CN101259275A - 抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及制备方法。所述抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂，分别以羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒、羊口蹄疫病毒制备的单苗，或羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒制备的联苗疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄并提取、制备。所述抗羊病毒性疾病卵黄抗体都是通过提高羊机体对引起病毒病相应病原微生物的抗体水平来防治病毒病的。本发明的饲料添加剂方便喂食羊，防治效果显著；抗羊病毒性疾病卵黄抗体注射剂在羊发病后使用，药效更快。本发明疗效显著，成本低、见效快，无毒副作用，不会产生耐药性菌株；制备简单，原料来源广泛，使用方便，易于推广。

Description

抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及制备方法

技术领域

本发明属于饲料和医药领域，特别涉及一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及制备方法。

背景技术

羊传染性脓疱病是脓疱病毒引起的羊的一种接触性传染病，又称羊口疮。该病世界各地都有发生，凡是有羊的地方都有此病。对成年羊危害轻，对羔羊危害重，死亡率在1％-15％之间，康复发育受阻。病羊和带毒羊是该病的传染源。健康的羊主要是通过接触传染，被传染的圈舍、饲草、用具等可间接传染，多为群发，只要有一只羊发病将迅速波及全群。在草料缺乏、羊只瘦弱、羔羊缺奶，抗病力降低的情况下，容易发病且病情严重。该病潜伏期为4-7天。发生部位主要在嘴唇、口角、鼻孔周围，其次是乳房、外阴及蹄部。发病后首先出现丘疹，继而形成水泡，脓疱，破溃流黄水，最后结痂。痂皮为褐色或黑色的疣状物，揭开痂皮出现黄水或脓样物质。病羊患部发痒，嘴头不断在建筑物或树木上强行磨擦，严重时采食困难，精神不振，体温升高，采食和反刍减少，最后因机体衰竭而死亡。

蓝舌病病毒是一种急性传染病，主要见于绵羊。临床上以发热、白细胞减少，口和唇糜烂性炎症，蹄冠炎和肌炎为特征。由于病羊发育不良，并带来死亡、羊毛损坏，往往造成很大的经济损失。本病病原是蓝舌病病毒病毒。病羊是主要传染来源，通过库蠓传播。绵羊感染不分品种、性别和年龄，以1岁左右的绵羊最易感，哺乳期羔羊有一定的抵抗力。病初体温高达40.5-41.5℃，稽留2-3天。在体温升高后不久，表现厌食，精神沉郁，落群。上唇肿胀、水肿可延至面耳部，口流涎，口腔粘膜充血、呈青紫色，随即可显示唇、齿龈、颊、舌粘膜糜烂，致使吞咽困难。口腔粘膜受溃疡损伤，局部渗出血液，唾液呈红色。病程一般为6-14天，至6-8周后蹄部病变可恢复。发病率30％-40％，病死率2％-30％，高者达90％。在该病流行区，每年接种疫苗。对病羊可用磺胺类药或抗毒素等进行对症治疗，控制继发的细菌感染。

口蹄疫病毒是偶蹄家畜的急性传染病，山羊、绵羊都可患此病，有时还可以传染给人。病原体为口蹄疫病毒病毒，主要传染来源为患病家畜，其次为带毒的野生动物(如黄羊)。主要是通过消化道和呼吸道传染，也可以经眼结膜、鼻黏膜、乳头及皮肤伤口传染。绵羊和山羊病的潜伏期为1-7天，平均2-4天。主要症状是体温升高，食欲废绝，精神沉郁，跛行。口腔的水泡多发生在口膜，舌上水泡少见。哺乳羔羊特别容易得病，多发生出血性胃肠炎。也可能发生恶性口蹄疫病毒，由于急性心脏麻痹而死亡。死亡率可达20％-50％。用当地流行毒株同型的口蹄疫病毒弱毒疫苗或灭活疫苗接种动物。

羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒引起的病毒病没有有效的治疗药物。目前，有关用抗羊传染性脓疱、羊蓝舌病和羊口蹄疫卵黄抗体的制备方法还未见报道。

因此，提供一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及制备方法，有效预防和治疗羊病毒病，是该技术领域科研人员急需开发的新课题之一。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及制备方法。

本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂，其特征在于以羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒、羊口蹄疫病毒制备的单苗，或羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒制备的联苗疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄并提取、制备。

一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂的制备方法，其特征在于：

(1)分离羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒进行增殖培养，当具有抗原性后制备成羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒联合疫苗；

(2)利用制备成羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒联合疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，第一轮次免疫注射时免疫剂量呈1.0ml；10天后进行第二轮次免疫注射，免疫剂量为首免的2倍；再过10天后进行第三轮次免疫注射，免疫剂量为首免的4倍；以后每隔一个月再以首免的4倍剂量进行免疫；诱导产蛋母鸡持续性产生羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒抗体；

(3)第三轮次免疫结束后10天，经卵黄抗体效价测定后收集免疫卵，无菌获取卵黄，用0.01M无菌磷酸盐缓冲液液稀释、0.5％羟丙甲基纤维素、邻苯二甲酸盐处理，真空抽滤，弃渣，抽滤液喷雾干燥，即得本发明的抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂。

一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体注射剂，其特征在于以羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒、羊口蹄疫病毒制备的单苗，或羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒制备的联苗疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄并提取、制备。

一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体注射剂的制备方法，其特征在于：

(1)分离羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒进行增殖培养，当具有抗原性后制备成羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒联合疫苗；

(2)利用制备成羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒联合疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，第一轮次免疫注射时免疫剂量呈1.0ml；10天后进行第二轮次免疫注射，免疫剂量为首免的2倍；再过10天后进行第三轮次免疫注射，免疫剂量为首免的4倍；以后每隔一个月再以首免的4倍剂量进行免疫；诱导产蛋母鸡持续性产生羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒抗体；

(3)第三轮次免疫结束后10天，用1％新洁尔灭消毒蛋壳，在无菌条件下收集卵黄，用无菌蒸馏水对倍稀释，置组织捣碎机中用3000r/min匀浆1min，匀浆后加入乳酸液，在1-4℃温度下静止3-4h或过夜，去除杂蛋白，收集上清液，上清液中加入硫酸铵至饱和度20-40盐析，4000r/min离心20min，收集沉淀，加入生理盐水，调整IgY的浓度分装，该注射剂内含有效价≥1∶256的抗羊相应病原微生物的卵黄抗体，即得本发明的抗羊病毒性疾病卵黄抗体注射剂。

本发明的有益效果是：抗羊病毒性疾病卵黄抗体是治疗羊病毒性疾病的特异性生物制品，是一种被动免疫制剂，同时还有鉴别诊断和紧急预防接种等作用，具有较高的推广应用价值。卵黄抗体的使用，在免疫学理论中可成为被动免疫。当免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失败时，可利用卵黄抗体注射、口服替代主动免疫接种，发挥抗病作用。卵黄抗体作为替代抗生素的新型饲料添加剂，正在引起人们的关注。卵黄抗体取代抗生素用作生长促进剂，不会产生药物残留，是一种安全的绿色添加剂。

抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂都是通过提高羊机体对抗羊病毒性疾病卵黄抗体的抗体水平来防治羊病毒性疾病的。抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂喂食羊，既使用简便，又特适宜羊使用。由羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒毒引起的病毒病，可直接给羊饲喂本发明产品，有效率可达86.7％以上。也可添加于饲料中用于预防病毒病。抗羊病毒性疾病卵黄抗体注射剂治疗病毒病，1-3天见效，临床治愈率可达82.7％以上。使用本发明的卵黄抗体注射治疗羊病毒性疾病，试验组临床症状比对照组明显减轻，且试验组的死亡率显著低于对照组，具有明显的防治病毒病作用。本发明的抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂防治羊病毒性疾病效果显著。该方法成本低，见效快，无副作用，不会产生耐药性菌株，制备工艺简单，原料来源广泛，使用方便，易于在基层推广。

具体实施方式

以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：

实施例1

一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂，其特征在于以羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒、羊口蹄疫病毒制备的单苗，或羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒制备的联苗疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄并提取、制备。

抗羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒卵黄抗体饲料添加剂的制备方法：

(1)分离羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒进行增殖培养，当具有抗原性后制备成羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒三联疫苗。

(2)利用制备成羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒三联疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，第一轮次免疫注射时免疫剂量呈1.0ml；10天后进行第二轮次免疫注射，免疫剂量为首免的2倍；再过10天后进行第三轮次免疫注射，免疫剂量为首免的4倍；以后每隔一个月再以首免的4倍剂量进行免疫。诱导产蛋母鸡持续性产生羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒三联疫苗抗体。

(3)第三轮次免疫结束后10天，经卵黄抗体效价测定后收集免疫卵，无菌获取卵黄，用0.01M无菌磷酸盐缓冲液液稀释、0.5％羟丙甲基纤维素、邻苯二甲酸盐处理，真空抽滤，弃渣，抽滤液喷雾干燥，即得本发明的抗羊脓疱病毒和羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒卵黄抗体饲料添加剂。将粉剂封装保存。

实施例2

一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体注射剂，其特征在于以羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒、羊口蹄疫病毒制备的单苗，或羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒制备的联苗疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄并提取、制备。

抗羊脓疱病毒和羊蓝舌病病毒卵黄抗体注射剂的制备方法：

(1)分离羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒进行增殖培养，当具有抗原性后制备成羊脓疱病毒和羊蓝舌病病毒二联疫苗。

(2)利用制备成羊脓疱病毒和羊蓝舌病病毒二联疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，第一轮次免疫注射时免疫剂量呈1.0ml；10天后进行第二轮次免疫注射，免疫剂量为首免的2倍；再过10天后进行第三轮次免疫注射，免疫剂量为首免的4倍；以后每隔一个月再以首免的4倍剂量进行免疫。诱导产蛋母鸡持续性产生羊脓疱病毒和羊蓝舌病病毒抗体。

(3)第三轮次免疫结束后10天，用1％新洁尔灭消毒蛋壳，在无菌条件下收集卵黄，用无菌蒸馏水对倍稀释，置组织捣碎机中用3000r/min匀浆1min，匀浆后加入乳酸液，在1-4℃温度下静止3-4h或过夜，去除杂蛋白，收集上清液，上清液中加入吸取上清，加入50％的饱和硫酸铵，摇匀，4℃盐析2h。4000

r/min离心20min，弃上清，沉淀以1ml的PBS(pH 7.4)完全溶解。用30％的饱和硫酸铵重复盐析3次，沉淀用PBS透析24h或过夜，沉淀中加入生理盐水，同时加青霉素、链霉素各2000IU/mL，调整IgY的浓度分装于灭菌玻璃瓶中，该注射剂内含有效价≥1∶256的抗羊相应病原微生物的卵黄抗体，即得本发明的抗羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒卵黄抗体注射剂。其IgY的得率达95％以上，一个免疫卵一般可得IgY 80-110mg。初诊为羊病毒性疾病的羊，按每千克体重0.5-1毫升的剂量确定用量，选择肌肉丰满的部位进行多点肌肉注射，严重者间隔3-4日可再次注射。同时要饮用白糖水、维生素或葡萄糖水溶液，辅助给予青饲料等含维生素丰富的食物。

实施例3

抗羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒卵黄抗体注射剂的制备方法：

(1)分离羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒进行增殖培养，当具有抗原性后制备成羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒三联疫苗。

(2)利用制备成羊脓疱病毒和羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒三联疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，第一轮次免疫注射时免疫剂量呈1.0ml；10天后进行第二轮次免疫注射，免疫剂量为首免的2倍；再过10天后进行第三轮次免疫注射，免疫剂量为首免的4倍；以后每隔一个月再以首免的4倍剂量进行免疫。诱导产蛋母鸡持续性产生羊脓疱病毒和羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒三联疫苗抗体。

(3)第三轮次免疫结束后10天，用1％新洁尔灭消毒蛋壳，在无菌条件下收集卵黄，用无菌蒸馏水对倍稀释装于灭菌玻璃瓶中，同时加青霉素、链霉素各2000IU/mL，置组织捣碎机中用3000r/min匀浆1min，匀浆后加入乳酸液，在1-4℃温度下静止3-4h或过夜，去除杂蛋白，收集上清液，上清液中加入硫酸铵，在1-4℃温度下静止3-4h或过夜，4000r/min离心20min，收集沉淀，加入生理盐水，调整IgY的浓度分装，该注射剂内含有效价≥1∶256的抗羊相应病原微生物的卵黄抗体，即得本发明的抗羊脓疱病毒羊蓝舌病病毒卵黄抗体注射剂。其IgY的得率达95％以上，一个免疫卵一般可得IgY 80-110mg。初诊为羊病毒性疾病的羊，按每千克体重0.5-1毫升的剂量确定用量，选择肌肉丰满的部位进行多点肌肉注射，严重者间隔3-4日可再次注射。同时要饮用白糖水、维生素或葡萄糖水溶液，辅助给予青饲料等含维生素丰富的食物。

应用实例1：

抗羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒卵黄抗体饲料添加剂防治羊病毒性疾病的试验研究

用添加了抗羊脓疱病毒和羊蓝舌病病毒病毒卵黄抗体饲料添加剂的饲料和普通饲料分别饲喂2-15日龄而且口服攻毒羊脓疱病毒和羊蓝舌病病毒的羔羊，同时设正常对照组，未攻毒同时饲喂普通饲料。观察10日疗效，实验结果如下：

表1卵黄抗体饲料添加剂防治羊病毒性疾病的试验效果

组别	病例数(头)	饲喂饲料治愈(头)	死亡(头)	有效(头)	有效率(％)
						药物实验组	15	卵黄抗体饲料添加剂	2	13	86.7
阴性对照组	14	普通饲料	6	8	57.1
						正常对照组	10	普通饲料	0	10	100

从表1看出，口服攻毒羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒的羔羊饲喂抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂的饲料后，病毒病很快痊愈，有效率达86.7％，死亡率为13.3％，而口服攻毒的羔羊饲喂普通饲料后，有效率达57.1％，死亡率为42.9％，

结论：本发明的抗羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒卵黄抗体饲料添加剂防治羊脓疱病毒和羊蓝舌病病毒引起的羔羊病毒性疾病具有良好的治疗效果。当前治疗动物病毒性疾病，抗病毒药品种太少，抗羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒和羊口蹄疫病毒卵黄抗体饲料添加剂防治羔羊病毒性疾病的有效药物。羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒引起的羔羊病毒性疾病，严重威胁羊的健康，造成了重大经济损失。当羊发生病毒病时时，可立即口服或皮下注射卵黄抗体，能阻止羊脓疱病毒病毒、羊蓝舌病病毒进入细胞，中和病毒数量，经2-10小时就可发现羊精神好转，食欲增加，减少羔羊的死亡率。

应用实例2：

内蒙古某羊场的110只绵羊相继发生病毒病，经临床症状和实验室诊断诊断为羊蓝舌病病毒病毒感染。对发病羊用实施例2中制备的抗羊病毒性疾病卵黄抗体进行治疗。按每千克体重1毫升的剂量确定用量，选择肌肉丰满的部位进行多点肌肉注射，严重者间隔2日可再次注射羊病毒性疾病卵黄抗体。同时要饮用白糖水、维生素或葡萄糖水溶液，辅助给予青菜、水果等含维生素丰富的食物，结果康复91头，有效率为82.7％。临床试用表明，患病毒病羔羊经抗羊病毒性疾病卵黄抗体治疗后疗效好。制成的抗羊病毒性疾病卵黄抗体，注入动物机体后治疗绵羊病毒性疾病，具有疗效好、安全可靠、无毒副作用和成本低等优点。

上述参照实施例对该抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂和注射剂及制备方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1、一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂，其特征在于以羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒、羊口蹄疫病毒制备的单苗，或羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒制备的联苗疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄并提取、制备。

2、一种根据权利要求1所述的抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂的制备方法，其特征在于：

(1)分离羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒进行增殖培养，当具有抗原性后制备成羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒联合疫苗；

(2)利用制备成羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒联合疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，第一轮次免疫注射时免疫剂量呈1.0ml；10天后进行第二轮次免疫注射，免疫剂量为首免的2倍；再过10天后进行第三轮次免疫注射，免疫剂量为首免的4倍；以后每隔一个月再以首免的4倍剂量进行免疫；诱导产蛋母鸡持续性产生羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒抗体；

(3)第三轮次免疫结束后10天，经卵黄抗体效价测定后收集免疫卵，无菌获取卵黄，用0.01M无菌磷酸盐缓冲液液稀释、0.5％羟丙甲基纤维素、邻苯二甲酸盐处理，真空抽滤，弃渣，抽滤液喷雾干燥，即得本发明的抗羊病毒性疾病卵黄抗体饲料添加剂。

3、一种抗羊病毒性疾病卵黄抗体注射剂，其特征在于以羊脓疱病毒、羊蓝舌病病毒、羊口蹄疫病毒制备的单苗，或羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒制备的联苗疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，再收集免疫产蛋母鸡卵黄并提取、制备。

4、一种根据权利要求3所述的抗羊病毒性疾病卵黄抗体注射剂的制备方法，其特征在于：

(1)分离羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒进行增殖培养，当具有抗原性后制备成羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒联合疫苗；

(2)利用制备成羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒联合疫苗免疫非免疫产蛋母鸡，第一轮次免疫注射时免疫剂量呈1.0ml；10天后进行第二轮次免疫注射，免疫剂量为首免的2倍；再过10天后进行第三轮次免疫注射，免疫剂量为首免的4倍；以后每隔一个月再以首免的4倍剂量进行免疫；诱导产蛋母鸡持续性产生羊脓疱病毒和/或羊蓝舌病病毒和/或羊口蹄疫病毒抗体；

(3)第三轮次免疫结束后10天，用1％新洁尔灭消毒蛋壳，在无菌条件下收集卵黄，用无菌蒸馏水对倍稀释，置组织捣碎机中用3000r/min匀浆1min，匀浆后加入乳酸液，在1-4℃温度下静止3-4h或过夜，去除杂蛋白，收集上清液，上清液中加入硫酸铵至饱和度20-40盐析，4000r/min离心20min，收集沉淀，加入生理盐水，调整IgY的浓度分装，该注射剂内含有效价≥1∶256的抗羊相应病原微生物的卵黄抗体，即得本发明的抗羊病毒性疾病卵黄抗体注射剂。