgtgt tatgttggtg cttctgtgaa ttaagttgtg gtttcatcat gagtcttaat    2340
gttctttgtt gataagacaa gtttagaatt ggtttactta atac                     2384
<210>8
<211>490
<212>PRT
<213>人
<400>8
Met Asn Gly Ala Leu Asp His Ser Asp Gln Pro Asp Pro Asp Ala Ile
  1               5                  10                  15
Lys Met Phe Val Gly Gln Ile Pro Arg Ser Trp Ser Glu Lys Glu Leu
             20                  25                  30
Lys Glu Leu Phe Glu Pro Tyr Gly Ala Val Tyr Gln Ile Asn Val Leu
         35                  40                  45
Arg Asp Arg Ser Gln Asn Pro Pro Gln Ser Lys Gly Cys Cys Phe Val
     50                  55                  60
Thr Phe Tyr Thr Arg Lys Ala Ala Leu Glu Ala Gln Asn Ala Leu His
 65                  70                  75                  80
Asn Ile Lys Thr Leu Pro Gly Met His His Pro Ile Gln Met Lys Pro
                 85                  90                  95
Ala Asp Ser Glu Lys Ser Asn Ala Val Glu Asp Arg Lys Leu Phe Ile
            100                 105                  110
Gly Met Val Ser Lys Lys Cys Asn Glu Asn Asp Ile Arg Val Met Phe
        115                 120                 125
Ser Pro Phe Gly Gln Ile Glu Glu Cys Arg Ile Leu Arg Gly Pro Asp
    130                 135                 140
Gly Leu Ser Arg Gly Cys Ala Phe Val Thr Phe Ser Thr Arg Ala Met
145                 150                 155                 160
Ala Gln Asn Ala Ile Lys Ala Met His Gln Ser Gln Thr Met Glu Gly
                165                 170                 175
Cys Ser Ser Pro Ile Val Val Lys Phe Ala Asp Thr Gln Lys Asp Lys
            180                 185                 190
Glu Gln Arg Arg Leu Gln Gln Gln Leu Ala Gln Gln Met Gln Gln Leu
        195                 200                 205
Asn Thr Ala Thr Trp Gly Asn Leu Thr Gly Leu Gly Gly Leu Thr Pro
    210                 215                 220
Gln Tyr Leu Ala Leu Leu Gln Gln Ala Thr Ser Ser Ser Asn Leu Gly
225                 230                 235                 240
Ala Phe Ser Gly Ile Gln Gln Met Ala Gly Met Asn Ala Leu Gln Leu
                245                 250                 255
Gln Asn Leu Ala Thr Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gln Thr Ser
            260                 265                 270
Ala Thr Ser Thr Asn Ala Asn Pro Leu Ser Thr Thr Ser Ser Ala Leu
        275                 280                 285
Gly Ala Leu Thr Ser Pro Val Ala Ala Ser Thr Pro Asn Ser Thr Ala
    290                 295                 300
Gly Ala Ala Met Asn Ser Leu Thr Ser Leu Gly Thr Leu Gln Gly Leu
305                 310                 315                 320
Ala Gly Ala Thr Val Gly Leu Asn Asn Ile Asn Ala Leu Ala Val Ala
                325                 330                 335
Gln Met Leu Ser Gly Met Ala Ala Leu Asn Gly Gly Leu Gly Ala Thr
            340                 345                 350
Gly Leu Thr Asn Gly Thr Ala Gly Thr Met Asp Ala Leu Thr Gln Ala
        355                 360                 365
Tyr Ser Gly Ile Gln Gln Tyr Ala Ala Ala Ala Leu Pro Thr Leu Tyr
    370                 375                 380
Ser Gln Ser Leu Leu Gln Gln Gln Ser Ala Ala Gly Ser Gln Lys Glu
385                 390                 395                 400
Gly Pro Glu Gly Ala Asn Leu Phe Ile Tyr His Leu Pro Gln Glu Phe
                405                 410                 415
Gly Asp Gln His Ile Leu Gln Met Phe Met Pro Phe Gly Asn Val Ile
            420                 425                 430
Ser Ala Lys Val Phe Ile Asp Lys Gln Thr Asn Leu Ser Lys Cys Phe
        435                 440                 445
Gly Phe Val Ser Tyr Asp Asn Pro Val Ser Ala Gln Ala Ala Ile Gln
    450                 455                 460
Ala Met Asn Gly Phe Gln Ile Gly Met Lys Arg Leu Lys Val Gln Leu
465                 470                 475                 480
Lys Arg Ser Lys Asn Asp Ser Lys Pro Tyr
                485                 490
<210>9
<211>419
<212>DNA
<213>人
<400>9
tttttttttt tttttttcag catagtgaac gttaatattt ttatttcttt tgtaatgaag     60
agtacaaatg gttgggagca ggacatcaca ggaggaggaa agatagcgcc atctctgcag    120
aagaactcct gagccacaca cagaaggaaa gttgatcccc agggcagcct ttcccaccaa    180
aaaaatcagg cccaatccag gagagtttgc cagtagctcc ccagggttcc agggtgtctg    240
ccagccttcc taggaatcgt gggcaggctt ctaggtgcca gtgactcaaa ctcctttttc    300
cacttcccag ttcaacctgg tcactctcat ccccacaagt tcccaatctg aatcccattc    360
tctgaccatt ctctgcttcc ttgtttttaa tctcatttga gagtgatcct cacgggttc     419
<210>10
<211>762
<212>DNA
<213>人
<400>10
gccgggagga gcggcgcgcg ctcggacctc tcccgccctg ctcgttcgct ctccagcttg     60
ggatggccgg ctacctgcgg gtcgtgcgct cgctctgcag agcctcaggc tcgcggccgg    120
cctgggcgcc ggcggccctg acagccccca cctcgcaaga gcagccgcgg cgccactatg    180
ccgacaaaag gatcaaggtg gcgaagccgt ggtggagatg gatggtgatg agatgacccg    240
tattatctgg cagttcatca aggagaagct catcctgccc cacgtggaca tccagctaaa    300
gtattttgac ctcgggctcc caaaccgtga ccagactgat gaccaggtca ccattgactc    360
tgcactggcc acccagaagt acagtgtggc tgtcaagtgt gccaccatca cccctgatga    420
ggcccgtgtg gaagagttca agctgaagaa gatgtggaaa agtcccaatg gaactatccg    480
gaacatcctg ggggggactg tcttccggga gcccatcatc tgcaaaaaca tcccacgcct    540
agtccctggc tggaccaagc ccatcaccat tggcaggcac gcccatggcg accagtacaa    600
ggccacagac tttgtggcag accgggccgg cactttcaaa atggtcttca ccccaaaaga    660
tggcagtggt gtcaaggagt gggaagtgta caacttcccc gcaggcgcgc gtgggcatgg    720
gcatgtacma caccgacgag tccatctcag gttttgcgca ca                       762
<210>11
<211>689
<212>DNA
<213>人
<400>11
aactccatct ttgaaaaaca tttaataatg taatgtgttt gtggtacagg gtgagtacag     60
atgcacagga ggccataggg tttaggcaaa ggggagcaca aaagttgaag atgaggcgct    120
gccatcaatg ctgggacttc aggccaaggg caggaactga ggaagccaca agggaggaca    180
ttttctgcag ttgctgaacc agtagcaact aggtcctgag aaagccctct ctcgtggaag    240
aataacagcc aggcgggaaa gcttttcatc ctgcaaagct ggggaagaag attcttcctt    300
aaattgtcat ctgcacttca gctcaggaat cctgttggct gaagtccaga gtgtcctttc    360
tgattcctga agtagatgaa cagcccggcc ccaaggaaga gcaggcccag cacaaagccc    420
ccgactccac tcagcatctt gctctgtgca gattcagacc gtgcactcca ttccactgtg    480
agagggctcg ttacgcttgg gtgctccact tggcaggtgt aaacctctcc actccgagga    540
actgtttcta gcatcaccag ggtctggaat gtccagtctc cattctggat caggcgcgtg    600
gacaccaccc cagccttctc ttcctgcccg ttccggaacc agctgacttc aatgctgcct    660
ggatagaaac cactcacaga gcagaccag                                      689
<210>12
<211>1959
<212>DNA
<213>人
<400>12
gggagcacgc gggagtccgg ctgcccaccc atggcagggt ctaccagaag ggccacgagc     60
tggtgttggc caatattgct gaaagtgatg ctggtgtcta cacctgccac gcggccaacc    120
tggctggtca gcggagacag gatgtcaaca tcactgtggc cactgtgccc tcctggctga    180
agaagcccca agacagccag ctggaggagg gcaaacccgg ctacttggat tgcctgaccc    240
aggccacacc aaaacctaca gttgtctggt acagaaacca gatgctcatc tcagaggact    300
cacggttcga ggtgttcctg gcaaaggctc agggcttgga ggagggagtg gcagagaccc    360
tggtacttgt gaagagcctg cagagcaagg atgagcagca gcagctggac ttccggaggg    420
agttggagat gtttgggaag ctgaaccacg ccaacgtggt gcggctcctg gggctgtgcc    480
gggaggctga gccccactac atggtgctgg aatatgtgga tctgggagac ctcaagcagt    540
tcctgaggat ttccaagagc aaggatgaaa aattgaagtc acagcccctc agcaccaagc    600
agaaggtggc cctatgcacc caggtagccc tgggcatgga gcacctgtcc aacaaccgct    660
ttgtgcataa ggacttggct gcgcgtaact gcctggtcag tgcccagaga caagtgaagg    720
tgtctgccct gggcctcagc aaggatgtgt acaacagtga gtactaccac ttccgccagg    780
cctgggtgcc gctgcgctgg atgtcccccg aggccatcct ggagggtgac ttctctacca    840
agtctgatgt ctgggccttc ggtgtgctga tgtgggaagt gtttacacat ggagagatgc    900
cccatggtgg gcaggcagat gatgaagtac tggcagattt gcaggctggg aaggctagac    960
ttcctcagcc cgagggctgc ccttccaaac tctatcggct gatgcagcgc tgctgggccc   1020
tcagccccaa ggaccggccc tccttcagtg agattgccag cgccctggga gacagcaccg   1080
tggacagcaa gccgtgagga gggagcccgc tcaggatggc ctgggcaggg gaggacatct   1140
ctagagggaa gctcacagca tgatgggcaa gatccctgtc ctcctgggcc ctgaggcccc   1200
tgccctagtg caacaggcat tgctgaggtc tgagcagggc ctggcctttc ctcctcttcc    1260
tcaccctcat cctttgggag gctgacttgg acccaaactg ggcgactagg gctttgagct    1320
gggcagtttt ccctgccacc tcttcctcta tcagggacag tgtgggtgcc acaggtaacc    1380
ccaatttctg gccttcaact tctccccttg accgggtcca actctgccac tcatctgcca    1440
actttgcctg gggagggcta ggcttgggat gagctgggtt tgtggggagt tccttaatat    1500
tctcaagttc tgggcacaca gggttaatga gtctcttggc ccactggtcc cacttggggg    1560
tctagaccag gattatagag gacacagcaa gtgagtcctc cccactctgg gcttgtgcac    1620
actgacccag acccacgtct tccccaccct tctctccttt cctcatccta agtgcctggc    1680
agatgaagga gttttcagga gcttttgaca ctatataaac cgcccttttt gtatgcacca    1740
cgggcggctt ttatatgtaa ttgcagcgtg gggtgggtgg gcatgggagg taggggtggg    1800
ccctggagat gaggagggtg ggccatcctt accccacact tttattgttg tcgttttttg    1860
tttgttttgt ttttttgttt ttgtttttgt ttttacactc gctgctctca ataaataagc    1920
cttttttaca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa                           1959
<210>13
<211>364
<212>PRT
<213>人
<400>13
Glu His Ala Gly Val Arg Leu Pro Thr His Gly Arg Val Tyr Gln Lys
  1               5                  10                  15
Gly His Glu Leu Val Leu Ala Asn Ile Ala Glu Ser Asp Ala Gly Val
             20                  25                  30
Tyr Thr Cys His Ala Ala Asn Leu Ala Gly Gln Arg Arg Gln Asp Val
         35                  40                  45
Asn Ile Thr Val Ala Thr Val Pro Ser Trp Leu Lys Lys Pro Gln Asp
     50                  55                  60
Ser Gln Leu Glu Glu Gly Lys Pro Gly Tyr Leu Asp Cys Leu Thr Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Thr Pro Lys Pro Thr Val Val Trp Tyr Arg Asn Gln Met Leu Ile
                 85                  90                  95
Ser Glu Asp Ser Arg Phe Glu Val Phe Leu Ala Lys Ala Gln Gly Leu
            100                 105                 110
Glu Glu Gly Val Ala Glu Thr Leu Val Leu Val Lys Ser Leu Gln Ser
        115                 120                 125
Lys Asp Glu Gln Gln Gln Leu Asp Phe Arg Arg Glu Leu Glu Met Phe
    130                 135                 140
Gly Lys Leu Asn His Ala Asn Val Val Arg Leu Leu Gly Leu Cys Arg
145                 150                 155                 160
Glu Ala Glu Pro His Tyr Met Val Leu Glu Tyr Val Asp Leu Gly Asp
                165                 170                 175
Leu Lys Gln Phe Leu Arg Ile Ser Lys Ser Lys Asp Glu Lys Leu Lys
            180                 185                 190
Ser Gln Pro Leu Ser Thr Lys Gln Lys Val Ala Leu Cys Thr Gln Val
        195                 200                 205
Ala Leu Gly Met Glu His Leu Ser Asn Asn Arg Phe Val His Lys Asp
    210                 215                 220
Leu Ala Ala Arg Asn Cys Leu Val Ser Ala Gln Arg Gln Val Lys Val
225                 230                 235                 240
Ser Ala Leu Gly Leu Ser Lys Asp Val Tyr Asn Ser Glu Tyr Tyr His
                245                 250                 255
Phe Arg Gln Ala Trp Val Pro Leu Arg Trp Met Ser Pro Glu Ala Ile
            260                 265                 270
Leu Glu Gly Asp Phe Ser Thr Lys Ser Asp Val Trp Ala Phe Gly Val
        275                 280                 285
Leu Met Trp Glu Val Phe Thr His Gly Glu Met Pro His Gly Gly Gln
    290                 295                 300
Ala Asp Asp Glu Val Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Lys Ala Arg Leu
305                 310                 315                 320
Pro Gln Pro Glu Gly Cys Pro Ser Lys Leu Tyr Arg Leu Met Gln Arg
                325                 330                 335
Cys Trp Ala Leu Ser Pro Lys Asp Arg Pro Ser Phe Ser Glu Ile Ala
            340                 345                 350
Ser Ala Leu Gly Asp Ser Thr Val Asp Ser Lys Pro
        355                 360
<210>14
<211>430
<212>DNA
<213>人
<400>14
ggttgatgtt tcaacaaagt agttttaagt tccatccatt cagattttaa gcattttgat     60
ttatttaaaa agggattgtt catagaaaaa aattactttg aacagtatac aggactggtg    120
gagattggct atttcacaac atcagacagt acaatcagta tctgccatat ggctggtctc    180
tgtagacgcc ctttgctgtc ctcgctgaag gtgccttgtg tcttgagtta gtccactctt    240
cttgcccgta ggaatcataa gtctcctcac tgagtccatg tccgtaatca tagtaatcag    300
caccactttg ggctggggtg ctatagctgt tatcatagga atcataactc tgttcatcat    360
aagcagtgcc atatccatca tcatagtcat attctccata agtctcttgg tgtcgggggt    420
ggcggtggaa                                                           430
<210>15
<211>616
<212>DNA
<213>人
<400>15
ggtatgatga ccaaacataa aaagtgtttt ataattgttg gtgttttaat aacaactaat     60
attattactc tgatagttaa actaactcga gattctcaga gtttatgccc ctatgattgg    120
attggtttcc aaaacaaatg ctattatttc tctaaagaag aaggagattg gaattcaagt    180
aaatacaact gttccactca acatgccgac ctaactataa ttgacaacat agaagaaatg    240
aattttctta ggcggtataa atgcagttct gatcactgga ttggactgaa gatggcaaaa    300
aatcgaacag gacaatgggt agatggagct acatttacca aatcgtttgg catgagaggg    360
agtgaaggat gtgcctacct cagcgatgat ggtgcagcaa cagctagatg ttacaccgaa    420
agaaaatgga tttgcaggaa aagaatacac taagttaatg tctaagataa tggggaaaat    480
agaaaataac attattaagt gtaaaaccag caaagtactt ttttaattaa acaaagttcg    540
agttttgtac ctgtctggtt aattctgctt acgtgtcagg ctacacataa aagccacttc    600
aaagattggc aaaaaa                                                    616
<400>16
Met Met Thr Lys His Lys Lys Cys Phe Ile Ile Val Gly Val Leu Ile
  1               5                  10                  15
Thr Thr Asn Ile Ile Thr Leu Ile Val Lys Leu Thr Arg Asp Ser Gln
             20                  25                  30
Ser Leu Cys Pro Tyr Asp Trp Ile Gly Phe Gln Asn Lys Cys Tyr Tyr
         35                  40                  45
Phe Ser Lys Glu Glu Gly Asp Trp Asn Ser Ser Lys Tyr Asn Cys Ser
     50                  55                  60
Thr Gln His Ala Asp Leu Thr Ile Ile Asp Asn Ile Glu Glu Met Asn
 65                  70                  75                  80
Phe Leu Arg Arg Tyr Lys Cys Ser Ser Asp His Trp Ile Gly Leu Lys
                 85                  90                  95
Met Ala Lys Asn Arg Thr Gly Gln Trp Val Asp Gly Ala Thr Phe Thr
            100                 105                 110
Lys Ser Phe Gly Met Arg Gly Ser Glu Gly Cys Ala Tyr Leu Ser Asp
        115                 120                 125
Asp Gly Ala Ala Thr Ala Arg Cys Tyr Thr Glu Arg Lys Trp Ile Cys
    130                 135                 140
Arg Lys Arg Ile His
145
<210>17
<211>1973
<212>DNA
<213>人
<400>17
gggatattgg agtagcaaga ggctgggaag ccatcactta ccttgcactg agaaagaaga     60
caaaggccag tatgcacagc tttcctccac tgctgctgct gctgttctgg ggtgtggtgt    120
ctcacagctt cccagcgact ctagaaacac aagagcaaga tgtggactta gtccagaaat    180
acctggaaaa atactacaac ctgaagaatg atgggaggca agttgaaaag cggagaaata    240
gtggcccagt ggttgaaaaa ttgaagcaaa tgcaggaatt ctttgggctg aaagtgactg    300
ggaaaccaga tgctgaaacc ctgaaggtga tgaagcagcc cagatgtgga gtgcctgatg    360
tggctcagtt tgtcctcact gaggggaacc ctcgctggga gcaaacacat ctgacctaca    420
ggattgaaaa ttacacgcca gatttgccaa gagcagatgt ggaccatgcc attgagaaag    480
ccttccaact ctggagtaat gtcacacctc tgacattcac caaggtctct gagggtcaag    540
cagacatcat gatatctttt gtcaggggag atcatcggga caactctcct tttgatggac    600
ctggaggaaa tcttgctcat gcttttcaac caggcccagg tattggaggg gatgctcatt    660
ttgatgaaga tgaaaggtgg accaacaatt tcagagagta caacttacat cgtgttgcgg    720
ctcatgaact cggccattct cttggactct cccattctac tgatatcggg gctttgatgt    780
accctagcta caccttcagt ggtgatgttc agctagctca ggatgacatt gatggcatcc    840
aagccatata tggacgttcc caaaatcctg tccagcccat cggcccacaa accccaaaag    900
cgtgtgacag taagctaacc tttgatgcta taactacgat tcggggagaa gtgatgttct    960
ttaaagacag attctacatg cgcacaaatc ccttctaccc ggaagttgag ctcaatttca    1020
tttctgtttt ctggccacaa ctgccaaatg ggcttgaagc tgcttacgaa tttgccgaca    1080
gagatgaagt ccggtttttc aaagggaata agtactgggc tgttcaggga cagaatgtgc    1140
tacacggata ccccaaggac atctacagct cctttggctt ccctagaact gtgaagcata    1200
tcgatgctgc tctttctgag gaaaacactg gaaaaaccta cttctttgtt gctaacaaat    1260
actggaggta tgatgaatat aaacgatcta tggatccagg ttatcccaaa atgatagcac    1320
atgactttcc tggaattggc cacaaagttg atgcagtttt catgaaagat ggatttttct    1380
atttctttca tggaacaaga caatacaaat ttgatcctaa aacgaagaga attttgactc    1440
tccagaaagc taatagctgg ttcaactgca ggaaaaattg aacattacta atttgaatgg    1500
aaaacacatg gtgtgagtcc aaagaaggtg ttttcctgaa gaactgtcta ttttctcagt    1560
catttttaac ctctagagtc actgatacac agaatataat cttatttata cctcagtttg    1620
catatttttt tactatttag aatgtagccc tttttgtact gatataattt agttccacaa    1680
atggtgggta caaaaagtca agtttgtggc ttatggattc atataggcca gagttgcaaa    1740
gatcttttcc agagtatgca actctgacgt tgatcccaga gagcagcttc agtgacaaac    1800
atatcctttc aagacagaaa gagacaggag acatgagtct ttgccggagg aaaagcagct    1860
caagaacaca tgtgcagtca ctggtgtcac cctggatagg caagggataa ctcttctaac    1920
acaaaataag tgttttatgt ttggaataaa gtcaaccttg tttctactgt ttt           1973
<210>18
<211>469
<212>PRT
<213>人
<400>18
Met His Ser Phe Pro Pro Leu Leu Leu Leu Leu Phe Trp Gly Val Val
1               5                   10                  15
Ser His Ser Phe Pro Ala Thr Leu Glu Thr Gln Glu Gln Asp Val Asp
            20                  25                  30
Leu Val Gln Lys Tyr Leu Glu Lys Tyr Tyr Asn Leu Lys Asn Asp Gly
        35                  40                  45
Arg Gln Val Glu Lys Arg Arg Asn Ser Gly Pro Val Val Glu Lys Leu
    50                  55                  60
Lys Gln Met Gln Glu Phe Phe Gly Leu Lys Val Thr Gly Lys Pro Asp
65                  70                  75                  80
Ala Glu Thr Leu Lys Val Met Lys Gln Pro Arg Cys Gly Val Pro Asp
                85                  90                  95
Val Ala Gln Phe Val Leu Thr Glu Gly Asn Pro Arg Trp Glu Gln Thr
            100                 105                 110
His Leu Thr Tyr Arg Ile Glu Asn Tyr Thr Pro Asp Leu Pro Arg Ala
        115                 120                 125
Asp Val Asp His Ala Ile Glu Lys Ala Phe Gln Leu Trp Ser Asn Val
    130                 135                 140
Thr Pro Leu Thr Phe Thr Lys Val Ser Glu Gly Gln Ala Asp Ile Met
145                 150                 155                 160
Ile Ser Phe Val Arg Gly Asp His Arg Asp Asn Ser Pro Phe Asp Gly
                165                 170                 175
Pro Gly Gly Asn Leu Ala His Ala Phe Gln Pro Gly Pro Gly Ile Gly
            180                 185                 190
Gly Asp Ala His Phe Asp Glu Asp Glu Arg Trp Thr Asn Asn Phe Arg
        195                 200                 205
Glu Tyr Asn Leu His Arg Val Ala Ala His Glu Leu Gly His Ser Leu
    210                 215                 220
Gly Leu Ser His Ser Thr Asp Ile Gly Ala Leu Met Tyr Pro Ser Tyr
225                 230                 235                 240
Thr Phe Ser Gly Asp Val Gln Leu Ala Gln Asp Asp Ile Asp Gly Ile
                245                 250                 255
Gln Ala Ile Tyr Gly Arg Ser Gln Asn Pro Val Gln Pro Ile Gly Pro
            260                 265                 270
Gln Thr Pro Lys Ald Cys Asp Ser Lys Leu Thr Phe Asp Ala Ile Thr
        275                 280                 285
Thr Ile Arg Gly Glu Val Met Phe Phe Lys Asp Arg Phe Tyr Met Arg
    290                 295                 300
Thr Asn Pro Phe Tyr Pro Glu Val Glu Leu Asn Phe Ile Ser Val Phe
305                 310                 315                 320
Trp Pro Gln Leu Pro Asn Gly Leu Glu Ala Ala Tyr Glu Phe Ala Asp
                325                 330                 335
Arg Asp Glu Val Arg Phe Phe Lys Gly Asn Lys Tyr Trp Ala Val Gln
            340                 345                 350
Gly Gln Asn Val Leu His Gly Tyr Pro Lys Asp Ile Tyr Ser Ser Phe
        355                 360                 365
Gly Phe Pro Arg Thr Val Lys His Ile Asp Ala Ala Leu Ser Glu Glu
    370                 375                 380
Asn Thr Gly Lys Thr Tyr Phe Phe Val Ala Asn Lys Tyr Trp Arg Tyr
385                 390                 395                 400
Asp Glu Tyr Lys Arg Ser Met Asp Pro Gly Tyr Pro Lys Met Ile Ala
                405                 410                 415
His Asp Phe Pro Gly Ile Gly His Lys Val Asp Ala Val Phe Met Lys
            420                 425                 430
Asp Gly Phe Phe Tyr Phe Phe His Gly Thr Arg Gln Tyr Lys Phe Asp
        435                 440                 445
Pro Lys Thr Lys Arg Ile Leu Thr Leu Gln Lys Ala Asn Ser Trp Phe
    450                 455                 460
Asn Cys Arg Lys Asn
465
<210>19
<211>1141
<212>DNA
<213>人
<400>19
ccgccaggcg ctttctcgga cgccttgccc agcgggccgc ccgaccccct gcaccatgga     60
ccccgctcgc cccctggggc tgtcgattct gctgcttttc ctgacggagg ctgcactggg    120
cgatgctgct caggagccaa caggaaataa cgcggagatc tgtctcctgc ccctagacta    180
cggaccctgc cgggccctac ttctccgtta ctactacgac aggtacacgc agagctgccg    240
ccagttcctg tacgggggct gcgagggcaa cgccaacaat ttctacacct gggaggcttg    300
cgacgatgct tgctggagga tagaaaaagt tcccaaagtt tgccggctgc aagtgagtgt    360
ggacgaccag tgtgaggggt ccacagaaaa gtatttcttt aatctaagtt ccatgacatg    420
tgaaaaattc ttttccggtg ggtgtcaccg gaaccggatt gagaacaggt ttccagatga    480
agctacttgt atgggcttct gcgcaccaaa gaaaattcca tcattttgct acagtccaaa    540
agatgaggga ctgtgctctg ccaatgtgac tcgctattat tttaatccaa gatacagaac    600
ctgtgatgct ttcacctata ctggctgtgg agggaatgac aataactttg ttagcaggga    660
ggattgcaaa cgtgcatgtg caaaagcttt gaaaaagaaa aagaagatgc caaagcttcg    720
ctttgccagt agaatccgga aaattcggaa gaagcaattt taaacattct taatatgtca    780
tcttgtttgt ctttatggct tatttgcctt tatggttgta tctgaagaat aatatgacag    840
catgaggaaa caaatcattg gtgatttatt caccagtttt tattaataca agtcactttt    900
taaaaaattt ggattttttt atatataact agctgctatt caaatgtgag tctaccattt    960
ttaatttatg gttcaactgt ttgtgagact gaattcttgc aatgcataag atataaaagc   1020
aaatatgact cactcatttc ttggggtcgt attcctgatt tcagaagagg atcataactg   1080
aaacaacata agacaatata atcatgtgct tttaacatat ttgagaataa aaaggactag   1140
c                                                                   1141
<210>20
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>序列：丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制因子正义引物
<400>20
ccaaactttg aaagccaagg tg
<210>21
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制因子反义引物
<400>21
tgcacttcaa agaccagcag g                                            21
<210>22
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>肾上腺髓质素正义引物
<400>22
aggaatagtc gcgcaagcat c    21
<210>23
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>肾上腺髓质素反义引物
<400>23
cacgcattgc acttttcctc tt   22
<210>24
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>载脂蛋白D正义引物
<400>24
tgaagccacc ccagttaacc t    21
<210>25
<211>23
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>载脂蛋白D反义引物
<400>25
ggtcaacttc ctttgtgcgt ggt    23
<210>26
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>a-1 XV型胶原蛋白正义引物
<400>26
accaaaccct atttcaagtg cc    22
<210>27
<211>21
<212>DNA
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>a-1XV型胶原蛋白反义引物
<400>27
tagttatcca caaggcggac g               21
<210>28
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>CUG三联体重复RNA结合蛋白2正义引物
<400>28
atgtttgtcg gacagatccc c               21
<210>29
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>CUG三联体重复RNA结合蛋白2反义引物
<400>29
atgtgacaaa cgcacagcct c                      21
<210>30
<211>20
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>皮肤桥蛋白正义引物
<400>30
atttgaaccg gcaaggcttc                        20
<210>31
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>皮肤桥蛋白反义引物
<400>31
aagtggttgt tgctcctcgg a                      21
<210>32
<211>20
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>异柠檬酸脱氢酶正义引物
<400>32
tgccatccag aagaaatggc                       20
<210>33
<211>19
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>异柠檬酸脱氢酶反义引物
<400>33
aggcaaagat gctggcgat                        19
<210>34
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>MHC II类DR β3正义引物
<400>34
tagctgtgga caaagccaac ct                        22
<210>35
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>MHC II类DR β3反义引物
<400>35
ggcacacacc acgttctctg ta                        22
<210>36
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>蛋白质酪氨酸激酶7正义引物
<400>36
tggaaccaga gcgtacgact gt                     22
<210>37
<211>19
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>蛋白质酪氨酸激酶7反义引物
<400>37
tggctttgca gcgcttctt                        19
<210>38
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>类Sam68磷酸化酪氨酸蛋白质，T-STAR正义引物
<400>38
aggagaaggc aaggatgaag aa                                22
<210>39
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>类Sam68磷酸化酪氨酸蛋白质，T-STAR反义引物
<400>39
tgttaactcc tggagctgtg ct                                22
<210>40
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>C-型凝集素超家族成员2正义引物
<400>40
gcccctatga ttggattggt tt                               22
<210>41
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>C-型凝集素超家族成员2反义引物
<400>41
catccttcac tccctctcat gc                              22
<210>42
<211>25
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>MMP(基质金属蛋白酶)1正义引物
<400>42
cgactctaga aacacaagag caaga                           25
<210>43
<211>25
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>MMP(基质金属蛋白酶)1反义引物
<400>43
aaggttagct tactgtcaca cgctt                          25
<210>44
<211>17
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>TFPI(组织因子途径抑制物)2正义引物
<400>44
gtcgattctg cttttcc                                  17
<210>45
<211>20
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>TFPI(组织因子途径抑制物)2反义引物
<400>45
atggaatttt ctttggtgcg                                              20
<210>46
<211>1045
<212>DNA
<212>人
<400>46
ctcccgagct ctactgactc ccaacagagc gcccaagcaa gaaaatggcc ataagtggag  60
tccctgtgct aggatttttc atcatagctg tgctgatgag cgctcaggaa tcatgggcta 120
tcaaagaaga acatgtgatc atccaggccg agttctatct gaatcctgac caatcaggcg 180
agtttatgtt tgactttgat ggtgatgaga ttttccatgt ggatatggca aagaaggaga 240
cggtctggcg gcttgaagaa tttggacgat ttgccagctt tgaggctcaa ggtgcattgg 300
ccaacatagc tgtggacaaa gccaacctgg aaatcatgac aaagcgctcc aactatactc 360
cgatcaccaa tgtacctcca gaggtaactg tgctcacgaa cagccctgtg gaactgagag     420
agcccaacgt cctcatctgt ttcatcgaca agttcacccc accagtggtc aatgtcacgt     480
ggcttcgaaa tggaaaacct gtcaccacag gagtgtcaga gacagtcttc ctgcccaggg     540
aagaccacct tttccgcaag ttccactatc tccccttcct gccctcaact gaggacgttt     600
acgactgcag ggtggagcac tggggcttgg actgagcctc ttctcaagca ctgggaggtt     660
gatgctccaa gcccgtctcc agagacttac gagacgtggt gtgtgccctg gggctgactg     720
tgggtctggt cgggcttcct ttgggaccct ctttcatcat ccacggcgag tgcgccaaaa     780
gcattgccca gaaacccagg gggccctctg taaggcctgt gcgggggcag aacggtccct     840
taaaaagaag aacctcgtgg gcaaaacctg gcgcaagacg tcatacaaag ggggggcata     900
taacacgcgt gccccagaac gaccgcactc agggctcgcc gcctataaca ccccggtgtg     960
gtacccccaa ggcgcgctaa aactaaacag cgcgcacata gtagctcagg cgatacacca    1020
ctcacatata taatagcacc gctaa                                          1045
<210>47
<211>18
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的肾上腺髓质素引物
<400>47
ggtttccgtc gccctgat                             18
<210>48
<211>24
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的肾上腺髓质素引物
<400>48
gagcccactt attccacttc tttc                      24
<210>49
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的基质金属蛋白酶1引物
<400>49
gatggacctg gaggaaatct tg                            22
<210>50
<211>24
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的基质金属蛋白酶1引物
<400>50
ccgcaacacg atgtaagttg tact                         24
<210>51
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的组织因子途径抑制物2引物
<400>51
ggcaacgcca acaatttcta c                         21
<210>52
<211>26
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的组织因子途径抑制物2引物
<400>52
caaactttgg gaactttttc tatcct                   26
<210>53
<211>23
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑止因子引物
<400>53
tgggtggaga ataacacaaa caa                      23
<210>54
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑止因子引物
<400>54
ccagataagt ggcagcatca aa                                  22
<210>55
<211>28
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的蛋白质酪氨酸激酶7引物
<400>55
gggagttcct taatattctc aagttctg                            28
<210>56
<211>27
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>蛋白质酪氨酸激酶7
<400>56
gctgtgtcct ctgtaatcct ggtctag                        27
<210>57
<211>20
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的胶原蛋白，XV型，α1引物
<400>57
ccagcaaccc acatcagctt                               20
<210>58
<211>23
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的胶原蛋白，XV型，α1引物
<400>58
atgcagagca ggcttctcat aat                             23
<210>59
<211>29
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的类Sam68磷酸化酪氨酸蛋白质引物
<400>59
tcacaacatc agacagtaca atcagtatc                       29
<210>60
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的类Sam68磷酸化酪氨酸蛋白质引物
<400>60
acgggcaaga agagtggact aa                  22
<210>61
<211>23
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的载脂蛋白D引物
<400>61
tgagaagatc ccaacaacct ttg                23
<210>62
<211>24
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的载脂蛋白D引物
<400>62
tgatctttcc gttttccatt agtg               24
<210>63
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>主要组织相容性复合体DRβ
<400>63
ggctgaagtc cagagtgtcc tt                     22
<210>64
<211>18
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的主要组织相容性复合体DR β引物
<400>64
gctgggcctg ctcttcct                         18
<210>65
<211>19
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的主要组织相容性复合体DR α引物
<400>65
gcccagggaa gaccacctt                                   19
<210>66
<211>23
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的主要组织相容性复合体DR α引物
<400>66
cagtcgtaaa cgtcctcagt tga                              23
<210>67
<211>27
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的C型凝集素引物
<400>67
atccattttc tttcggtgta acatcta                    27
<210>68
<211>23
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的C型凝集素引物
<400>68
catgagaggg agtgaaggat gtg                        23
<210>69
<211>24
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的CUG三联体重复RNA结合蛋白2引物
<400>69
catgaatgct ttacagttgc agaa                             24
<210>70
<211>19
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>用于RT-PCR的CUG三联体重复RNA结合蛋白2引物
<400>70
gcgctgctcg tggtagaga                                   19
<210>71
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>整联蛋白，α6(ITGA6)，MRNA
<400>71
gatgacagtg ttccccgata cc                               22
<210>72
<211>20
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>整联蛋白，α6(ITGA6)，MRNA
<400>72
tgtaagtcag ccacgccaaa                            20
<210>73
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>溶质运载蛋白家族20(磷酸盐转运)成员1
<400>73
aatggagaag ctgacatggc c                          21
<210>74
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>溶质运载蛋白家族20(磷酸盐转运)成员1
<400>74
ccaaacccac agaccaacac a                           21
<210>75
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>核苷酸还原酶M2多肽(RRM2)MRNA
<400>75
tccaaggaca ttcagcactg g                          21
<210>76
<211>19
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>核苷酸还原酶M2多肽(RRM2)MRNA
<400>76
atcgacgcaa aagaaccgg                             19
<210>77
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>卵泡抑制素转录变异型FST317，MRNA
<400>77
ggaagtccag taccaaggca ga                         22
<210>78
<211>19
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>卵泡抑制素转录变异型FST317，MRNA
<400>78
tggcattgtc actggcaca                            19
<210>79
<211>20
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>SPROUTY(果蝇)同源基因2(SPRY2)，MRNA
<400>79
gccatccgaa acaccaatga                            20
<210>80
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>SPROUTY(果蝇)同源基因2(SPRY2)，MRNA
<400>80
tgccacagtc ctcacacctg ta                         22
<210>81
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>RAB3B，癌基因家族成员RAS，MRNA
<400>81
atgctgatga cacgttcacc c                           21
<210>82
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>RAB3B，癌基因家族成员RAS，MRNA
<400>82
ggcctgcctt acactgatgt tc                          22
<210>83
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>溶质运载蛋白家族2(利于葡萄糖转运)
<400>83
gccttttcgt taaccgcttt g                            21
<210>84
<211>19
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>溶质运载蛋白家族2(利于葡萄糖转运)
<400>84
tcctcgttgc ggttgatga                              19
<210>85
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>白介素13受体，α2(IL13RA2)，MRNA
<400>85
tgaaggctat ttgaagtcgc c                             21
<210>86
<211>19
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>白介素13受体，α2(IL13RA2)，MRNA
<400>86
cttcgcttca atgcccttg                                19
<210>87
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>丝氨酸/苏氨酸激酶12(STK12)，MRNA
<400>87
tggaaacgtg tacttggctc g                        21
<210>88
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>丝氨酸/苏氨酸激酶12(STK12)，MRNA
<400>88
accagccgaa gtcagcaatc t                        21
<210>89
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>微染色体维持缺陷蛋白(啤酒酵母)5
<400>89
aagtttggcc tgactaccag ca                      22
<210>90
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>微染色体维持缺陷蛋白(啤酒酵母)5
<400>90
ccagacgtgt ataccccaat gg                        22
<210>91
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>甲状腺激素受体中间子13(TRIP13)，MRNA
<400>91
cctgtgtaaa gcgttagccc ag                        22
<210>92
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>甲状腺激素受体中间子13(TRIP13)，MRNA
<400>92
gtggcccaat gtactgcttg at                        22
<210>93
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>类驱动蛋白6(KINESIN-LIKE 6)
<400>93
ccagctttaa cgaagccatg ac                       22
<210>94
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>类驱动蛋白6(KINESIN-LIKE 6)
<400>94
gcatttacca gaacctgtcc ca                       22
<210>95
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物3
<400>95
tcggtttatg tgctcttcca gg                       22
<210>96
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物3
<400>96
atcctcttag gtctcgcagg ct                     22
<210>97
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>染色体凝集蛋白G(HCAP-G)，MRNA
<400>97
gctcgccaga aattcgagtc ta                    22
<210>98
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>染色体凝集蛋白G(HCAP-G)，MRNA
<400>98
catgatcact ttcagagtcg gc                   22
<210>99
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>CDC28蛋白激酶1(CKS1)，MRNA
<400>99
gcccactacc caagaaacca a                       21
<210>100
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>CDC28蛋白激酶1(CKS1)，MRNA
<400>100
cataaatccg caagtcacca ca                      22
<210>101
<211>20
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>胞质分裂的蛋白质调节子1(PRC1)，MRNA
<400>101
cccaagtgga attgatgcga                            20
<210>102
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>胞质分裂的蛋白质调节子1(PRC1)，MRNA
<400>102
cccctcacac actgcttcat tt                         22
<210>103
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>细胞分裂循环2，G1→S→G2→M(CDC2)，MRNA
<400>103
ctgattttgg ccttgccaga g                           21
<210>104
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>细胞分裂循环2，G1→S→G2→M(CDC2)，MRNA
<400>104
ggatgattca gtgccatttt gc                          22
<210>105
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>CDC20细胞分裂周期20，酿酒酵母，同源基因
<400>105
acagttcgcg ttcgagagtg a                                  21
<210>106
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>CDC20细胞分裂周期20，酿酒酵母，同源基因
<400>106
ttccactgag ccgaaggatc t                                 21
<210>107
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>LIKELY ORTHOLOG OF MATERNAL EMBRYONIC LEUCINE ZIPPER KINAS
<400>107
tggctctctc ccagtagcat tc                                22
<210>108
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>LIKELY ORTHOLOG OF MATERNAL EMBRYONIC LEUCINE ZIPPER KINAS
<400>108
tcacttgcgg tcacatcttc c                                         21
<210>109
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>微染色体维持缺陷蛋白(啤酒酵母)7
<400>109
agagaacaca aggattgccc ag                                        22
<210>110
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>微染色体维持缺陷蛋白(啤酒酵母)7
<400>110
atgacaggag ctgagacttg gc                        22
<210>111
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>细胞周期蛋白A2(CCNA2)，MRNA
<400>111
ggcactgctg ctatgctgtt ag                        22
<210>112
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>细胞周期蛋白A2(CCNA2)，MRNA
<400>112
tgaaggtcca tgagacaagg c                      21
<210>113
<211>19
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>胸苷激酶1，可溶性(TK1)，MRNA
<400>113
ggcgcaatga gctgcatta                         19
<210>114
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>胸苷激酶1，可溶性(TK1)，MRNA
<400>114
aaatggcttc ctctggaagg tc                        22
<210>115
<211>21
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物2A(黑素瘤，p16，inhibits CDK4)
(CDKN2A)，mRNA
<400>115
tccccgattg aaagaaccag a                         21
<210>116
<211>22
<212>DNA
<213>人工系列
<220>
<223>细胞周期蛋白依赖性激酶抑止剂2A(cyclin-dependent kinase inhibitor
2A)(黑色素瘤p16，抑止CDK 4)(CDKN2A)，mRNA
<400>116
aagagaagcc agtaaccccc ct                        22

Claims (6)

1.体外系统识别间充质干细胞的方法，其特征在于对被检细胞中编码蛋白质的间充质干细胞标记基因的表达进行检测，该间充质干细胞标记基因包括有以下基因中的一个或多个：人骨形态生成蛋白4(BMP4)，MRNA基因(NM_001202)；人克隆24775mRNA序列基因/钾通道结构域12(KCTD：AA402981)；基质Gla蛋白(MGP：BF668572)基因；蛋白聚糖1，分泌颗粒基因(PRG1：AV734015)；种族同系物2(TRIB2：NM_021643)基因；人动力蛋白，细胞质的，中间体多肽1(DYNC1I1)，M(NM_004411)基因；脑源性神经营养因子(BDNF：X60201)基因。
2.根据权利要求1记载的间充质干细胞的识别方法，其特征是，采用探针对间充质干细胞标记基因的表达进行检测，该探针具有的DNA序列能与基因数据库登录号为NM_001202，AA402981，BF668572，AV734015，NM_021643，NM_004411或X60201所示的碱基序列的间充质干细胞基因杂交。
3.根据权利要求1记载的间充质干细胞的识别方法，其特征是采用具有基因数据库登录号为NM_001202，AA402981，BF668572，AV734015，NM_021643，NM_004411或X60201所示碱基序列的基因的微阵列或DNA芯片对间充质干细胞标记基因的表达进行检测。
4.根据权利要求1记载的识别间充质干细胞的方法，其特征是，对间充质干细胞标记基因表达的检测包括定量或半定量PCR的使用。
5.根据权利要求4记载的识别间充质干细胞的方法，其特征是其使用的定量的或半定量的PCR是RT-PCR法或实时PCR法。
6.一种体外系统识别分离间充质干细胞的方法，特征在于，通过使用检测间充质干细胞基因标记的探针对用于检测间充质干细胞的标记基因和/或标记多肽的表达进行检测、对识别出的间充质干细胞进行分离；该探针具有的DNA系列能与基因数据库登录号为NM_001202，AA402981，BF668572，AV734015，NM_021643，NM_004411或者X60201所示碱基序列的间充质干细胞标记基因杂交。
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