CN101265289A - 抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法，包括如下步骤：(1)用组织培养的灭活猪流行性腹泻病毒与弗氏完全佐剂以1∶1的体积比混合后为猪流行性腹泻疫苗免疫牛，进行基础免疫；(2)基础免疫后7－10天进行加强免疫；(3)屠宰采血；(4)血液中加入青霉素和链霉素，自然凝固、放置，分离血清；(5)用硫酸铵沉淀杂蛋白，杀灭其它不同动物易感病毒；(6)过滤除菌，即制成一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白。本发明制备的免疫球蛋白具有疗效好、安全可靠、无毒副作用和成本低等优点。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，特别涉及一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法。
背景技术
猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起猪的一种高度接触性传染病，流行广泛，发病率及死亡率甚高，危害极大，对养猪业造成严重的经济损失。
随着养猪业的发展，集约化程度越来越高，规模越来越大；并随着不断从国外大量引进种猪和国内生猪的交易流通日益加大等等因素，给猪流行性腹泻的防治带来了不少困难。猪流行性腹泻又称猪流行性病毒性腹泻，是由猪流行性腹泻病毒引起的一种肠道传染病。其特征为呕吐、腹泻和脱水。
由于猪流行性腹泻是一种病毒病，至今尚无有效的防治药物和防治方法。流行地区可对怀孕母猪在分娩前2周，以病猪粪便或小肠内容物进行人工感染，刺激产生母猪源抗体，以缩短本病在猪场中的流行。目前，猪流行性腹泻血清是防治猪病毒性疾病的有效药物。猪流行性腹泻免疫球蛋白是防治猪流行性腹泻的特异性生物制品，是一种被动免疫制剂，同时还有鉴别诊断和紧急预防接种等作用，具有较高的推广应用价值。猪流行性腹泻的免疫接种，包括被动免疫和主动免疫。被动免疫应用免疫血清。许多大型猪场利用淘汰的老母猪制成高免血清，自制猪流行性腹泻血清防治效果很好，但因使用猪流行性腹泻病毒免疫猪制备的高免血清，应用强毒血毒，有造成散毒的危险，推广应用受到很大限制。
89103922.8提供了一种病毒疫苗免疫猪生产猪流行性腹泻血清的简单制取方法。本制品与抗菌素配合使用，主要用于防治猪流行性腹泻，其治愈率97.7％。但免疫猪制备的高免血清应用时有强毒散毒的危险。200610131631.2提供一种病毒疫苗免疫马、驴、骡等制备抗猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒三联高免免疫球蛋白的制备方法，该产品主要针对母猪繁殖障碍病毒性疾病。马、驴、骡在许多地区饲养数量有限，而牛在全国的饲养量很大，利用病毒疫苗免疫牛制备猪流行性腹泻免疫球蛋白具有原料来源广泛、制备工艺简单等优点。
目前，有关病毒疫苗免疫牛制备猪流行性腹泻血清和免疫球蛋白的制备方法还未见报道。
因此，提供一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法，有效预防和防治猪流行性腹泻，是该技术领域科研人员急需开发的新课题之一。
发明内容
本发明的目的在于克服上述技术中的不足之处，提供一种制备简单、效果显著的抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法。
为实现上述目的本发明所采用的实施方式如下：
一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法，包括如下步骤：
(1)用组织培养的灭活猪流行性腹泻病毒与弗氏完全佐剂以1∶1的体积比混合后为猪流行性腹泻疫苗免疫牛，每头牛首次颈部多点肌肉注射30-80头份的猪流行性腹泻疫苗，进行基础免疫；
(2)基础免疫后7-10天进行加强免疫，每头牛肌肉注射猪流行性腹泻疫苗100-300头份；
(3)强化免疫后，猪流行性腹泻抗体效价达到最高峰时屠宰采血；
(4)血液中加入100-300单位/ml青霉素和100-300微克/ml链霉素，自然凝固、放置5-10小时，分离血清；
(5)用硫酸铵沉淀杂蛋白，胃蛋白酶剪切Fc段，保留抗体F(ab)2段，再用硫酸铵沉淀Fc蛋白，除去Fc蛋白，上清液中加入盐酸调至pH为2.0，4.0℃，放置2天，灭活病毒，再加NaOH调至pH为7.0，杀灭其它不同动物易感病毒；
(6)过滤除菌，即制成一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白。
无菌分装，冰箱内保存。
本发明动物是经过严格检疫的牛作为免疫动物。
本发明的有益效果是：免疫原用取猪流行性腹泻病毒细胞培养物经浓缩后加完全弗氏完全佐剂制备而成，然后免疫动物。通过免疫牛，防止了同种动物之间某些其它病毒性传染病的人为传染。安全性好，效价高；本发明的一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白，可以冷藏保存(+4℃～+12℃)储运方便。本发明制备的猪免疫球蛋白防治猪流行性腹泻，每日注射1次，一个疗程1-3次，病重用量略加。临床试用表明，患瘟病猪经猪流行性腹泻免疫球蛋白防治后的治愈率高。制成的猪流行性腹泻免疫球蛋白，注入动物机体后，具有疗效好、安全可靠、无毒副作用和成本低等优点。
具体实施方式
以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：
实施例1
一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法，步骤如下：
(1)基础免疫，选健康的动物牛数头，用组织培养的灭活猪流行性腹泻病毒与弗氏完全佐剂以1∶1的体积比混合后为猪流行性腹泻疫苗免疫牛，每头牛首次颈部多点肌肉注射50头份的猪流行性腹泻疫苗；
(2)基础免疫后8天进行加强免疫，每头牛肌肉注射猪流行性腹泻疫苗200头份；
(3)强化免疫后，猪流行性腹泻抗体效价达到最高峰时屠宰采血；首先按常规规定，待宰牛颈部局部剪毛、冲洗、消毒，然后切开皮肤与脂肪，分离组织充分暴露颈静脉，切断颈静脉，用胶管导流或沿盆壁顺流接血，放血前一天晚上停食，可饮水；
(4)血液中加入200单位/ml青霉素和200微克/ml链霉素，自然凝固、放置8小时，分离血清；
(5)用硫酸铵沉淀杂蛋白，胃蛋白酶剪切Fc段，保留抗体F(ab)2段，再用硫酸铵沉淀Fc蛋白，除去Fc蛋白，上清液中加入盐酸调至pH为2.0，4.0℃，放置2天，灭活病毒，再加NaOH调至pH为7.0，杀灭其它不同动物易感病毒；
(6)过滤除菌，即制成一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白。
无菌分装，冰箱内保存。
实施例2
一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法，步骤如下：
(1)基础免疫，选健康的动物，如牛数头，用组织培养的灭活猪流行性腹泻病毒与弗氏完全佐剂以1∶1的体积比混合后为猪流行性腹泻疫苗免疫牛，每头牛首次颈部多点肌肉注射30头份的猪流行性腹泻疫苗；
(2)基础免疫后7天进行加强免疫，每头牛肌肉注射猪流行性腹泻疫苗100头份；
(3)强化免疫后，猪流行性腹泻抗体效价达到最高峰时屠宰采血；首先按常规规定，待宰牛颈部局部剪毛、冲洗、消毒，然后切开皮肤与脂肪，分离组织充分暴露颈静脉，切断颈静脉，用胶管导流或沿盆壁顺流接血，放血前一天晚上停食，可饮水；
(4)血液中加入100单位/ml青霉素和100微克/ml链霉素，自然凝固、放置5小时，分离血清；
(5)用硫酸铵沉淀杂蛋白，胃蛋白酶剪切Fc段，保留抗体F(ab)2段，再用硫酸铵沉淀Fc蛋白，除去Fc蛋白，上清液中加入盐酸调至pH为2.0，4.0℃，放置2天，灭活病毒，再加NaOH调至pH为7.0，杀灭其它不同动物易感病毒；
(6)过滤除菌，即制成一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白。
无菌分装，冰箱内保存。
实施例3
一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法，步骤如下：
(1)基础免疫，选健康的动物，如牛数头，用组织培养的灭活猪流行性腹泻病毒与弗氏完全佐剂以1∶1的体积比混合后为猪流行性腹泻疫苗免疫牛，每头牛首次颈部多点肌肉注射80头份的猪流行性腹泻疫苗；
(2)基础免疫后10天进行加强免疫，每头牛肌肉注射猪流行性腹泻疫苗300头份；
(3)强化免疫后，猪流行性腹泻抗体效价达到最高峰时屠宰采血；首先按常规规定，待宰牛颈部局部剪毛、冲洗、消毒，然后切开皮肤与脂肪，分离组织充分暴露颈静脉，切断颈静脉，用胶管导流或沿盆壁顺流接血，放血前一天晚上停食，可饮水；
(4)血液中加入300单位/ml青霉素和300微克/ml链霉素，自然凝固、放置10小时，分离血清；
(5)用硫酸铵沉淀杂蛋白，胃蛋白酶剪切Fc段，保留抗体F(ab)2段，再用硫酸铵沉淀Fc蛋白，除去Fc蛋白，上清液中加入盐酸调至pH为2.0，4.0℃，放置2天，灭活病毒，再加NaOH调至pH为7.0，杀灭其它不同动物易感病毒；
(6)过滤除菌，即制成一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白。
无菌分装，冰箱内保存。
本发明的一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白还可以进一步的提纯，浓缩至免疫球蛋白含量为3-15％，效价含量为3000-8000单位/ml。
本发明可有液体及冻干两种类型，规格为治疗用500IU/瓶和预防用100IU/瓶。冻干制品分装后应立即在-20℃以下进行冷冻。干燥时间可根据水含量来决定。干燥完毕后进行真空封口。
应用实例：
河北省沧州某猪场累计购入仔猪1257头，购入后结果相继发病，死亡103头，经临床症状和实验室诊断诊断为猪流行性腹泻。对剩下的1154余头猪进行了猪流行性腹泻免疫球蛋白防治。按每千克体重1毫升的剂量确定用量，选择肌肉丰满的部位进行多点肌肉注射，严重者间隔2日可再次注射猪流行性腹泻免疫球蛋白。同时要饮用白糖水、维生素或葡萄糖水溶液，辅助喂食青菜、水果等含维生素丰富的食物，结果康复1098头，治愈率为95.1％。
建议用法与用量：小猪50单位/头/天、成年猪200单位/头/天。每日注射1次，间隔2天后再次注射，一个疗程1-3次，病重者用量略加。临床试用表明，猪流行性腹泻免疫球蛋白防治猪流行性腹泻治愈率在90.1％以上。
上述参照实施例对该抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法，其特征是包括如下步骤：
(1)用组织培养的灭活猪流行性腹泻病毒与弗氏完全佐剂以1∶1的体积比混合后为猪流行性腹泻疫苗免疫牛，每头牛首次颈部多点肌肉注射30-80头份的猪流行性腹泻疫苗，进行基础免疫；
(2)基础免疫后7-10天进行加强免疫，每头牛肌肉注射猪流行性腹泻疫苗100-300头份；
(3)强化免疫后，猪流行性腹泻抗体效价达到最高峰时屠宰采血；
(4)血液中加入100-300单位/ml青霉素和100-300微克/ml链霉素，自然凝固、放置5-10小时，分离血清；
(5)用硫酸铵沉淀杂蛋白，胃蛋白酶剪切Fc段，保留抗体F(ab)2段，再用硫酸铵沉淀Fc蛋白，除去Fc蛋白，上清液中加入盐酸调至pH为2.0，4.0℃，放置2天，灭活病毒，再加NaOH调至pH为7.0，杀灭其它不同动物易感病毒；
(6)过滤除菌，即制成一种抗猪流行性腹泻免疫球蛋白。
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| CNA2008100527457A CN101265289A (zh) | 2008-04-15 | 2008-04-15 | 抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法 |
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| CNA2008100527457A Pending CN101265289A (zh) | 2008-04-15 | 2008-04-15 | 抗猪流行性腹泻免疫球蛋白的制备方法 |
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN103705918A (zh) * | 2013-12-24 | 2014-04-09 | 北京大北农科技集团股份有限公司动物医学研究中心 | 抗猪流行性腹泻病毒高免血清及其制备方法 |
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2008
- 2008-04-15 CN CNA2008100527457A patent/CN101265289A/zh active Pending
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| CN103705918A (zh) * | 2013-12-24 | 2014-04-09 | 北京大北农科技集团股份有限公司动物医学研究中心 | 抗猪流行性腹泻病毒高免血清及其制备方法 |
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