CN101234951A - 联苯类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
联苯类化合物及其制备方法和应用，涉及一种联苯类化合物。提供一种具有良好生物活性、抗氧化性和抑制癌细胞能力的联苯类化合物及其制备方法和应用。联苯类化合物来源于红树林内生真菌次级代谢产物，为无色针状晶体，具有生物活性、抗氧化性和抑癌细胞能力。制备矮棒曲霉BYY－1(Aspergillus clavatonanicus BYY－1)的种子液和发酵液，联苯类化合物的提取，联苯类化合物的精制。联苯类化合物具有很强得抗肿瘤和抗氧化作用，可用于制备抗肿瘤药物和作为抗氧化剂应用于医药品、化妆品及食品领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种联苯类化合物，尤其是涉及一种来源于红树林内生真菌——矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)真菌代谢产物联苯类化合物及其制备方法，以及该化合物在制备抗肿瘤药物及其作为抗氧化剂在医药品、化妆品及食品领域的应用。
背景技术
海洋真菌是海洋微生物的重要组成类型，与细菌相比，真菌相对高等，代谢能力强，生命活动复杂，并且与海洋中动植物有着非常复杂的生态关系，因此能够产生许多结构新颖、活性独特的次级代谢产物，海洋真菌已成为寻找高活性先导化合物的新资源([1]范国涛，朱天骄，崔承彬，等.海洋真菌KLEB-07培养条件的研究[J].中国海洋药物杂志，2005，24(5)：11-14)。红树林内生真菌作为一类重要的海洋真菌，越来越引起国内外天然产物化学家的关注，目前已从中分离到一些具有良好生物活性的新化合物。2001年，Lin等([2]Lin Y C，Wu X Y，Feng S，etal..Five Unique Compounds：Xyloketals from Mangrove Fungus Xylaria sp.from the South ChinaSea Coast[J].J.Org.Chem.，2001，66：6252-6256)从红树林真菌Xylaria sp.(no.2508)的代谢产物中得到5个结构独特的新聚酮类化合物xyloketals A-E。2004年，罗景慧等([3]罗景慧，杨迎暴，林永成，等.中国南海海岸红树真菌Xylaria sp.代谢产物在体外对乙酰胆碱酯酶活性的影响[J].中药材，2004，27(4)：261-264)采用改良Ellmen法对化合物xyloketals A-D的活性进行研究。结果表明，xyloketals A-D在体外对Ach E活性均有不同程度的抑制作用，并呈一定剂量依赖关系，IC50值分别为29.9、137.4、109.3和425.6μmol/L。通过对Ach E酶抑制动力学曲线进行分析发现，xyloketals对Ach E的抑制表现为可逆非竞争性抑制。Isaka等对红树林真菌Aigialus parvus BCC 5311进行了研究，从中得到5个新间二羟苯基大环内酯Aigialomycins A-E和一个已知化合物hypothemycin，其中hypothemycin和aigialomycin D表现出体外抗疟疾活性，对Plasmodium falciparum K1的IC50分别为2.2μg/mL和6.6μg/mL([4]Isaka M，Suyarnsestakom C，Tanticharoen M.Aigialomycins A-E，New Resorcylic Macrolides from the MarineMangrove Fungus Aigialus parvus[J].J.Org.Chem.，2002，67：1561-1566)。此后，Vongvilai等延长了该菌株(Aigialus parvus BCC 5311)的发酵时间，从其代谢产物中得到2个结构独特的新化合物Aigialone和aigialospirol([5]Vongvilai P，Isaka M，Kittakoop P，et al..Ketene Acetal andSpiroacetal Constituents of the Marine Fungus Aigialus parvus BCC 5311[J].J.Nat.Prod.，2004，67：457-460)。2007年，Xu等([6]Xu M J，Gessner G，Groth I，et al..Shearinines D-K，newindole triterpenoids from an endophytic Penicillium sp.(strain HKI0459)with blocking activity onlarge-conductance calcium-activated potassium channels[J].Tetrahedron，2007，63：435-444)从桐花树真菌Penicillium sp.的代谢产物中分离到8个新吲哚三萜shearinines D-K，其中ShearininesD，E和G表现出明显的阻断BKCa通道的活性。Shearinines D和E可能穿过血脑屏障，从而在治疗某种癫痫病中发挥作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有良好生物活性、抗氧化性和抑制癌细胞能力的联苯类化合物及其制备方法和应用。
所述的联苯类化合物来源于红树林内生真菌次级代谢产物，红树林内生真菌为矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)，已于2006年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC中国武汉大学校内)，保藏号为CCTCC NO：M206063。(参见本申请人的中国专利申请：200710008928.4；200710008929.9；200710008930.1)：
所述的联苯类化合物的结构式为：
所述的联苯类化合物为无色针状晶体，1H-NMR(CD3OD，400MHz)：6.73(d，J＝2.7Hz)，6.66(d，J＝2.8Hz)，4.61(s，2H)；13C-NMR(CD3OD，400MHz)：144.3，121.9，115.4，151.7，114.5，132.1，61.1.HR ESI-Q-TOF m/z 279.1915[M+H]+，301.9705[M+Na]+，317.0409[M+K]+.经综合分析核磁共振和质谱数据证实该化合物为联苯类化合物。它具有良好的生物活性及良好的抗氧化性和抑癌细胞能力。
所述的联苯类化合物的制备方法包括以下步骤：
(1)制备矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)的种子液
a.菌株的斜面培养：马铃薯去皮、切成小块，加水煮沸，纱布过滤，滤液中加葡萄糖和琼脂，海水定容，灭菌，制成试管斜面，得斜面培养基，挑取菌种接入斜面，培养，得培养的斜面菌种；
b.菌株的种子培养：在马铃薯汁中添加葡萄糖，海水定容，灭菌，得种子培养基，将上述培养的斜面菌种转接到分装后的种子培养基中，摇瓶培养，得种子液；
(2)制备矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)的发酵液
马铃薯去皮、切成小块，加水煮沸，纱布过滤，滤液中加葡萄糖，海水定容，灭菌，得发酵培养基，将种子液转接入发酵培养基，发酵后得发酵液；
(3)联苯类化合物的提取
将发酵液过滤得发酵液上清和菌体，发酵液上清用有机溶剂萃取，合并有机相减压浓缩得浸膏；
(4)联苯类化合物的精制
将浸膏用石油醚和甲醇分相，分别得到石油醚相和甲醇相，将甲醇相减压浓缩，用凝胶柱层析，有机溶剂洗脱，所得组分用正相硅胶柱层析，以石油醚和/或乙酸乙酯梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯的体积比例为(100～1)∶1洗脱液得到组分A；组分A用正相硅胶柱纯化，以氯仿和/或甲醇梯度洗脱，收集当氯仿/甲醇的体积比例为(100～10)∶1时的洗脱液，合并洗脱液，减压浓缩得联苯类化合物。
在步骤(1)a中，所述的加水煮沸的时间最好为30min；所述的海水定容中的海水为10％～100％海水(即按体积百分比，海水占海水与自来水总体积的10％～100％)，海水定容后的每升斜面培养基含琼脂15～20g；海水定容后的每升斜面培养基含葡萄糖15～20g；培养的温度最好为25～32℃，培养的时间最好为2～8d；海水定容后所述的灭菌可采用121℃灭菌。
在步骤(1)b中，所述的在马铃薯汁中添加葡萄糖的比例是每升马铃薯滤液中加10～30g葡萄糖；所述的海水定容中的海水为10％～100％海水(即按体积百分比，海水占海水与自来水总体积的10％～100％)；海水定容后所述的灭菌可采用121℃灭菌。
在步骤(2)中，所述的加水煮沸的时间最好为30min；所述的在马铃薯汁中添加葡萄糖的比例是每升马铃薯滤液中加15～20g葡萄糖；所述的海水定容中的海水为10％～100％海水(即按体积百分比，海水占海水与自来水总体积的10％～100％)；所述的将种子液转接入发酵培养基是将种子液按接种量5％～10％转接入发酵培养基中，在23～33℃下静置培养13～18d；海水定容后所述的灭菌可采用121℃灭菌。
在步骤(3)中，所述的发酵液上清用有机溶剂萃取至少3次，有机溶剂选自石油醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯化碳等中的一种。
在步骤(4)中，所述的有机溶剂选自乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇等中的一种。
经综合分析，本发明所述的联苯类化合物具有良好的生物活性及良好的抗氧化性和抑癌细胞能力，可用于制备抗肿瘤药物，也可作为抗氧化剂应用于医药品、化妆品及食品的制备中。本发明所述的联苯类化合物来源于红树林内生真菌次级代谢产物，该化合物不仅结构新颖，而且对其研究不会破坏红树林生态系统，具有较高的理论和实际意义。
附图说明
图1为联苯类化合物的抗氧化活性数据图。在图1中，横坐标为浓度(μg/mL)，纵坐标为清除率(％)。
图2为联苯类化合物对Hela细胞形态的影响(×40)。在图2中，a对照；b.2μg/mL；c.4μg/mL。
图3为流式细胞仪分析联苯类化合物对Hela细胞的存活率。在图3中，横坐标为浓度(μg/mL)，纵坐标为存活率(％)。
图4为流式细胞仪分析联苯类化合物对Hela细胞周期分布的影响。在图4中，a.对照；b.2μg/mL；横坐标为PI(表示荧光信号或散射光信号相对强度，单位是道数)，纵坐标为Count(表示细胞相对数量，无具体单位)。图中的各字母表示：E、U：凋亡峰(AP峰)；F、V：DNA合成休止以及准备期(G0/G1期)细胞峰；G、W：DNA合成期(S期)细胞峰；H、X：细胞分裂(G2/M期)细胞峰。
具体实施方式
以下给出本发明制备方法的实施例，对本发明作进一步说明。
实施例1
(1)制备矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)的种子液
a.菌株的斜面培养：取200g马铃薯去皮、切成小块，加水煮沸30min，4层纱布过滤，滤液中加20g葡萄糖和20g琼脂，50％海水(按海水与自来水按体积比)定容1000mL。然后分装试管，灭菌(121℃，20min)，制成试管斜面，得斜面培养基。挑取菌种接入斜面培养基进行培养；
b.菌株的种子培养：在每升马铃薯滤液(制备方法同上)中加20g葡萄糖，用50％海水(海水与自来水按体积比混合)定容至1000mL。然后分装到500mL三角瓶中(200mL/瓶)，灭菌(121℃，30min)，得种子培养基。将上述培养的斜面菌种转接到分装后的种子培养基中，摇瓶培养(28℃，120r/min，培养4d)，得种子液；
(2)制备矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)的发酵液
先配制好发酵培养基，与前述配制种子培养基相同。将前述所得的种子液按接种量10％转接入发酵培养基中发酵(30℃静置培养15d)，得发酵液；
(3)联苯类化合物的提取
将发酵液4层纱布过滤得发酵液上清和菌体，发酵液上清用等体积乙酸乙酯萃取4次，合并有机相减压(50℃)浓缩得浸膏；
(4)联苯类化合物的精制
浸膏用石油醚和甲醇分相，分别得到石油醚相和甲醇相，将甲醇相减压浓缩，用凝胶柱(Sephadex LH-20)层析，用甲醇洗脱，所得组分用正相硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至7/3，v/v)梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯的体积比例为7∶3洗脱液得到组分A；组分A用正相硅胶柱纯化，以氯仿/甲醇(氯仿/甲醇＝100/0至40/1，v/v)梯度洗脱，收集当氯仿/甲醇的体积比例为40∶1时的洗脱液，合并洗脱液，减压浓缩得联苯类化合物。
实施例2
(1)制备矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)的种子液
a.菌株的斜面培养：取300g马铃薯去皮、切成小块，加水煮沸30min，4层纱布过滤，滤液中加30g葡萄糖和30g琼脂，100％海水(按海水与自来水按体积比)定容1000mL。然后分装试管，灭菌(121℃，20min)，制成试管斜面，得斜面培养基。挑取菌种接入斜面培养基进行培养；
b.菌株的种子培养：取300g马铃薯去皮、切成小块，加水煮沸30min，4层纱布过滤，按每升滤液中加30g葡萄糖的比例加入葡萄糖，用50％海水(海水与自来水按体积比混合)定容至1000mL。然后分装到500mL三角瓶中(200mL/瓶)，灭菌(121℃，30min)，得种子培养基。将上述培养的斜面菌种转接到分装后的种子培养基中，摇瓶培养(25℃，140r/min，培养3d)，得种子液；
(2)制备矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)的发酵液
先配制好发酵培养基(与前述配制种子培养基相同)。将前述所得的种子液按接种量8％转接入发酵培养基中发酵(28℃静置培养13d)。得发酵液；
(3)联苯类化合物的提取
将发酵液4层纱布过滤得发酵液上清和菌体，发酵液上清用等体积氯仿萃取3次，合并有机相减压(50℃)浓缩得到浸膏。
(4)联苯类化合物的精制
浸膏用石油醚和甲醇分相，分别得到石油醚相和甲醇相，将甲醇相减压浓缩，用凝胶柱(Sephadex LH-20)层析，用甲醇洗脱，所得组分用正相硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯(石油醚/乙酸乙酯＝15/1至1/1，v/v)梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯的体积比例为4∶1洗脱液得到组分A；组分A用正相硅胶柱纯化，以氯仿/甲醇(氯仿/甲醇＝100/0至20/1，v/v)梯度洗脱，收集当氯仿/甲醇的体积比例为20∶1时的洗脱液，合并洗脱液，减压浓缩得联苯类化合物。
实施例3
(1)制备矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)的种子液
a.菌株的斜面培养：取150g马铃薯去皮、切成小块，加水煮沸30min，4层纱布过滤，滤液中加15g葡萄糖和15g琼脂，30％海水(按海水与自来水按体积比)定容1000mL。然后分装试管，灭菌(121℃，20min)，制成试管斜面，得斜面培养基。挑取菌种接入斜面培养基进行培养；
b.菌株的种子培养：取150g马铃薯去皮、切成小块，加水煮沸30min，4层纱布过滤，按每升滤液中加15g葡萄糖的比例加入葡萄糖，用30％海水(海水与自来水按体积比混合)定容至1000mL。然后分装到500mL三角瓶中(200mL/瓶)，灭菌(121℃，20min)，得种子培养基。将上述培养的斜面菌种转接到分装后的种子培养基中，摇瓶培养(27℃，180r/min培养4d)，得种子液；
(2)制备矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)的发酵液
先配制好发酵培养基(与前述配制种子培养基相同)。将前述所得的种子液按接种量8％转接入发酵培养基中发酵(27℃静置培养18d)。得发酵液；
(3)联苯类化合物的提取
将发酵液4层纱布过滤得发酵液上清和菌体，发酵液上清用等体积二氯甲烷萃取3次，合并有机相减压(50℃)浓缩得到浸膏。
(4)联苯类化合物的精制
浸膏用石油醚和甲醇分相，分别得到石油醚相和甲醇相，将甲醇相减压浓缩，用凝胶柱(Sephadex LH-20)层析，用甲醇洗脱，所得组分用正相硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯(石油醚/乙酸乙酯＝50/1至1/1，v/v)梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯的体积比例为4∶1洗脱液得到组分A；组分A用正相硅胶柱纯化，以氯仿/甲醇(氯仿/甲醇＝100/0至20/1，v/v)梯度洗脱，收集当氯仿/甲醇的体积比例为10∶1时的洗脱液，合并洗脱液，减压浓缩得联苯类化合物。
实施例4
采用有机自由基DPPH体系，测定联苯类化合物对有机自由基DPPH的清除作用来检测联苯类化合物的抗氧化作用。
在96孔板孔内依次分别加入不同浓度的待测样品溶液(甲醇配制)或甲醇(空白)50μL，50μmol/L的DPPH(甲醇配制)150μL，在黑暗环境下反应30min后用分光光度计测定吸光度(OD517)。按下式计算样品对DPPH自由基的清除率：
清除率＝1-[(A-A0)/(B-B0)]×100％
式中：A0，A为加样反应前后的吸光度，B0，B为空白孔反应前后的吸光度。
图1为本发明的联苯类化合物的抗氧化活性数据图。图1结果表明，当联苯类化合物的浓度为3.125μg/mL、6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL时，对有机自由基DPPH的清除率分别为44.65％、66.75％、90.4％、90.07％。由此可见，本发明的联苯类化合物具有良好的抗氧化活性。
实施例5
以人宫颈癌Hela细胞为指示瘤株，采用MTT法测定联苯类化合物的抗肿瘤活性。
Hela细胞用完全培养基(RMPI1640基本培养液，加10％的胎牛血清，1％的三抗)制成单细胞悬液，血球计数板计数，Hela按8000～9000个/孔接种于96孔细胞培养板中，每孔加80μL，空白加80μL培养液，置CO2培养箱中，37℃培养24h后，加入完全培养基稀释的样品20μL；阳性对照加入顺铂20μL；阴性对照加入20μL培养液，继续培养72h后取出，加入5mg/mL的MTT溶液(溶于PBS中)10μL，37℃反应3h，加入100μL的10％SDS-0.01NHCl，37℃过夜。用酶标仪测量吸光度(测量波长570nm，参考波长655nm)，依照下式计算抑制率，抑制率为50％时样品的浓度为IC50。
抑制率＝(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值×100％
结果表明，联苯类化合物对Hela细胞具有很强的抑制作用，IC50为3.2μg/mL。
实施例6
用不同浓度的联苯类化合物分别处理Hela细胞，24h后观察细胞形态的变化，结果如图2。从图2可以看出在经过药物处理后，Hela细胞的形态发生了明显的变化：阴性对照的Hela细胞呈不规则形，贴壁生长(参见图2a)；当联苯类化合物浓度为2μg/mL时，大部分细胞贴壁生长，少数细胞变圆，形成膜泡，悬浮于液体中(参见图2b)；当联苯类化合物浓度为4μg/mL时，大部分细胞变圆，形成膜泡，悬浮于液体中，只有极少数细胞存活(参见图2c)。
实施例7
用流式细胞仪分析细胞存活率及测定细胞周期分布：细胞接种于六孔板中，药物处理后，消化收集，用4℃预冷的PBS洗涤3次(1000r/min，5min)，弃上清，用70％的4℃预冷乙醇于4℃固定细胞。测定时离心去乙醇，PBS洗涤两次，加入500μLPBS后再加3μL无DNA酶的RNA酶A(10mg/mL)重悬细胞(反复吹打细胞，避免细胞结块)37℃下反应30min，避光下直接加入100μL 0.05mg/mL的碘化丙啶PI4℃下染色30min。400目的尼龙网过滤后，用流式细胞仪分析细胞存活率(如图3所示)及测定细胞周期分布(如图4和表1所示)。
从图3可以看出，联苯类化合物对Hela细胞有很强的抑制作用，且呈浓度依赖性，即随着药物浓度的增大，化合物对Hela细胞的抑制作用增强，Hela细胞的存活率明显下降；当浓度达到6μg/mL以上时，24h后Hela细胞的存活率接近0。
图4表明，联苯类化合物(浓度为2μg/mL)作用Hela细胞24h后，在DNA直方图上出现一个位于G0/G1峰左侧的细胞凋亡峰(AP峰)或称亚二倍体(sub-G0/G1)。从表1可以看出，用浓度为2μg/mL的联苯类化合物处理Hela细胞24h后，Hela细胞的周期分布发生了明显的变化。G0/G1期细胞的比例明显增加，而S期和G2/M期细胞比例则降低。
以上实验结果说明联苯类化合物作用Hela细胞能引起细胞发生明显的凋亡。
表1联苯类化合物对Hela细胞周期分布的影响
| 化合物浓度(g/mL) | sub-G0/G1(％) | G0/G1(％) | S(％) | G2/M(％) |
| 对照0联苯类化合物2 | 1.7630.2 | 56.632.8 | 12.311.4 | 29.425.8 |
Claims (10)
1.联苯类化合物，其特征在于来源于红树林内生真菌次级代谢产物，红树林内生真菌为矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)，所述的联苯类化合物的结构式为：
为无色针状晶体，1H-NMR(CD3OD，400MHz)：6.73(d，J＝2.7Hz)，6.66(d，J＝2.8Hz)，4.61(s，2H)；13C-NMR(CD3OD，400MHz)：144.3，121.9，115.4，151.7，114.5，132.1，61.1.HR ESI-Q-TOFm/z 279.1915[M+H]+，301.9705[M+Na]+，317.0409[M+K]+，具有生物活性、抗氧化性和抑癌细胞能力。
2.如权利要求1所述的联苯类化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)制备矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)的种子液
a.菌株的斜面培养：马铃薯去皮、切成小块，加水煮沸，纱布过滤，滤液中加葡萄糖和琼脂，海水定容，灭菌，制成试管斜面，得斜面培养基，挑取菌种接入斜面，培养，得培养的斜面菌种；
b.菌株的种子培养：在马铃薯汁中添加葡萄糖，海水定容，灭菌，得种子培养基，将上述培养的斜面菌种转接到分装后的种子培养基中，摇瓶培养，得种子液；
(2)制备矮棒曲霉BYY-1(Aspergillus clavatonanicus BYY-1)的发酵液
马铃薯去皮、切成小块，加水煮沸，纱布过滤，滤液中加葡萄糖，海水定容，灭菌，得发酵培养基，将种子液转接入发酵培养基，发酵后得发酵液；
(3)联苯类化合物的提取
将发酵液过滤得发酵液上清和菌体，发酵液上清用有机溶剂萃取，合并有机相减压浓缩得浸膏；
(4)联苯类化合物的精制
将浸膏用石油醚和甲醇分相，分别得到石油醚相和甲醇相，将甲醇相减压浓缩，用凝胶柱层析，有机溶剂洗脱，所得组分用正相硅胶柱层析，以石油醚和/或乙酸乙酯梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯的体积比例为(100～1)∶1洗脱液得到组分A；组分A用正相硅胶柱纯化，以氯仿和/或甲醇梯度洗脱，收集当氯仿/甲醇的体积比例为(100～10)∶1时的洗脱液，合并洗脱液，减压浓缩得联苯类化合物。
3.如权利要求2所述的联苯类化合物的制备方法，其特征在于在步骤(1)a中，所述的加水煮沸的时间为30min；所述的海水定容中的海水为10％～100％海水，海水定容后的每升斜面培养基含琼脂15～20g；海水定容后的每升斜面培养基含葡萄糖15～20g；培养的温度为25～32℃，培养的时间为2～8d。
4.如权利要求2所述的联苯类化合物的制备方法，其特征在于在步骤(1)b中，所述的在马铃薯汁中添加葡萄糖的比例是每升马铃薯滤液中加10～30g葡萄糖；所述的海水定容中的海水为10％～100％海水。
5.如权利要求2所述的联苯类化合物的制备方法，其特征在于在步骤(2)中，所述的加水煮沸的时间为30min；所述的在马铃薯汁中添加葡萄糖的比例是每升马铃薯滤液中加15～20g葡萄糖；所述的海水定容中的海水为10％～100％海水。
6.如权利要求2所述的联苯类化合物的制备方法，其特征在于在步骤(2)中，所述的将种子液转接入发酵培养基是将种子液按接种量5％～10％转接入发酵培养基中，在23～33℃下静置培养13～18d。
7.如权利要求2所述的联苯类化合物的制备方法，其特征在于在步骤(3)中，所述的发酵液上清用有机溶剂萃取至少3次，有机溶剂选自石油醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯化碳中的一种。
8.如权利要求2所述的联苯类化合物的制备方法，其特征在于在步骤(4)中，所述的有机溶剂选自乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的一种。
9.如权利要求1所述的联苯类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.如权利要求1所述的联苯类化合物在制备用于医药品、化妆品及食品的抗氧化剂中的应用。
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